制藥工藝學專題專家講座

學科概況對象：工業(yè)生產(chǎn)過程中共性規(guī)律及其應用制備原理工藝路線質(zhì)量控制地位：藥品產(chǎn)業(yè)化橋梁與瓶頸多學科性：有機和生物化學：有機合成（含熱力學）、發(fā)酵和細胞培養(yǎng)、基因工程工程與工藝：工程放大、工藝設計、代謝工程機械電子：設備設計與選型、儀表監(jiān)測經(jīng)濟學：經(jīng)濟核實與工藝優(yōu)化1制藥工藝學專題專家講座第1頁工藝研究三個步驟小試：工藝路線設計與選擇反應與產(chǎn)物合成動力學及其影響原因質(zhì)量控制標準與方法學中試：放大技術及其影響原因工業(yè)化生產(chǎn)工藝研究與優(yōu)化工業(yè)生產(chǎn)：工藝試驗完善生產(chǎn)工藝規(guī)程確保安全生產(chǎn)2制藥工藝學專題專家講座第2頁化學制藥工藝特點：安全性要求高工藝路線盡可能短每步90%收率，那么：3步：~72%5步：~55%7步：~36%分類：全合成半合成化學合成和生物合成雜合3制藥工藝學專題專家講座第3頁生物技術制藥工藝以生物體或生物反應過程為基礎，依賴于生物機體或細胞生長繁殖與代謝上游過程：取得藥品。利用基因技術，細胞工程及發(fā)酵工程等進行菌種或細胞系選育優(yōu)化培養(yǎng)基優(yōu)化下游過程：產(chǎn)品后處理。分離提純質(zhì)檢和質(zhì)保4制藥工藝學專題專家講座第4頁生物技術制藥發(fā)展微生物發(fā)酵制藥釀酒青霉素等抗生素氨基酸、維生素等微生物代謝產(chǎn)物酶工程制藥：自然酶制劑生物酶：用于制備手性藥品，如酶拆分生物催化轉(zhuǎn)化，改造已經(jīng)有藥品細胞培養(yǎng)技術制藥人畜病毒疫苗、單克隆抗體、重組基因工程干擾素等5制藥工藝學專題專家講座第5頁生物技術制藥發(fā)展基因工程技術制藥在體外經(jīng)過重組DNA技術，對生物遺傳物質(zhì)基因進行剪切、拼接、重新組合，與適宜載體連接，組成完整基因表示系統(tǒng)，然后導入宿主生物細胞內(nèi)，與原有遺傳物質(zhì)整合或以質(zhì)粒形式單獨在細胞中繁殖，并表示活性蛋白質(zhì)、多肽或核酸等藥品。也就是，經(jīng)過基因工程改造微生物細胞代謝過程，提升微生物生產(chǎn)抗生素、維生素、氨基酸、核酸、輔酶和甾體激素等藥品生產(chǎn)能力6制藥工藝學專題專家講座第6頁反應器設計總體思緒化學反應動力學包括物料物理性質(zhì)過程質(zhì)量、熱量衡算生產(chǎn)能力設計：標準（國家標準，行業(yè)標準等）7制藥工藝學專題專家講座第7頁反應器概述設計反應器選型依據(jù)生產(chǎn)工藝要求、反應及物料特征等原因確定反應器操作方式、結(jié)構(gòu)類型、傳遞和流動方式等反應器結(jié)構(gòu)設計確定各種結(jié)構(gòu)參數(shù)，如幾何尺寸內(nèi)部結(jié)構(gòu)攪拌器形式、大小及轉(zhuǎn)速換熱方式和換熱面積8制藥工藝學專題專家講座第8頁生物反應器設計確定工藝參數(shù)及其控制方式溫度壓力pH通氣量底物濃度進料濃度、流量等9制藥工藝學專題專家講座第9頁反應器分類和結(jié)構(gòu)特點依據(jù)流體流動或混合狀態(tài)分類間歇反應器（a）連續(xù)反應器活塞流反應器（PFR）（b）：沒有返混全混流反應器（CSTR）（c）：返混極大10制藥工藝學專題專家講座第10頁反應器分類和結(jié)構(gòu)特點理想反應器非理想反應器連續(xù)反應器停留時間分布微混合軸向或徑向擴（彌）散反應器操作時震蕩間歇反應器混合時間剪切力分布各組分濃度和溫度分布11制藥工藝學專題專家講座第11頁反應器分類和結(jié)構(gòu)特點依據(jù)反應器結(jié)構(gòu)特征及動力輸入方式分類依據(jù)反應物系特點釜式管式固定床流化床依據(jù)動力輸入方式機械攪拌式氣流攪拌式液體環(huán)流式12制藥工藝學專題專家講座第12頁作業(yè)查閱關于“發(fā)酵罐”和“攪拌釜”相關資料，從發(fā)酵角度看，二者結(jié)構(gòu)終究有沒有區(qū)分？假如有，有何區(qū)分？描述本書前兩篇在目錄上出現(xiàn)概念，能夠用例子佐證，讓具備高中知識水平人就能懂。一人一個，同學之間不能相同；如有必要，注明出處。試用量綱分析法推導式（21-2）13制藥工藝學專題專家講座第13頁影響中試原因放大效應（scale-upeffect）因放大造成數(shù)量和質(zhì)量指標不能重復現(xiàn)象，統(tǒng)稱為放大效應如，反應情況惡化，選擇性，轉(zhuǎn)化率和收率降低；產(chǎn)品質(zhì)量不合格；甚至發(fā)生爆炸等事故原輔料雜質(zhì)催化劑失活環(huán)境影響生物材料或細胞活性和穩(wěn)定性非理想化流動造成傳質(zhì)和傳熱不均14制藥工藝學專題專家講座第14頁中試放大研究方法逐層放大法完全依靠經(jīng)驗相同放大法經(jīng)驗，依靠量綱分析法降低試驗次數(shù)在物理過程放大中非常有效數(shù)學模型法有明確理論依據(jù)，能夠高倍放大15制藥工藝學專題專家講座第15頁工藝放大關鍵反應器放大反應器內(nèi)：“三傳一反”耦合過程均相反應過程擴散：宏觀上，濃度和溫度分布均勻非均相反應過程擴散外擴散：宏觀上內(nèi)擴散：微觀上抓住過程關鍵控制原因進行放大16制藥工藝學專題專家講座第16頁工藝放大關鍵抓住過程控制步驟進行放大反應控制外擴散控制內(nèi)擴散控制建立控制步驟和工藝條件關聯(lián)試驗方法冷模試驗本征動力學試驗17制藥工藝學專題專家講座第17頁量綱分析法任何一個物理量都能夠表示為量綱齊次原理正確選擇相關物理量必需流體力學知識豐富感性認識一定量綱分析經(jīng)驗18制藥工藝學專題專家講座第18頁量綱分析法瑞利法/π定理正確選擇物理量n個選擇包含不一樣基本量綱物理量，普通3-4個，他們相互獨立且不能組合成一個無量綱數(shù)。將其余物理量作為導出量，將他們分別與基本量冪次組成無量綱數(shù)πi，共（n-3，或n-4）個寫出這幾個πi組成物理方程式，使之量綱齊次19制藥工藝學專題專家講座第19頁數(shù)學模擬放大本質(zhì)：“三傳一反”數(shù)學描述及其解析化學反應動力學模型流體流動模型邊界條件和初始條件特點：可靠性高，放大倍數(shù)大可經(jīng)過數(shù)學試驗，對過程進行預測分析模型往往復雜，建模困難，求解更難20制藥工藝學專題專家講座第20頁數(shù)學模擬放大基礎實質(zhì)是計算流體力學和動力學耦合控制體積內(nèi)質(zhì)量、熱量和動量衡算及運動方程（Navier-Stocks方程）耦合反應動力學方程慣用建模和求解工具AnsysFluent，CFXPHOENICSStar-CD等21制藥工藝學專題專家講座第21頁作業(yè)什么是KLa放大基準中“福田秀雄修正”？名詞解釋：連續(xù)性方程運動方程邊界條件初始條件22制藥工藝學專題專家講座第22頁制藥工藝計算制藥工藝圖質(zhì)量衡算熱量衡算工藝經(jīng)濟性評價23制藥工藝學專題專家講座第23頁建廠與工藝圖設計制造施工安裝前期準備初步設計施工圖設計總工藝流程圖物料流程圖管線、各設備特征圖設備布置圖管道布置圖帶控制點工藝流程圖儀表、閥門配置，輔助管路、蒸汽管道儀表、閥門支架、管口方向，操作平臺等帶控制點工藝流程圖24制藥工藝學專題專家講座第24頁制藥工藝流程圖（1）工藝流程示意圖（例：阿司匹林）原料結(jié)晶脫水干燥分離過篩包裝母液產(chǎn)品反應蒸汽、水冷凍鹽水水25制藥工藝學專題專家講座第25頁制藥工藝流程圖（2）工藝流程簡圖（例：阿司匹林）26制藥工藝學專題專家講座第26頁制藥工藝流程圖（3）物料流程圖：標注物料衡算結(jié)果27制藥工藝學專題專家講座第27頁制藥工藝流程圖（4）全廠總工藝流程圖（物料平衡圖）在總說明部分提供全廠總流通圖細長實線畫長方框：各車間（工段）流程線：粗實線，主要物料流程方向：箭頭注明：車間名稱，各車間原料、成品和半成品名稱、起源和去向以及對應平衡數(shù)據(jù)28制藥工藝學專題專家講座第28頁制藥工藝流程圖（5）帶控制點工藝流程圖全部工藝設備物料管路，閥門，設備附件顯示和控制儀表符號繪制方法和步驟確定圖紙幅面和繪圖百分比畫出設備輪廓，調(diào)整好位置，清楚好看連接管路，標注設備編號和名稱各種閥門、儀表和物料介質(zhì)29制藥工藝學專題專家講座第29頁常見管件與閥門符號30制藥工藝學專題專家講座第30頁儀表安裝位置及標注31制藥工藝學專題專家講座第31頁儀表功效和被測量代號32制藥工藝學專題專家講座第32頁計算基礎和準備收率：主要產(chǎn)物實際產(chǎn)量和理論產(chǎn)量之比選擇性：主產(chǎn)物在全部產(chǎn)物中所占百分率那么有，33制藥工藝學專題專家講座第33頁作業(yè)寫出圖22-4上各個符號意義計算例22-2,22-334制藥工藝學專題專家講座第34頁三廢處理工藝制藥工業(yè)清潔生產(chǎn)制藥企業(yè)末端污染治理技術廢水處理工藝廢氣處理工藝廢渣處理工藝經(jīng)濟性和環(huán)境保護綜合平衡過程35制藥工藝學專題專家講座第35頁制藥工業(yè)清潔生產(chǎn)清潔生產(chǎn)概念將“整體預防”環(huán)境戰(zhàn)略，連續(xù)應用于產(chǎn)品生產(chǎn)過程中，以期降低對人類和環(huán)境風險主要內(nèi)容清潔生產(chǎn)工藝清潔產(chǎn)品清潔能源36制藥工藝學專題專家講座第36頁三廢處理中主要指標CODBODpHSS：suspendedsolids，懸浮固體含量TN：totalNitrogen，總氮含量TP：totalPhosphorus，總磷含量37制藥工藝學專題專家講座第37頁廢水處理概要物理化學處理中和沉淀混凝萃取氧化還原吸附過濾其它單獨使用或結(jié)合使用生物處理活性污泥生物濾池厭氣法厭氣過濾其它單獨使用或結(jié)合使用懸浮物或剩下溶解物處理中和沉淀泡沫分離加壓上浮氧化還原離子交換電滲析反滲透吸附過濾萃取其它單獨使用或結(jié)合使用物理處理篩選沉淀上浮稀釋濃縮[油分離]

其它單獨使用或結(jié)合使用廢水澄清水泥渣污泥處理濃縮脫水干燥焚燒單或獨結(jié)使合用使用污水送回二級處理系統(tǒng)回收物綜填合土利等用處或理循環(huán)使用或排放澄清水注：引自祝傳書老師課件，有修改循環(huán)使用或排放38制藥工藝學專題專家講座第38頁廢氣處理工藝含塵廢氣氣固兩相混合物分離（除塵）→外力（重力，慣性力，離心力等）氣相內(nèi)污染物分離含無機污染物廢氣含有機污染物廢氣利用污染物物理和化學性質(zhì)，經(jīng)過冷凝、吸收，吸附，燃燒，催化等方法處理39制藥工藝學專題專家講座第39頁廢渣處理工藝廢渣固體、半固體或漿狀廢物起源復雜處理標準減量化、資源化和無害化必須排出，要綜合利用無法綜合利用，要無害化40制藥工藝學專題專家講座第40頁作業(yè)在“三廢”處理中，物理過程通常為氣-液，氣-固及固-液分離，包括到分離工程單元操作及設備哪些？舉例說明41制藥工藝學專題專家講座第41頁化學制藥概述合成路徑→工藝路線技術先進，經(jīng)濟合理→企業(yè)競爭力路線選擇經(jīng)濟性清潔生產(chǎn)，“三廢”問題路線選擇基礎工作調(diào)研和論證藥品及其結(jié)構(gòu)類似物文件資料SciFinder,Belstein有機合成技術和本身經(jīng)驗42制藥工藝學專題專家講座第42頁化學反應機理化學反應本質(zhì)化學鍵斷裂和建立化學鍵本質(zhì)價層電子間穩(wěn)定相互作用 ——Pauling常見有機反應基本類型加成取代消去周環(huán)43制藥工藝學專題專家講座第43頁有機反應電子效應誘導效應共軛效應：包括π鍵或類似穩(wěn)定結(jié)構(gòu)超共軛效應：包括σ鍵推電子基（斥電子基）拉電子基（吸電子基）立體效應又叫空間位阻效應，因為分子本身各個官能團客觀上占據(jù)了一定空間大小，經(jīng)常成為反應阻力44制藥工藝學專題專家講座第44頁作業(yè)舉例說明本章出現(xiàn)過5～6個有機人名反應。45制藥工藝學專題專家講座第45頁慣用溶劑性質(zhì)和分類質(zhì)子性溶劑非質(zhì)子性溶劑極性非極性含有易取代H原子，可與含A-反應物由H鍵結(jié)合；也可與含A+孤對電子配位結(jié)合；或與中性分子中O、N、P等原子形成H鍵；也可由偶極相互作用而產(chǎn)生溶劑化作用。介電常數(shù)（ε）>15H2O，ROH，HAc，H2SO4HF-SbF3，F(xiàn)SO3H-SbF3CF3COOH，（HPO3）nRNH2等不含易取代H原子，主要靠偶極矩或范德華力相互作用產(chǎn)生溶劑化作用。μ>2.44Dε>15-20-O-{(Et)2O,THF,

};RX(CH3Cl,CH3Cl,);RO;μ<2.44Dε<15-20惰性溶劑：氯苯，苯，苯，二甲苯；正己烷，正庚烷，環(huán)己烷，石油醚等46制藥工藝學專題專家講座第46頁酸堿催化劑Br?nsted酸堿（質(zhì)子）理論酸：給出質(zhì)子物質(zhì)堿：接收質(zhì)子物質(zhì)Lewis酸堿（電子）理論酸：接收電子正確物質(zhì)堿：給出電子正確物質(zhì)一個物質(zhì)終究屬于酸還是屬于堿，還是酸堿配合物取決于它參加反應沒有鹽概念，只有酸、堿和酸堿絡合物47制藥工藝學專題專家講座第47頁慣用酸堿催化劑Br?nsted酸Lewis酸堿性催化劑無機酸：如HClHBr，HI，H2SO4H3PO4等強酸弱鹽：NH4Cl，有機酸：AlCl3，ZnCL2FeCl3，SnCl4BF3，TiCl4這類催化劑慣用在無水環(huán)境中金屬氫氧化物金屬氧化物強堿弱酸鹽類有機堿醇鈉、氨基鈉金屬有機化合物NaOH等Na2CO3等NaHCO3等48制藥工藝學專題專家講座第48頁相轉(zhuǎn)移催化劑（PTC）Phasetransfercatalyst使一個反應物由一相轉(zhuǎn)移到另一相中參加反應物質(zhì)，它促使一個可溶于有機溶劑底物和一個不溶于此溶劑離子型試劑二者之間發(fā)生反應相轉(zhuǎn)移催化反應方法簡單后處理方便試劑價格低廉49制藥工藝學專題專家講座第49頁相轉(zhuǎn)移催化劑（PTC）鎓（內(nèi)）鹽（yelideorylid）在相鄰原子上有相反電荷中性分子。通常為含O，S，As，N，P等能夠?qū)懗晒舱袷?，其中一個共振雜化體有雙鍵冠醚類非環(huán)多醚類胺類中心原子中心原子取代基負離子50制藥工藝學專題專家講座第50頁相轉(zhuǎn)移催化劑（PTC）影響原因攪拌速率非均相體系，傳質(zhì)影響大溶劑固-液體系中，使用冠醚或叔胺時，普通使用助溶劑。51制藥工藝學專題專家講座第51頁作業(yè)Br?nsted酸堿概念；Lewis酸堿概念鎓（內(nèi)）鹽概念52制藥工藝學專題專家講座第52頁手性制藥技術概述手性對稱異構(gòu)體旋光性化學法制備手性藥品生物酶法制備手性藥品53制藥工藝學專題專家講座第53頁手性化合物標識D，L標識＋，－標識R，S標識x>y>z>w，從Cw方向看，若x→y→z順時針，則為R；不然為S54制藥工藝學專題專家講座第54頁手性化合物標識D，L標識＋，－標識R，S標識55制藥工藝學專題專家講座第55頁化學法制備手性藥品化學拆分手性試劑（拆解劑）通常拆分堿性物質(zhì)用酸性拆分劑（酒石酸）拆分酸性物質(zhì)用堿性拆分劑（α-苯基乙胺）產(chǎn)品較多時采取此法56制藥工藝學專題專家講座第56頁作業(yè)找出5種以上在本章中出現(xiàn)化合物手性中心57制藥工藝學專題專家講座第57頁DL-蘇型-1-對硝基苯基-2-氨基-1,3-丙二醇拆分誘導結(jié)晶拆分法增加溶解度飽和水溶液晶種產(chǎn)品補充原料，過飽和L型析出10kgD,L-蘇型58制藥工藝學專題專家講座第58頁作業(yè)非對映異構(gòu)體拆分和誘導結(jié)晶法拆分過程和原理是什么？常見推（斥）電子基團有哪些？常見拉（吸）電子基團有哪些？59制藥工藝學專題專家講座第59頁抗生素用于治療細菌和各種微生物感染等疾病藥品以后產(chǎn)生了含有免疫、抗腫瘤等活性抗生素。60制藥工藝學專題專家講座第60頁激素經(jīng)過血液循環(huán)或組織液起傳遞信息作用化學物質(zhì)61制藥工藝學專題專家講座第61頁激素維持代謝平衡；促進細胞分裂與分化，確保各組織、器官正常生長、發(fā)育及成熟，并影響衰老過程；影響神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育及其活動；促進生殖器官發(fā)育與成熟，調(diào)整生殖過程；與神經(jīng)系統(tǒng)親密配合，使機體能更加好地適應環(huán)境改變。62制藥工藝學專題專家講座第62頁生物技術制藥：發(fā)酵概述制藥微生物生長與生產(chǎn)關系制藥微生物菌種建立制藥微生物培養(yǎng)基制備滅菌工藝制藥微生物發(fā)酵培養(yǎng)技術發(fā)酵工藝過程檢測與控制63制藥工藝學專題專家講座第63頁發(fā)酵微生物次級代謝初級代謝小分子前體如氨基酸，單糖核苷酸和多糖蛋白質(zhì)、脂肪和核酸結(jié)構(gòu)特殊，含有不常見基團如氨基糖，苯醌香豆素，環(huán)氧基等營養(yǎng)物質(zhì)具生理活性抵抗逆境分解毒素生殖微生物生長與代謝，生理生化過程藥品粗品分離純化藥品純品64制藥工藝學專題專家講座第64頁微生物生長菌體生長久發(fā)酵前期菌體自溶期發(fā)酵后期產(chǎn)物合成期發(fā)酵中期大量生成并積累初級代謝產(chǎn)物，因為菌體生理狀況改變，初級代謝產(chǎn)物開始向次級代謝產(chǎn)物轉(zhuǎn)化x0xxdtd2x0定積分倍增時間t65制藥工藝學專題專家講座第65頁菌體生長與藥品生產(chǎn)關系初級代謝產(chǎn)物如乳酸、醋酸次級代謝產(chǎn)物如抗生素、生物堿等產(chǎn)物形成微生物生長微生物量產(chǎn)物量66制藥工藝學專題專家講座第66頁基質(zhì)（營養(yǎng)）利用Monod方程S生物量比消耗速率消耗速率最大比生長速率μmax意義：培養(yǎng)基利用效率最大值飽和常數(shù)Ks表示菌體對基質(zhì)親和力，越小越好。67制藥工藝學專題專家講座第67頁發(fā)酵制藥基本過程68制藥工藝學專題專家講座第68頁制藥生產(chǎn)菌選育與保藏自然分離活性測定育種保藏分離目標選擇環(huán)境采集樣品分離稀釋法濾膜法受試病菌活性系化合物瓊脂擴散色譜法靶向篩選高通量篩選等自然育種誘變育種雜交育種基因工程菌種單孢子懸液瓊脂平板分離優(yōu)良菌株適當稀釋單菌落生產(chǎn)能力測試物理化學生物接合融合斜面低溫保藏沙土管保藏冷凍干燥保藏液體石蠟密封保藏液氮保藏菌種庫69制藥工藝學專題專家講座第69頁培養(yǎng)基培養(yǎng)基水C源N源生長因子前體促進劑無機鹽消泡劑單糖：葡萄糖、果糖雙糖：蔗糖、乳糖、糖蜜多糖：淀粉、環(huán)糊精脂肪：豆油、棉籽油、豬油醇類：甘油、乙醇、甘露醇有機氮源：黃花豆餅，花生餅粉棉籽餅粉，玉米漿蛋白胨，酵母粉魚粉，尿素等富含氨基酸、多肽和蛋白質(zhì)無機氮源：銨鹽，氨水和硝酸鹽無機鹽加入能夠用來調(diào)整pH值大量元素和微量元素P，S，F(xiàn)e，Mg，CaMn，Cu，Zn，Co，KNa，Cl等微量有機物氨基酸、維生素核苷酸、脂肪酸等前體：能直接參加產(chǎn)物生物合成組成產(chǎn)物分子一部分，且本身結(jié)構(gòu)沒有多大變化。能夠顯著提升產(chǎn)物質(zhì)量和產(chǎn)量，甚至還能夠控制菌體代謝產(chǎn)物方向。但有毒易被菌體分解。屢次少許流加。促進劑：促進產(chǎn)物生成70制藥工藝學專題專家講座第70頁培養(yǎng)基設計思緒建立起始培養(yǎng)基單原因試驗多原因試驗放大試驗確定最終培養(yǎng)基71制藥工藝學專題專家講座第71頁滅菌工藝純種發(fā)酵消毒殺菌滅菌方式殺死營養(yǎng)體，不能殺滅芽胞體 99.9%去除全部微生物 99.9999%去除全部生命物質(zhì) 99.999999%對象殺滅率培養(yǎng)基發(fā)酵設備局部空間通入空氣化學滅菌物理滅菌輻射滅菌干熱滅菌濕熱滅菌過濾除菌氧化，表面紫外滅菌，表面120℃以上；160℃，2h；170℃，1h115~121℃，15~30min，0.1MPa蔡氏細菌過濾器，注射過濾器等72制藥工藝學專題專家講座第72頁培養(yǎng)基滅菌高溫快速滅菌73制藥工藝學專題專家講座第73頁發(fā)酵培養(yǎng)操作方式分批式操作間歇式操作，或叫不連續(xù)操作流加式操作補料-分批式操作半連續(xù)操作重復分批式操作或換液培養(yǎng)連續(xù)式操作74制藥工藝學專題專家講座第74頁流加式發(fā)酵培養(yǎng)75制藥工藝學專題專家講座第75頁發(fā)酵過程主要控制參數(shù)與檢測參數(shù)物理參數(shù)化學參數(shù)生物學參數(shù)溫度罐壓攪拌速率輸入功率通氣量黏度流加速度pH基質(zhì)濃度溶解氧氧化還原電位尾壓產(chǎn)物濃度菌絲形態(tài)菌絲濃度76制藥工藝學專題專家講座第76頁發(fā)酵過程主要控制參數(shù)與檢測溫度控制濃度：菌體濃度，基質(zhì)濃度，溶解氧濃度，CO2濃度pH值控制補料與放料泡沫77制藥工藝學專題專家講座第77頁基因工程制藥基礎概念中心法則核酸與核苷酸基因與DNA、RNA氨基酸與蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄與翻譯3’與5’78制藥工藝學專題專家講座第78頁從細胞到堿基對79制藥工藝學專題專家講座第79頁中心法則DNARNA蛋白質(zhì)復制復制轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄翻譯調(diào)控調(diào)控遺傳信息流調(diào)控JunZhang,

PatrickRGriffin,et.al,.NatureStructural&MolecularBiology

()doi:10.1038/nsmb.204680制藥工藝學專題專家講座第80頁中心法則81制藥工藝學專題專家講座第81頁中心法則82制藥工藝學專題專家講座第82頁中心法則83制藥工藝學專題專家講座第83頁基因克隆基本步驟84制藥工藝學專題專家講座第84頁分光光度法確定細菌細胞生長情況85制藥工藝學專題專家講座第85頁DNA濃度測量紫外吸收分光光度法（UVabsorbancespectrophotometry）純凈DNA那么，DNA純度能夠取得86制藥工藝學專題專家講座第86頁基因克隆中各種酶向共價閉合環(huán)狀DNA中引入或消除超螺旋結(jié)構(gòu)核酸酶：切開、切除或降解核酸分子酶復制核酸分子酶將核酸分子連接起來酶識別切割位點修飾酶：添加或去除化學基團酶87制藥工藝學專題專家講座第87頁限制性內(nèi)切酶限制性內(nèi)切酶生物活性：（1）定位切割，形成末端（2）降解外源DNA，但不降解本身DNA，因為在本身酶切位點上進行甲基化保護88制藥工藝學專題專家講座第88頁酶切結(jié)果分析：凝膠電泳瓊脂/SDS凝膠孔道大小決定了能夠分離DNA分子大小89制藥工藝學專題專家講座第89頁DNA分子大小預計錯誤率：5%構(gòu)建標準曲線90制藥工藝學專題專家講座第90頁轉(zhuǎn)化：使細菌細胞獲取重組DNA自然條件下，轉(zhuǎn)化很可能不是細胞獲取遺傳信息主要方式只有極少數(shù)種類（Bacillus和Streptococcus屬組員）能夠輕易地被轉(zhuǎn)化絕大多數(shù)細菌，包含大腸桿菌，正常條件下，僅能獲取有限數(shù)量DNA要高效轉(zhuǎn)化這些細菌，必須進行物理/化學處