植物胚培養(yǎng)課件

第六章植物胚培養(yǎng)大家

好！植物組織培養(yǎng)

第六章植物胚培養(yǎng)植物胚培養(yǎng)是指在無菌條件下，對(duì)植物的胚及胚器官如子房、胚珠和胚乳進(jìn)行離體培養(yǎng)的技術(shù)。胚培養(yǎng)的類型和意義胚培養(yǎng)的方法常見植物胚的培養(yǎng)本章內(nèi)容1904年Hanning進(jìn)行蘿卜和辣根菜成熟胚培養(yǎng)(1)了解植物胚培養(yǎng)的類型(2)掌握胚培養(yǎng)的方法和操作步驟(3)了解常見植物胚培養(yǎng)的技術(shù)本章教學(xué)目的與要求1.成熟胚培養(yǎng)成熟胚分離出來，進(jìn)行培養(yǎng)玉米成熟胚的培養(yǎng)霍山石斛的胚

剝離的胚胎培養(yǎng)受精后的胚珠培養(yǎng)受精后的子房培養(yǎng)2.幼胚培養(yǎng)包括也可以對(duì)未受精的胚珠或子房進(jìn)行培養(yǎng)，獲得單倍體1.克服遠(yuǎn)緣雜種的不育性

遠(yuǎn)緣雜交，在雜種幼胚發(fā)生敗育之前取出，進(jìn)行離體培養(yǎng)，獲得雜種植株。2.打破種子休眠

在休眠期，取出，離體培養(yǎng)，產(chǎn)生植物。3.提高種子發(fā)芽率

植物胚珠發(fā)育不完全，發(fā)芽率極低，胚培養(yǎng)，提高發(fā)芽率二、胚培養(yǎng)的意義山楂：自然條件9個(gè)月萌發(fā)，胚培養(yǎng)48小時(shí)萌發(fā)。胚狀體與合子胚的比較:合子胚胚狀體質(zhì)量萌發(fā)率高，質(zhì)量好萌發(fā)率低，質(zhì)量差來源受精卵胚\(yùn)體細(xì)胞胚柄有，明顯即使有也不明顯形態(tài)固定，體積相對(duì)較小復(fù)雜，常有兩個(gè)以上的子葉，體積較大變異率低高；胚狀體可以制成人工種子，便于運(yùn)輸和保存!人工種子視頻第二節(jié)胚培養(yǎng)的方法主要介紹成熟胚培養(yǎng)方法幼胚培養(yǎng)方法子房培養(yǎng)方法胚珠培養(yǎng)方法胚乳培養(yǎng)方法胚的發(fā)育2.成熟胚培養(yǎng)的目的（1）研究種子萌發(fā)時(shí)胚乳與胚的關(guān)系（2）胚乳對(duì)幼苗初期生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)作用（3）研究成熟胚生長(zhǎng)發(fā)育過程的形態(tài)建成（4）各種生長(zhǎng)物質(zhì)對(duì)形態(tài)建成的影響（5）打破種子休眠，縮短育種周期3.成熟胚培養(yǎng)的程序（1）選果實(shí)或種子作為外植體（2）表面消毒（3）無菌條件下切開果實(shí)，取出種子（4）胚的剝離（5）培養(yǎng)基培養(yǎng)：MS、White培養(yǎng)基。4.成熟胚培養(yǎng)條件下（1）因成熟胚本身含有較多的營(yíng)養(yǎng)條件，對(duì)培養(yǎng)基要求不高（2）只含有大量元素和糖的培養(yǎng)基上，便可萌發(fā)成苗（3）多數(shù)植物成熟胚的生長(zhǎng)以12h/天光照為宜。牡丹成熟胚的離體培養(yǎng)以‘鳳丹白’成熟胚為外植體結(jié)果表明：（1）打破成熟胚休眠最適宜的預(yù)處理是4℃沙藏。（2）成苗培養(yǎng)時(shí)的最佳的培養(yǎng)基是MS＋6-BA0.2mg/L＋I(xiàn)BA1.0mg/L。（3）最適宜的生根培養(yǎng)基是MS＋I(xiàn)AA1.0mg/L。幼胚培養(yǎng)：在無菌的條件下，將未成熟胚分離出來，進(jìn)行培養(yǎng)發(fā)育，以至形成幼苗的過程。二、幼胚培養(yǎng)方法：1933年Tukey進(jìn)行桃、梨幼胚培養(yǎng)獲得成功取子房常規(guī)表面消毒解剖鏡下，取胚珠、去珠被、取出完整幼胚。固體培養(yǎng)基培養(yǎng)1、幼胚培養(yǎng)過程：球形胚前期心型胚前期魚雷胚球形胚胚的發(fā)育程度與胚的萌發(fā)成活率呈正相關(guān)胚的剝離以受精后35天左右為宜.心型胚、魚雷胚較好（1）培養(yǎng)基A、無機(jī)鹽：

a

幼胚培養(yǎng)有MS、B5等培養(yǎng)基，可使K+、Ca2+水平稍高。2、影響胚培養(yǎng)的因素糖的作用： 調(diào)節(jié)滲透壓；碳源；防止幼胚早萌。滲透壓的保持對(duì)于幼胚培養(yǎng)相當(dāng)重要。最適蔗糖濃度隨著胚的發(fā)育時(shí)期而降低。B、碳水化合物：銀杏幼胚培養(yǎng)中添加銀杏胚乳有促進(jìn)作用（1934）；曼佗羅幼胚培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)添加椰子乳能很好的促進(jìn)幼胚的發(fā)育(200-500um的幼胚)（1941）。此外，大麥胚乳、麥芽提取物、酵母提取物、水解酪蛋白等都能促進(jìn)幼胚的發(fā)育。D、天然提取物及某些蛋白制品A、溫度：

多數(shù)為25-30℃，因植物種類有所差別。B、光照：一般認(rèn)為黑暗或弱光條件較為合適。（2）環(huán)境條件黃瓜雜種幼胎黃瓜雜種幼胎培養(yǎng)黃瓜雜種幼胎培養(yǎng)苗胚乳培養(yǎng)是指將胚乳從母體上分離出來，在無菌的環(huán)境條件下培養(yǎng)，使其生長(zhǎng)發(fā)育形成幼苗的過程。三、胚乳培養(yǎng)胚乳外植體制備:種子消毒---取出胚乳培養(yǎng):White或MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基---25-27℃--暗或弱光發(fā)育:誘導(dǎo)形成愈傷組織----再分化形成胚狀體或不定芽---生根培養(yǎng)----植株。1、胚乳培養(yǎng)過程

胚乳培養(yǎng)過程胚乳胚狀體發(fā)育成苗不定芽苗愈傷組織形態(tài)發(fā)生2、胚乳培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件培養(yǎng)基培養(yǎng)條件3、胚乳再生植株的染色體倍數(shù)穩(wěn)定型：三倍體畸變型：除少數(shù)是三倍體，多數(shù)是由多種倍性細(xì)胞組成的嵌合體4、胚乳培養(yǎng)的應(yīng)用（1）胚乳培養(yǎng)可得到三倍體植株，產(chǎn)生無籽果實(shí)?；蚣颖缎纬闪扼w植株進(jìn)行育種。（2）胚乳培養(yǎng)可得到倍性不同的愈傷組織，可分離和篩選各種類型的非整倍體植株。四、胚珠培養(yǎng)方法1、胚珠培養(yǎng)定義：是指將胚珠從母體上分離出來，在無菌的人工環(huán)境條件下培養(yǎng)，使其生長(zhǎng)發(fā)育形成幼苗的過程。倒生胚珠2、胚珠培養(yǎng)類型：（1）、受精胚珠的培養(yǎng)（2）、未受精胚珠的培養(yǎng)示胚珠的位置3、胚珠培養(yǎng)的基本過程：（2）胚珠的發(fā)育：A受精胚珠：一是形成種子；二是形成愈傷組織B未受精胚珠：形成單倍體植株。（1）培養(yǎng)基：White,Nitsch,MS培養(yǎng)基4、胚珠培養(yǎng)的應(yīng)用（1）受精胚珠培養(yǎng)目的：一是打破種子的休眠；二是挽救胚的發(fā)育，以獲得雜交種。（2）

未受精胚珠培養(yǎng)目的：獲得單倍體植株。五、子房培養(yǎng)1、定義：子房培養(yǎng)是指將子房從母體上分離出來，在無菌的人工環(huán)境條件下培養(yǎng)，使其生長(zhǎng)發(fā)育形成幼苗的過程。類型授粉子房的培養(yǎng)未授粉子房的培養(yǎng)2、子房培養(yǎng)的培養(yǎng)過程（1）、制備外植體：在開花前后適宜時(shí)期取子房或幼花，消毒（2）、子房培養(yǎng)：固體或液體培養(yǎng)均可（3）培養(yǎng)基:N6,MS培養(yǎng)基單核胚囊

3個(gè)反足細(xì)胞（合點(diǎn)端N）

8核胚囊1個(gè)中央細(xì)胞（中央2X1N）(7細(xì)胞胚囊)2個(gè)助細(xì)胞（珠孔端N）1個(gè)卵細(xì)胞（珠孔端N）三次有絲分裂胚囊發(fā)育過程：性細(xì)胞（卵細(xì)胞、助細(xì)胞、極核、反足細(xì)胞）----胚狀體或愈傷組織----單倍體植株；體細(xì)胞（珠被、子房壁）---胚狀體或愈傷組織----二倍體植株；3、子房培養(yǎng)的發(fā)育：4、子房培養(yǎng)的應(yīng)用A、授粉子房培養(yǎng)目的：挽救雜種胚B、未授粉子房培養(yǎng)目的：獲得單倍體植株。第三節(jié)常見植物胚培養(yǎng)技術(shù)玉米紅豆杉番茄蘋果1、成熟胚培養(yǎng)過程---以玉米成熟胚培養(yǎng)為例(1)玉米種子消毒(2)在黑暗條件下，將種子放在無菌濕潤(rùn)的含濾紙的培養(yǎng)皿中培育6hr。(3)將吸漲的種子在無菌培養(yǎng)皿內(nèi)將胚分離出來(4)無菌水沖洗3次(5)在MS培養(yǎng)基中暗培養(yǎng)。(6)觀察：2d出現(xiàn)胚根，3-4d出現(xiàn)胚芽，10d長(zhǎng)成幼苗。玉米成熟胚的培養(yǎng)2、紅豆杉成熟胚培養(yǎng)紅豆杉成熟胚培養(yǎng)（1）南方紅豆杉Taxuschinensisvar.mairei成熟胚為外植體,紅豆杉成熟胚培養(yǎng)（2）木本植物培養(yǎng)基（WPM）為胚培養(yǎng)的最適基本培養(yǎng)基。（3）細(xì)胞激動(dòng)素（KT）0.1mg·L-1和玉米素（ZT）1.0mg·L-1最有效于不定芽的誘導(dǎo),不定芽為叢生芽。（4）芽長(zhǎng)成嫩枝后的轉(zhuǎn)移到含ＩＢＡ或ＩＢＡ和６－ＢＡ的Ｗｈｉｔｅ培養(yǎng)基上分化出根，形成再生小植株

紅豆杉成熟胚培養(yǎng)（5）再生植株的移栽容易成活。

3、番茄的胚培養(yǎng)(1)、外植體制備：授粉后30-40d收獲果皮完整的果實(shí)，果實(shí)放入95%乙醇中表面消毒，浸在5%NaCI中5min，用無菌蒸餾水充分淋洗。果實(shí)放在無菌吸水紙上，除去種子上的膠狀復(fù)被。(2)、培養(yǎng)基：?jiǎn)?dòng)：MS+硫胺素0.3mg/L+2,4-D2mg/L+椰乳100ml/L，pH6.0；繼代：MS+2,4-D2mg/L；分化：MS+BA1.5mg/L；生根：MS+NAA2mg/L。(3)、培養(yǎng)條件：愈傷組織啟動(dòng)和繼代，用暗培養(yǎng)，27℃。芽再生和生根在室溫20-30℃.16h/d的光照，2000lx。4、蘋果胚培養(yǎng)(1)、取材消毒：取授粉30～50d內(nèi)的幼果，用70%酒精擦拭。取出種子，剝出幼胚或成熟胚。

(2)、啟動(dòng)培養(yǎng)：接種在BA0.25+IAA0.5的1/2MS培養(yǎng)基上。培養(yǎng)條件為25～30℃和1500～2000lx光照14h。

(3)、分化增殖：移植到加有BA0.