艾滋病實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理

艾滋病實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理第1頁/共72頁

艾滋病實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理

實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理包括質(zhì)量保證、質(zhì)量控制和質(zhì)量評價(jià)。第2頁/共72頁一、質(zhì)量保證(QA）

質(zhì)量保證是指從接收樣本起，到實(shí)驗(yàn)室發(fā)出報(bào)告止，為確保實(shí)驗(yàn)室最終報(bào)告結(jié)果的正確性所進(jìn)行的全過程，包括采取各種行政和技術(shù)上的措施和方法。第3頁/共72頁行政支持（行政部門關(guān)心實(shí)驗(yàn)室發(fā)展、建設(shè)，人員穩(wěn)定，足夠經(jīng)費(fèi)）人員培訓(xùn)（新人員上崗前培訓(xùn)獲得合格證書，接受復(fù)訓(xùn)，篩查實(shí)驗(yàn)室人員至少2年一次。檢測人員應(yīng)分為檢驗(yàn)人、復(fù)核人、簽發(fā)人。復(fù)核人和簽發(fā)人應(yīng)具備對檢測過程進(jìn)行分析和解決問題的能力）環(huán)境條件（實(shí)驗(yàn)室設(shè)置、建筑、設(shè)備符合要求）標(biāo)本采集、運(yùn)送和處理檢測方法和試劑的選擇設(shè)備維護(hù)與校準(zhǔn)（酶標(biāo)儀、洗板機(jī)、移液器校準(zhǔn)，冰箱、孵箱及其他儀器定期檢查）文件和文件管理第4頁/共72頁檢測方法和試劑的選擇使用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)的試劑，選擇敏感性高，特異性好的，根據(jù)參比室組織的國家級艾滋病診斷試劑臨床質(zhì)量評價(jià)各實(shí)驗(yàn)室更換試劑批號時(shí)，應(yīng)進(jìn)行平行試驗(yàn)所有試劑盒要嚴(yán)格按照要求條件保存，試劑盒拆封時(shí)要記錄拆封時(shí)間。第5頁/共72頁

設(shè)備維護(hù)與校準(zhǔn)第6頁/共72頁目前常用的艾滋病檢測設(shè)備類安全類：生物安全柜、洗眼器、普通冰箱、超低溫冰箱、自動高壓消毒柜檢測類：微量加樣器、搖擺平臺、全自動蛋白印跡儀、普通離心機(jī)、震蕩器、移液器、恒溫水浴、酶標(biāo)儀+洗板機(jī)、病毒載量儀、流式細(xì)胞儀其它：計(jì)算機(jī)、空調(diào)第7頁/共72頁規(guī)范化管理的意義遵照《全國艾滋病檢測工作規(guī)范》檢測質(zhì)量保證延長設(shè)備的使用時(shí)間便于設(shè)備的管理節(jié)約資源第8頁/共72頁HIV實(shí)驗(yàn)室的設(shè)備維護(hù)日常維護(hù)定期檢定和校準(zhǔn)第9頁/共72頁設(shè)備對環(huán)境的普通要求電源：電壓一定要匹配，插線板合適，專用的.經(jīng)常停電或電壓不穩(wěn)的實(shí)驗(yàn)室，建議配備穩(wěn)壓器和不間斷電源環(huán)境：清潔，溫、濕度合適良好通風(fēng)長時(shí)間不用的設(shè)備，注意特別容易壞第10頁/共72頁酶標(biāo)儀第11頁/共72頁（1）ELISA洗板機(jī)與酶標(biāo)儀：每天：每次操作要按要求設(shè)立對照。核對酶標(biāo)儀濾光片波長，檢查洗板機(jī)管道是否通暢，是否有漏液現(xiàn)象。每月：洗滌時(shí)檢查各孔是否與相應(yīng)的沖洗頭對位良好，負(fù)壓是否符合規(guī)定要求，這是保證各孔洗滌均衡一致的前提。每年：檢查、清洗濾光片，如果濾光片出現(xiàn)破裂或霉點(diǎn)則要更換，根據(jù)儀器內(nèi)具有的校準(zhǔn)程序或使用校準(zhǔn)板，對濾光片的所用波長光密度的精密度進(jìn)行校驗(yàn)，測定20次，計(jì)算精密度。精密度應(yīng)該控制在廠家說明書中所規(guī)定的范圍(建議請廠方代表校驗(yàn))。校驗(yàn)結(jié)果要有記錄，保留測定原始結(jié)果。根據(jù)實(shí)際使用情況更換主要設(shè)備內(nèi)的所有液體裝置和管子(要求廠方代表維修)。第12頁/共72頁移液器的校準(zhǔn)一年至少校準(zhǔn)一次需校準(zhǔn)的原因-經(jīng)常使用-要求高的準(zhǔn)確性-要高壓滅菌-用于移高粘稠性、高密度溶液-溫度變化大第13頁/共72頁移液器:用蒸餾水稱量標(biāo)定移液器方法(參考芬蘭Labsystems移液器標(biāo)定方案)

在一室溫為22℃的小型工作室(無風(fēng))中，在萬分之一級別天平上放置一個(gè)小三角燒瓶，用待標(biāo)定的移液器吸取蒸餾水(隔夜存放)加入小三角燒瓶內(nèi)底部，每次稱重后計(jì)量，去皮重后再加蒸餾水，連續(xù)加蒸餾水10次。加蒸餾水的量根據(jù)待標(biāo)定的移液器不同規(guī)格而不同，見下表。移液器標(biāo)定合格后，在移液器上貼上合格標(biāo)簽，標(biāo)明日期。在移液器標(biāo)定記錄中填寫移液器規(guī)格、編碼、10次標(biāo)定稱量、標(biāo)定日期和標(biāo)定人簽名。移液器10次標(biāo)定稱量在所要求的重量范圍內(nèi)為合格移液器；不合格移液器要根據(jù)移液器生產(chǎn)廠家所推薦的方法進(jìn)行校準(zhǔn)。第14頁/共72頁移液器規(guī)格標(biāo)定使用蒸餾水量要求重量范圍0.5-10l2l1.75-2.25mg5-40l10l9.8-10.2mg40-200l70l69.4-70.6mg200-1000l300l298.0-302.0mg1-5ml2000l1990.0-2010.0mg2-10ml3500l3485.0-3515.0mg第15頁/共72頁超低溫冰箱定期清理灰塵過濾器（建議每月一次）

第16頁/共72頁超低溫冰箱注意事項(xiàng)要求環(huán)境溫度控制在28度以下空間的清潔穩(wěn)定的電源供應(yīng)不宜放得太擠第17頁/共72頁生物安全柜HEPA-過濾裝置容納有害生物氣體。

需提供人員保護(hù)也為產(chǎn)品提供保護(hù)

(按等級而定)二級生物安全柜第18頁/共72頁生物安全柜的維護(hù)每年檢定一次安全柜保持所有操作在窗扇4英寸以內(nèi)清潔物質(zhì)和污染物隔離開，減少相互干擾使用后及時(shí)清理堵窗扇柜內(nèi)不宜放太多的物品，不能儲藏化學(xué)物質(zhì)第19頁/共72頁離心機(jī)的維護(hù)第20頁/共72頁轉(zhuǎn)頭、套桶第21頁/共72頁使用離心機(jī)的注意事項(xiàng)離心力、離心速度平穩(wěn)的儀器臺不用時(shí)，松轉(zhuǎn)頭；使用時(shí)，擰緊轉(zhuǎn)子保持平衡使用安全：蓋子要嚴(yán)使用后要擦干或開蓋至晾干防止液體泄漏到腔內(nèi)第22頁/共72頁高壓滅菌器第23頁/共72頁滅菌器的維護(hù)壓力表需要定期檢驗(yàn)等氣壓和溫度下降到正常后,再開閥高壓時(shí),放入指示紙,以便判定滅菌效果第24頁/共72頁設(shè)備的檢定和校準(zhǔn)

對檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性和有效性有影響的儀器設(shè)備必須進(jìn)行檢定和校準(zhǔn)。

有國家計(jì)量檢定規(guī)程的儀器設(shè)備，由法定計(jì)量檢定機(jī)構(gòu)或經(jīng)計(jì)量行政部門授權(quán)的技術(shù)機(jī)構(gòu)進(jìn)行檢定；

沒有國家檢定規(guī)程的，可以由廠家、自行檢定和校準(zhǔn)。第25頁/共72頁制訂儀器設(shè)備檢定計(jì)劃。經(jīng)檢定的儀器設(shè)備校驗(yàn)結(jié)果貼上標(biāo)志：合格標(biāo)志為綠色、準(zhǔn)用標(biāo)志為黃色、停用標(biāo)志為紅色。凡檢定不合格或超過檢定有效期的儀器設(shè)備，一律不得用于檢驗(yàn)工作。對超過檢定期，但暫時(shí)不用的儀器設(shè)備，貼上停用標(biāo)志。

第26頁/共72頁強(qiáng)制檢定的工作計(jì)量器具目錄

HIV檢測強(qiáng)制檢定儀器：加樣器、酶標(biāo)儀/洗板機(jī)、溫度計(jì)、高壓滅菌器

第27頁/共72頁強(qiáng)制檢定的周期，由執(zhí)行強(qiáng)制檢定的計(jì)量檢定機(jī)構(gòu)根據(jù)計(jì)量檢定規(guī)程確定。

屬于強(qiáng)制檢定的工作計(jì)量器具，未按照本辦法規(guī)定申請檢定或者經(jīng)檢定下合格的，任何單位或者個(gè)人不得使用。

第28頁/共72頁文件及文件管理

1.標(biāo)準(zhǔn)操作程序

(SOP)

2.實(shí)驗(yàn)原始記錄表

3.結(jié)果報(bào)告

4.樣品登記和保存

5.文件存檔

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1.標(biāo)準(zhǔn)操作程序

(SOP)

艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室要建立覆蓋主要工作內(nèi)容的SOP文件。

SOP由各崗位工作人員起草，實(shí)驗(yàn)室主任審定，并應(yīng)定期修訂。修訂應(yīng)該在實(shí)驗(yàn)室主管人員的領(lǐng)導(dǎo)下進(jìn)行，每年至少一次。所有工作人員要在所從事工作的SOP文件上簽名表示已經(jīng)閱讀并掌握了有關(guān)內(nèi)容。.第30頁/共72頁SOP通常包括以下內(nèi)容（1）標(biāo)題和編號（2）編寫和修改日期（3）編寫和修訂人員姓名（4）方法、目的和應(yīng)用范圍（5）相應(yīng)的職業(yè)規(guī)范（6）檢測設(shè)備和試劑（7）安全防護(hù)相關(guān)步驟（8）結(jié)果的解釋和報(bào)告（9）附錄（包括相關(guān)的附加文件如標(biāo)準(zhǔn)表格、設(shè)備和試劑盒說明書等。）

第31頁/共72頁艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立以下SOP1、樣品的接收、登記、處理、保存和運(yùn)輸2、檢測方法和步驟3、試劑使用方法和保存4、儀器的使用維護(hù)和校準(zhǔn)5、實(shí)驗(yàn)中的質(zhì)量控制要求及程序6、結(jié)果解釋與報(bào)告7、保密程序8、實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)、相關(guān)文件記錄與保存9、不確定樣本的追蹤和處理10、實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)及實(shí)驗(yàn)室的的清理和消毒第32頁/共72頁寫你所做的做你所寫的第33頁/共72頁2、實(shí)驗(yàn)原始記錄表

應(yīng)按實(shí)驗(yàn)要求，設(shè)計(jì)操作的原始記錄表，標(biāo)明空白對照、陽性對照、陰性對照、外部對照以及待檢樣品的位置，便于指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)人員加樣。要注明試劑廠家、測定方法、批號、有效期、操作人員和復(fù)核人員姓名及檢測日期。

第34頁/共72頁02ELISA表格.doc04快速原始記錄表.doc09實(shí)驗(yàn)室樣本交接記錄.doc10艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室結(jié)束后清理工作記錄.doc08高壓滅菌器.doc17移液器自校準(zhǔn)記錄.doc第35頁/共72頁

3、結(jié)果報(bào)告

分析結(jié)果及發(fā)出檢測報(bào)告前，應(yīng)注意須在試劑盒及外部質(zhì)控結(jié)果滿足要求的前提下，對樣品進(jìn)行分析。試劑盒及外部質(zhì)控不合格，樣品需要重新檢測復(fù)核人對檢測結(jié)果進(jìn)行仔細(xì)復(fù)核并對結(jié)果提出結(jié)論簽發(fā)人對試驗(yàn)結(jié)論進(jìn)行審核、分析、總結(jié)、簽字第36頁/共72頁4、樣品登記和保存

收到樣品后，建立唯一編碼，及時(shí)登記有關(guān)信息，包括受檢者姓名或代號、試管編號、性別、職業(yè)、送檢單位、人群類別、檢測結(jié)果、送檢日期、報(bào)告日期、通訊地址第37頁/共72頁5、文件存檔

實(shí)驗(yàn)原始記錄表、打印數(shù)據(jù)、膜反應(yīng)條帶或其照片、檢測記錄表、標(biāo)本登記、標(biāo)本保存記錄以及儀器設(shè)備維修和校準(zhǔn)記錄等都應(yīng)該妥善存檔保存10年以上。最好同時(shí)使用計(jì)算機(jī)保存各種文件和記錄。

第38頁/共72頁二、質(zhì)量控制(QC)p15

質(zhì)量控制是指為確保實(shí)驗(yàn)工作正常進(jìn)行而在每一步實(shí)驗(yàn)過程中必須采取的各種措施。是對檢驗(yàn)結(jié)果的即時(shí)性評價(jià)，通過對質(zhì)控結(jié)果的連續(xù)觀察，監(jiān)測實(shí)驗(yàn)室結(jié)果的精密性。第39頁/共72頁（一）抗體檢測的統(tǒng)計(jì)學(xué)室內(nèi)質(zhì)量控制

在所有實(shí)驗(yàn)中必須包含有試劑盒內(nèi)部對照質(zhì)控血清和室內(nèi)質(zhì)控品（外部對照質(zhì)控血清）。1、試劑盒內(nèi)部對照質(zhì)控品即為試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照血清。試劑盒內(nèi)部對照用于判斷每次實(shí)驗(yàn)的有效性，但不能做為室內(nèi)質(zhì)控品使用。內(nèi)部對照是質(zhì)量控制的基礎(chǔ)。每一次檢測必須使用內(nèi)部對照，而且只能在同批號的試劑盒中使用。內(nèi)部對照結(jié)果無效必須重新實(shí)驗(yàn)。

第40頁/共72頁2、室內(nèi)質(zhì)控品（外部對照）為非試劑盒組份的外部質(zhì)控品，是為了監(jiān)控檢測的重復(fù)性而設(shè)置的，包括強(qiáng)陽性、弱陽性和陰性質(zhì)控血清。也可以只設(shè)置一個(gè)弱陽性質(zhì)控，以該試劑盒臨界值（cutoff）的2-3倍為宜。外部質(zhì)控品的作用是，判斷該批臨床樣本檢測的有效性，因此，每次實(shí)驗(yàn)必須包含室內(nèi)質(zhì)控品，其結(jié)果無效，必須重新實(shí)驗(yàn)。室內(nèi)質(zhì)控品可以是商品或?qū)嶒?yàn)室自行制備第41頁/共72頁室內(nèi)質(zhì)控品的制備

收集HIV抗體陽性和陰性血清，56℃30分鐘滅活，3000rpm離心15分鐘。弱陽性對照可以用HIV抗體陰性血清梯度稀釋HIV抗體強(qiáng)陽性血清并標(biāo)定后得到。按一年使用量配制，用0.2μm濾膜過濾除菌。

第42頁/共72頁1陰性樣本陽性樣本（OD＝0.407；3.254）2用陰性樣本稀釋陽性樣本（CUTOFF=0.174）

1：10；1：100；1：1000；1：2000，4000，5000，6000，8000，10000。。。假設(shè)1:8000=0.514（0.348～0.522）

第43頁/共72頁室內(nèi)質(zhì)控品的保存

（1）按一周實(shí)驗(yàn)用量分裝、分類、標(biāo)記、封口、-20℃凍存。

（2）外部對照血清不可反復(fù)凍融，一旦融化后應(yīng)該存放2-8℃，一周內(nèi)使用。第44頁/共72頁3、室內(nèi)質(zhì)控品的使用

每一次實(shí)驗(yàn)必須使用室內(nèi)質(zhì)控品，以便監(jiān)控實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性。同時(shí)可以了解各批試劑盒的批間差異或孔間差異，繪制質(zhì)量控制圖。

第45頁/共72頁統(tǒng)計(jì)室內(nèi)質(zhì)控的主要方法----

建立質(zhì)控圖最常用的質(zhì)控圖是Levey-Jennings質(zhì)控圖，該圖使用累計(jì)和技術(shù)或趨勢分析技術(shù)的圖形提供系統(tǒng)偏移和漂移的狀況。下面以ELISA方法檢測HIV抗體為例，描述建立質(zhì)控圖步驟：第46頁/共72頁（二）質(zhì)控圖的建立及應(yīng)用

1.建立質(zhì)控圖參數(shù)2.繪制質(zhì)控圖3.質(zhì)控圖的判斷和分析4.考察試驗(yàn)系統(tǒng)的可靠性可采用多標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控方案的要點(diǎn)5.繪制和分析質(zhì)控圖的要點(diǎn)6.變異系數(shù)（CV）分析7.灰區(qū)

第47頁/共72頁1、建立質(zhì)控圖參數(shù)

（1）算術(shù)平均值(x)代表一組S/CO值的平均值。為了統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性意義，應(yīng)該采用至少20次(天)所測得的外部對照質(zhì)控血清S/CO值結(jié)果計(jì)算出平均值。（2）標(biāo)準(zhǔn)差(s)是描述樣本與均數(shù)之間離散程度的一個(gè)指標(biāo)，是與對照值的均值有關(guān)的預(yù)期范圍。一組S/CO值的標(biāo)準(zhǔn)差以s表示。

第48頁/共72頁

（3）控制限：外部對照S/CO值的±2s

（4）變異系數(shù)(cv)，是反映各次S/CO值相對于均值離散程度的一個(gè)指標(biāo)，可以用來衡量檢測的重復(fù)性或精密度。

第49頁/共72頁計(jì)算公式為：

Σx

x=──

n

s

計(jì)算公式為：───────

∑(xn-x)2

s=───────

n-1

cv

計(jì)算公式為：

s

cv=──x100%

x

第50頁/共72頁2、繪制質(zhì)控圖

質(zhì)控圖是把檢測數(shù)據(jù)與計(jì)算出的“控制限”進(jìn)行比較的圖，包含一條中心橫線和其上、下兩條平行的控制線，并有按時(shí)間順序點(diǎn)入的質(zhì)控血清測定值。

第51頁/共72頁質(zhì)控圖的繪制步驟是

（1）在常規(guī)條件下，對同一批血清連續(xù)測定20次（天）或以上，獲得一組S/CO值，求均數(shù)(x)和標(biāo)準(zhǔn)差(s),超出2s或3s的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除。

（2）將均值(x)和標(biāo)準(zhǔn)差(s)分別在質(zhì)控框架圖中標(biāo)示出來。以S/CO值作縱座標(biāo)(Y軸)，每一次(天)試驗(yàn)作橫座標(biāo)(x軸)，繪制質(zhì)控圖。

第52頁/共72頁

（3）從第21次起，將每次檢測的質(zhì)控血清的結(jié)果依次點(diǎn)入該質(zhì)控框架圖中，檢驗(yàn)進(jìn)入質(zhì)控狀態(tài)。

（4）建議將內(nèi)部對照質(zhì)控血清和外部對照質(zhì)控血清的結(jié)果繪制在同一個(gè)質(zhì)控圖中。

第53頁/共72頁艾滋病實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理\2006質(zhì)控圖.xls第54頁/共72頁質(zhì)控圖第55頁/共72頁3、質(zhì)控圖的判定和分析

（1）告警：外部對照的S/CO值超出±2s，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予以注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進(jìn)一步觀察。

(2)失控：外部對照的S/CO值超出±3s，稱為失控，則本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能被接受。可能是系統(tǒng)誤差或外部對照滴度下降造成。

（3）移漂：連續(xù)幾個(gè)（3-5次）外部對照S/CO值都落在均值的一側(cè)則稱為位移，提示實(shí)驗(yàn)條件發(fā)生了較大的變化。應(yīng)重新繪制質(zhì)控圖。

（4）趨勢：連續(xù)幾個(gè)（5-7個(gè)）外部對照質(zhì)控血清S/CO值幾乎按一個(gè)方向分布時(shí)稱為趨勢，通常由參數(shù)的緩慢改變引起。

第56頁/共72頁4、繪制和分析質(zhì)控圖的要點(diǎn)

（1）要在最佳條件下建立質(zhì)控圖參數(shù)。

（2）用S/CO比值繪制質(zhì)控圖。

（3）由專人負(fù)責(zé)建立質(zhì)控圖，每月定期召開質(zhì)控分析會，討論本月的質(zhì)量控制情況。每次檢測之前都應(yīng)了解質(zhì)控結(jié)果。

（4）建議長期和穩(wěn)定地使用一種質(zhì)量好的試劑盒。

第57頁/共72頁

（5）更換不同廠家的試劑盒后，必須重新繪制質(zhì)控圖。改用新批號試劑盒如結(jié)果偏離較大也應(yīng)重新制作質(zhì)控圖。使用新批號或不同廠家的試劑盒必須在質(zhì)控圖上注明使用日期。

（6）如發(fā)現(xiàn)質(zhì)控值劇烈位移或失控，應(yīng)填寫報(bào)告單，上交質(zhì)量負(fù)責(zé)人，分析原因并決定是否發(fā)出檢測報(bào)告。

（7）使用新批次的外部對照質(zhì)控血清時(shí)，必須重新繪制質(zhì)控圖。

（8）發(fā)現(xiàn)質(zhì)控結(jié)果失控

第58頁/共72頁5、變異系數(shù)（CV）分析

變異系數(shù)(cv)小于20％，表示外部對照處于穩(wěn)定狀態(tài)。

6、灰區(qū)

通常把臨界值上下10％的范圍定為灰區(qū)，對灰區(qū)標(biāo)本應(yīng)進(jìn)行復(fù)測。

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“即刻法”質(zhì)控

“即刻法”質(zhì)控統(tǒng)計(jì)方法，在連續(xù)測3次后，即可對第3次檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控。具體計(jì)算方法如下：1）將測定值從小到大排列：x1，x2，x3……xn(x1為最小值，xn為最大值)2）計(jì)算x和s3）計(jì)算SI上限值和SI下限值

SI上限=(X最大值-x)/sSI下限=(x-X最小值)/s第60頁/共72頁nn3sn2snn3sn2s31.161.15122.552.2941.491.46132.612.3351.751.67142.662.3761.941.82152.712.4172.101.94162.752.4482.222.03172.792.4792.322.11182.822.50102.412.18192.852.53112.482.23202.882.56第61頁/共72頁（1）當(dāng)SI上限和SI下限<n2s時(shí)表示處于控制范圍內(nèi)，可以繼續(xù)測定。繼續(xù)重復(fù)以上各項(xiàng)計(jì)算。（2）當(dāng)SI上限和SI下限有一值處于n2s~n3s值之間時(shí)說明該值在2s3s范圍，處于“告警”狀態(tài)。（3）當(dāng)