中藥質量控制和評價模式

中藥質量控制和評價模式第一頁，共43頁。1中藥質控現(xiàn)狀

中藥質量控制根本目標：保證中藥安全有效。而中藥質控的現(xiàn)行目標：保證中藥材或制劑的一致性和穩(wěn)定性。目前中藥內在質量控制模式基本上是“惟成分論”，即通過對個別指標性成分進行定性或/和定量分析來實現(xiàn)質量控制和評價。

第二頁，共43頁。中藥與化學藥品質量標準的根本區(qū)別:

化學藥品：分子結構清楚，構效關系明確，鑒別、檢查、含量測定可以直接作為療效評價的指標。中藥：在中醫(yī)理論指導下，尤其是復方制劑，檢測任何一種活性成分均不能體現(xiàn)其整體療效?，F(xiàn)行中藥質量控制的基本模式是參照國外植物藥的質量控制方法，借鑒化學藥品質量控制的模式建立的。

1中藥質控現(xiàn)狀

第三頁，共43頁。1中藥質控現(xiàn)狀中藥化學指紋圖譜技術對中藥質量控制有一定的促進作用，但中藥化學成分變化因素較為復雜，選擇合理的指紋信息難度較大，其重現(xiàn)性、耐受性及譜效關系等還有待深入研究。中藥化學指紋圖譜實質上是中藥部分成分的“化學條碼”，與安全性、有效性關聯(lián)意義不大。第四頁，共43頁。1中藥質控現(xiàn)狀如冬蟲夏草測定腺苷含量、板藍根檢測精氨酸,既不是其主要有效成分,也不是其專屬性成分,對其中藥質量控制幾乎沒有實際意義。即使是檢測有效成分,往往量效關系不明顯：如人參的人參總皂苷：人參(主根)約含2%,

人參須約含5%,

人參葉可達10%。第五頁，共43頁。1中藥質控現(xiàn)狀大部分中藥的有效成分仍未得以闡明。據統(tǒng)計，《中國藥典》2005年版(一部)共收載中藥材(含飲片和提取物)572種，其中只有60%有過化學成分研究報道，約20%進行過較系統(tǒng)的化學成分研究，至今已闡明其有效成分的品種不到5%。第六頁，共43頁。1中藥質控現(xiàn)狀中藥個別或部分指標性成分一致性和穩(wěn)定性≠制劑質量一致性和穩(wěn)定性≠臨床上安全性和有效性！第七頁，共43頁。2中藥質控方向目前中藥質量控制和評價的主要手段（《中國藥典》2005年版一部基本上是用這兩種方法）：形性檢測法＋化學檢測法質控策略探索：多元化中藥質量控制和評價模式

形性檢測＋化學檢測＋生物檢測（三位一體）第八頁，共43頁。2中藥質控方向中藥質量控制和評價的方法可以簡單概括為：形性檢測法、化學檢測法、生物檢測法。形性檢測主要指以藥材的形狀、大小、顏色、氣味、表面特征、質地、斷面等表觀性狀來判別藥材的種類和真?zhèn)?，并對部分藥材輔以簡單的理化試驗。第九頁，共43頁。2中藥質控方向化學檢測主要是利用藥材所含化學成分的某些物理性質或化學反應來對中藥進行定性和定量分析，一般可用于含不同化學成分的性狀相似而又無明顯顯微特征的藥材。生物檢測是利用生物體包括整體動物、離體組織、器官、細胞和微生物等評估藥物生物活性(包括藥效和毒性)的一種方法。第十頁，共43頁。中藥質控方向

2.1形性檢測

從主觀性和模糊性（趨向）組織形態(tài)特征三維化、可視化、定量化。

突破傳統(tǒng)的二維平面局限，借助計算機圖形學、計算機三維重建、體視學和圖像分析系統(tǒng)等手段，將生藥組織形態(tài)學研究推向三維化、可視化、定量化。第十一頁，共43頁?！皵?shù)字可視化中藥”技術（中藥計算機三維重建與顯示技術）（中藥計算機三維仿真技術）組織連續(xù)切片圖形量化得到深度信息（將物體不同切片上的二維圖像按照切片的空間位置關系依次疊加排列而組成物體的三維數(shù)據；再利用計算機圖像處理技術、圖形生成理論及視覺心理學原理，在二維平面上形成直觀地顯示出具有生動性和立體感的三維圖像。第十二頁，共43頁?！皵?shù)字可視化中藥”技術應用全方位刻畫中藥材形態(tài)結構、甄別道地與非道地藥材等提供三維立體動態(tài)的鑒定技術和圖像資料；形象生動地再現(xiàn)中藥和植物的外觀和微觀的立體結構；形象生動地再現(xiàn)中藥和植物的外觀和微觀的立體結構以及組織細胞的空間關系，有助于揭示植物和中藥材的生長發(fā)育規(guī)律、次生代謝產物積累分布動態(tài)、中藥材品質變化規(guī)律等。第十三頁，共43頁。比如，可以從不同來源、不同產地（道地）、不同規(guī)格（三七多少頭的、人參多少支的）、導管的長度、木質化的藥材木質化的程度、油細胞的大小多少、淀粉粒的多少等等，分析出藥材的質量，使過去經驗鑒別的東西變成了形象化的東西。第十四頁，共43頁。2中藥質控方向

2.1形性檢測不同種類不同產地的姜黃屬植物葉：供試材料處理:撕取表皮制片。其中每份材料選取3－5片葉子,每片葉子撕取上下表皮各5－10個視野。一般在葉片中部中脈附近撕取表皮組織。觀測：上表皮氣孔，下表皮氣孔；上表皮副衛(wèi)細胞，下表皮副衛(wèi)細胞；上表皮細胞，下表皮細胞。第十五頁，共43頁。2中藥質控方向

2.1形性檢測

圖像分析操作:①圖像采集,將制片置于配有CCD攝像機的顯微鏡下觀察采樣②圖像預處理,包括編輯、輪廓修飾、灰度變換、邏輯運算和二值化操作等,以便獲得清晰完整的目標灰度圖像;③參數(shù)測定,包括面數(shù)密度(個/mm2)、截面積(μm2)、周長(μm)、最大直徑(μm)、長寬比、圓形度、圓球度等參數(shù)。④數(shù)據倍數(shù)轉換,求出目標實際大小值和密度值;⑤采用系統(tǒng)聚類分析和主成分分析進行模式識別處理。第十六頁，共43頁?！按笮　北碚鳎杭毎睆?、面積、體積、體密度，平均間距等；“質地”表征：細胞體積、密度、壁厚，纖維和石細胞密度等；“粉性”表征：淀粉粒和木質化細胞的數(shù)密度、體密度、體積等；“油性”表征：油細胞數(shù)密度、體密度、油滴面積、體積等)。

例如第十七頁，共43頁。2中藥質控方向

2.1形性檢測大小、密度和形狀因子（3大類參數(shù)）體視學原理計算機圖像技術組織細胞顯微圖像的形態(tài)特征

數(shù)值分類歸納出其形態(tài)學特征

建立分類鑒定譜系圖第十八頁，共43頁。2中藥質控方向

2.2化學檢測

采用HPLC、MS、NMR、IR、UV、GC、CE等及其聯(lián)用技術進行化學指紋圖譜定性和有效成分或指標成分定量，結合化學計量學、人工智能等技術建立中藥化學質量模式識別系統(tǒng)，表征中藥化學組分群特征優(yōu)勢：a檢測中藥材及其產品的真?zhèn)危?/p>

b區(qū)分藥材的不同部位；

d追蹤制劑的工藝過程及某些化學成分的變化；

c監(jiān)測原料與成品之間、成品批間質量的穩(wěn)定性、一致性。

第十九頁，共43頁。2中藥質控方向

2.3生物檢測生物檢測

將生物檢測方法引入中藥質量控制與評價體系，不僅可以輔助鑒定真?zhèn)蝺?yōu)劣，又可不同程度地關聯(lián)安全性和有效性，尤其在無法對中藥中未知復雜成分用成分檢控的方法控制其質量時，更顯其優(yōu)越性。第二十頁，共43頁。2中藥質控方向

2.3生物檢測生物效價檢測：是指在嚴格控制的試驗條件下，通過比較標準品和供試品對生物體或離體器官與組織的特定生物效應，從而評價和控制供試品的質量或活性。適用于結構復雜或理化方法不能測定其含量、或者理化測定不能反映其臨床生物活性的藥物。第二十一頁，共43頁。2中藥質控方向

2.3生物檢測中國藥典2005采用了生物效價檢測方法控制水蛭質量，本品每1g含抗凝血酶活性應不低于16.0U。比濁法測定紅霉素生物效價?；诳咕r檢測的板藍根藥材品質評價方法的研究。生物效價檢測研究進展（3000字）（50%外文參考文獻）中藥質量控制中的生物效價檢測的作用與進展第二十二頁，共43頁。例：基于神經氨酸酶活性檢測的板藍根品質的生物評價采用流感病毒神經氨酸酶

(NA)體外活性熒光檢測法測定板藍根的NA抑制生物活性,并建立板藍根抗病毒生物效價檢測方法。研究表明板藍根具有抑制NA的活性,IC50=(0.90±0.20)mg·mL?1(相當于生藥),其量效曲線形狀與陽性對照藥磷酸奧司他韋相似,提示二者對NA的抑制可能具有相同的作用方式。第二十三頁，共43頁。采用“質反應平行線”法設計和優(yōu)化的板藍根抗病毒生物效價檢測方法,重復性較好(RSD=5.78%),實際樣品檢測結果均能通過可靠檢驗(偏離直線P>0.05、偏離平行P>0.05)。研究結果表明,所建立的生物效價檢測方法可以作為板藍根品質生物評價的方法之一。第二十四頁，共43頁。

當前,板藍根的質量控制方法主要是依托常規(guī)性狀鑒別和精氨酸的定性檢識,

該方法既難以做到客觀定量,又與板藍根的藥理活性幾無關聯(lián),也就難以保證它的臨床有效性。

生物效價檢測方法與常規(guī)鑒別方法比較不僅在結果上具有一致性,而且具有靈敏度高、重復性好、操作簡單、客觀、可定量、快捷等優(yōu)點。本方法的建立提高了板藍根的質量控制水平,并且能夠為抗病毒類中藥質量生物控制的研究提供參考。第二十五頁，共43頁。2中藥質控方向

2.3生物檢測目前生物效價檢測的常用方法有：酶活力、凝集素活性、抗病毒測試、抗菌活性、抗炎活性等。這些方法的專屬性較強，而通用性較差，有限的實驗條件難以同時滿足幾百甚至幾千種不同中藥及中藥制劑的質量控制和評價。另：生物熱動力學方法第二十六頁，共43頁。2中藥質控方向

2.3生物檢測生物效價檢測方法選取以下原則：(1)“相關性”是指所選取的檢測方法應與藥物的功能主治或現(xiàn)代藥理作用有關，從而保證檢測結果與臨床療效的相關性；(2)“重復性”是指在嚴格規(guī)定的條件下，檢測結果應有一定的重復性，以保證試驗的延續(xù)性和可重復性；(3)“靈敏性”是指所選取的檢測指標應能客觀體現(xiàn)反應程度隨劑量的變化而有顯著的改變；第二十七頁，共43頁。2中藥質控方向

2.3生物檢測(4)“適用性”是指選取的檢測方法應快速、高效、通用性好、易于推廣；(5)“定性定量”是指所選取的檢測方法最好應具有定性鑒別(生物效應譜)和定量分析(生物效價值)的雙重特性。第二十八頁，共43頁。2中藥質控方向

2.3生物檢測生物效價檢測方法之一：“熱譜圖”（基于生物熱動力學的微量熱分析方）測定不同中藥與機體相互作用的能量轉移和熱變化，將中藥內在的藥性品質表達為特征“指紋”——生物熱活性譜線圖(簡稱“熱譜圖”或“生物效應譜”)

，可對生物體在生長代謝過程中的相關信息進行定性、定量分析，有較強的專屬性、靈敏性和重現(xiàn)性，同時亦可按生物統(tǒng)計學進行實驗設計，屬于生物效價檢定中的量反應。第二十九頁，共43頁。2中藥質控方向

2.3生物檢測

生物熱動力學方法——“熱譜圖”原理：(1)生物體的生長代謝都伴有能量的轉移和熱變化，并在一定的閾值內呈規(guī)律性波動；(2)中藥的生物活性實質上就是中藥藥效物質對生物體生長代謝的干預作用，這種干預作用不可避免地將影響生物體的能量轉移和產熱變化；第三十頁，共43頁。2中藥質控方向

2.3生物檢測(3)通過測定能量和產熱的變化，可以間接地了解生物體的生長代謝變化，從而判斷藥物的生物活性情況；(4)生物熱活性檢測是以體系的狀態(tài)參數(shù)為研究對象，能實時、在線、快速地刻畫機體的表觀狀態(tài)及其變化情況。第三十一頁，共43頁。2中藥質控方向

2.3生物檢測“熱譜圖”特點：“普適性好”即是指對不同的研究對象(如微生物、組織、細胞、分子、基因)，均只需用：一個方法(生物熱活性測定方法)、一臺儀器(生物熱活性檢測儀)、一套指標(生物熱譜圖和熱動力學參數(shù))第三十二頁，共43頁。2中藥質控方向

2.3生物檢測“實時在線”是指生物熱活性檢測儀有如多導生理檢測儀，可以在第一時間及時地直觀地反映生命體系的宏觀狀態(tài)變化；“靈敏、準確”是指生物熱活性檢測所需的藥物樣品量少，一般是毫克級，同時由于研究對象和環(huán)境的可控性好、操作步驟簡單、自動化程度高，所以方法的精密度、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性較好；第三十三頁，共43頁。2中藥質控方向

2.3生物檢測“高效”是指一臺生物熱活性檢測儀可擁有8—16個檢測通道，甚至更多，可同時對多個研究對象或目標進行檢測和分析，降低成本。第三十四頁，共43頁。中藥質控模式

——基于道地藥材和生物效價檢測的中藥質控模式3.1道地藥材在中藥生產質量控制上的歷史和現(xiàn)實意義道地藥材來源于特定產地且傳統(tǒng)公認的名優(yōu)正品藥材,是優(yōu)質中藥材的代名詞,也是歷代中醫(yī)評價中藥材品質的一個綜合而物質化標準。

以道地藥材為參照物,克服了單一對照品的不足,有利于體現(xiàn)中藥多成分、多靶點、多環(huán)節(jié)、整合作用的特點和優(yōu)勢。第三十五頁，共43頁。3中藥質控模式

——基于道地藥材和生物效價檢測的中藥質控模式3.2道地優(yōu)級藥材對照品采集和標化的技術要求3.2.1原料的選擇應當選擇道地核心產區(qū)、主流優(yōu)良品種、優(yōu)等商品規(guī)格的品種，同時還要有嚴格的標準操作規(guī)程從根本上保證對照品原料的均一性、穩(wěn)定性、代表性和可延性。第三十六頁，共43頁。3.2.2標化程序必須保證標化的程序合法、方法科學。參照世界衛(wèi)生組織的有關指導原則，應該在藥典委員會指導下，確定牽頭單位，實行多實驗室協(xié)作標化。第三十七頁，共43頁。3.2.3量值的溯源性

新建立的生物效價檢測方法必須按照藥典要求進行方法學驗證。標化用基準物質應與被標物質有相同的特性值，必須是WHO、中國藥品生物制品檢定所等法定部門制備或賦值的相應標準物質。標定結果均應照“生物檢定統(tǒng)計法-量反應