陰道分泌物及相關(guān)病原體檢驗(yàn)

陰道分泌物及相關(guān)病原體檢驗(yàn)1第1頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二提綱陰道分泌物檢驗(yàn)概述標(biāo)本采集陰道分泌物的常規(guī)檢查病原學(xué)檢驗(yàn)陰道毛滴蟲真菌細(xì)菌（革蘭氏染色,加德納菌,淋球菌梅毒螺旋體）沙眼衣原體支原體病毒(HSV,CMV,HPV,HIV)第2頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二概述陰道分泌物：由女性陰道流出的、有粘性的、乳白色液體，俗稱白帶。由前庭大腺、子宮頸腺體、子宮內(nèi)膜的分泌物和陰道粘膜的滲出液、脫落的陰道上皮細(xì)胞混合而成。性行為中，白帶會增多，對陰道有潤滑作用；一般月經(jīng)中期，稀薄透明；排卵后白帶又變粘稠，混濁而量少。其檢測常用于生殖系統(tǒng)炎癥、腫瘤的診斷及雌激素水平的判斷。陰道的自潔：白帶中含有乳酸桿菌，復(fù)層上皮細(xì)胞所含糖原經(jīng)乳酸桿菌作用后，使陰道的環(huán)境保持為酸性狀態(tài)，同時白帶中還含有溶菌酶和抗體，故有抑制細(xì)菌生長的作用。第3頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二標(biāo)本采集（婦產(chǎn)科醫(yī)師進(jìn)行）24小時前禁止性交、盆浴、陰道檢查、陰道灌洗及局部用藥；取材所用消毒的刮板，吸管或棉拭子必須清潔干燥，不粘有任何化學(xué)藥品或潤滑劑；根據(jù)不同的檢查目的可自不同部位取材。一般采用鹽水浸濕的棉拭子自陰道深部或陰道穹后部、宮頸管口等處取材；生理鹽水懸滴可檢查滴蟲，涂制成薄片以95%乙醇固定，經(jīng)過巴氏染色、吉姆薩染色或革蘭氏染色，進(jìn)行腫瘤細(xì)胞篩查或病原微生物檢查。第4頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二陰道分泌物的常規(guī)檢查外觀正常為白色稀糊狀，無氣味、量多少不一，與雌激素水平及生殖器官充血情況有關(guān)。排卵期多，清澈透明、稀薄似蛋清；排卵后2-3天量減少，并變?yōu)榛鞚嵴吵?；行?jīng)前量又增加；妊娠期量較多。

外觀異?？梢娪冢捍罅繜o色透明粘白帶：雌激素水平過高，如用雌激素藥物后及卵巢顆粒細(xì)胞瘤膿性白帶：滴蟲或化膿性感染泡沫狀膿性白帶：滴蟲性陰道炎豆腐渣樣或凝乳樣白帶：真菌性陰道炎血性白帶：腫瘤、宮頸息肉、老年性陰道炎、重度慢性宮頸炎、及其它原因引起的出血第5頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二PH正常為PH4-4.5，陰道內(nèi)呈弱酸性，這是陰道的自凈作用，可以防止致病菌繁殖。如果患有滴蟲性或細(xì)菌性陰道炎時，pH值上升，可大于5～6。pH增高還見于幼女及絕經(jīng)后的婦女。第6頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二清潔度檢查將陰道分泌物加生理鹽水作涂片，用高倍鏡檢查，主要依靠白細(xì)胞、上皮細(xì)胞、陰道桿菌與雜菌的多少劃分清潔度。

Ⅰ度大量陰道桿菌和上皮細(xì)胞，白細(xì)胞0-5/HPF，雜菌無或極少。正常Ⅱ度中等量陰道桿菌和上皮細(xì)胞，白細(xì)胞10-15/HPF，雜菌少量。亦屬正常

Ⅲ度少量陰道桿菌和上皮細(xì)胞，白細(xì)胞15-50/HPF，雜菌較多。提示有炎癥

Ⅳ度無陰道桿菌，有少量上皮細(xì)胞，白細(xì)胞>50/HPF，大量雜菌。多見于嚴(yán)重的陰道炎第7頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二正常清潔度為I-II級臨床意義:病原菌感染，清潔度降低；如果未見病原菌，則為非特異性陰道炎卵巢功能減退，清潔度降低局限性：

1分級指標(biāo)不夠，級別不夠詳細(xì)，難以實(shí)際運(yùn)用；

2不能真正反映陰道清潔狀況；

建議淘汰清潔度分級而代之以涂片染色，具體報告所見情況。第8頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二病原學(xué)檢查陰道毛滴蟲(TV)

引起陰道感染的病原體主要是陰道毛滴蟲，可致滴蟲性陰道炎。病人外陰灼熱痛、瘙癢，陰道分泌物呈稀膿性或泡沫狀。第9頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二檢測方法

1直接涂片將分泌物用生理鹽水懸滴法置于低倍顯微鏡下觀察，可見波動狀或螺旋狀運(yùn)動的蟲體將周圍白細(xì)胞或上皮細(xì)胞推動。蟲體大小為8-45um，在高倍鏡下觀察，呈頂寬尾尖倒置梨形，大小多為白細(xì)胞的2-3倍，蟲體頂端有前鞭毛4根，后端有尾鞭毛一根，體側(cè)有波動膜，借以移動。陰道分泌物的清潔度常為Ⅲ-Ⅳ度。注意事項(xiàng)陰道毛滴蟲生長繁殖的適宜溫度為25-42攝氏度，故在檢驗(yàn)時應(yīng)注意保溫，方可觀察到陰道毛滴蟲的活動。在陰道分泌物中見到阿米巴滋養(yǎng)體時，提示為阿米巴性陰道炎第10頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二2涂片染色固定染色后呈梨形，體長8-45μm，前端有一個泡狀核，核上緣有5顆排列成環(huán)狀的毛基體，由此發(fā)出5根鞭毛，其中4根前鞭毛，1根后鞭毛。3膠乳凝集快速檢查4培養(yǎng)法第11頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二真菌陰道真菌有時在陰道中存在而無害，在陰道抵抗力減低時容易發(fā)病，真菌性陰道炎以找到真菌為診斷依據(jù)，陰道真菌多為白色假絲酵母菌，偶見陰道纖毛菌、放線菌等?；颊咄怅庰W、灼痛。嚴(yán)重時坐臥不寧、痛苦異常。還可有尿頻、尿痛及性交痛。急性期分泌物增多，典型的白帶呈白色稠厚豆渣樣。檢查可見小陰唇內(nèi)側(cè)及陰道粘膜上附著白色膜狀物，擦除而露出紅腫粘膜面。急性期可見到白色膜狀物覆蓋下的糜爛面及淺表潰瘍。

第12頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二檢測方法：1濕片檢查標(biāo)本置于載玻片上，加一滴2.5mmol/LKOH溶液，蓋上蓋玻片，置于顯微鏡下檢查。先在低倍鏡下初步檢查有無菌絲和孢子，然后用高倍鏡以孢子和菌絲的形態(tài)特征鑒別。2涂片染色孢子呈卵圓形，比葡萄球菌大5～6倍，革蘭氏染色陽性，著色不均勻。常見出芽，生成假菌絲，假菌絲長短不一。3培養(yǎng)血瓊脂或沙保氏瓊脂培養(yǎng)基。第13頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二細(xì)菌1濕片檢查法取出的白帶加無菌生理鹽水一滴，在低、中倍顯微鏡下觀察桿菌、球菌的比例。比較粗略，容易漏掉重要致病菌。2干片染色法取出白帶均勻涂抹在載玻片上，晾干后革蘭氏染色（或美蘭、復(fù)合染色）后，油鏡下觀察染色特性，細(xì)菌形態(tài)。

現(xiàn)在很多醫(yī)院使用的婦科白帶多功能染色液染色速度快，著色效果好，而且可同時觀察真菌、滴蟲、核異質(zhì)細(xì)胞，所以逐步普及。3分離培養(yǎng)。白帶的細(xì)菌分離培養(yǎng)價值不太大，因?yàn)椴≡啵欠裰虏∨c陰道內(nèi)環(huán)境關(guān)系密切。較常做的是淋球菌培養(yǎng)。4特異生化反應(yīng)。第14頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二

革蘭氏染色細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法，由丹麥醫(yī)生漢斯·克里斯蒂安·革蘭（HansChristianGram，1853年－1938年）于1884年所發(fā)明。原理通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，革蘭氏陽性菌由于其細(xì)胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時，因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現(xiàn)縫隙，因此能把結(jié)晶紫與碘復(fù)合物牢牢留在壁內(nèi)，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細(xì)胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結(jié)晶紫與碘復(fù)合物的溶出，因此通過乙醇脫色后呈無色，再經(jīng)沙黃等紅色染料復(fù)染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。第15頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二

革蘭氏染色結(jié)果革蘭氏陽性菌體都呈紫色，陰性菌體都呈紅色。乳酸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠色溶血性鏈球菌、肺炎球菌、白喉?xiàng)U菌、炭疽桿菌等屬革蘭氏染色陽性菌；德納桿菌、流感嗜血桿菌、百日咳桿菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌、霍亂弧菌、流行性腦膜炎雙球菌、淋病雙球菌等屬革蘭氏陰性。第16頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二

實(shí)驗(yàn)方法革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個步驟，具體操作方法是：1）涂片固定。2）草酸銨結(jié)晶紫染1分鐘。3）自來水沖洗。4）加碘液覆蓋涂面染約1分鐘。5）水洗，用吸水紙吸去水分。6）加95%酒精數(shù)滴，并輕輕搖動進(jìn)行脫色，20秒后水洗，吸去水分。7）蕃紅染色液（稀）染2分鐘后，自來水沖洗。干燥，鏡檢。第17頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二加德納菌革蘭氏陰性或染色不定的球桿菌，和某些厭氧菌共同引起細(xì)菌性陰道炎。加德納細(xì)菌性陰道病的診斷依據(jù)：線索細(xì)胞>20%PH>4.5；胺試驗(yàn)：分泌物加2.5mmol/LKOH溶液時出現(xiàn)魚腥氣味；勻質(zhì)、稀薄、灰白色陰道分泌物，可有臭味或魚腥味。第18頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二淋球菌革蘭氏陰性雙球菌，是常見的性病病原菌之一。常引起化膿性感染，但部分患者表現(xiàn)為慢性帶菌狀。檢測方法涂片染色法取宮頸管內(nèi)分泌物涂片，用革蘭氏染色或美蘭染色鏡檢，在多形核細(xì)胞中找到腎形雙球菌。檢出率低，易被陰道內(nèi)的其它雙球菌干擾，報告方式：找到（革蘭氏陰性）雙球菌培養(yǎng)法：WHO推薦方法，診斷淋球菌感染的金標(biāo)準(zhǔn)。直接熒光抗體染色：特異性欠佳其它：基因探針、PCR等

第19頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二梅毒螺旋體

亦稱蒼白螺旋體(Treponemiapallidum，TP)，菌體細(xì)長,帶均勻排列的6～12個螺旋，體外人工培養(yǎng)較難。它可存在于梅毒患者皮膚粘膜硬下疳、皮疹、體液中。當(dāng)與健康人性接觸時，螺旋體就隨分泌物進(jìn)入健康人體有破損的皮膚粘膜（即使是很細(xì)微的肉眼看不見的損傷），而使接觸者受到感染。第20頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二檢驗(yàn)方法

1暗視野顯微鏡檢

由于顯微鏡下沒有明亮的光線，便于檢查蒼白的螺旋體。這是一種病原體檢查，對早期梅毒的診斷有十分重要的意義。

第21頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二

2梅毒血清學(xué)檢測

梅毒血清學(xué)檢查對于診斷二期、三期梅毒，以及判定梅毒的發(fā)展、痊愈、判斷藥物的療效都有十分重要的意義。包括：

非梅毒螺旋體血清學(xué)試驗(yàn)這類試驗(yàn)的抗原成分為心磷脂、卵磷脂和膽固醇的混懸液，用來檢測抗心磷脂抗體。由于這些試驗(yàn)具有相同的標(biāo)準(zhǔn)化抗原，所以敏感性相似。常用的有三種：①性病研究實(shí)驗(yàn)室玻片試驗(yàn)（VDRL）；②血清不加熱的反應(yīng)素玻片試驗(yàn)（USR）；③快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR）?？捎米髋R床篩選，并可作定量，用于療效觀察。優(yōu)點(diǎn)是快速、低廉。第22頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二

梅毒螺旋體血清學(xué)試驗(yàn)

包括有：①熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS）；②梅毒螺旋體凝集試驗(yàn)（TPHA、TPPA）；③梅毒螺旋體制動試驗(yàn)（TPI）等。這類試驗(yàn)特異性高，主要用于診斷試驗(yàn)，但不能判定治療效果，因?yàn)橐坏┗加忻范荆@一試驗(yàn)將終身陽性。但還是有假陽性問題存在?？稍斐蒚PHA陽性的疾病有：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡、糖尿病、結(jié)腸癌、淋巴肉瘤、丙型肝炎、肝硬化、AIDS、麻風(fēng)、生殖器皰疹、海洛因成癮等。第23頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二3梅毒螺旋體IgM抗體檢測

梅毒螺旋體IgM抗體檢測是近年來才開展的新的診斷梅毒的方法。IgM抗體是一種免疫球蛋白，用它來診斷梅毒具有敏感性高，能早期診斷。特異性IgM類抗體的產(chǎn)生是感染梅毒和其他細(xì)菌或病毒后機(jī)體首先出現(xiàn)的體液免疫應(yīng)答，一般在感染的早期呈陽性，隨著疾病發(fā)展而增加，IgG抗體隨后才慢慢上升。經(jīng)有效治療后IgM抗體消失，IgG抗體則持續(xù)存在，此外，TP-IgM的檢測對診斷新生兒的先天性梅毒意義很大，因?yàn)镮gM抗體分子較大，其母體IgM抗體不能通過胎盤，如果TP-IgM陽性則表示嬰兒已被感染。第24頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二4分子生物學(xué)檢測

PCR要求有條件絕對好的實(shí)驗(yàn)室和技術(shù)一流的技師，而我國目前很少有這樣高水平的實(shí)驗(yàn)室。第25頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二沙眼衣原體目前最流行的性傳播疾病之一。檢測方法：培養(yǎng)法用感染組織的滲出液或刮取物，接種雞胚卵黃囊或傳代細(xì)胞，分離衣原體，再用免疫學(xué)方法鑒定。難度大衣原體細(xì)胞學(xué)檢查直接涂片，Giemsa、碘液或熒光抗體染色鏡檢，查上皮細(xì)胞漿內(nèi)有無衣原體或包涵體。特異性及敏感性差衣原體抗原檢測ELISA或免疫熒光法血清學(xué)試驗(yàn)主要用于性病淋巴肉芽腫的輔助診斷。常用補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)，若雙份血清抗體效價升高4倍或以上者，有輔助診斷價值。也可用ELISA、凝集試驗(yàn)。5PCR法第26頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二支原體生殖道支原體主要有解脲支原體和人型支原體。解脲支原體為脲原體屬中唯一的一個種，因生長需要尿素而得名。分解尿素為其代謝特征，產(chǎn)生氨氮，使培養(yǎng)基pH上升。主要通過性生活傳播，初期患者大多無明顯癥狀，后期可引起可引起生殖系統(tǒng)炎癥，是女性不孕不育的重要原因。第27頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二檢測方法1高倍顯微鏡直接檢查法2分離培養(yǎng)法準(zhǔn)確度高，可同時進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。首選方法，金標(biāo)準(zhǔn)。3斑點(diǎn)免疫結(jié)合試驗(yàn)檢測抗原或DNA簡便、快速、特異。4血清學(xué)試驗(yàn)5PCR法第28頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二病毒單純皰疹病毒（HSV）根據(jù)抗原性的差別目前把該病毒分為I型和II型。I型主要由口唇病灶獲得，II型可從生殖器病灶分離到。感染是由于人與人的接觸。是最易侵犯人的一種病毒，但在臨床僅有一部份發(fā)病。II型疑皰疹病毒與人類的宮頸癌有關(guān)。第29頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二檢驗(yàn)方法1病毒分離鑒定采取宮頸或陰道分泌物，接種到易感細(xì)胞中培養(yǎng)1～2天。出現(xiàn)細(xì)胞腫用脹，變圓，核融合等病變，可作初步診斷。然后用免疫熒光法，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）進(jìn)行鑒定，確診HSV感染。2抗原檢測用IFA、ELISA等方法直接檢測細(xì)胞內(nèi)或分泌物中抗原，快速診斷HSV感染。3抗體檢測檢測病人血清中的抗體，可用于原發(fā)感染診斷，但不能與復(fù)發(fā)感染區(qū)別，因?yàn)槿巳篐SV感染率高。4DNA分子雜交法和PCR法檢測第30頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二人巨細(xì)胞病毒（CMV）巨細(xì)胞病毒屬皰疹病毒群，它只能在活細(xì)胞中生長，一般用人的纖維母細(xì)胞培養(yǎng)。被巨細(xì)胞病毒感染的細(xì)胞在光學(xué)顯微鏡下檢查可見到細(xì)胞和核變大，有包涵體形成。核內(nèi)包涵體周圍與核膜間有一輪“暈”，因而稱為“貓頭鷹眼細(xì)胞”，這種細(xì)胞具有形態(tài)學(xué)診斷意義。檢驗(yàn)方法同HSV

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