病毒感染的檢查方法與防治原則專家講座

病毒感染檢驗(yàn)方法與防治標(biāo)準(zhǔn)病毒感染的檢查方法與防治原則第1頁重點(diǎn)及難點(diǎn)標(biāo)本采集和送檢病毒分離培養(yǎng)方法病毒感染血清學(xué)診療方法人工主動免疫和被動免疫及其慣用制劑病毒感染的檢查方法與防治原則第2頁第一節(jié)病毒感染檢驗(yàn)方法標(biāo)本采集與送檢病毒分離與判定病毒感染診療病毒感染的檢查方法與防治原則第3頁一、標(biāo)本采集與送檢采集急性期標(biāo)本使用抗生素冷藏保留，快速送檢采集雙份血清病毒感染的檢查方法與防治原則第4頁二、病毒分離與判定（一）病毒分離培養(yǎng)動物接種雞胚培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)病毒感染的檢查方法與防治原則第5頁動物接種病毒感染的檢查方法與防治原則第6頁應(yīng)用：無敏感細(xì)胞培養(yǎng)病毒優(yōu)點(diǎn)：結(jié)果易觀察，可建立動物模型缺點(diǎn)：要有喂養(yǎng)條件，費(fèi)用高，有潛伏病毒，對許多人類病毒不敏感動物接種病毒感染的檢查方法與防治原則第7頁雞胚培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)：對各種病毒敏感，條件易控制，操作簡單，成本較低缺點(diǎn)：無病毒增殖指標(biāo)；有些病毒可致雞胚死亡病毒感染的檢查方法與防治原則第8頁雞胚接種部位示意圖病毒感染的檢查方法與防治原則第9頁單層細(xì)胞懸浮細(xì)胞依據(jù)細(xì)胞生長情況原代細(xì)胞二倍體細(xì)胞傳代細(xì)胞系依據(jù)細(xì)胞起源、染色體特征及傳代次數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)病毒感染的檢查方法與防治原則第10頁1.原代細(xì)胞primarycells對各種病毒敏感起源困難,獲取成本高可攜帶潛伏病毒病毒感染的檢查方法與防治原則第11頁2.二倍體細(xì)胞diploidcells對各種病毒敏感不帶病毒，無致癌潛能用于病毒疫苗生產(chǎn)病毒感染的檢查方法與防治原則第12頁

3.傳代細(xì)胞continuouscell對各種病毒敏感繁殖能力高，傳代時間長不能用于病毒疫苗生產(chǎn)病毒感染的檢查方法與防治原則第13頁病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖指征:細(xì)胞病變紅細(xì)胞吸附病毒干擾作用細(xì)胞代謝改變病毒感染的檢查方法與防治原則第14頁細(xì)胞病變效應(yīng)cytopathiceffect,CPE

正常細(xì)胞細(xì)胞病變早期細(xì)胞病變晚期病毒感染的檢查方法與防治原則第15頁

紅細(xì)胞吸附hemadsorption

帶有血凝素病毒感染細(xì)胞后，能與脊椎動物紅細(xì)胞結(jié)合雞紅細(xì)胞吸附于流感病毒感染細(xì)胞病毒感染的檢查方法與防治原則第16頁

風(fēng)疹病毒

人胚腎細(xì)胞CPE(－)?？刹《?/p>

人胚腎細(xì)胞CPE(＋)人胚腎細(xì)胞?？刹《綜PE(-)CPE(+)待檢標(biāo)本風(fēng)疹病毒(-)風(fēng)疹病毒(+)病毒干擾作用viralinterference

一些病毒不引發(fā)CPE,但可干擾感染同一細(xì)胞另一病毒增殖，抑制該病毒CPE。病毒感染的檢查方法與防治原則第17頁（二）病毒判定形態(tài)學(xué)判定血清學(xué)判定分子生物學(xué)判定病毒感染的檢查方法與防治原則第18頁1.形態(tài)學(xué)判定光學(xué)顯微鏡巨細(xì)胞病毒包涵體透射電鏡SARS病毒病毒感染的檢查方法與防治原則第19頁Ab

方法包含Ag

2.血清學(xué)判定用已知特異性抗體對病毒進(jìn)行種、型和亞型判定ELISA中和試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)病毒感染的檢查方法與防治原則第20頁

方法包含3.分子生物學(xué)方法判定對病毒蛋白抗原、核實(shí)進(jìn)行檢測蛋白印跡技術(shù)核酸擴(kuò)增核酸雜交基因芯片基因測序病毒感染的檢查方法與防治原則第21頁新病毒判定核酸類型測定理化性狀檢測基因測序和生物對比病毒感染的檢查方法與防治原則第22頁（三）病毒數(shù)量與感染性測定50%組織細(xì)胞感染量紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)空斑形成試驗(yàn)病毒感染的檢查方法與防治原則第23頁

1.50％組織細(xì)胞感染量

50％tissuecultureinfectiousdose,TCID50原理：測定50%細(xì)胞出現(xiàn)CPE最小病毒量以CPE作指標(biāo)，判斷病毒感染性和毒力測定活病毒數(shù)量病毒感染的檢查方法與防治原則第24頁

++++++++++++++++++--2.紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)redcellagglutinationtest

原理：測定使紅細(xì)胞發(fā)生凝集最小病毒量測定病毒總量（活病毒+死病毒）凝集效價：能使紅細(xì)胞呈++凝集病毒最高稀釋度為凝集效價，該稀釋度記為一個血凝單位病毒感染的檢查方法與防治原則第25頁3.空斑形成試驗(yàn)plaqueformationtest原理：將適量病毒接種單層細(xì)胞，病毒增殖使感染細(xì)胞脫落，形成肉眼可見空斑空斑形成單位（plaqueformattingunit，PFU）：由一個感染病毒增殖所致測定活病毒數(shù)量病毒感染的檢查方法與防治原則第26頁三、病毒感染診療形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)病毒成份檢測血清學(xué)診療病毒感染的檢查方法與防治原則第27頁（一）形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)電鏡和免疫電鏡檢驗(yàn)光學(xué)顯微鏡檢驗(yàn)病毒感染的檢查方法與防治原則第28頁（二）病毒成份檢測病毒蛋白抗原檢測EIA、FIA、Wb病毒核酸檢測核酸擴(kuò)增技術(shù)核酸雜交技術(shù)基因芯片技術(shù)基因測序技術(shù)病毒感染的檢查方法與防治原則第29頁（三）血清學(xué)診療中和試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)?zāi)z免疫擴(kuò)散試驗(yàn)特異性IgM抗體檢測病毒感染的檢查方法與防治原則第30頁血清學(xué)診療用途分離病毒為時已晚無法分離或難以分離病毒證實(shí)分離病毒臨床意義血清流行病學(xué)調(diào)查病毒感染的檢查方法與防治原則第31頁原理：病毒＋中和抗體病毒失去感染性1.中和試驗(yàn)neutralizingtest檢測血清中抗體水平判定未知病毒對病毒進(jìn)行半定量較少用于臨床診療，用于人群免疫情況調(diào)查病毒感染的檢查方法與防治原則第32頁原理：病毒＋特異性抗體＋雞紅細(xì)胞

不凝集帶血凝素病毒感染輔助診療判定病毒型和亞型2.血凝抑制試驗(yàn)Hemagglutinationinhibitiontest

病毒感染的檢查方法與防治原則第33頁343.補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)Complementfixationtest原理：用已知病毒可溶性補(bǔ)體抗原檢測病人血清中對應(yīng)補(bǔ)體抗體特異性低，抗體出現(xiàn)早，消失快近期感染指標(biāo)病毒感染的檢查方法與防治原則第34頁第二節(jié)病毒感染特異性預(yù)防人工主動免疫人工被動免疫病毒感染的檢查方法與防治原則第35頁1.人工主動免疫滅活疫苗減毒活疫苗亞單位疫苗基因工程疫苗重組載體疫苗核酸疫苗病毒感染的檢查方法與防治原則第36頁2.人工被動免疫免疫球蛋白血清丙種球蛋白細(xì)胞免疫制劑細(xì)胞因子病毒感染的檢查方法與防治原則第37頁逆轉(zhuǎn)錄病毒復(fù)制示意圖第三節(jié)病毒感染治療病毒感染的檢查方法與防治原則第38頁第三節(jié)病毒感染治療抗病毒化制劑干擾素和干擾素誘生劑中草藥新抗生素類治療性疫苗治療性抗體基因治療劑病毒感染的檢查方法與防治原則第39頁抗病毒化學(xué)制劑核苷類藥品阿昔洛韋、利巴韋林、拉米夫定等非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑奈韋拉平、吡啶酮、甲酸磷霉素蛋白酶抑制劑塞科納瓦、英迪納瓦、瑞托納瓦其它抗病毒藥品金剛烷胺、甲酸磷霉素病毒感染的檢查方法與防治原則第40頁41干擾素和干擾素誘生劑干擾素干擾素誘生劑PolyI:C、甘草甜素、蕓芝多糖病毒感染的檢查方法與防治原則第41頁42以流感病毒為例，試述病毒分離培養(yǎng)普通程序。病毒感染血清學(xué)診療慣用方法及原理？病毒感染早期試驗(yàn)室快速診療有哪些方法？病毒分離培養(yǎng)時對臨床標(biāo)本采集和送檢有哪些要求？病毒檢測和細(xì)菌檢測有什么區(qū)分？復(fù)習(xí)思索題病毒感染的檢查方法與防治原則第42頁中英文關(guān)鍵詞紅細(xì)胞吸附hemadsorption血清學(xué)檢測serologicaldiagnosis細(xì)胞病變效應(yīng)

cytopathiceffect,CPE血凝抑制試驗(yàn)

hemagglutinationinhibitiontest50%組織細(xì)胞感染量

50%tissuecultureinfectiousdose,TCID50

病毒感染的檢查方法與防治原則第43頁[1]NealNathanson.ViralPathogenesisandImmunity.(secondedition)，北京：科學(xué)出版社，。[2]Martín-CarboneroL,PovedaE.HepatitisBViru