動(dòng)物細(xì)胞工程曲_第1頁(yè)
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動(dòng)物細(xì)胞工程曲第1頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一關(guān)于蛋白質(zhì)工程的說法錯(cuò)誤的是()A.蛋白質(zhì)工程能定向改造蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu),使之更加符合人類的需要B.蛋白質(zhì)工程是在分子水平上對(duì)蛋白質(zhì)分子直接進(jìn)行操作,定向改變分子結(jié)構(gòu)C.蛋白質(zhì)工程能產(chǎn)生出自然界中不曾存在過的新型蛋白質(zhì)分子D.蛋白質(zhì)工程又稱為第二代基因工程關(guān)于蛋白質(zhì)工程的說法錯(cuò)誤的是()A.蛋白質(zhì)工程能定向改造蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu),使之更加符合人類的需要B.蛋白質(zhì)工程是在分子水平上對(duì)蛋白質(zhì)分子直接進(jìn)行操作,定向改變分子結(jié)構(gòu)C.蛋白質(zhì)工程能產(chǎn)生出自然界中不曾存在過的新型蛋白質(zhì)分子D.蛋白質(zhì)工程又稱為第二代基因工程下列關(guān)于蛋白質(zhì)工程的說法錯(cuò)誤的是()A.蛋白質(zhì)工程能定向改造蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu),使之更加符合人類的需要B.蛋白質(zhì)工程是在分子水平上對(duì)蛋白質(zhì)分子直接進(jìn)行操作,定向改變分子的結(jié)構(gòu)C.蛋白質(zhì)工程能產(chǎn)生出自然界中不曾存在過的新型蛋白質(zhì)分子D.蛋白質(zhì)工程與基因工程密不可分,又被稱為第二代基因工程下列關(guān)于蛋白質(zhì)工程的說法錯(cuò)誤的是()A.蛋白質(zhì)工程能定向改造蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu),使之更加符合人類的需要B.蛋白質(zhì)工程是在分子水平上對(duì)蛋白質(zhì)分子直接進(jìn)行操作,定向改變分子的結(jié)構(gòu)C.蛋白質(zhì)工程能產(chǎn)生出自然界中不曾存在過的新型蛋白質(zhì)分子D.蛋白質(zhì)工程與基因工程密不可分,又被稱為第二代基因工程2、下列關(guān)于蛋白質(zhì)工程的說法錯(cuò)誤的是()A.蛋白質(zhì)工程能定向改造蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu),使之更加符合人類的需要B.蛋白質(zhì)工程是在分子水平上對(duì)蛋白質(zhì)分子直接進(jìn)行操作,定向改變分子的結(jié)構(gòu)C.蛋白質(zhì)工程能產(chǎn)生出自然界中不曾存在過的新型蛋白質(zhì)分子D.蛋白質(zhì)工程與基因工程密不可分,又被稱為第二代基因工程B科學(xué)家利用生物技術(shù)將改造后的人干擾素基因?qū)胄∈笫芫训募?xì)胞中,經(jīng)培育獲得轉(zhuǎn)基因小鼠,從轉(zhuǎn)基因小鼠的乳汁中可以提取出人的干擾素。分析:該項(xiàng)技術(shù)手段為基因工程還是蛋白質(zhì)工程?如何判斷?第2頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一科學(xué)家用植物細(xì)胞雜交方法,將番茄的原生質(zhì)體和馬鈴薯的原生質(zhì)體融合,成功地培育出了“番茄—馬鈴薯”雜種植株如圖,其中①~⑤表示過程,英文字母表示細(xì)胞、組織或植株。據(jù)圖回答下列問題:(1)實(shí)現(xiàn)過程②是指____________,在此之前使用____________________處理細(xì)胞以除去細(xì)胞壁。與過程③密切相關(guān)的具有單層膜結(jié)構(gòu)的細(xì)胞器為_____。誘導(dǎo)②的方法有______________________________。原生質(zhì)體融合纖維素酶、果膠酶物理方法:離心、振動(dòng)、電激等化學(xué)方法:聚乙二醇(PEG)高爾基體第3頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一(2)在利用雜種細(xì)胞培育成為雜種植株的過程中,依據(jù)的原理是______________,其中過程④⑤相當(dāng)于______________過程,涉及的分裂方式為__________。植物細(xì)胞的全能性脫分化、再分化有絲分裂(3)e內(nèi)的細(xì)胞表示

,特點(diǎn)是_________________,它與①相比分化程度

,全能性

(4)若想制作人工種子,應(yīng)該選用

,再包裹上____________________而制成。

細(xì)胞排列疏松,高度液泡化的薄壁細(xì)胞愈傷組織未分化高胚狀體人工胚乳、人工種皮(5)植物體細(xì)胞雜交的繁殖方式_______,具有___個(gè)親本的優(yōu)良性狀。與傳統(tǒng)的有性生殖相比具怎樣的優(yōu)點(diǎn)_______________。無(wú)性生殖兩克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙第4頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段:動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞核移植、動(dòng)物細(xì)胞融合、生產(chǎn)單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。知識(shí)回憶:植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些?植物細(xì)胞工程通常以獲得什么為目的?植物組織培養(yǎng),植物體細(xì)胞雜交完整植物體第5頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)1、如何將動(dòng)物組織分散成單個(gè)的細(xì)胞呢?3、培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)到什么時(shí)候就不再分裂、增殖?4、如此時(shí)細(xì)胞數(shù)量并未達(dá)到人們的需求,應(yīng)該怎樣辦?2、培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞在生長(zhǎng)過程中表現(xiàn)出怎樣的生長(zhǎng)特點(diǎn)?5、如何理解原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)?6、傳代培養(yǎng)的細(xì)胞都能一直傳代下去嗎?第6頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)1、如何將動(dòng)物組織分散成單個(gè)的細(xì)胞呢?先用剪刀剪碎,后用蛋白酶處理3、培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)到什么時(shí)候就不再分裂、增殖?當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí),細(xì)胞分裂就會(huì)停止分裂增殖,這種現(xiàn)象叫接觸抑制。4、如此時(shí)細(xì)胞數(shù)量并未達(dá)到人們的需求,應(yīng)該怎樣辦?將貼滿細(xì)胞壁的細(xì)胞用胰蛋白酶處理,然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng),讓細(xì)胞繼續(xù)增殖。這樣的過程叫做傳代培養(yǎng)2、培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞在生長(zhǎng)過程中表現(xiàn)出怎樣的生長(zhǎng)特點(diǎn)?貼壁生長(zhǎng)、接觸抑制第7頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一5、如何理解原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)?培養(yǎng)過程中,在第一培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是原代培養(yǎng),之后轉(zhuǎn)移到其它培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是傳代培養(yǎng)6、傳代培養(yǎng)的細(xì)胞都能一直傳代下去嗎?不都能有些遺傳物質(zhì)發(fā)生改變,能無(wú)限增殖。第8頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一能力提高:1、用文字箭頭的形式表示出動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程2、總結(jié)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的概念及依據(jù)的原理第9頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織塊胰蛋白酶或膠原蛋白酶先剪碎單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液稀釋制成細(xì)胞懸液原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞分裂旺盛易培養(yǎng)去掉組織細(xì)胞間的蛋白質(zhì)過程:用文字、箭頭表示細(xì)胞貼壁接觸抑制轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中胰蛋白酶處理分瓶繼續(xù)培養(yǎng)10—50代:細(xì)胞增殖緩慢甚至停止,50代以后:部分細(xì)胞的細(xì)胞核型發(fā)生變化,獲得不死性,無(wú)限增殖10代以內(nèi):遺傳物質(zhì)不變?cè)恚杭?xì)胞的增殖第10頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一分析:1、一組概念:貼壁生長(zhǎng)、接觸抑制,原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng),細(xì)胞株、細(xì)胞系2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件有哪些?3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用?第11頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一強(qiáng)調(diào)一:細(xì)胞貼壁■細(xì)胞貼壁:在培養(yǎng)瓶懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上,稱為細(xì)胞貼壁?!雠囵B(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿壁要求:表面光滑、無(wú)毒、易于貼附。第12頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一■當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí),細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖,這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。強(qiáng)調(diào)二:接觸抑制第13頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一3、培養(yǎng)條件:(1)無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境(2)營(yíng)養(yǎng)(3)溫度和PH

(4)氣體環(huán)境:

保證細(xì)胞順利的生長(zhǎng)增殖措施:①對(duì)培養(yǎng)液和用具進(jìn)行無(wú)菌處理②添加一定量的抗生素③定期更換培養(yǎng)液)合成培養(yǎng)基(已知成分),外加動(dòng)物血清、血漿等36.5+(-)0.5℃,7.2-7.4O2和CO2,二者的作用分別是什么?細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)常用的混合氣體的組成:(95%空氣和5%CO2)第14頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一問題1:為什么用胰蛋白酶處理而不用胃蛋白酶?動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的最適PH值為7.2-7.4,胰蛋白酶作用的適宜PH為7.2-8.4,胃蛋白酶適宜PH為1.5。胃蛋白酶在PH為7.2-7.4的動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中無(wú)活性。合作探究問題2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分是什么?較植物組織培養(yǎng)基有何獨(dú)特之處?主要成分:(葡萄糖、氨基酸)、(水、無(wú)機(jī)鹽)、維生素和動(dòng)物血清等。獨(dú)特之處有:1、液體培養(yǎng)基2、成分中有動(dòng)物血清等問題3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個(gè)體?目前還不能,高度分化的動(dòng)物細(xì)胞全能性受到限制,失去了發(fā)育成完整個(gè)體的能力,動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多。第15頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一細(xì)胞的全能性細(xì)胞植物體或組織培養(yǎng)結(jié)果獲得細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物快速繁殖、培育無(wú)病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、水、維生素、動(dòng)物血清等蔗糖、氨基酸、植物激素、水、礦物質(zhì)、瓊脂等培養(yǎng)基成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖(分裂)原理動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較第16頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一1、下圖表示從蘇云金芽孢桿菌分離出來的殺蟲晶體蛋白質(zhì)基因(簡(jiǎn)稱Bt基因)及形成轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的圖解。(1)圖中a過程要用到的酶是_________。(2)在進(jìn)行圖中b過程時(shí).由我國(guó)科學(xué)家獨(dú)創(chuàng)的十分簡(jiǎn)便經(jīng)濟(jì)的方法是_______,此外,也經(jīng)常采用________法。若要培育轉(zhuǎn)基因綿羊,則此過程要用__________的方法。(3)為確定抗蟲棉是否培育成功,既要用放射性同位索標(biāo)記的___________作探針進(jìn)行分子雜交測(cè)試,又要在個(gè)體水平上鑒定,后者具體過程是______________。限制酶花粉管通道法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法顯微注射法Bt基因把害蟲放在抗蟲棉植株上,看其是否存活第17頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一2、草莓生產(chǎn)上傳統(tǒng)的繁殖方式易將所感染的病毒傳播給后代,導(dǎo)致產(chǎn)量降低、品質(zhì)變差。運(yùn)用微型繁殖技術(shù)可以培育出無(wú)病毒幼苗。草莓微型繁殖的基本過程如下:

①②③④脫分化再分化(1)微型繁殖培育無(wú)病毒草莓苗時(shí),一般選取________作為外植體,其依據(jù)是_______________。(2)若①是花藥,則④是

,繼續(xù)對(duì)其使用___處理可獲得

正常植株,該過程稱為

(3)若利用此項(xiàng)技術(shù)培育相關(guān)組織制造治療燙傷、割傷的藥物——紫草素,培養(yǎng)將進(jìn)行到(填序號(hào))

;若想制作人工種子,應(yīng)該選用(填序號(hào))

。人工種子是否都具有可育能力?理由:

芽尖、莖尖莖尖(或根尖)病毒極少單倍體純合子單倍體育種②③秋水仙素第18頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一3、下圖是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過程示意圖。請(qǐng)據(jù)此回答:(1)容器A中放置的是動(dòng)物器官或組織。它一般取自_______________________。

(2)容器A中的動(dòng)物器官或組織首先要進(jìn)行的處理是___,然后用_________酶處理,這是為了使細(xì)胞分散開來,這樣做的目的是_______________。(3)培養(yǎng)首先在B瓶中進(jìn)行,瓶中的培養(yǎng)基成分______________________________________________等。動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織塊剪碎胰蛋白酶或膠原蛋白避免接觸抑制及細(xì)胞易與培養(yǎng)液進(jìn)行物質(zhì)交換(糖、氨基酸、維生素、促生長(zhǎng)因子)(水、無(wú)機(jī)鹽)動(dòng)物血清、血漿第19頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一(4)在B瓶中培養(yǎng)一段時(shí)間后,有許多細(xì)胞衰老死亡,這是培養(yǎng)到第

代,到這時(shí)的培養(yǎng)稱為________。(5)為了把B瓶中的細(xì)胞分裝到C瓶中,用_________處理,然后配置成

,再分裝。(6)在C瓶中正常培養(yǎng)了一段時(shí)間后,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞全部死亡,原因是_______________。

10原代培養(yǎng)胰蛋白酶細(xì)胞懸液細(xì)胞沒有癌變第20頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一二、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)與克隆動(dòng)物:1、克隆動(dòng)物:2、核移植概念:3、核移植的種類胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植(難度高)將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核,移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中,使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎,這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體。用核移植的方法得到的動(dòng)物4、體細(xì)胞核移植的過程為什么?第21頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一從優(yōu)良供體動(dòng)物中取體細(xì)胞采集卵母細(xì)胞,體外培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂的中期

對(duì)供體體細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)通過顯微操作去核,得到去核卵母細(xì)胞將供體細(xì)胞核注入去核卵母細(xì)胞電激,構(gòu)建重組胚胎將早期胚胎移植到代孕母牛體內(nèi)分娩出克隆牛核移植過程:體細(xì)胞核移植思考:該克隆牛的遺傳物質(zhì)與供體牛之間有何關(guān)系?性狀主要與哪方動(dòng)物相同?克隆動(dòng)物的成功說明了什么?

第22頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一5、體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景(了解)畜牧業(yè)方面:1、加速家畜遺傳改良進(jìn)程,促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育2、保護(hù)瀕危物種醫(yī)藥衛(wèi)生方面:1、做生物反應(yīng)器,生產(chǎn)醫(yī)用蛋白2、轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物可作為異種移植的供體3、人的核移植胚胎干細(xì)胞可用于組織器官的移植4、深入了解胚胎發(fā)展和衰老過程5、追蹤研究疾病的發(fā)展過程和治療疾病6、該技術(shù)存在的問題(了解)成功率低、存在健康問題、克隆動(dòng)物的食品安全性問題等第23頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一卵細(xì)胞A母綿羊B母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植早期胚胎卵裂C母綿羊子宮胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育過程融合后的卵細(xì)胞第24頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一知識(shí)回憶:1、用箭頭和文字的形式簡(jiǎn)述植物體細(xì)胞雜交的過程分析:去壁的方法、融合的方法?形成雜種細(xì)胞的標(biāo)志、雜種植株形成的標(biāo)志?2、用文字箭頭的形式表示出動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程分析:培養(yǎng)過程中主要有那兩個(gè)階段的培養(yǎng),培養(yǎng)過程中表現(xiàn)出來的特點(diǎn)細(xì)胞株及細(xì)胞系,動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)條件培養(yǎng)應(yīng)選用怎樣的動(dòng)物組織材料,為什么?將動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞的方法?能否用胃蛋白酶?為什么要分散成單個(gè)細(xì)胞?

第25頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一3、用文字箭頭的形式表示出細(xì)胞核移植的過程分析:采用的卵母細(xì)胞是處于哪一時(shí)期的?克隆的動(dòng)物遺傳性狀100%與提供核的動(dòng)物相同嗎?為什么?動(dòng)物細(xì)胞核移植的分類:第26頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一三、動(dòng)物細(xì)胞融合1、概念:?又稱?得到的細(xì)胞稱為什么?2、原理:?3、誘導(dǎo)融合的方法:?與植物細(xì)胞融合方法的區(qū)別是?4、常用在哪一領(lǐng)域?四、單克隆抗體1、獲得抗體的傳統(tǒng)方法是?該方法有何缺陷?2、動(dòng)物體內(nèi)的抗體由什么細(xì)胞產(chǎn)生?人的血清中含有抗體的種類?4、一個(gè)B淋巴細(xì)胞能否在體外培養(yǎng)條件下,無(wú)限增殖?5、如何才能賦予B淋巴細(xì)胞無(wú)限增殖的能力,從而產(chǎn)生大量的抗體呢?科學(xué)家有何設(shè)想?這種設(shè)想的結(jié)果是什么?第27頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一設(shè)計(jì)方案:一個(gè)B淋巴細(xì)胞--只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞--能無(wú)限增殖雜種細(xì)胞能力提高:用文字箭頭的形式表示出單克隆抗體的制備過程第28頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一抗原小鼠B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞融合,篩選細(xì)胞培養(yǎng)篩選,繼續(xù)培養(yǎng)體外培養(yǎng)體內(nèi)培養(yǎng)單克隆抗體單克隆抗體的制備第29頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一1、對(duì)小鼠注射抗原的目的是什么?2、誘導(dǎo)融合的方法有哪些?及融合細(xì)胞類型?3、怎樣篩選出雜交瘤細(xì)胞?該細(xì)胞有何特點(diǎn)?4、為什么要進(jìn)行專一抗體檢測(cè)和克隆化培養(yǎng)?5、大量增殖雜交瘤細(xì)胞獲得單抗的方法?B-B細(xì)胞B-瘤細(xì)胞(雜交瘤細(xì)胞)瘤-瘤細(xì)胞使其發(fā)生免疫反應(yīng),產(chǎn)生抗體,獲得與抗原對(duì)應(yīng)的效應(yīng)B細(xì)胞物理(如:電激),化學(xué)(如:聚乙二醇),滅活的病毒用選擇培養(yǎng)基篩選既能無(wú)限增殖,又能產(chǎn)生專一性抗體將不同種雜交瘤細(xì)胞分開,篩選出能產(chǎn)生所需特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞

①體外培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞,從培養(yǎng)液中提?、趯㈦s交瘤細(xì)胞注射到小鼠腹腔中,從腹水中提取第30頁(yè),共34頁(yè),2023年,2月20日,星期一整個(gè)制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選及其采用的方法第一次篩選得到雜交瘤細(xì)胞(多種),第二次需先在多孔培養(yǎng)板上,在每孔只有一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下開始培養(yǎng),然后再篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群。由于該細(xì)胞群是單個(gè)雜交瘤細(xì)胞克隆得來的,所以產(chǎn)生的抗

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