草魚魚蛋白水解工藝的研究課件

草魚魚蛋白水解工藝的研究

雖然已有文獻(xiàn)報(bào)道遲緩愛德華氏菌具有抵抗血清殺菌作用，但其分子機(jī)制尚不清楚。為此，將同等菌量的遲緩愛德華氏菌與不同體積的魚血漿孵育，獲取全菌蛋白，進(jìn)行基于等電聚焦雙向電泳的蛋白質(zhì)組學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)YihK和GpmA為顯著上調(diào)的差異蛋白。這些發(fā)現(xiàn)有助于闡明病原菌對魚血漿反應(yīng)的分子機(jī)制。根據(jù)中國金槍魚漁業(yè)觀察員項(xiàng)目于2006年2－11月在東太平洋水域作業(yè)的中國金槍魚延繩釣漁船上收集的數(shù)據(jù)，本研究對大眼金槍魚攝食強(qiáng)度的時空變動進(jìn)行了分析。結(jié)果表明，小個體大眼金槍魚的攝食強(qiáng)度較大個體大眼金槍魚高，叉長小于140cm的大眼金槍魚攝食強(qiáng)度相對較大。3－4月的攝食強(qiáng)度較小，5－11月的攝食強(qiáng)度相對較大。3月空胃率相對較高，5－11月，大眼金槍魚空胃率均低于15%。200－350m水層中的大眼金槍魚攝食活動非?；钴S。各月份和不同叉長組大眼金槍魚攝食強(qiáng)度均存在顯著性差異，且不同水層大眼金槍魚攝食強(qiáng)度也存在顯著性差異。本試驗(yàn)比較研究了黃顙魚和青梢紅鲌?jiān)谛螒B(tài)學(xué)參數(shù)、營養(yǎng)組成和A/E比值等方面的差異。結(jié)果表明，黃顙魚的臟體比、肝體比、腸脂比和性腺成熟系數(shù)顯著高于青梢紅鲌（P<0.05）。黃顙魚全魚、肌肉、卵巢中脂肪含量顯著高于青梢紅鲌（P<0.05），而全魚和卵巢中蛋白質(zhì)含量顯著高于青梢紅鲌（P<0.05）。這兩種魚肌肉和卵巢中脂肪酸組成也存在顯著差異（P<0.05）。黃顙魚與青梢紅鲌全魚和肌肉中的氨基酸組成相似。然而，這兩種魚卵巢中氨基酸組成存在顯著差異（P<0.05）。全魚和肌肉中A/E比值在這兩種魚相似，而在卵巢中A/E值有較大的差異。本實(shí)驗(yàn)為這兩種魚的營養(yǎng)組成提供了重要信息，同時以本研究的A/E比值數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)，可以初步預(yù)測這兩種魚對飼料中必需氨基酸的需要量。打聽jsx為了解超低溫凍存對大黃魚精子DNA損傷的影響，采用單細(xì)胞凝膠電泳（SCGE）法，檢測了以5%–30%DMSO為抗凍劑的超低溫凍存的大黃魚精子核DNA的損傷情況。實(shí)驗(yàn)中，對傳統(tǒng)的堿性單細(xì)胞凝膠電泳法在鋪膠、電泳條件等方面進(jìn)行改進(jìn)——使用普通玻片單層鋪膠法，在130mA、15V條件下電泳60min，獲得了清晰的電泳圖（彗星圖譜）。彗星圖經(jīng)CometScore1.5分析軟件處理，獲得彗星全長、尾長、彗星拖尾中DNA的量占細(xì)胞總DNA量的比例等參數(shù)，并計(jì)算彗星率與損傷系數(shù)；參照Goerin（1995）的分級方法，將大黃魚精子DNA損傷程度分為5級。結(jié)果表明，以5%、10%、15%、20%DMSO為抗凍劑的凍精與鮮精的活力（激活力、運(yùn)動時間與壽命）、彗星率及損傷系數(shù)差異不顯著，而以25%、30%DMSO為抗凍劑的凍精與鮮精的活力、彗星率及損傷系數(shù)差異顯著。凍精SCGE彗星率與抗凍劑DMSO濃度成正相關(guān)，凍精核DNA損傷程度隨DMSO濃度升高而增大。鮮精與凍精核DNA損傷主要為Ⅰ級和Ⅱ級損傷，Ⅲ級損傷比例低，Ⅳ級損傷只存在于25%與30%DMSO為抗凍劑的凍精中，且比例低。分析認(rèn)為，大黃魚凍精DNA損傷的主要因素為抗凍劑的毒副作用。根據(jù)2006年3—5月在熱帶太平洋中東部水域作業(yè)的中國金槍魚延繩釣漁船上收集的數(shù)據(jù)，基于反映魚類繁殖能力的重要指標(biāo)—性腺指數(shù)及其影響因素（表溫、當(dāng)?shù)乇頊鼐嗥郊皽剀S層深度），本研究對大眼金槍魚繁殖棲息地適應(yīng)性進(jìn)行了分析。結(jié)果表明，表溫、當(dāng)?shù)乇頊鼐嗥郊皽剀S層深度與熱帶太平洋中東部大眼金槍魚性腺指數(shù)的最佳上界分位數(shù)回歸方程分別為采用聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)對大黃魚四個子代各30個樣本進(jìn)行群體遺傳差異的檢測。10種同工酶共檢測到30個基因座位，其中Est-1、Est-2和Cat-3為多態(tài)座位。四個家系多態(tài)基因座位比例均為10%，平均每個座位的有效等位基因數(shù)為1.0799～1.1168，平均每個座位的實(shí)際雜合度在0.0590～0.0846之間，預(yù)期值為0.0450～0.0595。遺傳變異水平，反交子代>岱衢洋自交子代>正交子代>官井洋自交子代。Gad-1座位對應(yīng)的1條酶帶，正交子代相對遷移率Rf0.082低于其他3個家系的0.096，7528肉眼已能從凝膠上清晰分辨，可將此酶帶作為區(qū)別正交子代和其他3個子代間的標(biāo)記。采用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNA（RAPD）技術(shù)對大黃魚四個子代各20個樣本進(jìn)行群體遺傳差異的檢測。14條引物共檢測到89個位點(diǎn)，各子代的多態(tài)位點(diǎn)比例在24.01%～29.41%之間，平均遺傳雜合度為0.2135～0.2644，Shannon多樣性指數(shù)在0.0871～0.1673之間。遺傳多樣性水平，反交子代>岱衢洋自交子代>正交子代>官井洋自交子代，提示通過雜交試圖提高乃至恢復(fù)大黃魚的遺傳多樣性水平的方法是可行的。結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際情況，推測反交子代可能同時具有雙親的優(yōu)良性狀，顯示出較強(qiáng)的雜種優(yōu)勢，岱衢族雄魚與閩-粵東族雌魚的反交組合可能成為大黃魚雜交育種的最優(yōu)組合。研究探討了紫菜共附生真菌Cladosporiumsp.的次生代謝產(chǎn)物的粗提物N5及兩種純化物DLF3、DLF4對壇紫菜（Porphyrahaitanensis）葉狀體和絲狀體生長的影響。研究結(jié)果表明：粗提物N5在低濃度10-8~10-6mg/mL范圍時，對絲狀體和葉狀體的生長有促進(jìn)作用，但隨N5濃度的升高，促進(jìn)作用降低，甚至表現(xiàn)抑制作用。N5在10-6mg/mL時，絲狀體日相對生長速率可增長18.8%（p＜0.01），同時藻膽蛋白的生物合成量相對增加了2.90mg/g；N5在10-8mg/mL時，葉狀體日相對生長速率變化較大，增加了2.76%（p＜0.05），同時藻膽蛋白相對增加量可達(dá)14.16mg/g（p＜0.01）。在10-8~10-4mg/mL范圍內(nèi)，純化物DLF3和DLF4對絲狀體生長均表現(xiàn)了完全的抑制作用，并且隨濃度升高，抑制作用加強(qiáng)。在10-8mg/mL時，DLF3和DLF4分別可降低絲狀體日相對生長速率4.5%和76.5%。DLF3和DLF4對葉狀體生長影響均極顯著（p＜0.01），低濃度時促進(jìn)其生長，隨濃度升高而表現(xiàn)抑制作用，但最適濃度范圍有所不同，分別在10-8mg/mL和10-6mg/mL時表現(xiàn)較強(qiáng)的促進(jìn)作用，葉狀體日相對生長速率分別增加了7.94%和2.00%。香魚(Plecoglossusaltivelis)是一種名貴的經(jīng)濟(jì)魚類。本研究建立香魚巨噬細(xì)胞培養(yǎng)，檢測鰻弧菌對巨噬細(xì)胞呼吸爆發(fā)和噬菌能力影響。巨噬細(xì)胞由頭腎組織經(jīng)梯度離心，貼壁分離來獲得，并通過姬姆薩染色證實(shí)。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)鰻弧菌（Listonellaanguillarum）可以刺激香魚巨噬細(xì)胞產(chǎn)生呼吸爆發(fā)，其還原NBT的能力比靜息狀態(tài)顯著性增高。鰻弧菌加入到培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞，在4h香魚巨噬細(xì)胞大量吞噬細(xì)菌，在12h香魚巨噬細(xì)胞內(nèi)含的細(xì)菌減少。這是我國香魚巨噬細(xì)胞體外培養(yǎng)的首次報(bào)道，香魚巨噬細(xì)胞對鰻弧菌有很強(qiáng)殺傷能力，是抵抗病原體侵染的重要防線。根據(jù)2007年秋季在黃海北部海域進(jìn)行的定點(diǎn)底拖網(wǎng)調(diào)查，對黃鮟鱇（Lophiuslitulon）的攝食生態(tài)進(jìn)行了初步研究。結(jié)果表明，北黃海的黃鮟鱇在秋季主要以底層魚類和蝦類為食，優(yōu)勢餌料生物是矛尾蝦虎魚（Chaeturichthysstigmatias）和脊腹褐蝦（Crangonaffinis），其中矛尾蝦虎魚在食物組成中所占的比例最高，免費(fèi)發(fā)布廣告jsx是黃鮟鱇最重要的餌料生物。典范對應(yīng)分析表明，水深、經(jīng)度和緯度對黃鮟鱇的食物組成有顯著影響（P<0.05），而體長、性別和性腺成熟度則沒有顯著影響（P>0.05）。黃鮟鱇攝食矛尾蝦虎魚和脊腹褐蝦的體長范圍分別是32～152mm和34～79mm，平均體長分別為80.8±1.88mm（S.E.）和53.2±3.11mm（S.E.），它與兩種餌料生物的體長之間沒有顯著的相關(guān)關(guān)系。黃鮟鱇與矛尾蝦虎魚和脊腹褐蝦體長的比率分別為1.19～5.14和2.38～6.02，平均值分別為2.67±0.09（S.E.）和4.23±0.29（S.E.），黃鮟鱇與兩種餌料生物體長的比率與黃鮟鱇的體長之間存在極顯著的正相關(guān)關(guān)系。本文采用常規(guī)解剖、石蠟切片、蘇木精-曙紅染色（H-E）和顯微攝像等組織學(xué)研究技術(shù)，研究了雜食性的鯉魚和肉食性的鱸魚肝臟的解剖與組織結(jié)構(gòu)，并對其進(jìn)行了較為詳細(xì)的比較。結(jié)果表明：兩種魚肝臟的形態(tài)、大小、色澤、致密度及膽囊狀況等均有區(qū)別；組織結(jié)構(gòu)上兩種魚肝臟均外被薄層漿膜，切片上由于伸入肝臟實(shí)質(zhì)內(nèi)結(jié)締組織較少，很難區(qū)分為肝小葉的結(jié)構(gòu)。中央靜脈形狀多變，且分布很不規(guī)則。小葉周緣門管區(qū)有小葉間動脈血管、小葉間靜脈血管和小葉間膽管分布。胰臟外分泌組織組織包于肝臟組織之內(nèi)，沿門靜脈分枝周圍分布，構(gòu)成肝胰臟，與肝臟組織有薄層結(jié)締組織界膜分開。肝胰臟主要由腺泡構(gòu)成，腺泡內(nèi)有泡心細(xì)胞。鯉魚肝胰臟較發(fā)達(dá)，所含腺泡較多，腺細(xì)胞主要含有大量嗜酸性的酶原顆粒，少量腺細(xì)胞核致密，胞質(zhì)被H-E染為桔黃色；花鱸肝胰臟較少且其中所含腺泡較少，腺細(xì)胞亦含大量嗜酸性的酶原顆粒?；|肝臟內(nèi)沿門靜脈分枝周圍分布有大量黑色素巨噬細(xì)胞集合體，鯉魚肝臟中未觀察到類似組織結(jié)構(gòu)。根據(jù)2007年秋季在黃海北部海域進(jìn)行的定點(diǎn)底拖網(wǎng)調(diào)查，對細(xì)紋獅子魚（Liparistanakae）的攝食生態(tài)進(jìn)行了初步研究。結(jié)果表明，北黃海的細(xì)紋獅子魚在秋季主要以蝦類和底層魚類為食，屬于底棲動物食性魚類，其優(yōu)勢餌料生物是脊腹褐蝦（Crangonaffinis）。在調(diào)查海域最北部的一個站位，細(xì)紋獅子魚還攝食了較多的大瀧六線魚（Hexagrammosotakii）魚卵。典范對應(yīng)分析表明，水深、經(jīng)度、緯度和體長對細(xì)紋獅子魚的食物組成有顯著影響（P<0.05），而性別和性腺成熟度則沒有顯著影響（P>0.05）。脊腹褐蝦與細(xì)紋獅子魚體長之間呈顯著的正相關(guān)（r=0.326，P<0.05），而中華安樂蝦（Eualussinensis）與細(xì)紋獅子魚體長之間沒有顯著的相關(guān)關(guān)系（r=0.219，P>0.05）；脊腹褐蝦（r=-0.372，P<0.01）和中華安樂蝦（r=-0.799，P<0.01）與細(xì)紋獅子魚體長的比率與細(xì)紋獅子魚體長之間均呈極顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系?；貧w分析表明，細(xì)紋獅子魚的胃總重和空胃重均隨著體長的增加呈指數(shù)增長。從患暴發(fā)性出血性敗血癥中華鱉的腹腔液、腸、心、肝、和胃等組織中分離培養(yǎng)得到8株細(xì)菌。通過光、電鏡觀察和16SrDNA序列測定、比對，對所分離細(xì)菌進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明，它們分別為格氏乳球菌、假單胞菌、海氏腸球菌、屎腸球菌、人蒼白桿菌、惰性嗜血桿菌、弗氏檸檬酸桿菌和遲鈍愛德華氏菌。用含慶大霉素、頭孢唑啉、羅紅霉素、阿莫西林和阿米卡星的藥敏紙片對格氏乳球菌、弗氏檸檬酸桿菌和遲鈍愛德華氏菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，格氏乳球菌對頭孢唑啉和阿莫西林中度敏感，抑菌圈直徑平均值分別為14mm和16mm；弗氏檸檬酸桿菌對阿莫西林敏感，抑菌圈直徑平均值為23mm；遲鈍愛德華氏菌對慶大霉素和阿米卡星中度敏感，抑菌圈直徑平均值分別為15mm和17mm。北京DHL電話jsx通過測定黃姑魚精子的激活率、運(yùn)動時間及壽命研究了不同環(huán)境因子對黃姑魚精子活力的影響。結(jié)果表明，黃姑魚精液中精子濃度為（1.41±0.12）×1010個/ml；精子激活與運(yùn)動的適宜鹽度為25~35、適宜pH為7.5~8.5。在pH8.0~8.3、鹽度25條件下，精子激活率達(dá)（87.00±5.54）%，運(yùn)動時間及壽命分別為（336±14.02）s及（405.33±12.22）s。精子激活與運(yùn)動的適宜NaCl、KCl、MgCl2及葡萄糖溶液濃度分別為300~500mmol?L-1、600mmol?L-1、800~1000mmol?L-1及900mmol?L-1；精子在CaCl2溶液中有聚集現(xiàn)象出現(xiàn)，且運(yùn)動時間及壽命明顯縮短；精子在缺少HCO3-的人工海水中未能被激活；精子在無Ca2+或Mg2+的人工海水中激活率均超過80%，但運(yùn)動時間及壽命均有所縮短。于2008年11月在浙江新昌采集20尾光唇魚，采用垂直聚丙烯酰胺平板電泳，對光唇魚的肝臟、脾臟、心臟、腎臟、腦、鰓耙、眼睛、背鰭和肌肉等9種組織器官中的10種同工酶進(jìn)行研究，并分析了其酶譜表型。結(jié)果表明，除了過氧化氫酶（CAT）和酸性磷酸酶(ACP)只顯示微弱且不穩(wěn)定的區(qū)帶外，乳酸脫氫酶(LDH)、蘋果酸脫氫酶(MDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、蘋果酸酶(MEP)、醇脫氫酶