細(xì)菌性食物中毒的實(shí)驗(yàn)室支持

細(xì)菌性食物中毒的實(shí)驗(yàn)室支持第1頁(yè)/共112頁(yè)食物中毒的概念定義：國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GBl4938)中界定了食物中毒，指攝入了含有生物性、化學(xué)性有毒有害物質(zhì)的食品或者把有毒有害物質(zhì)當(dāng)作食品攝入后出現(xiàn)的非傳染性(不屬于傳染病)的急性、亞急性疾病。即食物中毒指通過飲料或食物及其盛具、容器、包裝材料進(jìn)入人體的某種致病性微生物及其毒素、有害有毒的化學(xué)物質(zhì)(包括有毒動(dòng)植物)等引起的，多數(shù)是以急性胃腸炎癥狀為主要特征的一群疾病。但不包括已知的傳染病，寄生蟲病、人畜共患性疾病、食物過敏和暴飲暴食所引起的急性胃腸炎等食源性疾病。第2頁(yè)/共112頁(yè)食物中毒的特點(diǎn)

食物中毒常呈集體性爆發(fā)，其種類很多，病因也很復(fù)雜，一般具有下列共同特點(diǎn)：⑴.潛伏期短，在短時(shí)間內(nèi)可能有很多人同時(shí)發(fā)病。⑵.有相似的臨床表現(xiàn)，病人都有大致相同的臨床表現(xiàn)。⑶.與飲食有關(guān)，凡進(jìn)食某種有毒食品的人大都發(fā)病，沒有進(jìn)食該種有毒食品的人不發(fā)病。發(fā)病和食物有明顯關(guān)系，一旦停止食用這種有毒食品，發(fā)病立即停止。⑷.發(fā)病率高、爆發(fā)性，人與人不傳染，一般沒有傳染病流行時(shí)的余波或拖尾現(xiàn)象。(5).發(fā)病季節(jié)性強(qiáng)，一般多發(fā)于4-10月份，6-9月進(jìn)入高峰期。第3頁(yè)/共112頁(yè)食物中毒分類一般按病原物質(zhì)，將食物中毒分為五類。⑴.細(xì)菌性食物中毒：是指由于食入被病原菌或其有毒代謝產(chǎn)物污染的食物后，所引起的以急性腸胃炎為主要中毒癥狀的疾病。⑵.真菌性食物中毒：指食入被真菌及其毒素污染的食物而引起的食物中毒。⑶.動(dòng)物性食物中毒：指攝入動(dòng)物性有毒食品引起的食物中毒。⑷.植物性食物中毒：攝入植物性中毒食品引起的食物中毒。⑸.化學(xué)性食物中毒：攝入化學(xué)性有毒食品引起的食物中毒。第4頁(yè)/共112頁(yè)細(xì)菌性食物中毒細(xì)菌性食物中毒：是指人們吃了大量活菌或活菌產(chǎn)的毒素養(yǎng)污染的食品所引起的種毒現(xiàn)象。細(xì)菌性食物中毒按發(fā)病機(jī)理又分為感染型食物中毒、毒素型食物中毒和混合型食物中毒。第5頁(yè)/共112頁(yè)感染型食物中毒

指食物被污染并繁殖了大量食物中毒性微生物（包括病原菌和條件致病菌，如沙、志、金、變形、蠟樣、副溶、耶爾森、產(chǎn)氣莢膜梭菌、枯草桿菌等）這種含有大量活菌（一般在107/g以上）的食物被攝入機(jī)體后，引起一系列消化道癥狀的現(xiàn)象，稱為感染型食物中毒，此類種毒是由細(xì)菌本身引起。第6頁(yè)/共112頁(yè)毒素型食物中毒

食物被能產(chǎn)生毒素的微生物如葡萄球菌、肉毒梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌等污染，并在適宜的條件下生長(zhǎng)繁殖，產(chǎn)生了某種毒素，這種毒素同污染的微生物一起或單獨(dú)隨食物被攝入體內(nèi)，所引起的一系列的中毒現(xiàn)象，稱為毒素型食物中毒。第7頁(yè)/共112頁(yè)混合型食物中毒

有的細(xì)菌性食物中毒，有感染型食物中毒的特征，又具有毒素型食物中毒的特征，稱為混合型食物中毒。如產(chǎn)氣莢膜梭菌、蠟樣芽胞桿菌等引起的食物中毒，這種食物中毒在檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)得視毒素養(yǎng)的檢測(cè)。第8頁(yè)/共112頁(yè)樣品采集及時(shí)、準(zhǔn)確、有代表性地采集食源性疾病相關(guān)樣本，是保證實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)質(zhì)量的前提、對(duì)食源性疾病病因的明確診斷、病人的急救治療、查明有毒食品來(lái)源及毒性具有重要意義。第9頁(yè)/共112頁(yè)食物中毒標(biāo)本的采集原則1．典型性原則食物中毒標(biāo)本的采集不同于衛(wèi)生評(píng)價(jià)采樣，應(yīng)根據(jù)可疑食物的性質(zhì)采集可能含毒最多的標(biāo)本。2．適時(shí)性原則為了防止可疑食物丟失和被檢物質(zhì)組分發(fā)生變化，保證得到正確結(jié)論必須盡快采樣送檢。流調(diào)人員到達(dá)現(xiàn)場(chǎng)后應(yīng)及時(shí)采樣送檢。3．適量性原則

由于引起食物中毒的毒物種類繁多，有時(shí)需實(shí)驗(yàn)室檢索的項(xiàng)目很多，這要求有一定的樣本量，在可能的情況下盡量多采。第10頁(yè)/共112頁(yè)采樣前的準(zhǔn)備(1)

人員的準(zhǔn)備：一般要指派2名以上專業(yè)人員趕赴現(xiàn)場(chǎng)，必要時(shí)還需要檢驗(yàn)人員和其他部門有關(guān)人員協(xié)作前往。

交通工具準(zhǔn)備：在接到疑似食物中毒報(bào)告后，在城區(qū)1小時(shí)、郊區(qū)2小時(shí)內(nèi)到達(dá)現(xiàn)場(chǎng)。第11頁(yè)/共112頁(yè)采樣前的準(zhǔn)備(2)●調(diào)查采樣箱準(zhǔn)備：屬常用的物品，應(yīng)提前準(zhǔn)備，定期檢查，及時(shí)補(bǔ)充。常備以下物品：

1、采樣工具：注射器、肛拭子、消毒棉簽、消毒紗布、調(diào)匙、勺子、夾子、鑷子、剪刀、酒精燈、標(biāo)號(hào)用品、75%酒精、其他消毒滅菌器具、吸管、火柴等。

2、樣品容器：滅菌塑料袋、廣口瓶、滅菌試管、滅菌糞便盒、樣品冷藏設(shè)施等。第12頁(yè)/共112頁(yè)采樣前的準(zhǔn)備(3)●現(xiàn)場(chǎng)快速檢驗(yàn)、測(cè)量設(shè)備：食物中毒快速檢樣箱，食品溫度測(cè)試計(jì)、消毒劑濃度檢測(cè)試紙等?！裾{(diào)查用表：食物中毒事故個(gè)案調(diào)查登記表、調(diào)查筆錄、樣品采集記錄表、樣品送檢單、調(diào)查結(jié)果匯總表、空白紙等●參考資料：食物中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)、有關(guān)衛(wèi)生部規(guī)章、參考書籍等。●其它有關(guān)物品：如便攜式電腦、手機(jī)或?qū)χv機(jī)等通訊設(shè)施以及用于保存運(yùn)送培養(yǎng)基的冰箱、冰塊等●取證工具：照相機(jī)、攝像機(jī)等第13頁(yè)/共112頁(yè)采樣用容器和試劑要求1.

采樣容器應(yīng)采用潔凈、無(wú)色、無(wú)毒的聚乙烯塑料或硬質(zhì)玻璃（又稱硼硅玻璃）。樣品瓶必須專瓶專用，切不可用實(shí)驗(yàn)室裝過試劑的瓶作采樣瓶。2.用于微生物檢驗(yàn)容器基本要求是選耐高溫、無(wú)毒、耐用材料制成，容器包裝好后可防滲漏，能承受空中或地面運(yùn)送過程中可能發(fā)生的溫度和壓力變化。所有采樣用具、容器需嚴(yán)格滅菌，并且不能存放過長(zhǎng)時(shí)間，防止污染影響檢驗(yàn)結(jié)果。３、采樣用的生理鹽水、運(yùn)送培養(yǎng)基及有關(guān)試劑等都應(yīng)該滿足新鮮、無(wú)菌的要求，同時(shí)應(yīng)符合采樣所需要的試劑量，如運(yùn)送糞便的培養(yǎng)基為5ml/管為宜。第14頁(yè)/共112頁(yè)細(xì)菌性食物中毒標(biāo)本的采集（1）剩余食物：采集殘余食物時(shí)應(yīng)盡量避免采集不相干的標(biāo)本。殘余食物用滅菌工具采取，置于滅菌容器內(nèi)。如無(wú)剩余食物，可用滅菌棉拭在可疑食物容器內(nèi)涂擦，置于裝有少量生理鹽水試管內(nèi)。體積較大的肉及魚等，應(yīng)將表面燒灼滅菌后割取內(nèi)部肌肉，置于滅菌容器內(nèi)?？赡墓揞^可直接送檢，如僅剩余空盒，可將空盒送檢。炊事用具：如鍋、刀、抹布、砧板等，可用棉試大用具上涂擦，置于裝有少量生理鹽水的試管中。如砧板已洗過，可用刀用力刮取表面層木屑，置于滅菌容器中。第15頁(yè)/共112頁(yè)細(xì)菌性食物中毒標(biāo)本的采集（2）糞便、肛拭：糞便標(biāo)本應(yīng)盡量在病程早期和治療前采集，同時(shí)應(yīng)采集新鮮糞便，選取有膿血、粘液部分3-5克、水樣便取含絮狀物的2-5ml，盛于無(wú)菌容器中及時(shí)送檢。若無(wú)法獲得糞便時(shí)，可用保存液或增菌液濕潤(rùn)過的棉拭子插入肛門4-5cm深處（小兒2-3cm），輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)一圈，擦取直腸表面的黏液后取出，盛入運(yùn)送培養(yǎng)基或保存液中送檢。注意為保證多個(gè)檢驗(yàn)項(xiàng)目的開展，同一病人應(yīng)至少采集2支肛拭

第16頁(yè)/共112頁(yè)細(xì)菌性食物中毒標(biāo)本的采集（3）嘔吐物：直接放入無(wú)菌容器中及時(shí)送檢咽拭樣品：采集時(shí)應(yīng)將棉簽檫拭咽喉及扁桃體紅腫處（特別是白膜處），然后將棉簽插入4-5ml生理鹽水中，尾部棄去血液：采集患者急性發(fā)病期（3天內(nèi)）和恢復(fù)期（2周左右）各3ml全血分離血清送檢第17頁(yè)/共112頁(yè)檢驗(yàn)項(xiàng)目霍亂弧菌135、副溶血弧菌及其它致病性弧菌P131、金黃色葡萄球菌P133、蠟樣芽胞桿菌P134、沙門菌P126、變形桿菌、致瀉性大腸埃希菌P128、空腸彎曲菌P130、小腸結(jié)腸耶爾森菌P131、志賀菌P127、溶血性鏈球菌及單核細(xì)胞增生李斯特菌P132等引起的細(xì)菌性食物中毒樣品檢驗(yàn)

第18頁(yè)/共112頁(yè)檢驗(yàn)宗旨竭盡全力盡快找到病原體快速、準(zhǔn)確可與傳統(tǒng)方法不一定完全相同

第19頁(yè)/共112頁(yè)檢驗(yàn)程序

樣品采集↓初步檢驗(yàn)→活菌數(shù)、直接鏡檢(涂片→染色→鏡檢)↓分離培養(yǎng)(包括增菌培養(yǎng)和直接平板培養(yǎng))↓初篩試驗(yàn)↓純培養(yǎng)↓全面鑒定（生化試驗(yàn)、血清分型、噬菌體試驗(yàn)等）↓報(bào)告第20頁(yè)/共112頁(yè)直接涂片染色鏡檢

觀察存在于檢品中特種形態(tài)的細(xì)菌如霍亂弧菌、彎曲菌、球菌等，為進(jìn)一步的檢驗(yàn)提供有用的信息

第21頁(yè)/共112頁(yè)檢樣的處理病源檢樣因含較多病原菌而一般無(wú)須做預(yù)增菌處理，但若病源檢樣為服過抗生素后采集的檢樣應(yīng)按檢驗(yàn)項(xiàng)目要求而進(jìn)行預(yù)增菌處理以保護(hù)和放大目的病原菌直接插入2ml預(yù)增管37℃預(yù)增菌4～6h

第22頁(yè)/共112頁(yè)直接培養(yǎng)將無(wú)須做增菌處理的病源檢樣按檢驗(yàn)項(xiàng)目要求直接接種于各相應(yīng)培養(yǎng)基第23頁(yè)/共112頁(yè)增菌培養(yǎng)及接種將預(yù)增菌處理后的服過抗生素后采集的病源檢樣按檢驗(yàn)項(xiàng)目要求接種各相應(yīng)增菌液培養(yǎng)（保證特定的微生物在其中繁殖）增菌培養(yǎng)后接種于各相應(yīng)培養(yǎng)基第24頁(yè)/共112頁(yè)初篩試驗(yàn)克氏雙糖/三糖鐵/腸道綜合發(fā)酵管1、管2PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))VIDAS(酶聯(lián)免疫試驗(yàn)：酶分子與抗體或抗抗體分子共價(jià)結(jié)合，此種結(jié)合不會(huì)改變抗體的免疫學(xué)特性，也不影響酶的生物學(xué)活性)第25頁(yè)/共112頁(yè)可疑菌的鑒定全面生化試驗(yàn)噬菌體試驗(yàn)血清分型毒素或毒素基因測(cè)試第26頁(yè)/共112頁(yè)毒素或毒素基因測(cè)試霍亂弧菌腸毒素、葡萄球菌腸毒素、EIEC侵襲毒素、ETEC腸毒素按國(guó)標(biāo)方法進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn)或酶聯(lián)免疫試驗(yàn)（VIDAS等）毒素基因測(cè)試：霍亂弧菌腸毒素、葡萄球菌腸毒素、致瀉性大腸埃希菌的所有毒力基因均可用PCR檢測(cè)，特別是對(duì)致瀉性大腸埃希菌的定論應(yīng)以毒素或毒素基因?yàn)闇?zhǔn)第27頁(yè)/共112頁(yè)患者血清的試驗(yàn)疑似傷寒或副傷寒的患者應(yīng)取發(fā)病一周的血清做肥達(dá)氏反應(yīng)，用作輔助診斷將患者急性期和恢復(fù)期的血清做凝集效價(jià)的對(duì)比，4倍增長(zhǎng)可確診第28頁(yè)/共112頁(yè)檢驗(yàn)結(jié)果的判定應(yīng)以找到病原體或其毒素為最終結(jié)論，在此之前所有的快速檢驗(yàn)方法如PCR、VIDAS等得到的結(jié)果僅供參考

應(yīng)注意非病源檢樣與病源檢樣檢出的病原體的統(tǒng)一性

第29頁(yè)/共112頁(yè)檢驗(yàn)結(jié)果的判定原則（1）多數(shù)患者樣品中檢出的致病意義明確的細(xì)菌在種類、生化和/或血清型、毒素型均一致時(shí)，可報(bào)告為細(xì)菌性食物中毒的病原體第30頁(yè)/共112頁(yè)檢驗(yàn)結(jié)果的判定原則（2）非病源檢樣與病源檢樣檢出占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)但通常致病意義不甚明確的細(xì)菌如大腸艾希菌、溶藻弧菌等，且其在種類、生化和/或血清型均一致，同時(shí)本次細(xì)菌性食物中毒事件中非患者對(duì)照標(biāo)本中未檢出該菌時(shí)，應(yīng)做該菌的毒素、毒素基因或動(dòng)物試驗(yàn)，陽(yáng)性結(jié)果可報(bào)告為細(xì)菌性食源性疾病事件的病原體第31頁(yè)/共112頁(yè)檢驗(yàn)結(jié)果的判定原則（3）樣品中檢出的生化、血清符合致瀉性大腸艾希菌、金黃色葡萄球菌，一定要以毒素、毒素基因測(cè)試陽(yáng)性為最終結(jié)論報(bào)告蠟樣芽胞桿菌在非病源檢樣中須達(dá)到105cfu/g(ml)以上者才有報(bào)告價(jià)值第32頁(yè)/共112頁(yè)細(xì)菌檢驗(yàn)重要篩檢試驗(yàn)氧化酶試驗(yàn)（1%鹽酸二甲基對(duì)苯二胺溶液，再加α-萘酚溶液一滴）接觸酶試驗(yàn)（過氧化氫酶試驗(yàn)）第33頁(yè)/共112頁(yè)氧化酶試驗(yàn)用于分辨G-桿菌中腸桿菌科及弧菌科兩類細(xì)菌

革蘭陰性桿菌陽(yáng)性反應(yīng)弧菌科（呈現(xiàn)粉紅色，再加呈現(xiàn)鮮藍(lán)色）

陰性反應(yīng)腸桿菌科第34頁(yè)/共112頁(yè)接觸酶試驗(yàn)用于分辨葡萄球菌及鏈球菌

革蘭陽(yáng)性球菌

陽(yáng)性反應(yīng)葡萄球菌

（產(chǎn)生氣泡）

陰性反應(yīng)鏈球菌第35頁(yè)/共112頁(yè)沙門氏菌檢測(cè)第36頁(yè)/共112頁(yè)沙門氏菌食物中毒主要特征來(lái)源:生食和烹飪不完全的食物，主要是肉類蛋品。癥狀：惡心嘔吐、胃痛、腹瀉、出冷汗、發(fā)燒（38-40℃）。較重者可出現(xiàn)煩躁不安、昏迷、譫語(yǔ)、抽搐等中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，也可以出現(xiàn)尿少、尿閉，呼吸困難等癥狀。同時(shí)還出現(xiàn)面色蒼白、口唇青紫、四肢發(fā)涼、血壓下降等周圍循環(huán)衰竭癥狀，甚至休克，如不及時(shí)救治，最后可因循環(huán)衰竭而死亡。潛伏期一般為12～36h，短者6h，長(zhǎng)者48～72h。第37頁(yè)/共112頁(yè)概況1880年發(fā)現(xiàn)，至今已有2600種有動(dòng)力（除雞-雛沙門菌）大多產(chǎn)H2S

（除副甲傷寒沙門菌等）產(chǎn)酸大多產(chǎn)氣（除傷寒、雞-雛沙門菌）靛基質(zhì)-、蔗糖-、乳糖-甘露醇+符合腸桿菌科特征（葡萄糖+、硝酸鹽還原+、氧化酶-）第38頁(yè)/共112頁(yè)沙門氏菌檢驗(yàn)流程血液、骨髓糞便、肛拭子食品25g分離血清血培養(yǎng)瓶肥達(dá)試驗(yàn)接種血平板接種BS和XLD/HE平板，37℃過夜TTB（42℃）和SC（37℃）過夜225mLBP，37℃過夜挑取可疑菌落TSI、尿素、靛基質(zhì)、氰化鉀、賴氨酸、營(yíng)養(yǎng)瓊脂甘露醇+、山梨醇+ONPG–商品化生化鑒定系統(tǒng)HS+靛基質(zhì)–尿素–KCN–賴氨酸+HS+靛基質(zhì)+尿素–KCN–賴氨酸+HS–靛基質(zhì)–尿素–KCN–賴氨酸+/–反應(yīng)結(jié)果與左側(cè)描述不符非沙門氏菌沙門氏菌、血清學(xué)試驗(yàn)報(bào)告第39頁(yè)/共112頁(yè)沙門氏菌菌落形態(tài)BS瓊脂：培養(yǎng)40～48h，菌落為黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色，光滑、邊緣整齊、圓形，菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色；有些菌株形態(tài)成灰綠色菌落，周圍培養(yǎng)基不變。HE瓊脂：藍(lán)綠色或藍(lán)色，透明、光滑、濕潤(rùn)、邊緣整齊、圓形，多數(shù)菌落中心黑色或幾乎全黑色；有些菌株為黃色，中心黑色或幾乎全黑色。XLD瓊脂：菌落呈粉紅色，帶或不帶黑色中心，有些菌株可呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色中心，或呈現(xiàn)全部黑色的菌落；有些菌株為黃色，帶或不帶黑色中心。第40頁(yè)/共112頁(yè)沙門氏菌菌落形態(tài)BS第41頁(yè)/共112頁(yè)沙門氏菌菌落形態(tài)XLD第42頁(yè)/共112頁(yè)沙門氏菌菌落形態(tài)HE第43頁(yè)/共112頁(yè)主要生化試驗(yàn)五項(xiàng)生化試驗(yàn)H2S靛基質(zhì)PH7.2尿素酶KCN賴氨酸脫羧酶第44頁(yè)/共112頁(yè)主要生化試驗(yàn)TSI培養(yǎng)基上培養(yǎng)情況典型沙門氏菌：表面（-）粉紅色、底層（+）黃色、HS（+）底層有黑色、有動(dòng)力表面（+）黃色、HS（-）的可排除其它情況均有可能是沙門氏菌第45頁(yè)/共112頁(yè)主要生化試驗(yàn)?zāi)c道綜合發(fā)酵管1：甘露醇（上斜面）+、葡萄糖（下直面）+產(chǎn)氣腸道綜合發(fā)酵管2：蔗糖-、動(dòng)力+、H2S+、靛基質(zhì)-第46頁(yè)/共112頁(yè)主要生化試驗(yàn)典型五項(xiàng)生化試驗(yàn)H2S（+）、靛基質(zhì)（-）、PH7.2尿素酶（-）、KCN（-）、賴氨酸脫羧酶（+）第47頁(yè)/共112頁(yè)血清凝集（1）A-F多價(jià)+OH1H2第48頁(yè)/共112頁(yè)血清凝集（2）若生化反應(yīng)符合，而血清A-F多價(jià)-，考慮：Vi抗原（傷寒、副丙傷寒沙門菌）遮蔽，煮沸后再凝亞利桑那菌：遲緩發(fā)酵乳糖，延長(zhǎng)Mac平板培養(yǎng)時(shí)間至4天可能是A-F以外的沙門菌極可能是血清交叉的檸檬酸桿菌第49頁(yè)/共112頁(yè)報(bào)告方式A群甲型副傷寒沙門菌1,2,12:aB群乙型副傷寒沙門菌1,4,5,12:b:1,2

鼠傷寒沙門氏菌1,4,5,12:i:1,2C群丙型副傷寒沙門菌6,7,vi:c:1,5

豬霍亂沙門菌6,7,:c:1,5D群腸炎沙門菌1,9,12:g,m

傷寒沙門菌1,9,vi:d

雞雛沙門菌1,9,12:-第50頁(yè)/共112頁(yè)志賀氏菌檢測(cè)第51頁(yè)/共112頁(yè)志賀氏菌食物中毒主要特征來(lái)源：被污染的冷盤菜、涼拌菜等。癥狀：腸炎型：腹痛腹瀉為主，水樣便。痢疾型：腹痛、腹部痙攣、惡心、發(fā)熱、里急后重、粘血便。潛伏期：1-3天，平均2天。第52頁(yè)/共112頁(yè)概況至今已有4群（A、B、C、D）、32種（A-痢疾志賀菌10個(gè)血清型；B–福氏志賀菌6個(gè)血清型+X、Y變種；C-鮑氏志賀菌15個(gè)血清型、D-宋內(nèi)1個(gè)血清型，S，R兩相）無(wú)動(dòng)力乳糖-

（除宋內(nèi)遲緩發(fā)酵+）不產(chǎn)H2S產(chǎn)酸不產(chǎn)氣（除F6產(chǎn)極少量氣泡）靛基質(zhì)大多+（宋內(nèi)-）、蔗糖-甘露醇+（痢疾志賀菌為-）符合腸桿菌科特征（葡萄糖+、硝酸鹽還原+、氧化酶-）第53頁(yè)/共112頁(yè)志賀氏菌檢驗(yàn)流程標(biāo)本糞便、肛拭子食品25g、水（濾膜法）1:10與GN增菌液混合，36℃，6～8hSS/HE、EMB/MAC，36℃，18～24hSS/HE、EMB/MAC，36℃，18～24h可疑菌落接種TSI、葡萄糖半固體，36℃，18～24hK/A、H2S–、不產(chǎn)氣、無(wú)動(dòng)力非如左述的各種反應(yīng)結(jié)果+血清玻片凝集（四種多價(jià)）–+B群血清凝集–+D群凝集–A1、A2+生化分群試驗(yàn)（5％乳糖、甘露醇、棉子糖、甘油、吲哚）+C群血清凝集–A3～A12+制菌懸液100℃水浴30min重做玻片凝集+–非志賀氏菌報(bào)告分群及分型結(jié)果鏡檢進(jìn)一步試驗(yàn)（葡萄糖銨、西蒙氏檸檬酸鹽、賴氨酸、尿素、氰化鉀、水楊苷和七葉苷）有任何陽(yáng)性結(jié)果第54頁(yè)/共112頁(yè)志賀氏菌菌落形態(tài)SS瓊脂：菌落呈無(wú)色透明或半透明、光滑、濕潤(rùn)、邊緣整齊、圓形中等大小菌落；宋內(nèi)志賀菌能延緩發(fā)酵乳糖，培養(yǎng)24h后可以出現(xiàn)紅色菌落，宋內(nèi)志賀菌常形成扁平、粗糙的菌落。MAC瓊脂：菌落呈灰白色透明或半透明菌落、光滑、濕潤(rùn)、邊緣整齊、圓形菌落。HE瓊脂：菌落呈淡藍(lán)綠色或無(wú)色半透明、光滑、濕潤(rùn)、邊緣整齊、圓形菌落。EMB瓊脂：菌落呈灰白色半透明、光滑、濕潤(rùn)、邊緣整齊、圓形菌落。第55頁(yè)/共112頁(yè)志賀氏菌菌落形態(tài)第56頁(yè)/共112頁(yè)志賀氏菌菌落形態(tài)第57頁(yè)/共112頁(yè)志賀氏菌菌落形態(tài)第58頁(yè)/共112頁(yè)志賀氏菌菌落形態(tài)第59頁(yè)/共112頁(yè)初步生化鑒定從平板上挑取3～4個(gè)可疑菌落，接種TSI和葡萄糖半固體培養(yǎng)基各一管，36℃培養(yǎng)18～24h。第60頁(yè)/共112頁(yè)初步生化鑒定TSI生長(zhǎng)結(jié)果（現(xiàn)象）：斜面產(chǎn)堿仍為粉紅色或紅色；底層產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，變黃色；不產(chǎn)硫化氫，不產(chǎn)黑色。半固體培養(yǎng)基：沿線生長(zhǎng)，無(wú)動(dòng)力。第61頁(yè)/共112頁(yè)初步生化鑒定可棄去地培養(yǎng)物：在TSI表面呈蔓延生長(zhǎng)的。18～24h內(nèi)發(fā)酵乳糖、庶糖的。不分解葡萄糖，只在半固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的。產(chǎn)氣的。有動(dòng)力的。產(chǎn)硫化氫的。第62頁(yè)/共112頁(yè)血清凝集先用四種志賀氏菌多價(jià)血清檢查，如果由于K抗原的存而不凝集，應(yīng)將菌液煮沸后再檢查。如果凝集，再用A1、A2、B多價(jià)和D群血清分別試驗(yàn)。如是B群福氏志賀菌凝集，則用群和型因子血清分別檢查。四種多價(jià)血清不凝集者，可用鮑氏多價(jià)1、2、3分別檢查，并進(jìn)一步有1～15各型因子血清檢查；如鮑氏多價(jià)不凝集，可用痢疾志賀菌3～12多價(jià)血清及各型因子血清檢查。第63頁(yè)/共112頁(yè)血清凝集若生化反應(yīng)符合，而血清四種多價(jià)-，考慮：A、C群志賀菌O抗原外有K包膜抗原遮蔽，煮沸后再凝可能是EIEC，再做大生化以鑒別宋內(nèi)的R相菌，用R相血清凝集可能是蜂窩哈夫尼亞菌，做大生化以鑒別可能是類志賀鄰單胞菌，觀察動(dòng)力、氧化酶第64頁(yè)/共112頁(yè)報(bào)告方式痢疾志賀菌1型福氏志賀菌2a型福氏志賀菌X變種鮑氏志賀菌13型宋內(nèi)志賀菌S相第65頁(yè)/共112頁(yè)金黃色葡萄球菌第66頁(yè)/共112頁(yè)金葡菌食物中毒主要特征來(lái)源：主要存在于人們的皮膚、鼻、喉、耳等部位。進(jìn)食了被污染的肉類、乳品、定粉制品。癥狀：惡心、嘔吐（頻繁而劇烈），腹痛、腹瀉，由于劇烈嘔吐和腹瀉，可引起大量失水而發(fā)生外周循環(huán)衰竭和虛脫。潛伏期：一般30min～6h，最短為15min左右，很少有超過8h的。第67頁(yè)/共112頁(yè)概況典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8μm左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀。金黃色葡萄球菌無(wú)芽胞、鞭毛，大多數(shù)無(wú)莢膜，革蘭氏染色陽(yáng)性。金黃色葡萄球菌營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，需氧或兼性厭氧，最適生長(zhǎng)溫度37°C，最適生長(zhǎng)pH7.4,干燥環(huán)境下可存活數(shù)周。平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起，直徑1～2mm。血平板菌落周圍形成透明的溶血環(huán)。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在10～15%NaCl肉湯中生長(zhǎng)?？煞纸馄咸烟?、麥芽糖、乳糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅反應(yīng)陽(yáng)性，VP反應(yīng)弱陽(yáng)性。許多菌株可分解精氨酸，水解尿素，還原硝酸鹽，液化明膠。金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)的抵抗力，對(duì)磺胺類藥物敏感性低，但對(duì)青霉素、紅霉素等高度敏感。對(duì)堿性染料敏感，十萬(wàn)分之一的龍膽紫液即可抑制其生長(zhǎng)。第68頁(yè)/共112頁(yè)金黃色葡萄球菌

檢驗(yàn)流程食物25g+生理鹽水225mL，取5mL50mL7.5％NaCl肉湯血平板、B-P平板36℃24h染色鏡檢血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)觀察菌落形態(tài)報(bào)告嘔吐物、糞便肛拭了、涂抹拭子3個(gè)連續(xù)稀釋度接種B-P平板36℃48h10mL7.5％NaCl肉湯BHI肉湯和營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面第69頁(yè)/共112頁(yè)金黃色葡萄球菌菌落形態(tài)B-P瓊脂：菌落圓形、凸起、濕潤(rùn)，直徑2～3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈，接種針接觸菌落有似奶油至樹膠樣硬度，偶然會(huì)遇到非脂肪溶解的類似菌落，但無(wú)混濁帶及透明圈。長(zhǎng)期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落比典型菌落所產(chǎn)生的黑色較淡些，外觀可能粗糙并干燥。血平板：形成較菌落較大，圓形、光滑凸起、濕潤(rùn)、金黃色（有時(shí)為白色），菌落周圍可見完全透明溶血圈。第70頁(yè)/共112頁(yè)金黃色葡萄球菌菌落形態(tài)第71頁(yè)/共112頁(yè)血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)可疑菌落1個(gè)（計(jì)數(shù)時(shí)取5個(gè)菌落分別接種）→5mLBHI和營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面，36℃培養(yǎng)24h→0.2～0.3mLBHI培養(yǎng)物+0.5mL兔血漿→36℃水浴箱或培養(yǎng)箱→每半小時(shí)觀察一次,觀察6小時(shí)→凝固為陽(yáng)性,反之為陰性（同時(shí)以血漿凝固酶陽(yáng)性和陰性葡萄球菌株的肉湯培養(yǎng)物作對(duì)照）。第72頁(yè)/共112頁(yè)副溶血性弧菌第73頁(yè)/共112頁(yè)副溶血性弧菌食物中毒主要特征來(lái)源：是進(jìn)食含有該菌的食物所致，主要來(lái)自海產(chǎn)品，如墨魚、海魚、海蝦、海蟹、海蜇，以及含鹽分較高的腌制食品，如咸菜、腌肉等。癥狀：主要的癥狀為腹痛，優(yōu)勢(shì)腹痛在臍部附近劇烈。腹痛是本病的特點(diǎn)，多為陣發(fā)性絞痛，并有腹瀉、惡心、嘔吐、畏寒發(fā)熱，大便似水樣。便中混有黏液或膿血。潛伏期：3～24h，一般10小時(shí)左右。第74頁(yè)/共112頁(yè)概況副溶血弧菌系弧菌科弧菌屬，革蘭染色陰性，兼性厭氧菌，為多形態(tài)桿菌或稍彎曲弧菌。本菌嗜鹽畏酸。最適宜的培養(yǎng)基：溫度為30℃—37℃，含鹽2.5%—3%(若鹽濃度低于0.5%則不生長(zhǎng)），pH值為8.0—8.5。本菌對(duì)酸較敏感，當(dāng)pH6以下即不能生長(zhǎng)，在普通食醋中l(wèi)一3min即死亡。在固體培養(yǎng)基上菌落常隆起，圓形，表面光滑，濕潤(rùn)。在3％一3．5％含鹽水中繁殖迅速，每8～9min為一周期。對(duì)高溫抵抗力小，50℃20min；65℃5min或80℃1min即可被殺死。本菌對(duì)常用消毒劑抵抗力很弱，可被低濃度的酚和煤酚皂溶液殺滅。第75頁(yè)/共112頁(yè)副溶血性弧菌

檢驗(yàn)流程糞便、嘔吐物、拭子食物25g+3％NaCl堿性胨水225mL，37℃，8～16hTCBS平板，37℃，18～24h3％TSA純化，37℃，18～24h初步鑒定；3％TSI、革蘭染色、氧化酶實(shí)驗(yàn)、嗜鹽性實(shí)驗(yàn)生化試驗(yàn)（接種含3％氯化鈉生化試劑）報(bào)告3％NaCl堿性胨水10mL，37℃，8～16h第76頁(yè)/共112頁(yè)副溶血性弧菌菌落形態(tài)TCBS瓊脂：呈圓形、半透明、表面光滑的綠色菌落，接種環(huán)輕觸，有類似口香糖的質(zhì)感，直徑2～3mm。涂片鏡檢：革蘭氏陰性，呈棒狀、弧狀、卵圓狀等多形態(tài)，無(wú)芽胞，有鞭毛。第77頁(yè)/共112頁(yè)副溶血性弧菌菌落特征第78頁(yè)/共112頁(yè)副溶血性弧菌菌落特征霍亂、副弧、隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)霍亂的黃色菌落逐漸變藍(lán)

第79頁(yè)/共112頁(yè)鑒定生化性狀：葡萄糖+、分解葡萄糖產(chǎn)氣-、甘露醇+、H2S-、氧化酶+、動(dòng)力+、蔗糖-、乳糖-、賴氨酸脫羧酶+、V-P-、ONPG-。嗜鹽試驗(yàn)：10％氯化鈉胰胨水不生長(zhǎng)或微弱生長(zhǎng)，7％氯化鈉胰胨水生長(zhǎng)旺盛。第80頁(yè)/共112頁(yè)變形桿菌第81頁(yè)/共112頁(yè)變形桿菌食物中毒主要特征來(lái)源：生、熟食品的工具、容器未嚴(yán)格分開使用，使制成的熟食品受到重復(fù)污染。受污染的熟食品在較高的溫度下存放較長(zhǎng)的時(shí)間，細(xì)菌大量繁殖；食用前不再回鍋加熱或加熱不徹底，食后引起中毒癥狀：主要表現(xiàn)為腹痛（多呈臍周圍部的劇烈絞痛或刀割樣疼痛）、腹瀉、惡心、嘔吐、發(fā)冷發(fā)熱（38～39℃）、頭暈、頭痛。潛伏期：一般為5～18h，短者1～3h，長(zhǎng)者60h。第82頁(yè)/共112頁(yè)概況變形桿菌屬(Proteus)包括:普通變形桿菌(P．vulgaris)奇異變形桿菌(P.mirabilis)產(chǎn)粘變形桿菌（P.myxofaciens）。

變形桿菌為革蘭氏陰性桿菌，兩端鈍圓，有明顯的多形性。無(wú)芽孢無(wú)莢膜，有周身鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑。為需氧或兼性厭氧，對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求不高，生長(zhǎng)溫度為10～43℃。不耐熱，60℃5～30min皆可殺死。變形桿菌可產(chǎn)生腸毒素，此腸毒素為蛋白質(zhì)和碳水化合物的復(fù)合物，具抗原性。第83頁(yè)/共112頁(yè)變形桿菌檢驗(yàn)流程食品加適量生理鹽水制成混懸液計(jì)數(shù)選擇性SS、EMB培養(yǎng)基，37℃，18～24hTSI，37℃，24h生化試驗(yàn)血清學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告GN，37℃，24h糞便、嘔吐物、拭子、涂抹液第84頁(yè)/共112頁(yè)變形桿菌菌落形態(tài)SS瓊脂：形成單個(gè)菌落，菌落圓形、扁薄透明或半透明，有的菌落邊緣呈擴(kuò)散狀，對(duì)光觀察，菌落周圍淡藍(lán)色中心稍厚，有黏性，打開平皿時(shí)有臭味。EMB瓊脂：無(wú)色透明菌落，普通變形桿菌和奇異變形桿菌在伊紅美藍(lán)平板上可呈現(xiàn)片狀蔓延生長(zhǎng)。第85頁(yè)/共112頁(yè)變形桿菌菌落特征普平第86頁(yè)/共112頁(yè)變形桿菌菌落特征SS第87頁(yè)/共112頁(yè)變形桿菌菌落特征EMB第88頁(yè)/共112頁(yè)鑒定生化實(shí)驗(yàn)：乳糖反應(yīng)陰性（TSI斜面紅色）、葡萄糖產(chǎn)酸（TSI底層黃色）產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，硫化氫陽(yáng)性或陰性、尿素陽(yáng)性、苯丙氨酸陽(yáng)性者進(jìn)行系統(tǒng)生化鑒定，判定種屬或群。血清學(xué)實(shí)驗(yàn)：變形桿菌食物中毒需對(duì)來(lái)自可疑食物與患者的菌株進(jìn)行血清型別鑒定，以判定其同源性，，方法：將待試菌株分別點(diǎn)種在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板的兩端，待兩側(cè)的菌株蔓延生長(zhǎng)到平板中間，菌苔完全融合，說(shuō)明兩株細(xì)菌沒有拮抗現(xiàn)象。第89頁(yè)/共112頁(yè)蠟樣芽孢桿菌第90頁(yè)/共112頁(yè)蠟樣芽孢桿菌食物中毒主要特征來(lái)源：米食、乳制品、畜禽肉類制品、等。剩飯，特別是大米飯，其次小米飯、高粱米飯等剩飯。除米飯有時(shí)微有發(fā)粘、入口不爽或稍帶異味外，大多數(shù)食品的感官性狀正常。

癥狀：嘔吐型：主要表現(xiàn)為惡心、嘔吐、腹痛，腹瀉。此外，頭昏、四肢無(wú)力、口干、寒戰(zhàn)、結(jié)膜充血等癥亦有發(fā)生。該型主要是由剩米飯或炒飯引起的。該菌易在米飯中繁殖并產(chǎn)生耐熱性腸毒素。與葡萄球菌食物中毒在潛伏期、中毒表現(xiàn)方面非常相似，易混淆。腹瀉型：主要表現(xiàn)有腹瀉、腹痛。水樣便，一般無(wú)發(fā)熱，可有輕度惡心，但嘔吐罕見。病程稍長(zhǎng)，16～136h。主要是蠟樣芽孢桿菌在食品中產(chǎn)生不耐熱腸毒素所致,與產(chǎn)氣莢膜梭菌食物中毒相似，應(yīng)注意鑒別潛伏期：嘔吐型：潛伏期一般1～3h，短者0.5h，長(zhǎng)者5h；腹瀉型：潛伏期長(zhǎng),一般10～12h,短者6h,長(zhǎng)者16h。第91頁(yè)/共112頁(yè)概況革蘭氏陽(yáng)性、能形成芽孢、需氧或兼性厭氧大桿菌。芽孢不大于菌體寬度，位于中央或稍偏一端，無(wú)莢膜，有周身鞭毛。生長(zhǎng)溫度范圍是10～50℃，最適生長(zhǎng)溫度為28～35℃，10℃以下不能繁殖。繁殖體較耐熱，加熱100℃經(jīng)20min被殺死；芽孢能耐受100℃30min，干熱170℃經(jīng)60min才能殺死。生長(zhǎng)的pH值范圍為4.9～9.3。第92頁(yè)/共112頁(yè)蠟樣芽孢桿菌檢驗(yàn)流程食物25g+225mL生理鹽水制成10-1～10-5的稀釋液選擇性培養(yǎng)基MYP36℃，12～20h（菌數(shù)測(cè)定）選擇性培養(yǎng)基MYP，36℃，12～20h（分離培養(yǎng)）菌數(shù)計(jì)算營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（證實(shí)試驗(yàn)）染色鏡檢生化試驗(yàn)生長(zhǎng)及菌落觀察報(bào)告糞便、嘔吐物、拭子用少量生理鹽水做成混懸液第93頁(yè)/共112頁(yè)蠟樣芽孢桿菌菌落形態(tài)MYP瓊脂：典型菌落為灰白色至微粉紅色（不發(fā)酵甘露醇），周圍有白色至淡粉紅色沉淀環(huán)（產(chǎn)生卵磷脂酶）。營(yíng)養(yǎng)瓊脂：典型菌落在為灰白色，偶有黃綠色，不透明，表面粗糙似毛玻璃狀或融蠟狀，邊緣常呈擴(kuò)展?fàn)?，直徑?mm～10mm。革蘭染色菌體形態(tài)：革蘭氏陽(yáng)性大桿菌，寬1μm或以上，芽胞呈圓形，不突出菌體，多位于中央或稍偏于一端。第94頁(yè)/共112頁(yè)蠟樣芽孢桿菌菌落形態(tài)特征蠟樣芽孢桿菌在甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂（MYP）上第95頁(yè)/共112頁(yè)蠟樣芽胞桿菌菌落形態(tài)特征蠟樣芽胞桿菌在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上第96頁(yè)/共112頁(yè)蠟樣芽孢桿菌菌落形態(tài)特征

ＴＳＳＢ瓊脂平板上蠟樣芽胞桿菌菌落為淺灰色，不透明，似白色毛玻璃狀，有草綠色溶血環(huán)或完全溶血環(huán)。蘇云金芽胞桿菌和蕈狀芽胞桿菌呈現(xiàn)弱的溶血現(xiàn)象，而多數(shù)炭疽芽胞桿菌為不溶血，巨大芽胞桿菌為不溶血。第97頁(yè)/共112頁(yè)蠟樣芽孢桿菌Ｇ染色形態(tài)第98頁(yè)/共112頁(yè)鑒定形態(tài)觀察：革蘭氏陽(yáng)性大桿菌，寬度為1μm或1μm以上,芽胞呈卵圓形，不突出菌體，多位于菌體中央或稍偏于一端。培養(yǎng)特性：肉湯中生長(zhǎng)混濁，常微有菌膜或壁環(huán)，振搖易乳化；在普通瓊脂平板上生成的菌落不透明，表面粗糙，似毛玻璃狀或融蠟狀，邊緣不齊。生化性狀：有動(dòng)力；能產(chǎn)生卵磷脂酶和酪蛋白酶；過氧化氫酶試驗(yàn)陽(yáng)性；溶血；不發(fā)酵甘露醇和木糖；常能液化明膠和使硝酸鹽還原；在厭氧條件下能發(fā)酵葡萄糖。生化分型：分１５個(gè)型別。與類似菌鑒別：本菌在生化狀態(tài)上與蘇云金芽胞桿菌極為相似。第99頁(yè)/共112頁(yè)蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶試驗(yàn)取經(jīng)30℃±1℃培養(yǎng)24h±2h并于室溫放置3d～4d的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)物少許于載玻片上，滴加蒸餾水混勻并涂成薄膜。經(jīng)自然干燥，微火固定后，加甲醇作用30s后傾去，再通過火焰干燥，于載玻片上滴滿0.5％堿性復(fù)紅，放火焰上加熱（微見蒸氣，勿使染液沸騰)持續(xù)1min～2min，移去火焰，再更換染色液再次加溫染色30s，傾去染液用潔凈自來(lái)水徹底清洗、晾干后鏡檢。第100頁(yè)/共112頁(yè)蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶試驗(yàn)觀察有無(wú)游離芽胞（淺紅色）和染成深紅色的菱形、正方形或其它形狀的蛋白結(jié)晶體。如發(fā)現(xiàn)游離芽胞形成的不豐富，應(yīng)將培養(yǎng)物置室溫2d～3d再行檢查。放置3d～4d以上的蘇云金芽胞桿菌培養(yǎng)物有大量的結(jié)晶體，但是只有在芽胞裂解通過上述染色方法才能見到。然而，除非見到芽胞，否則培養(yǎng)物應(yīng)在室溫繼續(xù)放置幾天以重新檢查毒素晶體。其它芽胞桿菌不產(chǎn)生蛋白質(zhì)毒素晶體。第101頁(yè)/共112頁(yè)第102頁(yè)/共112頁(yè)有關(guān)應(yīng)急演練第103頁(yè)/共112頁(yè)目的通過演練，加強(qiáng)急性傳染病防控工作，規(guī)范各項(xiàng)防控措施，鍛煉應(yīng)急隊(duì)伍，增強(qiáng)應(yīng)急意識(shí),提高應(yīng)急處置能力。第104頁(yè)/共112頁(yè)內(nèi)容應(yīng)急響應(yīng)和組織協(xié)調(diào)：人員組成，響應(yīng)時(shí)間等；物資準(zhǔn)備：法律文書、消毒藥品、消殺器械、檢測(cè)試劑、實(shí)驗(yàn)儀器、宣教資料、預(yù)防用藥、個(gè)人防護(hù)等攜帶情況；