生命科學(xué)進(jìn)展人類干細(xì)胞研究進(jìn)展詳解演示文稿

生命科學(xué)進(jìn)展人類干細(xì)胞研究進(jìn)展詳解演示文稿現(xiàn)在是1頁\一共有119頁\編輯于星期日1優(yōu)選生命科學(xué)進(jìn)展人類干細(xì)胞研究進(jìn)展現(xiàn)在是2頁\一共有119頁\編輯于星期日2

干細(xì)胞生物學(xué)研究與應(yīng)用幾乎涉及所有生命科學(xué)和生物醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域。除了在細(xì)胞治療、組織器官移植、基因治療具重要意義外，還將在新基因發(fā)現(xiàn)與基因功能分析、發(fā)育生物學(xué)研究、新藥開發(fā)與藥效以及毒性評(píng)估等領(lǐng)域產(chǎn)生極其重要的影響?，F(xiàn)在是3頁\一共有119頁\編輯于星期日3

干細(xì)胞研究1999年被Science評(píng)為十大科技進(jìn)展之首；2000年再度入選世界十大科技進(jìn)展；現(xiàn)在是4頁\一共有119頁\編輯于星期日4美國諾貝爾獎(jiǎng)獲得者吉爾伯特預(yù)言

“用不了50年，人類將能夠培育出人體的所有器官?！爆F(xiàn)在是5頁\一共有119頁\編輯于星期日5CharactersofStemCell具有無限增殖分裂的能力；長期保持自我穩(wěn)定的能力；長期保持分化成其它細(xì)胞的可能性；產(chǎn)生新細(xì)胞是對(duì)組織（細(xì)胞）損傷的反應(yīng)；以對(duì)稱或不對(duì)稱兩種方式進(jìn)行生長：或保持不分化狀態(tài)，或不可逆地向終末分化（由細(xì)胞質(zhì)中調(diào)節(jié)分化蛋白不均勻分配決定）?，F(xiàn)在是6頁\一共有119頁\編輯于星期日6干細(xì)胞研究重要事件(1)1981年，Evans等獲得小鼠胚胎干細(xì)胞；1990年，Piedrahita等獲得豬和綿羊的胚胎干細(xì)胞；1991年，Meineeke-Tillmann等獲得山羊胚胎干細(xì)胞；1992年，Satio等獲得牛胚胎干細(xì)胞；1992年，Sukoyan等獲得水貂胚胎干細(xì)胞；1993年，Oraves等獲得兔胚胎干細(xì)胞；1995年，Thomson等獲得恒河猴胚胎干細(xì)胞；1996年，Pain等獲得雞胚胎干細(xì)胞；現(xiàn)在是7頁\一共有119頁\編輯于星期日7干細(xì)胞研究重要事件(2)1997年美國華盛頓大學(xué)的多納爾·托馬斯報(bào)告說，將正常人的骨髓移植到病人體內(nèi)，可以治療造血功能障礙；1998年，Thomson和Shamblott實(shí)驗(yàn)室分別用人的胚泡和早期胚胎的生殖嵴培養(yǎng)出胚胎干細(xì)胞（ES）和生殖嵴干細(xì)胞（Embryonicgermstemcell）；現(xiàn)在是8頁\一共有119頁\編輯于星期日8在一些原本認(rèn)為不可更新的組織中發(fā)現(xiàn)干細(xì)胞，如：亞腦室區(qū)、側(cè)腦室區(qū)和嗅球的連接處以及海馬區(qū)；目前已發(fā)現(xiàn)存在干細(xì)胞的組織有：骨髓、外周血、臍血、血管、腦、脊髓、皮膚、骨骼肌、肝臟、胰腺、角膜、視網(wǎng)膜、牙齒和消化系統(tǒng)上皮等。干細(xì)胞研究重要事件(3)現(xiàn)在是9頁\一共有119頁\編輯于星期日91999年12月，美國科學(xué)家在《美國科學(xué)院院刊》報(bào)告說，小鼠肌肉組織的成體干細(xì)胞可以“橫向分化”為血液細(xì)胞。隨后，世界各國的科學(xué)家相繼證實(shí)，成體干細(xì)胞，包括人類的成體干細(xì)胞具有可塑性。避開了倫理爭議和異體免疫排斥問題。

干細(xì)胞研究重要事件(4)現(xiàn)在是10頁\一共有119頁\編輯于星期日102000年5月，日本把干細(xì)胞技術(shù)的出現(xiàn)視作在生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域趕超歐美國家的絕好機(jī)遇。在2000年度啟動(dòng)的“千年世紀(jì)工程”中，日本把干細(xì)胞工程作為四大重點(diǎn)之一，并且在第一年度就投入108億日元的巨額資金；美國總統(tǒng)2000年8月4日宣布：美國政府自今日起準(zhǔn)許用政府經(jīng)費(fèi)進(jìn)行已有人體胚胎干細(xì)胞研究；2000年12月19日，英國下議院也超過2／3的多數(shù)票通過了允許克隆人類早期胚胎，并從中提取干細(xì)胞進(jìn)行醫(yī)療研究的決議。干細(xì)胞研究重要事件(5)現(xiàn)在是11頁\一共有119頁\編輯于星期日112001年1月，英國議會(huì)上院通過法案，允許科學(xué)家克隆人類早期胚胎，并利用它進(jìn)行醫(yī)療研究。

2001年4月，美國科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，從病人臀部和大腿處抽取的脂肪中，含有大量類似干細(xì)胞的細(xì)胞，這些細(xì)胞可以發(fā)育成健康的軟骨和肌肉等。這一發(fā)現(xiàn)有可能使脂肪成為干細(xì)胞的主要來源?？茖W(xué)家今后可能將不必從胚胎組織或骨髓中提取干細(xì)胞，從而既可降低成本，又能避免倫理上的爭論。

干細(xì)胞研究重要事件(6)現(xiàn)在是12頁\一共有119頁\編輯于星期日122001年4月，美國國立衛(wèi)生研究院決定取消原定舉行的人類胚胎干細(xì)胞研究經(jīng)費(fèi)申請(qǐng)案的審查會(huì)議。該申請(qǐng)案是美國第一例人類胚胎干細(xì)胞研究經(jīng)費(fèi)申請(qǐng)案。這意味著布什政府將不對(duì)人類胚胎干細(xì)胞研究進(jìn)行資助。

干細(xì)胞研究重要事件(7)現(xiàn)在是13頁\一共有119頁\編輯于星期日13干細(xì)胞研究重要事件(8)2005年2月加拿大科學(xué)家在人體臍帶中發(fā)現(xiàn)一種新的干細(xì)胞源，這一發(fā)現(xiàn)為促進(jìn)骨髓移植治療和組織修復(fù)帶來新的希望。這種干細(xì)胞可以生成骨胳、軟骨、肌肉和其他結(jié)締組織。把在結(jié)締組織中發(fā)現(xiàn)的這些干細(xì)胞分離、培養(yǎng)幾周，生成了足夠多的細(xì)胞。這項(xiàng)發(fā)現(xiàn)將對(duì)骨髓移植有促進(jìn)作用。骨髓移植經(jīng)常用于治療白血病、某些癌癥以及免疫系統(tǒng)功能紊亂?，F(xiàn)在是14頁\一共有119頁\編輯于星期日14干細(xì)胞研究重要事件(9)2004年12月，法國科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，通過培育人類干細(xì)胞可以將每個(gè)干細(xì)胞轉(zhuǎn)化為200萬個(gè)紅血球。

該發(fā)現(xiàn)向著數(shù)十年來批量制造紅細(xì)胞的目標(biāo)又邁進(jìn)了一大步，該研究將最終使得血液短缺成為歷史。

現(xiàn)在是15頁\一共有119頁\編輯于星期日15干細(xì)胞研究重要事件(10)2005年1月，臺(tái)大醫(yī)院陳耀昌等醫(yī)生從滿月生產(chǎn)的新鮮胎盤，分離出胎盤間質(zhì)干細(xì)胞，是介于“胚胎干細(xì)胞”與“成體干細(xì)胞”間的新種干細(xì)胞；放入培養(yǎng)基中誘導(dǎo)分化，大約5到7天后，干細(xì)胞分別成功分化為神經(jīng)、脂肪、成骨細(xì)胞。與臍帶血干細(xì)胞相比，一只胎盤約重700~800克，臍帶血只有80~90克，胎盤干細(xì)胞的數(shù)量更充裕；現(xiàn)在是16頁\一共有119頁\編輯于星期日16干細(xì)胞研究重要事件(11)2005年1月30日在美國威斯康星大學(xué)工作的中國科學(xué)家張素春和李學(xué)軍報(bào)告說，他們成功地用人類胚胎干細(xì)胞分化出了運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元；

發(fā)現(xiàn)只有在相當(dāng)于人類胚胎發(fā)育第三周到第四周這一段時(shí)間里，胚胎干細(xì)胞才有可能分化成運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元；

首先要將胚胎干細(xì)胞分化成神經(jīng)干細(xì)胞，然后使神經(jīng)干細(xì)胞生長為運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元祖細(xì)胞，最后才使祖細(xì)胞變成運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元；

現(xiàn)在是17頁\一共有119頁\編輯于星期日17干細(xì)胞分類全能性干細(xì)胞（Totipotentstemcell）；多能性干細(xì)胞(Pluripotentstemcell)；單能性干細(xì)胞(Unipotentstemcell)；現(xiàn)在是18頁\一共有119頁\編輯于星期日18干細(xì)胞分類現(xiàn)在是19頁\一共有119頁\編輯于星期日19干細(xì)胞的可塑性科學(xué)證明，一種組織的成體干細(xì)胞可以產(chǎn)生其它的組織和細(xì)胞。骨髓干細(xì)胞神經(jīng)細(xì)胞神經(jīng)干細(xì)胞造血細(xì)胞骨髓肌間葉干細(xì)胞造血細(xì)胞提示：成人組織干細(xì)胞可能存在廣譜的分化潛能；干細(xì)胞工程不一定取自胚胎干細(xì)胞；微環(huán)境對(duì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)化具非常重要的作用；現(xiàn)在是20頁\一共有119頁\編輯于星期日20干細(xì)胞分化的調(diào)控迄今為止，觸發(fā)和控制細(xì)胞分化的機(jī)制尚不明了；是預(yù)先程序化還是受環(huán)境的調(diào)控是一個(gè)有爭議的話題；內(nèi)在調(diào)控：

轉(zhuǎn)錄因子，端粒酶活性，結(jié)構(gòu)蛋白等以各種方式影響干細(xì)胞的有絲分裂、分裂部位及染色體的功能；外在調(diào)控(微環(huán)境)：

整合素：細(xì)胞受損時(shí)，胞外信息通過整合素傳遞給干細(xì)胞，以觸發(fā)跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，調(diào)控干細(xì)胞的基因表達(dá)；細(xì)胞因子：干細(xì)胞因子，干細(xì)胞生長因子，白細(xì)胞介素，表皮細(xì)胞生長因子，成纖維細(xì)胞生長因子，肝細(xì)胞生長因子等；現(xiàn)在是21頁\一共有119頁\編輯于星期日21干細(xì)胞培養(yǎng)飼養(yǎng)層細(xì)胞：提供附植環(huán)境；飼養(yǎng)層細(xì)胞分泌物對(duì)維持干細(xì)胞的生長、抑制分化起重要作用；人類胚胎干細(xì)胞（ES）可用小鼠纖維母細(xì)胞作飼養(yǎng)層，但效果不十分理想；可用人輸卵管上皮細(xì)胞作飼養(yǎng)層；培養(yǎng)液；現(xiàn)在是22頁\一共有119頁\編輯于星期日22干細(xì)胞的倫理和社會(huì)問題(1)生殖性克??；治療性克?。滑F(xiàn)在是23頁\一共有119頁\編輯于星期日23干細(xì)胞的倫理和社會(huì)問題(2)英國2000年通過了準(zhǔn)許在嚴(yán)格管理的條件下克隆人類早期胚胎進(jìn)行干細(xì)胞研究；美國總統(tǒng)布什在2001年8月宣布，美國政府將僅僅支持對(duì)已有的胚胎干細(xì)胞進(jìn)行研究；德國不僅只允許研究2002年1月30日以前產(chǎn)生的胚胎干細(xì)胞，而且還必須是在沒有其它可選擇的情況下才能進(jìn)行。現(xiàn)在是24頁\一共有119頁\編輯于星期日24干細(xì)胞的倫理和社會(huì)問題(3)中國對(duì)胚胎干細(xì)胞研究，即治療性克隆持支持態(tài)度。中科院副院長陳竺院士2002年7月指出：“一個(gè)體外的胚胎在有限的時(shí)間，如14天里，尚屬一般的生物細(xì)胞，此時(shí)還沒有神經(jīng)細(xì)胞和腦細(xì)胞的產(chǎn)生，既無知覺也無感覺，因此科學(xué)界一般認(rèn)為它在此時(shí)還不是一個(gè)道德意義上的人?！祟惛杉?xì)胞研究給21世紀(jì)醫(yī)學(xué)的革命性發(fā)展帶來可能，因此總的平衡利弊，還是要支持”。25現(xiàn)在是25頁\一共有119頁\編輯于星期日25干細(xì)胞的倫理和社會(huì)問題(4)2005年2月18日，經(jīng)過激烈的辯論，第59屆聯(lián)合國大會(huì)法律委員會(huì)以71票贊成、35票反對(duì)、43票棄權(quán)的表決結(jié)果，以決議的形式通過一項(xiàng)政治宣言，要求各國禁止有違人類尊嚴(yán)的任何形式的克隆人?，F(xiàn)在是26頁\一共有119頁\編輯于星期日26DeterminationofStemCell

干細(xì)胞的鑒別細(xì)胞周期特征：

慢周期性（標(biāo)記滯留法）；無限增殖能力，形成細(xì)胞克??；

干細(xì)胞表面受體鑒別：熒光素標(biāo)記；受體結(jié)合標(biāo)記；現(xiàn)在是27頁\一共有119頁\編輯于星期日27ThreeStepsontheResearchofStemCell獲得干細(xì)胞系;建立干細(xì)胞誘導(dǎo)分化模型;將上述干細(xì)胞或干細(xì)胞培育體系植入動(dòng)物或人的相應(yīng)器官或組織，考察其效果?，F(xiàn)在是28頁\一共有119頁\編輯于星期日28ThreeStepsontheResearchofStemCell

（1）獲得干細(xì)胞系：這是本研究最重要的第一步。可以從動(dòng)物或人的早期胚胎或各器官、組織中分離并經(jīng)鑒定，且能在體外長期保持干細(xì)胞特性（一般應(yīng)穩(wěn)定傳25代以上）；

現(xiàn)在是29頁\一共有119頁\編輯于星期日29ThreeStepsontheResearchofStemCell

（2）建立干細(xì)胞誘導(dǎo)分化模型：可利用基因工程手段引入外源目的基因（對(duì)原有致病基因進(jìn)行置換改造），探索誘導(dǎo)干細(xì)胞向特定組織、器官分化的化學(xué)或/和物理?xiàng)l件；現(xiàn)在是30頁\一共有119頁\編輯于星期日30ThreeStepsontheResearchofStemCell

（3）將上述干細(xì)胞或干細(xì)胞培育體系植入動(dòng)物或人的相應(yīng)器官或組織中，考察其效果?，F(xiàn)在是31頁\一共有119頁\編輯于星期日31Meritsofstemcelltherapy

干細(xì)胞治療的優(yōu)點(diǎn)低毒性（或無毒性），一次治療有效；不需要完全了解疾病發(fā)病的確切機(jī)理；用自身干細(xì)胞移植，可避免產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)?，F(xiàn)在是32頁\一共有119頁\編輯于星期日32胚胎干細(xì)胞研究步履蹣跚成體干細(xì)胞研究如火如荼現(xiàn)在是33頁\一共有119頁\編輯于星期日33將體細(xì)胞核注入去核卵母細(xì)胞現(xiàn)在是34頁\一共有119頁\編輯于星期日34胚胎干細(xì)胞的來源早期胚胎細(xì)胞團(tuán)分離（ES）；胚胎生殖嵴分離的胚胎生殖細(xì)胞（EG）；

兩者的形態(tài)、標(biāo)志、體內(nèi)分化潛能及種系傳遞功能都相似?，F(xiàn)在是35頁\一共有119頁\編輯于星期日35胚胎干細(xì)胞受精后5~7d，胚胎由大約140個(gè)細(xì)胞組成，呈空心圓球狀，即胚泡。胚泡中央的腔稱“囊胚腔”；胚泡囊胚腔一側(cè)的細(xì)胞群即為胚胎干細(xì)胞；胚胎干細(xì)胞可能發(fā)育成完整的個(gè)體，或演變成構(gòu)成人體任何器官、組織的200多種細(xì)胞；現(xiàn)在是36頁\一共有119頁\編輯于星期日36小鼠4細(xì)胞胚剛剛分裂成4個(gè)細(xì)胞哺乳動(dòng)物胚胎，其細(xì)胞就有了不同的發(fā)育特征，每個(gè)細(xì)胞可能不是全能的;

現(xiàn)在是37頁\一共有119頁\編輯于星期日37桑椹胚階段的克隆胚現(xiàn)在是38頁\一共有119頁\編輯于星期日38人胚干細(xì)胞現(xiàn)在是39頁\一共有119頁\編輯于星期日39人早期胚胎——囊胚現(xiàn)在是40頁\一共有119頁\編輯于星期日40人胚干細(xì)胞現(xiàn)在是41頁\一共有119頁\編輯于星期日41TheCharactersofESC飼養(yǎng)層依賴的；有抑制因子存在時(shí)呈未分化狀態(tài)；無抑制因子存在時(shí)可被誘導(dǎo)成各種細(xì)胞；懸浮培養(yǎng)時(shí)可形成擬胚體，并有序分化；現(xiàn)在是42頁\一共有119頁\編輯于星期日42常用滋養(yǎng)層小鼠成纖維細(xì)胞無限系（STO）；小鼠原始胚胎成纖維細(xì)胞（PMEF）；

上述兩種細(xì)胞都可以分泌成纖維細(xì)胞生長因子（FibroblastGrowthFactor，F(xiàn)GF）和分化抑制因子（LeukemiaInhibitoryFactor，LIF），既有助于ES細(xì)胞增殖，又能抑制細(xì)胞凋亡和分化；現(xiàn)在是43頁\一共有119頁\編輯于星期日43CultivationofESCESC置于滋養(yǎng)層上；放入CO2（5%）培養(yǎng)箱中，37~39℃,飽和濕度；培養(yǎng)液：DMEM+15%胎牛血清+LIF+EGF（表皮生長因子）+IGF（胰島素樣生長因子）+胰島素+β-巰基乙醇；

現(xiàn)在是44頁\一共有119頁\編輯于星期日44ESC的傳代用胰酶/EDTA消化ESC克?。挥梦⑽芑蜥槍⑵浯蛩槌蓡渭?xì)胞或細(xì)胞團(tuán)；移入新培養(yǎng)基；現(xiàn)在是45頁\一共有119頁\編輯于星期日45ESC的鑒定細(xì)胞小，核較大，明顯，有1至多個(gè)核仁；細(xì)胞間界限清晰，形態(tài)扁平；堿性磷酸酶（AKP）染色陽性；細(xì)胞克隆如鳥巢狀；胚胎階段細(xì)胞特異表面抗原SSEA-4強(qiáng)陽性、SSEA-3弱陽性；腫瘤相關(guān)抗原TRA-1-60、TRA-1-81陽性；M-22-25、ESMA-7反應(yīng)陽性；端粒酶活性高；現(xiàn)在是46頁\一共有119頁\編輯于星期日46EGC的鑒定細(xì)胞克隆緊密堆積；細(xì)胞界限不很清楚；細(xì)胞核較大；細(xì)胞表面具SSEA-1、SSEA-3、SSEA-4、TRAS-1-60和TRA-1-81抗原；現(xiàn)在是47頁\一共有119頁\編輯于星期日47胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)分化心肌、橫紋肌細(xì)胞造血細(xì)胞上皮細(xì)胞現(xiàn)在是48頁\一共有119頁\編輯于星期日48胚胎干細(xì)胞分化為特定器官現(xiàn)在是49頁\一共有119頁\編輯于星期日49TheKeyoftheResearchofESC體外生長保持不分化；DIA、LIF和HILD能抑制分化，有售；按需要定向分化；二甲亞砜可誘導(dǎo)肌細(xì)胞分化；維甲酸可誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞分化；環(huán)六亞甲基雙乙酰胺（HMBA）；高密度生長時(shí)分化成多種不同類型細(xì)胞；低密度生長時(shí)僅分化成少數(shù)幾種細(xì)胞；條件不宜時(shí)易發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化；現(xiàn)在是50頁\一共有119頁\編輯于星期日50ESC的分化誘導(dǎo)因子堿性成纖維細(xì)胞生長因子（bFGF）；轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1)；骨形態(tài)發(fā)生蛋白4（BMP-4）；造血生長因子（HGF）；表皮生長因子（EGF）；維生素A酸（RA）；二甲亞砜（DMSO）；雙環(huán)磷酸腺苷（db-cAMP）；

50現(xiàn)在是51頁\一共有119頁\編輯于星期日51胚胎干細(xì)胞研究(1)80年代中期我國科學(xué)家建立小鼠胚胎干細(xì)胞系；1995年，湯姆森等從恒河猴囊胚中分離建立了世界第一株靈長類胚胎干細(xì)胞；1995年，華盛頓大學(xué)醫(yī)學(xué)院的貝恩（G.Bain）用維生素A的衍生物視黃酸處理小鼠胚胎干細(xì)胞，使之轉(zhuǎn)變成神經(jīng)細(xì)胞；1998年，湯姆森等從不孕癥治療的夫婦捐獻(xiàn)的處于囊胚的人早期胚胎中分離獲得人胚胎干細(xì)胞；1998年，我國科學(xué)家培養(yǎng)出人胚胎干細(xì)胞，并先后誘導(dǎo)形成了漿細(xì)胞、造血干細(xì)胞；現(xiàn)在是52頁\一共有119頁\編輯于星期日52胚胎干細(xì)胞研究(2)1998年吉爾哈特等從流產(chǎn)胚胎的生殖腺（Gonadalgerm)中分離出原始胚胎生殖細(xì)胞，經(jīng)誘導(dǎo)，生成胚胎干細(xì)胞；1999年，在上海建立小鼠胚胎生殖嵴（EG）干細(xì)胞系；2000年，澳大利亞和新加坡科學(xué)家從人囊胚成功建立了2株人胚胎干細(xì)胞系，并從中分化得到神經(jīng)祖細(xì)胞；2001年1月浙江大學(xué)藥學(xué)院副院長樓宜嘉教授等通過藥物誘導(dǎo)在體外將胚胎干細(xì)胞定向分化成心肌細(xì)胞，能搏動(dòng)?，F(xiàn)在是53頁\一共有119頁\編輯于星期日53胚胎干細(xì)胞研究(3)2001年8月中國西北農(nóng)林科技大學(xué)竇忠英等從人胎兒原始生殖細(xì)胞分化得到能跳動(dòng)的類心肌細(xì)胞，每分鐘跳90次。2001年11月美國馬薩諸塞州的先進(jìn)細(xì)胞技術(shù)公司JoseCibelli等用化學(xué)藥物處理77枚猴子的卵，其中4枚單性發(fā)育到囊胚期，從中分離出干細(xì)胞，誘導(dǎo)它們形成神經(jīng)細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、心肌細(xì)胞和脂肪細(xì)胞等，從而有助于跨越倫理道德的障礙。2001年，美國威斯康星大學(xué)的考夫曼等成功地讓人胚胎干細(xì)胞分化成骨髓造血干細(xì)胞，并進(jìn)一步培養(yǎng)成紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板；現(xiàn)在是54頁\一共有119頁\編輯于星期日54胚胎干細(xì)胞研究(4)2001年美國科學(xué)家利用體細(xì)胞克隆技術(shù)制造出人早期胚胎，并從中獲得胚胎干細(xì)胞，避免了直接利用胚胎帶來的倫理上的麻煩。2001年12月美國人種起源研究所把人胎盤干細(xì)胞轉(zhuǎn)化成神經(jīng)細(xì)胞、血細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、皮膚細(xì)胞、肌細(xì)胞?，F(xiàn)在是55頁\一共有119頁\編輯于星期日55

美國馬薩諸塞州的生物技術(shù)公司AdvancedCellTechnology2001.11.25成功克隆出人類胚胎，在克隆人的技術(shù)上邁出了重要一步，不過該公司表示其目的不是為了克隆人，而是為了獲得能夠用于治療帕金森綜合癥和青少年糖尿病等各種疾病的干細(xì)胞。現(xiàn)在是56頁\一共有119頁\編輯于星期日56胚胎干細(xì)胞研究(5)2002年2月日本京都大學(xué)再生醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所用鼠胚胎干細(xì)胞培育出胰島細(xì)胞，并將它們轉(zhuǎn)移到3只患糖尿病的實(shí)驗(yàn)鼠體內(nèi)，一周后實(shí)驗(yàn)鼠的血糖值都正常。2002年2月美國馬薩諸塞州的先進(jìn)細(xì)胞技術(shù)公司從母牛耳朵取皮膚細(xì)胞的細(xì)胞核，與去核卵電激融合（體細(xì)胞克隆），形成早期胚胎。取出其中的胚胎干細(xì)胞，放在腎形可降解“支架”上生長，獲得外形和功能都似牛腎的微型器官，可泌尿，存活數(shù)月，不被排斥?，F(xiàn)在是57頁\一共有119頁\編輯于星期日57胚胎干細(xì)胞研究(6)2002年3月劍橋大學(xué)喬治?戴利和魯?shù)婪?耶尼施等對(duì)鼠胚干細(xì)胞的免疫缺陷基因進(jìn)行修復(fù)后，再將其植入鼠體，結(jié)果修復(fù)了鼠的免疫系統(tǒng)缺陷。2002年3月美國麻省理工學(xué)院羅伯特?蘭格等利用人胚干細(xì)胞培育出可能形成血管的組織，將它們注入免疫抑制的鼠中，未受排斥，14天后形成毛細(xì)血管網(wǎng)?，F(xiàn)在是58頁\一共有119頁\編輯于星期日58胚胎干細(xì)胞研究(7)2002年10月中國河北農(nóng)業(yè)大學(xué)桑潤滋教授等在國內(nèi)首次分離出山羊早期胚胎的類胚胎干細(xì)胞和類生殖細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)、分化試驗(yàn)，獲得了類神經(jīng)細(xì)胞和上皮細(xì)胞。2002年10月廣州中山大學(xué)附屬第二醫(yī)院黃紹良教授等在國內(nèi)首次建立三個(gè)中國人胚胎干細(xì)胞系CHE1、CHE2和CHE3，并采用分階段方法成功誘導(dǎo)小鼠胚胎干細(xì)胞發(fā)育成造血干細(xì)胞?，F(xiàn)在是59頁\一共有119頁\編輯于星期日59胚胎干細(xì)胞研究(8)美國威斯康星大學(xué)把胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)成血小板、紅細(xì)胞和白細(xì)胞。2003年日本三菱化學(xué)生命科學(xué)研究所科學(xué)家將老鼠的胚胎干細(xì)胞與能夠生成BMP4蛋白質(zhì)的細(xì)胞一同培育后，植入老鼠的睪丸，胚胎干細(xì)胞逐漸轉(zhuǎn)變成精子細(xì)胞。現(xiàn)在是60頁\一共有119頁\編輯于星期日60胚胎干細(xì)胞研究(9)2005年2月，美國北卡羅萊納州大學(xué)的研究人員報(bào)告，用一種生長因子處理培養(yǎng)的小鼠胚胎干細(xì)胞，再用纖維原細(xì)胞生長因子將胚胎干細(xì)胞處理7天，使胚胎干細(xì)胞分化成類似前體細(xì)胞的早期內(nèi)皮層細(xì)胞；然后將這種細(xì)胞注射到小鼠的肝臟中，從而導(dǎo)致肝臟細(xì)胞持續(xù)生產(chǎn)第九因子，逆轉(zhuǎn)了一種類型的血友病。這種類型的小鼠血友病與人類的B型血友病很相似；4個(gè)月后這些細(xì)胞仍不被免疫系統(tǒng)所排斥；現(xiàn)在是61頁\一共有119頁\編輯于星期日61胚胎干細(xì)胞研究(10)2005年2月以色列魏茨曼科學(xué)學(xué)院的耶爾·瑞瑟教授說，在豬胚胎受孕的第六周取出的胚胎肝臟、胰腺和肺的先質(zhì)組織移入老鼠體內(nèi)，既不會(huì)發(fā)生被移植組織發(fā)育成畸胎瘤的危險(xiǎn)，又可以看到被移植組織成功地發(fā)育成健康的細(xì)胞群；該實(shí)驗(yàn)為異種器官移植奠定了理論基礎(chǔ)；

現(xiàn)在是62頁\一共有119頁\編輯于星期日62胚胎干細(xì)胞研究(11)國家973計(jì)劃首席科學(xué)家曹誼林2005年1月透露：他們從兔子眼內(nèi)分離了小小1平方毫米的角膜緣干細(xì)胞，移植手術(shù)后8周，這塊“復(fù)制品”變成透明狀，令兔子的眼睛重放光明。隨著組織工程技術(shù)不斷發(fā)展與完善，這一成果今后將運(yùn)用于臨床，它意味著，“人體器官復(fù)制工廠”的夢想離我們又近了一步。在目前我國200萬因角膜疾患而失明的患者中，每年僅有2000－2500例能夠手術(shù)。

現(xiàn)在是63頁\一共有119頁\編輯于星期日63胚胎干細(xì)胞研究面臨的挑戰(zhàn)如何維持體外培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞不分化？如何定向誘導(dǎo)干細(xì)胞分化？如何增殖已定向分化的細(xì)胞？如何誘導(dǎo)生成所需的組織或器官？如何創(chuàng)造“萬能”干細(xì)胞？胚胎干細(xì)胞是否安全？現(xiàn)在是64頁\一共有119頁\編輯于星期日64臍血干細(xì)胞（約占臍血組織的0.4%）；骨髓造血干細(xì)胞（約占骨髓造血組織的0.1%）；外周血干細(xì)胞（約占外周血單核細(xì)胞的0.1~0.01%）；它們各自的優(yōu)缺點(diǎn)？造血干細(xì)胞

HematopoieticStemCell(1)現(xiàn)在是65頁\一共有119頁\編輯于星期日65造血干細(xì)胞

HematopoieticStemCell(2)從胚胎發(fā)育第4個(gè)月開始至終生，骨髓是主要的造血器官；造血干細(xì)胞的兩個(gè)重要特征：①高度的自我更新或自我復(fù)制能力，②可分化為各類血細(xì)胞(不對(duì)稱分裂)；造血干細(xì)胞僅占骨髓有核細(xì)胞的0.5%；現(xiàn)在是66頁\一共有119頁\編輯于星期日66造血干細(xì)胞

HematopoieticStemCell(3)成熟血細(xì)胞的產(chǎn)生過程：

造血干細(xì)胞造血祖細(xì)胞前體細(xì)胞成熟血細(xì)胞現(xiàn)在是67頁\一共有119頁\編輯于星期日67DifferentiationofBloodCellsfromHematopoieticStemCell

造血干細(xì)胞分化成各類血細(xì)胞造血干細(xì)胞（4）現(xiàn)在是68頁\一共有119頁\編輯于星期日68DifferentiationofBloodCellsfromHematopoieticStemCell造血干細(xì)胞（5）現(xiàn)在是69頁\一共有119頁\編輯于星期日69脂肪干細(xì)胞分化成血管2004年9月，日本大阪大學(xué)的中神啟德等提取、培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)鼠的脂肪干細(xì)胞，并把它們注入鼠受損的血管周圍。4周后，實(shí)驗(yàn)鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)約為對(duì)照的1.5倍，實(shí)驗(yàn)鼠受損腿部的血流量增加了15%。造血干細(xì)胞（6）現(xiàn)在是70頁\一共有119頁\編輯于星期日70TheSurfaceMarkers

ofHematopoieticStemCell

造血干細(xì)胞的表面標(biāo)志（1）CD34分子是目前應(yīng)用最廣泛的造血干細(xì)胞的表面陽性標(biāo)志；CD34分子是一種跨膜粘蛋白，在造血干細(xì)胞、造血祖細(xì)胞、小血管內(nèi)皮細(xì)胞以及胚胎成纖維細(xì)胞表面表達(dá)；CD34+細(xì)胞不全是造血干細(xì)胞，但造血干細(xì)胞表面都具有CD34分子；Lin-CD34-細(xì)胞中有些是比CD34+造血干細(xì)胞更原始的前體細(xì)胞；造血干細(xì)胞（7）現(xiàn)在是71頁\一共有119頁\編輯于星期日71MolecularAntigenofCD34

CD34抗原分子酸性的糖基化I型蛋白，MW=100~115kD；構(gòu)成：主肽區(qū)31aa，胞外區(qū)258aa，跨膜區(qū)23aa，胞槳區(qū)73aa；其中蘇氨酸和絲氨酸各占35%；編碼基因長26kb，含8個(gè)外顯子，位于染色體1q12-ter區(qū)；現(xiàn)在是72頁\一共有119頁\編輯于星期日72有人認(rèn)為，AC133分子是造血干細(xì)胞和造血祖細(xì)胞的特異標(biāo)記；有人認(rèn)為，KDR（血管內(nèi)皮生長因子受體2）是可定義造血干細(xì)胞、并使之區(qū)別于造血祖細(xì)胞的功能標(biāo)志；TheSurfaceMarkers

ofHematopoieticStemCell

造血干細(xì)胞的表面標(biāo)志（2）造血干細(xì)胞（8）現(xiàn)在是73頁\一共有119頁\編輯于星期日73將血液經(jīng)密度梯度離心獲得包括CD34+細(xì)胞的有核細(xì)胞，然后以CD34的特異抗體進(jìn)行標(biāo)記，通過流式細(xì)胞儀或免疫吸附等方法把CD34+細(xì)胞與未被標(biāo)記的CD34-細(xì)胞分離；造血干細(xì)胞大多處于細(xì)胞靜止期，對(duì)活體染料拒染。如何利用？造血干細(xì)胞移植后能迅速向骨髓回歸，如何利用該特點(diǎn)？造血干細(xì)胞（9）ScreeningandIsolation

ofHematopoieticStemCell

造血干細(xì)胞的篩選分離現(xiàn)在是74頁\一共有119頁\編輯于星期日74Detectionof

HematopoieticStemCell

造血干細(xì)胞的檢測確認(rèn)小鼠造血干細(xì)胞的唯一標(biāo)準(zhǔn)：長期體內(nèi)重建造血能力（LTR）；對(duì)人骨髓細(xì)胞造血活力的檢測一直依賴體外檢測：長期培養(yǎng)啟動(dòng)細(xì)胞活力檢測（LTC-IC）:將待測細(xì)胞在基質(zhì)細(xì)胞層上培育5~8周后，移到半固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，凡能夠形成混合細(xì)胞集落的即為LTC-IC陽性；高增殖力集落形成細(xì)胞活力檢測（HPP-CFC）：骨髓細(xì)胞在多種造血刺激因子存在時(shí)在體外半固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)10~12d后能形成大集落（直徑0.5mm）者；造血干細(xì)胞（10）現(xiàn)在是75頁\一共有119頁\編輯于星期日75Transplantation

ofhematopoieticstemcell

造血干細(xì)胞移植（1）造血干細(xì)胞具有“歸巢”（homing）的特性：經(jīng)復(fù)雜的分子間作用，由外周循環(huán)向骨髓遷移、識(shí)別和定位；介導(dǎo)血液干細(xì)胞與骨髓微環(huán)境成分之間粘附作用的糖蛋白分子稱粘附分子；粘附分子按其結(jié)構(gòu)和效應(yīng)分為五類：

選擇素、整合素、免疫球蛋白超家族、鈣粘蛋白以及CD44分子；造血干細(xì)胞（11）現(xiàn)在是76頁\一共有119頁\編輯于星期日76造血干細(xì)胞移植成為惡性腫瘤大劑量“放療”和“化療”后造血支持治療的主要措施；含異基因(外源基因)的造血干細(xì)胞轉(zhuǎn)移，可使受者產(chǎn)生對(duì)供者特異的、終生的免疫耐受；Transplantation

ofhematopoieticstemcell

造血干細(xì)胞移植（2）造血干細(xì)胞（12）現(xiàn)在是77頁\一共有119頁\編輯于星期日77造血干細(xì)胞用于基因治療具有自我更新能力，病人可能終生受益；具有多向分化能力，可隨血液循環(huán)到達(dá)靶細(xì)胞，發(fā)揮基因治療作用；目的基因產(chǎn)物可通過血循環(huán)到達(dá)靶器官；Transplantation

ofhematopoieticstemcell

造血干細(xì)胞移植（3）造血干細(xì)胞（13）現(xiàn)在是78頁\一共有119頁\編輯于星期日78MarrowLibrary

骨髓庫建立骨髓庫是造血干細(xì)胞移植的必然需要；美國骨髓供者庫是世界最大的骨髓庫，已有注冊志愿者350多萬人；臺(tái)灣骨髓資料捐贈(zèng)中心已有登記志愿者24萬人。已經(jīng)為約200人（其中大陸近100人）提供了骨髓；大陸已登記的捐贈(zèng)骨髓志愿者約24萬人；我國有大約400萬名白血病患者等待合適的骨髓移植；造血干細(xì)胞（14）現(xiàn)在是79頁\一共有119頁\編輯于星期日79ApplicationofImmunologicalRepressorinHSCT

免疫抑制劑在造血干細(xì)胞移植中的應(yīng)用環(huán)孢菌素A（CsA）；氨甲喋呤（MTX）；霉酚酸酯（MMF）；也可以將上述藥物聯(lián)合使用；造血干細(xì)胞（15）現(xiàn)在是80頁\一共有119頁\編輯于星期日80將造血干細(xì)胞置于與以往不同的環(huán)境中，使其分化受到周圍細(xì)胞產(chǎn)生的信號(hào)的調(diào)節(jié)，可能分化成多種非造血組織的細(xì)胞；

骨髓干細(xì)胞橫紋肌、心肌、軟骨、骨、肝細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、肺基質(zhì)細(xì)胞；外周血干細(xì)胞肝細(xì)胞、腎細(xì)胞、小腸、皮膚及血管的內(nèi)皮細(xì)胞；Transdifferentiation

ofHematopoieticStemCell

造血干細(xì)胞的橫向分化造血干細(xì)胞（16）現(xiàn)在是81頁\一共有119頁\編輯于星期日81PeripheralBloodStemCellTransplantation（PBSCT）

外周血干細(xì)胞移植優(yōu)點(diǎn)：無需麻醉，采集方便，可重采；重建造血功能快，免疫功能恢復(fù)早；感染等并發(fā)癥輕；混入腫瘤細(xì)胞的機(jī)會(huì)較少；缺點(diǎn)：細(xì)胞少，僅占外周血有核細(xì)胞的0.01%~0.1%，相當(dāng)于骨髓干細(xì)胞的1%~10%；操作較復(fù)雜；要有一定條件和設(shè)備；費(fèi)用比骨髓干細(xì)胞移植高；外周血CD34+細(xì)胞是造血干細(xì)胞移植的重要來源。造血干細(xì)胞（17）現(xiàn)在是82頁\一共有119頁\編輯于星期日82HowtoharvestPBSC?Physicalmethods:根據(jù)細(xì)胞大小、形態(tài)、密度等離心收集；Immunityreaction:免疫磁珠純化法；流式細(xì)胞儀；造血干細(xì)胞（18）現(xiàn)在是83頁\一共有119頁\編輯于星期日83AmplificationofPBSCinvitroIL-1、IL-3、IL-6、G-CSF、GM-CSF和SCF等6種因子為最佳組合，可使有核細(xì)胞擴(kuò)增1300倍；還有用IL-1、IL-3、IL-6、SCF結(jié)合EPO；造血干細(xì)胞（19）現(xiàn)在是84頁\一共有119頁\編輯于星期日84Howtorisethepercentageofperipheralbloodstemcell抗癌藥物；硫酸葡聚糖；吡喃聚合物；四氫葉酸；造血生長因子（包括白細(xì)胞介素）；

都是安全有效的干細(xì)胞動(dòng)員劑；造血干細(xì)胞（20）現(xiàn)在是85頁\一共有119頁\編輯于星期日85CordBloodStemCell

臍血干細(xì)胞(1)(CBSC)1984年，Boyce等發(fā)現(xiàn)人臍帶血中含有造血干細(xì)胞，并預(yù)言臍帶血可能是造血干細(xì)胞移植的一種新來源；1988年Gluckman第一次應(yīng)用人臍帶血移植治療凡科尼（Fanconi’s）貧血患兒在巴黎獲得成功；臍帶血的優(yōu)點(diǎn)：含豐富的造血干細(xì)胞和/或祖細(xì)胞（約1%，與骨髓相同）；免疫原（抗原）性較弱（主要含不成熟T細(xì)胞）；增殖快，集落形成率高；所需細(xì)胞數(shù)少；來源廣泛；造血干細(xì)胞（21）現(xiàn)在是86頁\一共有119頁\編輯于星期日86CordBloodStemCell

臍血干細(xì)胞(2)(CBSC)臍血干細(xì)胞是將新生兒的臍血采集、凍存起來，主要供體重在30~50kg以下的幼兒、少年和少數(shù)成年患者使用；(1~2╳108個(gè)單核細(xì)胞/kg體重，或0.5~1.0╳106個(gè)CD34+細(xì)胞/kg體重）;對(duì)于多數(shù)成年人，怎么辦？嘗試移植2份HLA基本相符的臍血；體外擴(kuò)增臍血干細(xì)胞；造血干細(xì)胞（22）現(xiàn)在是87頁\一共有119頁\編輯于星期日87AmplificationofCBSCinvitroIL-3與KL或FL組合，8周后擴(kuò)增約1000倍，第10周細(xì)胞數(shù)開始下降；KL和FL組合，可維持12~14周，擴(kuò)增1~2萬倍；純化的CD34+細(xì)胞，在加入FL和TPO的培養(yǎng)基中，25周后可擴(kuò)增5千萬倍；抑制因子TGF-β的抗血清可阻斷臍血細(xì)胞自分泌TGF-β的抑制作用，促進(jìn)CD34+細(xì)胞增殖；造血干細(xì)胞（23）現(xiàn)在是88頁\一共有119頁\編輯于星期日88TheClinicalApplicationofCordBloodStemCells臍血干細(xì)胞的臨床應(yīng)用1972年，Ende等報(bào)道應(yīng)用臍血治療白血病及再生障礙性貧血；1988年，Glukman等對(duì)Fanconi貧血患者實(shí)施親屬間臍血干細(xì)胞移植獲得成功；1994年，Issaragrisil等用臍血干細(xì)胞治療重型β-地中海貧血癥女孩成功；1998年，第一軍醫(yī)大學(xué)和中山醫(yī)科大學(xué)用臍血干細(xì)胞治療重型β-地中海貧血癥女孩成功；全世界已經(jīng)開展1000多例；造血干細(xì)胞（24）現(xiàn)在是89頁\一共有119頁\編輯于星期日89移植是否成功取決于配型和細(xì)胞數(shù)；移植前危險(xiǎn)因素有哪些？HLA不完全符合的移植成功率如何？遠(yuǎn)期療效如何？TheProblemsintheClinicalApplicationofCordBloodStemCells

臍血干細(xì)胞臨床應(yīng)用存在的問題造血干細(xì)胞（25）現(xiàn)在是90頁\一共有119頁\編輯于星期日90TheCordBloodLibrary

臍血庫1993年，美國紐約開始建立臍血庫。至1998年存有8700份，已為世界600多例患者進(jìn)行了臍血移植；西歐、加拿大、日本和韓國等相繼建立國家臍血庫；全世界已建立的臍血庫150多個(gè)；我國在北京、天津、上海、濟(jì)南、杭州、成都和廣州分別建立骨髓庫，已有臍血15000多份。

遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠造血干細(xì)胞（26）現(xiàn)在是91頁\一共有119頁\編輯于星期日91StemCellandTissueEngineering

干細(xì)胞與組織工程組織、器官損傷或功能障礙是人類疾病和死亡的最主要原因?，F(xiàn)有組織、器官缺損的治療途徑及缺陷：自體組織移植；異體組織移植；人工合成組織代用品；干細(xì)胞與組織工程(1)現(xiàn)在是92頁\一共有119頁\編輯于星期日92TissueEngineering

針對(duì)患者組織或器官缺損的情況，利用干細(xì)胞工程技術(shù)，誘導(dǎo)細(xì)胞定向分化，為其提供空間支持材料，在體內(nèi)外培育出所需的人體組織。今后可能進(jìn)一步培育出人造器官。干細(xì)胞與組織工程(2)現(xiàn)在是93頁\一共有119頁\編輯于星期日93ThreeStepsontheResearchofTissueEngineering制備干細(xì)胞，誘導(dǎo)定向分化；建立由細(xì)胞和可降解材料構(gòu)成的三維空間復(fù)合體；可降解材料在組織培育成熟后逐漸消失；干細(xì)胞與組織工程(3)現(xiàn)在是94頁\一共有119頁\編輯于星期日94ProgressesoftheResearchofTissueEngineering(1)人工皮膚“Apligraf”已經(jīng)在美國面市；2000年8月日本筑波大學(xué)把鼠肝干細(xì)胞體外培養(yǎng)后移植到肝功能衰竭的鼠肝中，40天后干細(xì)胞發(fā)育成新的肝組織，分泌出鼠肝特異清蛋白。2002年2月日本京都大學(xué)再生醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所用鼠胚胎干細(xì)胞培育出胰島細(xì)胞。干細(xì)胞與組織工程(4)現(xiàn)在是95頁\一共有119頁\編輯于星期日95ProgressesoftheResearchofTissueEngineering(2)2002年2月美國馬薩諸塞州的先進(jìn)細(xì)胞技術(shù)公司從母牛耳朵取皮膚細(xì)胞的細(xì)胞核，與去核卵電激融合，形成早期胚胎。取出其中的胚胎干細(xì)胞，放在腎形可降解“支架”上生長，獲得外形和功能都似牛腎的微型器官，可泌尿，存活數(shù)月，不被排斥。干細(xì)胞與組織工程(5)現(xiàn)在是96頁\一共有119頁\編輯于星期日96ProgressesoftheResearchofTissueEngineering(3)2002年3月美國麻省理工學(xué)院羅伯特?蘭格等利用人胚干細(xì)胞培育出可能形成血管的組織，將它們注入免疫抑制的鼠中，未受排斥，14天后形成毛細(xì)血管網(wǎng)。2002年6月澳大利亞的莫納什大學(xué)研究人員在世界上首次利用人干細(xì)胞培育出完整的功能齊全的胸腺。干細(xì)胞與組織工程(6)現(xiàn)在是97頁\一共有119頁\編輯于星期日97ProgressesoftheResearchofTissueEngineering(4)2002年7月美國的弗里德蘭德等將實(shí)驗(yàn)鼠骨髓的“內(nèi)皮祖細(xì)胞”注入鼠眼，后者會(huì)附著在視網(wǎng)膜內(nèi)的星形細(xì)胞上，與原有血管相結(jié)合形成新血管。2002年9月美國波士頓弗西斯研究中心從小豬體內(nèi)提取牙齒干細(xì)胞，用酶催化后，放入可降解牙模中，再植入小鼠腹部。在30周內(nèi)，這些細(xì)胞長成包含琺瑯質(zhì)和牙質(zhì)的牙冠。干細(xì)胞與組織工程(7)現(xiàn)在是98頁\一共有119頁\編輯于星期日982002年10月韓國與美國的科學(xué)家把干細(xì)胞置于可被吸收的生化塑料小架子上，再放到受中風(fēng)嚴(yán)重破壞的老鼠腦部。

一個(gè)月之內(nèi)，干細(xì)胞形成了新的腦部組織，還刺激原有的腦細(xì)胞生長。受損的部位已經(jīng)大部分恢復(fù)。干細(xì)胞與組織工程(8)ProgressesoftheResearchofTissueEngineering(5)現(xiàn)在是99頁\一共有119頁\編輯于星期日99StemCellandGeneTherapy基因治療的兩條途徑：體外途徑：從病人體內(nèi)獲取細(xì)胞，體外培養(yǎng)并進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移后，重新輸入患者體內(nèi)；體內(nèi)途徑：直接將基因或改造后的病毒（插入目的基因）導(dǎo)入人體患病組織中；現(xiàn)在是100頁\一共有119頁\編輯于星期日100治療基因或其它核苷酸；可攜帶治療基因進(jìn)入靶細(xì)胞的載體；將治療基因-載體導(dǎo)入靶組織的裝置（導(dǎo)管、注射器等）；ThreeFactorsofGeneTherapy現(xiàn)在是101頁\一共有119頁\編輯于星期日101PathwaysofinducinggeneintoES顯微注射；逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)；電脈沖介導(dǎo)；基因重組（定點(diǎn)整合，基因打靶）；基因敲除（定點(diǎn)敲除）；現(xiàn)在是102頁\一共有119頁\編輯于星期日102TheKeyofGeneTherapy選擇安全、無毒、容易穿過細(xì)胞膜的基因載體是將治療基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的關(guān)鍵。理想載體的條件：易獲得高滴度的純品；能穩(wěn)定、高效地轉(zhuǎn)染體內(nèi)非增殖狀態(tài)的細(xì)胞；可以長期、穩(wěn)定地表達(dá)外源基因而不會(huì)引起細(xì)胞毒性、感染或免疫應(yīng)答；能特異地識(shí)別靶組織，在其中表達(dá)外源基因；現(xiàn)在是103頁\一共有119頁\編輯于星期日103TheKindsofVectorfor

GeneTherapy腺相關(guān)病毒逆轉(zhuǎn)錄病毒皰疹病毒；甲病毒；弱免疫源性；高效穩(wěn)定轉(zhuǎn)染非增殖細(xì)胞；較長期表達(dá)外源基因；較低的致感染力；VirusVectors缺點(diǎn)：安全性不夠理想；操作難度較大；現(xiàn)在是104頁\一共有119頁\編輯于星期日104Non-virusVectors裸DNA（NakedDNA）；脂質(zhì)體載體（Liposomevector）；陽離子多聚物載體（Cationicpolymervector）；Safety,Easytomanipulate現(xiàn)在是105頁\一共有119頁\編輯于星期日105Howcouldthereconstructedvectorspassintocell?

重組載體如何進(jìn)入細(xì)胞？Virus：自主特異侵入；NakedDNA：微注射或基因搶；Cationicpolymervector：與細(xì)胞膜融合;易被降解；特異性不強(qiáng)；現(xiàn)在是106頁\一共有119頁\編輯于星期日106TheAdvantagesofTransgenicStemCellTherapy

轉(zhuǎn)基因干細(xì)胞治療的優(yōu)點(diǎn)轉(zhuǎn)基因干細(xì)胞可維持、增強(qiáng)或抑制其增殖分化（產(chǎn)生新組織）的能力；轉(zhuǎn)基因干細(xì)胞可使插入基因在其重建的組織中持續(xù)表達(dá)；現(xiàn)在是107頁\一共有119頁\編輯于星期日107TheGeneTherapyofHematopoieticStemCell

造血干細(xì)胞基因治療需要將外源基因整合到染色體上，因此常用逆轉(zhuǎn)錄病毒；造血干細(xì)胞轉(zhuǎn)腺苷脫氨酶基因（ada），6年后在外周血淋巴細(xì)胞尚可檢測到表達(dá)；標(biāo)記造血干細(xì)胞移植治療急性白血病兒童，8年后尚可在外周血中檢測到標(biāo)記的血細(xì)胞；造血干細(xì)胞基因治療的臨床效果大多不理想；現(xiàn)在是108頁\一共有119頁