細(xì)胞融合和單克隆抗體的制備

細(xì)胞融合和單克隆抗體的制備2010-3-261第1頁，共24頁，2023年，2月20日，星期六2.2.2

動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體上杭二中謝金金上杭縣高中生物校際教研活動(dòng)公開課2010-3-262第2頁，共24頁，2023年，2月20日，星期六植物體細(xì)胞雜交植物細(xì)胞A植物細(xì)胞B原生質(zhì)體A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體融合雜種細(xì)胞組織培養(yǎng)雜種植株去細(xì)胞壁纖維素酶、果膠酶化學(xué)法物理法2010-3-263第3頁，共24頁，2023年，2月20日，星期六一、動(dòng)物細(xì)胞融合1、概念：指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。2、結(jié)果：形成單核的雜交細(xì)胞3、原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性4、過程：5、意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動(dòng)植物之間）成為可能。6、應(yīng)用：成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。特別是利用雜交瘤技術(shù)制造單克隆抗體2010-3-264第4頁，共24頁，2023年，2月20日，星期六4、過程：動(dòng)物細(xì)胞A動(dòng)物細(xì)胞B誘導(dǎo)，融合2個(gè)完整的雜交細(xì)胞AB有絲分裂（膜融合、誘導(dǎo)方法質(zhì)融合、核融合）單核細(xì)胞2010-3-265第5頁，共24頁，2023年，2月20日，星期六2、什么是抗體？二、單克隆抗體回顧3、抗體的分布？抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。主要分布在血清中。1、什么是克?。俊翱寺　睆挠⑽摹癱lone”音譯而來，是指從一個(gè)共同祖先，通過無性繁殖的方法產(chǎn)生出來的一群遺傳特性相同的DNA分子，細(xì)胞或個(gè)體。在細(xì)胞水平指動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng).2010-3-266第6頁，共24頁，2023年，2月20日，星期六該法制備抗體的特點(diǎn)：

產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。自主閱讀P52：抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法及缺陷是什么？思考：如何獲取某種特定抗體？2010-3-267第7頁，共24頁，2023年，2月20日，星期六B淋巴細(xì)胞特點(diǎn)３．每一個(gè)B淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。１．B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。２．動(dòng)物體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬種以上的抗體，每種抗體對(duì)特定的抗原具有特異性免疫作用。2010-3-268第8頁，共24頁，2023年，2月20日，星期六二、單克隆抗體

由單個(gè)B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖（克?。?，形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體

稱為單克隆抗體。1、概念:2010-3-269第9頁，共24頁，2023年，2月20日，星期六怎樣才能大量生產(chǎn)單克隆抗體？提示1：僅用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可行嗎？提示2：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無限增殖的？提示3：有什么方法能使B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能力和腫瘤細(xì)胞無限增殖能力同時(shí)具備呢？2010-3-2610第10頁，共24頁，2023年，2月20日，星期六大量生產(chǎn)單克隆抗體思路B淋巴細(xì)胞具產(chǎn)生抗體的功能骨髓瘤細(xì)胞具無限增殖的特性利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得具有淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞特性的雜交瘤細(xì)胞利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞2010-3-2611第11頁，共24頁，2023年，2月20日，星期六B淋巴細(xì)胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤細(xì)胞培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞融合（只考慮兩兩融合）培養(yǎng)液中細(xì)胞有幾種類型？融合細(xì)胞幾種類型？骨髓瘤細(xì)胞---骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞---B淋巴細(xì)胞B淋巴細(xì)胞---骨髓瘤細(xì)胞多種雜交細(xì)胞在具有篩選作用的培養(yǎng)基上培養(yǎng)專一抗體檢驗(yàn)陽性克隆上述雜交細(xì)胞分開不同雜交細(xì)胞，克隆專一抗體，檢驗(yàn)陽性細(xì)胞單克隆抗體注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)2、單克隆抗體的制備過程第1次篩選目的：得到雜交瘤細(xì)胞（多種）。第2次篩選目的：在雜交瘤細(xì)胞中篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。該細(xì)胞繼承雙親細(xì)胞的遺傳特性，既能產(chǎn)生專一抗體又能無限增殖。雜交瘤細(xì)胞有何特點(diǎn)？特異性強(qiáng)，靈敏度高2010-3-2612第12頁，共24頁，2023年，2月20日，星期六免疫小鼠培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞融合骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞注射特定抗原蛋白選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)專一抗體檢驗(yàn)陽性專一抗體檢驗(yàn)陽性注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)單克隆抗體克隆雜交細(xì)胞分開不同雜交細(xì)胞，克隆專一抗體，檢驗(yàn)陽性細(xì)胞多種雜交細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞有何特點(diǎn)？本過程利用的那些技術(shù)？動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是否注射抗原（只考慮兩兩融合）培養(yǎng)液中細(xì)胞有幾種類型？幾種融合細(xì)胞？兩次篩選的目的分別是什么？2、單克隆抗體制備過程與傳統(tǒng)制備的抗體相比具有什么特點(diǎn)？2010-3-2613第13頁，共24頁，2023年，2月20日，星期六3.單克隆抗體的應(yīng)用：

①作為診斷試劑：準(zhǔn)確識(shí)別各種抗原物質(zhì)，并與特異性結(jié)合優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確、高效、簡易、快速②用于運(yùn)載藥物：制成“生物導(dǎo)彈”治療疾?。褐饕糜诎┌Y治療資料：目前世界各國已經(jīng)研制出數(shù)以百計(jì)的單克隆抗體。許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、內(nèi)分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一個(gè)必然趨勢。另外，用單克隆抗體做體內(nèi)診斷，借以鑒別和定位體內(nèi)“病灶”也引起人們的注意，目前，主要用于腫瘤追蹤及心肌梗塞的診斷。2010-3-2614第14頁，共24頁，2023年，2月20日，星期六兩個(gè)過程動(dòng)物細(xì)胞融合過程單克隆抗體制備過程三個(gè)“一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法一個(gè)新細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢課堂小結(jié)你記住了嗎？－－滅活的病毒－－雜交瘤細(xì)胞－－單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢2010-3-2615第15頁，共24頁，2023年，2月20日，星期六形成雜種細(xì)胞獲得雜種植株結(jié)果物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振蕩、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞全能性原理動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目1、植物、動(dòng)物細(xì)胞融合的比較課堂小結(jié)融合前處理用纖維素酶、果膠酶去壁用胰蛋白酶使細(xì)胞分散2010-3-2616第16頁，共24頁，2023年，2月20日，星期六2、單克隆抗體制備過程B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合B-B細(xì)胞B-瘤細(xì)胞瘤-瘤細(xì)胞選擇培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞（B-瘤細(xì)胞）克隆化培養(yǎng)抗體檢測產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)增殖單克隆抗體課堂小結(jié)2010-3-2617第17頁，共24頁，2023年，2月20日，星期六B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC

1.右圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗體的實(shí)驗(yàn)方案制備單克隆抗體不能，沒有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無法獲得產(chǎn)生單一抗體的B淋巴細(xì)胞。(1).該實(shí)驗(yàn)方案的目的是：________________(2).該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？課堂練習(xí)2010-3-2618第18頁，共24頁，2023年，2月20日，星期六B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC

(3).A是從小鼠的脾臟中取得__________該細(xì)胞能夠產(chǎn)生______。(4).圖中B為________________過程，常用_________________作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。B淋巴細(xì)胞抗體細(xì)胞融合滅活的病毒雙親細(xì)胞產(chǎn)生專一抗體無限增殖課堂練習(xí)2010-3-2619第19頁，共24頁，2023年，2月20日，星期六B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC

(5).__________技術(shù)是單克隆抗體的技術(shù)支持。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（6）單克隆抗體的特點(diǎn)________________，并可大量制備。特異性強(qiáng)，靈敏度高課堂練習(xí)2010-3-2620第20頁，共24頁，2023年，2月20日，星期六2、動(dòng)物細(xì)胞融合和植物細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（）A.誘導(dǎo)融合的方法完全相同B.所用的技術(shù)手段完全相同C.所采用的原理完全相同D.都能形成雜種細(xì)胞課堂練習(xí)D2010-3-2621第21頁，共24頁，2023年，2月20日，星期六3、用a表示骨髓瘤細(xì)胞，用b表示B淋巴細(xì)胞，則細(xì)胞融合過程中兩次篩選的目的分別是（）A.a、aa、ab、bb、ba、aa、ababB.a、aa、ab、bb、bab、bb、babC.a、aa、ab、bb、bab產(chǎn)生特定抗體的abD.a、aa、ab、bb、baa能無限增殖的aaC課堂練習(xí)課后練習(xí)：練習(xí)冊P312.2.2動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體2010-3-2622第22頁，共24頁，2023年，2月20日，星期六已成功的動(dòng)物細(xì)胞融合實(shí)例還有哪些？生物種類成功年代酵母菌—雞1975年人—胡