生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室儀器操作簡(jiǎn)介

生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室儀器操作簡(jiǎn)介第1頁/共46頁實(shí)驗(yàn)室主要儀器，設(shè)備的簡(jiǎn)介及使用方法

微量移液器高速臺(tái)式離心機(jī)

PCR儀凝膠成像系統(tǒng)電泳儀恒溫氣浴搖床超凈工作臺(tái)滅菌鍋第2頁/共46頁微量移液器第3頁/共46頁微量移液器是連續(xù)可調(diào)的、計(jì)量和轉(zhuǎn)移液體的專用儀器，其裝有直接讀數(shù)容量計(jì)。微量移液器有多種規(guī)格，在移液器量程范圍內(nèi)能連續(xù)調(diào)節(jié)讀數(shù)。0.5～10μl10～100μl20～200μl100～1000μl常見規(guī)格第4頁/共46頁量液的操作步驟：第一停點(diǎn)第二停點(diǎn)A保持微量移液器垂直，將按鈕壓至第一停點(diǎn)；B微量移液器頭尖端浸入溶液，緩慢釋放按鈕；C保持微量移液器垂直，將微量移液器頭與容器壁接觸，慢慢壓下按鈕至第一停點(diǎn)；D壓至第二停點(diǎn)把溶液完全釋放出；E釋放按鈕回原狀。第5頁/共46頁1．未裝吸嘴的微量移液器絕對(duì)不可用來吸取任何液體。

2．一定要在允許量程范圍內(nèi)設(shè)定容量，千萬不要將讀數(shù)的調(diào)節(jié)超出其適用的刻度范圍，否則會(huì)造成損壞。

3．不要橫放或倒拿帶有殘余液體吸嘴的移液器。

4．不要用大量程的移液器移取小體積樣品。

5.移液器使用完后，將刻度調(diào)到最大刻度，收藏。

量液操作注意問題：第6頁/共46頁臺(tái)式高速離心機(jī)離心機(jī)的分類

低速：每分鐘幾千轉(zhuǎn)

高速：每分鐘1~3萬轉(zhuǎn)

超速：每分鐘3萬轉(zhuǎn)以上第7頁/共46頁低速：細(xì)胞等大分子

高速：DNA，蛋白等

超速:

病毒，蛋白，細(xì)胞器等基因片段的分離、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物樣品的分離制備實(shí)驗(yàn)中都離不開低溫離心技術(shù)本實(shí)驗(yàn)室所用離心機(jī):臺(tái)式高速離心機(jī)（Thermo），配有角式轉(zhuǎn)頭：24×1.5ml；極限轉(zhuǎn)速13000rpm;臺(tái)式低溫高速離心機(jī)（sigma),極限轉(zhuǎn)速20000rpm。離心機(jī)的功能：分離，純化第8頁/共46頁1、把離心機(jī)放置于平面桌或平面臺(tái)上，檢查離心機(jī)是否放置平穩(wěn)。2、將離心管對(duì)稱放入轉(zhuǎn)子內(nèi)，且要事先平衡。3、鎖緊門蓋。4、插上電源插座，按下電源開關(guān)。5、設(shè)置轉(zhuǎn)子號(hào)、轉(zhuǎn)速、時(shí)間：（常用，最高轉(zhuǎn)速為13000r/min，時(shí)間最長(zhǎng)為20min）；

注意：對(duì)應(yīng)的轉(zhuǎn)子不可超速使用，否則對(duì)試管或轉(zhuǎn)子有損壞。6、當(dāng)轉(zhuǎn)子停轉(zhuǎn)后，打開門蓋取出離心管，關(guān)斷電源開關(guān)。臺(tái)式高速離心機(jī)使用步驟第9頁/共46頁注意事項(xiàng)：1、離心機(jī)在運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)，不得移動(dòng)離心機(jī)，不要打開門蓋。2、安放離心機(jī)的臺(tái)面應(yīng)堅(jiān)實(shí)平整，四只橡膠機(jī)腳都應(yīng)與臺(tái)面接觸和均勻受力，以免產(chǎn)生振動(dòng)。3、離心管加液要平衡，若加液差異過大運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)會(huì)產(chǎn)生大的振動(dòng)，此時(shí)應(yīng)停機(jī)檢查，使加液符合要求，離心試管必須對(duì)稱放入。4、若運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)有離心試管破裂，會(huì)引起較大振動(dòng)應(yīng)立即停機(jī)處理。5、離心機(jī)徹底停止后，才可開蓋，取樣。第10頁/共46頁P(yáng)CR儀第11頁/共46頁P(yáng)CR儀主要應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究等許多領(lǐng)域，如基因分析、序列分析、進(jìn)化分析、臨床診斷、法醫(yī)學(xué)等。PCR儀，也稱DNA熱循環(huán)儀、基因擴(kuò)增儀，能使一對(duì)寡核苷酸引物結(jié)合到正負(fù)DNA鏈上的靶序列兩側(cè)，從而酶促合成拷貝數(shù)為百萬倍的靶序列DNA片段，它的每一循環(huán)包括DNA變性、復(fù)性、延伸三個(gè)反應(yīng)。第12頁/共46頁操作程序:1）開機(jī)：打開電源，顯示主界面；2）創(chuàng)建程序：使用”create”輸入新程序（包括PCR循環(huán)數(shù)，預(yù)變性、變性、復(fù)性、延伸的時(shí)間和溫度），保存程序（包括用戶名和方法名）;3）放入樣品，蓋上蓋子;4）在所建用戶名下按“run”鍵，找到設(shè)定的程序，按“start”鍵啟動(dòng)程序;5）運(yùn)行結(jié)束后按“stop”鍵停止運(yùn)行，取出樣品，關(guān)閉電源。第13頁/共46頁

1、預(yù)變性：可用94～95℃，2～10min,一般用5min。

2、變性：一般用94℃，30s~2min,一般45s~1min。

3、退火：溫度自定，30s~2min。

4、延伸：72℃，對(duì)于(1kb=1min,每增加1kb加1min)。

5、循環(huán)數(shù)：一般25～35個(gè)循環(huán)(2,3,4步循環(huán)）。

6、最終延伸：72℃，5～15min。

7、保存：4℃，時(shí)間設(shè)為0。

8、END。如何設(shè)置一個(gè)PCR程序：第14頁/共46頁FR-980生物電泳圖像分析系統(tǒng)第15頁/共46頁系統(tǒng)簡(jiǎn)介：系統(tǒng)可以通過紫外/可見光分析裝置及透光掃描儀直接獲得核酸、蛋白質(zhì)凝膠電泳圖像。系統(tǒng)配置有SmartView生物電泳圖像分析軟件，可以進(jìn)行密度掃描、密度定量、分子量計(jì)算等電泳分析。此外，該系統(tǒng)含有多種圖像濾波器，可降低圖像的噪音，從而獲得較清晰的圖像。第16頁/共46頁操作步驟：1）將電泳樣品放入分析裝置中2）打開電腦，運(yùn)行SmartView軟件，單擊“Import”鍵進(jìn)入

圖像獲取項(xiàng)目欄，選擇“獲取視頻圖像”鍵，進(jìn)行圖像采集3）選

擇紫外或可見光源，在圖像采集窗口中調(diào)節(jié)好圖像大

小、亮度及焦距4）單擊“采集圖像”鍵，根據(jù)圖像質(zhì)量選擇好優(yōu)化攝影時(shí)間

（一般情況下在12秒左右），即開始采集。1、圖像采集第17頁/共46頁第18頁/共46頁2、圖像保存

單擊“System鍵”選擇“另保存圖像為”鍵，出現(xiàn)一個(gè)“圖像文件登記”窗口，輸入標(biāo)題，實(shí)驗(yàn)人，實(shí)驗(yàn)日期，實(shí)驗(yàn)摘要等信息，按“保存”鍵完成圖像文件登記，同時(shí)出現(xiàn)“另保存圖像為”窗口，輸入圖像名，保存圖像至桌面。3、關(guān)閉操作系統(tǒng)（1）關(guān)閉紫外/可見光。（2）退出軟件界面。（3）關(guān)閉紫外與可見分析裝置的電源。第19頁/共46頁注意事項(xiàng)：1、不要戴“臟”手套觸摸電腦鼠標(biāo)、鍵盤及其它位置；

2、不要戴“臟”手套觸摸倉門和燈箱電源開關(guān)；

3、不要戴“臟”手套觸摸外接電源開關(guān)；

4、在圖像獲取過程中，若通過軟件打開紫外/可見光，則必須再通過軟件關(guān)閉，若通過紫外與可見分析裝置上打開紫外/可見光，則從分析裝置上關(guān)閉，嚴(yán)禁互用，導(dǎo)致紫外燈長(zhǎng)亮。第20頁/共46頁電泳儀DYY-12型電腦三恒多用電泳儀（北京六一儀器廠）第21頁/共46頁操作程序：1）電泳槽的兩個(gè)電極與電泳儀的直流輸出端連接（極性不要接反）；2）打開電源，設(shè)置參數(shù)（選擇穩(wěn)壓穩(wěn)流方式及電壓電流范圍）；3）按“啟動(dòng)”啟動(dòng)程序（輸出為高電壓，注意安全）；4）電泳結(jié)束，按“停止”鍵終止程序。第22頁/共46頁注意事項(xiàng)1、電泳儀工作時(shí)，禁止人體接觸電極、電泳物及其它可能帶電部分，也不能到電泳槽內(nèi)取放東西，以免觸電，同時(shí)要求儀器有良好接地端，以防漏電。2、儀器通電后，不要臨時(shí)增加或撥除輸出導(dǎo)線插頭，以防短路。3、由于不同介質(zhì)支持物的電阻值不同，電泳所通過的電流量也不同，其泳動(dòng)速度及泳至終點(diǎn)所需時(shí)間也不同，故不同介質(zhì)支持物的電泳不要同時(shí)在同一電泳儀上進(jìn)行。4、使用過程中發(fā)現(xiàn)異?，F(xiàn)象，如較大噪音、放電或異常氣味，須立即切斷電源，進(jìn)行檢修，以免發(fā)生意外。第23頁/共46頁使用及性能：搖床（振蕩器）廣泛用于對(duì)溫度和振蕩頻率有較高要求的細(xì)菌培養(yǎng)、發(fā)酵、雜交、生物化學(xué)反應(yīng)以及酶和組織研究等。實(shí)驗(yàn)室常用的液體搖勻，微生物、細(xì)菌和細(xì)胞培養(yǎng)。

恒溫氣浴搖床SHK-99-Ⅱ型臺(tái)式空氣恒溫?fù)u床第24頁/共46頁1）樣品瓶牢固放入彈簧夾中；2）接通電源開關(guān)，設(shè)定參數(shù)（溫度、時(shí)間、轉(zhuǎn)速等）；3）按啟動(dòng)鍵啟動(dòng)儀器，按暫停鍵可暫停托盤的旋轉(zhuǎn)；4）按下控制面板的電源鍵兩秒，顯示屏顯示消失，關(guān)閉電源總開關(guān)。操作程序：第25頁/共46頁超凈工作臺(tái)使用及性能：超凈工作臺(tái)為分子生物學(xué)無菌操作提供可能，分為垂直送風(fēng)和水平送風(fēng)兩種。第26頁/共46頁超凈臺(tái)由三相電機(jī)作鼓風(fēng)動(dòng)力，空氣通過由特制的微孔泡沫塑料片層疊合組成的“超級(jí)濾清器”后吹送出來，形成連續(xù)不斷的無塵無菌的超凈空氣層流，即所謂“高效的特殊空氣”，能夠防止附近空氣可能襲擾而引起的污染，同時(shí)也不會(huì)妨礙采用酒精燈或本生燈對(duì)器械等的灼燒消毒。工作人員就在這樣的無菌條件下操作，可以保持無菌材料在轉(zhuǎn)移接種過程中不受污染。第27頁/共46頁臺(tái)面清潔消毒紫外燈滅菌30分鐘進(jìn)行無菌操作清理工作臺(tái)面紫外消毒30分鐘關(guān)閉紫外燈、電源操作程序：1）工作臺(tái)面上，不要存放不必要的物品，以保持工作區(qū)內(nèi)的潔凈氣流不受干擾。2）操作時(shí)一定注意關(guān)掉紫外，防止對(duì)實(shí)驗(yàn)人員造成傷害注意事項(xiàng)：第28頁/共46頁滅菌鍋使用及性能：細(xì)菌和細(xì)胞培養(yǎng)以及核酸等有關(guān)實(shí)驗(yàn)所用的試劑、器皿及實(shí)驗(yàn)用具，應(yīng)嚴(yán)格滅菌；對(duì)于經(jīng)過導(dǎo)入DNA重組分子的菌株，操作后必須進(jìn)行嚴(yán)格的高壓消毒滅活處理。第29頁/共46頁1）開蓋：轉(zhuǎn)動(dòng)手輪，使鍋蓋離開密封圈，添加蒸餾水剛沒至板上；2）通電：打開控制面板上電源開關(guān)，若水位低則紅燈亮；3）堆放物品：需包扎的滅菌物品，體積不超過200mm×100mm×100mm為宜，各包裝之間留有間隙，利于蒸汽穿透，提高滅菌效果；3）密封高壓鍋：推橫梁入立柱內(nèi)，旋轉(zhuǎn)手輪，壓緊鍋蓋；4）滅菌：121℃，20min；如為液體，液體必須裝在可耐高溫的玻璃器皿中，不宜超過2/3；5）滅菌結(jié)束，所有東西放入干燥箱干燥，排盡水氣。操作程序：第30頁/共46頁1）如是手動(dòng)的滅菌鍋，滅菌過程中，應(yīng)注意排凈鍋內(nèi)冷空氣，否則會(huì)影響滅菌效果。2）滅菌結(jié)束后，要等溫度降為“0”，才可打開滅菌鍋鍋蓋；3）高壓蒸汽滅菌時(shí)，須保持高溫高壓，因此必須嚴(yán)格按照操作規(guī)程操作，否則易發(fā)生意外事故。注意事項(xiàng)：第31頁/共46頁

瓊脂糖凝膠電泳的制備及核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)二第32頁/共46頁帶電荷的物質(zhì)在電場(chǎng)中的趨向運(yùn)動(dòng)稱為電泳。電泳一般分為自由界面電泳和區(qū)帶電泳兩大類:自由界面電泳不需支持物，這類電泳目前已很少使用;而區(qū)帶電泳則需用各種類型的物質(zhì)作為支持物，常用的支持物有濾紙、醋酸纖維薄膜、非凝膠性支持物、凝膠性支持物及硅膠-G薄層等，分子生物學(xué)領(lǐng)域中最常用的是瓊脂糖凝膠電泳其優(yōu)點(diǎn)主要在于操作簡(jiǎn)單、快速、靈敏。第33頁/共46頁一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆窄傊悄z電泳的原理;學(xué)習(xí)瓊脂糖凝膠電泳的操作。第34頁/共46頁二.實(shí)驗(yàn)原理瓊脂糖是一種天然聚合長(zhǎng)鏈狀分子，沸水中溶解，45℃開始形成多孔性剛性濾孔，凝膠孔徑的大小決定于瓊脂糖的濃度。DNA分子在堿性環(huán)境中帶負(fù)電荷，在外加電場(chǎng)作用下向正極泳動(dòng)。DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動(dòng)時(shí)，有電荷效應(yīng)與分子篩效應(yīng)。DNA分子量及構(gòu)型不同，其泳動(dòng)率就不同，從而分出不同的區(qū)帶。瓊脂糖凝膠電泳法分離DNA，主要是利用分子篩效應(yīng)。第35頁/共46頁

溴化乙錠（EB）為扁平狀分子，在紫外照射下發(fā)射熒光。EB可與DNA分子形成EB-DNA復(fù)合物，其發(fā)射的熒光強(qiáng)度較游離狀態(tài)EB發(fā)射的熒光強(qiáng)度大10倍以上，且熒光強(qiáng)度與DNA的含量成正比。用肉眼觀察，可檢測(cè)到5ng以上的DNA。第36頁/共46頁附注：1．影響DNA在瓊脂糖凝膠中遷移速率的因素：

1)DNA分子大小

2)

瓊脂糖濃度：不同的凝膠濃度，分辨不同范圍的DNA

Agarose：

0.5%：1-30

kb；

0.7%：

0.8-12

kb；

1.2%:

0.4-7

kb；1.5%：

0.2-3

kb.

3)DNA構(gòu)象：一般遷移速率超螺旋環(huán)狀>線狀DNA>單鏈開環(huán)。logN1V=（V：遷移速率N：堿基對(duì)數(shù)目）第37頁/共46頁

4)所加電壓：低電壓時(shí)，線狀DNA片段的遷移速率與所加電

壓成正比。

5)嵌入染料的存在：降低線性DNA遷移率。

6)電泳緩沖液的組成及其離子強(qiáng)度影響DNA的遷移率，無離

子存在時(shí)，核酸基本不泳動(dòng)，離子強(qiáng)度過大產(chǎn)熱厲害，熔

化凝膠并導(dǎo)致DNA變性，一般采用1×TAE，1×TBE，1×TPE（均含EDTA

pH8.0）。

第38頁/共46頁2．溴化乙錠（EB）：致癌劑，操作時(shí)應(yīng)戴手套，盡量減少臺(tái)面污染。3．電泳指示劑：核酸電泳常用的指示劑有兩種，溴酚藍(lán)（bromophenol

blue,

Bb）呈藍(lán)紫色；二甲苯青（xylene

cyanol,

Xc）呈藍(lán)色，它攜帶的電荷量比溴酚藍(lán)少，在凝膠中的的遷移率比溴酚藍(lán)慢。第39頁/共46頁

儀器微量移液器，電泳儀，電泳槽，微波爐

試劑瓊脂糖：1.0%；電泳緩沖液（PH8.0）（50×TAE電泳緩沖液：取Tris24.2g，冰醋酸5.7ml，0.25mol/LEDTA(pH8.0)20ml，加蒸餾水至100ml）

EB：5μl/100mlTBE

電泳