ImageLab中文操作手冊

ImageLab?中文操作手冊FastandReliableImageLab全自動圖像獲取和分析軟件用于MolecularImagerChemiDoc?XRS+、MolecularImagerGelDoc?XR+和CriterionStainFreeTM成像系統(tǒng)，可應(yīng)用于凝膠電泳和轉(zhuǎn)印膜的數(shù)字成像和分析，而自動化的工作流程能加速圖像獲取環(huán)節(jié)及參數(shù)優(yōu)化，并針對調(diào)整好的凝膠或轉(zhuǎn)印膜影像進(jìn)行系統(tǒng)性分析，進(jìn)而得到所需的分析數(shù)據(jù)結(jié)果。一、軟件操作界面啟動精靈程序桌面啟動精靈程序桌面主窗口工具列分析工具列狀態(tài)列1.主窗口工具列檔案管理分析數(shù)據(jù)RsltsData2.顯示工具列轉(zhuǎn)換3D成模式像亮度明暗度轉(zhuǎn)換改變圖像色彩全窗口大小放大轉(zhuǎn)換3D成模式像亮度明暗度轉(zhuǎn)換改變圖像色彩全窗口大小放大縮小圖像顯示設(shè)定圖像信息3.分析工具列（1）Imageols（2）泳道及條帶LaneandBadools（3）分子量MWMoeculareigt（4）自動定量uanttyols（5）注釋nnoationols（6）手動定量omeols二、使用ImageLab軟件進(jìn)行化學(xué)發(fā)光圖像獲取流程1.建立圖像獲取程序：在凝膠成像（GelImaging）對話框中選擇Chemi（化學(xué)發(fā)光）應(yīng)用程序在成像區(qū)域（ImagingArea）對話框中的下拉式選單中選擇合適的樣品大小（非必需，可之后通過PositionGel選擇）選擇成像曝光（ImageExposure）方法，可以人為評估曝光時間并以手動設(shè)定（ManualExposure），或是使用信號累積模式（SignalAccumulationMode，SAM）來進(jìn)行操作。在建立一個化學(xué)發(fā)光的程序時最難的任務(wù)就是圖像曝光的擬定，由于您想獲得一個充足運(yùn)用了相機(jī)大的動態(tài)范圍的圖像。過短的圖像曝光時間也許使高于膜背景的薄弱信號不能被辨認(rèn)；過長的圖像曝光時間可以使得某些條帶飽和（也就是說，超過了相機(jī)準(zhǔn)確報告信號的能力）。假如這是您第一次用ChemiDocXRS+分析化學(xué)發(fā)光樣品，您需要在使用手控或信號累積模式（SAM）之前決定一個合適的成像時間框架。獲得這個信息的最佳的方式是取得一個相對短的手工曝光并運(yùn)用ImageLab里的工具估計最適的曝光時間。2.手動曝光選擇手動設(shè)定曝光時間（Manuallysetexposuretime）并在讀秒框中輸入10秒。選擇Highlightsaturatedpixels。把膠置于透射箱的中心位置。在程序窗口中點(diǎn)擊按鈕。觀測顯示器中樣品的實(shí)時圖像，打開照膠系統(tǒng)的門并移動樣品直到位于視野的中心區(qū)域?？蛇\(yùn)用照相機(jī)的變焦滑板調(diào)節(jié)成像區(qū)域的大小。選擇按鈕獲得你的第一個圖像。若所需的圖像出現(xiàn)在計算機(jī)的顯示器上，確認(rèn)圖像中是否包含紅色的飽和區(qū)域。若有飽和區(qū)域存在，請重新以較短的曝光時間來獲取圖像。若無飽和區(qū)域存在，則可移動鼠標(biāo)置于最暗的條帶之上，在較低的右下角ImageLab窗口中觀測信號的強(qiáng)度數(shù)值。如圖中顯示強(qiáng)度為1994，照相機(jī)能記錄的最大值的32分之一（最大值為65,535）。用你的最初的10秒曝光再乘以30就可在照相機(jī)的最大動態(tài)范圍附近成像你的樣品。若你只需針對單一圖像的成像時間進(jìn)行評估，可直接在手動曝光區(qū)域中輸入300。3.信號累積模式（SignalAccumulationMode，SAM）假如預(yù)估方法局限性以精確滿足您的目的，請選擇SAM按鈕，然后按Setup按鈕。一個新的對話框會跳出來，其包具有可輸入細(xì)分的成像時間的領(lǐng)域。在這個例子中，我們已經(jīng)輸入了小于和大于我們原始的300秒曝光估計時間，由于我們有理由相信準(zhǔn)確的成像時間將會在這些時間之中。我們總共想要5個成像，推測其中一個將會與最佳成像極為接近。一個您的SAM設(shè)定的圖像顯示出現(xiàn)在對話框里。而SAM設(shè)定的影像顯示對話窗口，在您選擇按鈕后再點(diǎn)選按鈕，窗口會顯示相關(guān)進(jìn)度圖標(biāo)來說明整體圖像獲取的時間。在250秒獲取第一個圖像，同時一個小的縮略圖會出現(xiàn)在窗口的下方，以此類推整個過程將連續(xù)到獲取所有的圖像。就像前面做過的那樣，通過移動鼠標(biāo)在圖像上，您能鑒定強(qiáng)度值。您也可以通過使用位于程序窗口左邊的圖像轉(zhuǎn)換窗口（ImageTransform）中的調(diào)節(jié)劃片改變圖像的表觀。在SAM程序中的任何地方您都能通過點(diǎn)擊縮略圖查看圖像。若擬定調(diào)整到符合您規(guī)定的圖像時，點(diǎn)擊按鈕舍棄其它不適合的圖像來完畢獲取圖像的程序。也可在SAM獲取圖像的過程中或之后來保存需要的所有圖像，直接點(diǎn)選右鍵單點(diǎn)縮圖窗口內(nèi)的圖像即可進(jìn)行存盤保存下來。在決定獲取圖像的數(shù)量時，記住增長SAM圖像會導(dǎo)致背景信號的平均。當(dāng)較多的圖像被獲得時，在背景強(qiáng)度水平附近的弱的信號將會變得難以辨認(rèn)。假如辨別最弱的信號很重要，我們推薦在合適的時間下獲得單一的成像。三、建立全自動圖像獲取及分析程序（CeatingPotocols）1.啟動分析精靈窗口--SEP1.GELIMAGING（1）按照應(yīng)用（NucleicAcid/Protein/Blots）選擇相關(guān)的程序（Chooseanapplication）（2）選擇成像區(qū)域（ChooseteImagingAea）（3）選擇成像曝光時間（ChooseImageExposueTime）（4）選擇顯示設(shè)定（ChoeDslayOtins,HghightaturatedpxesandImageColo）2.圖像自動分析（AnalyzeImage）--SEP2.DTETLNESNDBN設(shè)定DTETLNESNDBN（Lowsensitivity=25）、HighBandDetectionSensitivity（Highsensitivity=75。3.分子量分析（AnalyzeMolecular）--SEP3.ANLYZEMOEULRGT設(shè)定AnalyzeMolecularWeightSettings的分子量標(biāo)準(zhǔn)品（MolecularWeightStandard）類型，所有Bio-Rad的各類標(biāo)準(zhǔn)品（涉及核酸、蛋白）均已預(yù)存。當(dāng)然，您也可以根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)設(shè)立您自定義的分子量標(biāo)準(zhǔn)品。并同時設(shè)定分子量標(biāo)準(zhǔn)品的泳道及回歸方式。4.報告輸出設(shè)定（ReportSettings）--SEP4.SPEIFYCOTETOFRPR5.結(jié)果（ResultsOverview）及報告（Report） （1）數(shù)據(jù)顯示信息（DisplayingData）（2）分析表格設(shè)定（AnalysisableOptions）（3）Lane信息（LanePofile）（4）標(biāo)準(zhǔn)曲線（StandadCurve）四、建立圖像分析程序（CeatingImagesAnalyzingPotocols）1.圖像分析（AnalyzingImages）（1）分析工具AnalysisoolBox（A）自動分析（AutoAnalysis）點(diǎn)選進(jìn)入DetectionSettings窗口設(shè)定DetectlanesandbandsBandDetectionSensitivity（Lowsensitivity=25）、HighBandDetectionSensitivity（Highsensitivity=75），接著再設(shè)定MolecularAnalysisSettings的MoleculareightStandad、StandadLanes及RegessionMetho。2.圖像工具（Imageools）可進(jìn)行水平或垂直翻轉(zhuǎn)、左右旋轉(zhuǎn)90℃或自由旋轉(zhuǎn)（Rotate）、裁剪（Crop）、反轉(zhuǎn)（InvertData）及迭合（Merge）。3.Lanes及Bands工具（LaneandBandools）使用自動（Automatic）或手動（Manual）搜尋Lane功能（A）針對所有的Lanes（All）進(jìn)行大小調(diào)整（Resize）、（djst）及刪除（Delete）等參數(shù)調(diào)整。（B）針對單一Lane（Single）進(jìn)行增長（d）、彎曲（Bend）、移動（Move）、寬度（Width）及刪除（Delete）等參數(shù)調(diào)整。（C）運(yùn)用進(jìn)行背景值的扣抵，并可點(diǎn)選（ApplytoselectedLane）針對單一Lane進(jìn)行調(diào)整。-RollingDisk參數(shù)（1-99mm）（2）BandsTab通過DetectBands進(jìn)行自動搜尋Bands功能或手動進(jìn)行增長（Add）、刪除（Delete）及（Adjust）等參數(shù)調(diào)整。.分子量分析工具（MoleculareightAnalysisools）此工具可由已知的標(biāo)準(zhǔn)品測算相對的分子量或堿基對（asepairs）。5.定量工具（Quantityools）（1）相對定量（RelativeQuantity）從圖像中選擇已知的標(biāo)準(zhǔn)品（efenceband）標(biāo)準(zhǔn)品濃度（以綠色R表達(dá)），其分析結(jié)果可從Analysistable觀測。（2）絕對定量（Absolute）通過選擇已知標(biāo)準(zhǔn)品濃度的bands（至少兩個以上,以R表達(dá)），并設(shè)定合適的回歸參數(shù)計算所得之標(biāo)準(zhǔn)曲線來推算目的bands的絕對濃度（回歸參數(shù)設(shè)定如Linear(較常用)、Point-to-Poin或Cuicsline）。RegressionMethodMinimumnumberfstanardbandsinimumnumerwithFoceThrouhOptionie21int-to-oint21uicpi546.注釋工具（Annotationools）可以通過AddAnnotations工具增長文字批注及箭頭批注，并可調(diào)整批注相對位置（Alignment）、文字屬性、顏色及旋轉(zhuǎn)方向等參數(shù)7.定量工具（olumeools）按下選擇較適合的Band型態(tài),選取想要定量分析的Band位置,并在Band上點(diǎn)擊左鍵兩下可將樣品定義為標(biāo)準(zhǔn)品、未知樣品或背景空白,并分別定義其定量依據(jù)（如kb，ppm，mg/ml…）建議用RectTool方形，先框出適當(dāng)?shù)姆叫?，并用?fù)制方式將分析的Band框出（Ctrl+C+左鍵/即可復(fù)制，或Ctrl+C