微生物分類學之沙門氏菌檢驗

本資料來源沙門氏菌及其檢驗一、概述在微生物分類學中，沙門氏菌屬（Salmonella）是腸桿菌科的一個大屬，包括2000多個血清型，它們在形態(tài)結(jié)構(gòu)、培養(yǎng)特性、生化特性和抗原構(gòu)造方面都非常相似，是一類形態(tài)短小的革蘭氏陰性桿菌，主要寄居于人和其它溫血動物的腸道中，可引起多種性質(zhì)的疾病，根據(jù)沙門氏菌的致病范圍，可將其分為三大類群。第一類群：專門對人致病。如傷寒沙門氏菌,甲型、乙型、丙型副傷寒沙門氏菌。第二類群：能引起人類食物中毒，稱之為食物中毒沙門氏菌群，如鼠傷寒沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、紐波特沙門氏菌等。第三類群：專門對動物致病，很少感染人，如馬流產(chǎn)沙門氏菌、雞白痢沙門氏菌，此類群中盡管很少感染人，但近年也有感染人的報道。2

根據(jù)侵入機體沙門氏菌菌種的不同，在臨床上引起四種不同的疾病:（1）傷寒、副傷寒由沙門氏屬中的傷寒桿菌和甲、乙、丙型副傷寒桿菌引起。（2）食物中毒沙門氏菌屬引起的食物中毒，主要以腸炎桿菌、鼠傷寒桿菌、豬霍亂桿菌、丙型副傷寒桿菌和湯普遜桿菌等最為多見。臨床癥狀主要是胃腸炎。病程較短，一般2~4d,可完全恢復。（3）敗血癥多為豬霍亂桿菌引起，甲、乙、丙型副傷寒桿菌和腸炎桿菌亦可引起敗血癥。（4）慢性腸炎沙門氏桿菌可引起慢性、持久性腸炎。3

沙門氏菌廣泛分布于自然界，是引起食物中毒的重要病原菌。在世界各國各類細菌性的食物中毒中，沙門氏菌常居前列。因此，沙門氏菌的檢測是各國檢驗機構(gòu)對多種進出口食品的必檢項目之一。沙門氏菌不產(chǎn)生外毒素，但能產(chǎn)生毒力較強的內(nèi)毒素。沙門氏菌主要通過食物、飲水經(jīng)口感染。可存在多種食物中，包括生肉、禽、蛋、奶制品、蝦、魚和田雞腿等。4二、沙門氏菌的生物學特性

1、形態(tài)與染色特性：革蘭氏陰性短桿菌，無芽孢,一般無莢膜，周生鞭毛（除雞白痢沙門氏菌、雞傷寒沙門氏菌外），大多數(shù)具有菌毛。2、培養(yǎng)特性：需氧或兼性厭氧；普通營養(yǎng)瓊脂上生長良好，菌落中等大小，無色半透明、圓形、光滑、濕潤。53、生化特性：大部分發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、甘露醇和山梨酸產(chǎn)氣；一般不發(fā)酵乳糖和蔗糖，不發(fā)酵側(cè)金盞花醇；一般不產(chǎn)吲哚，V-P反應陰性；不分解尿素，苯丙氨酸不脫氨；三糖鐵瓊脂斜面常產(chǎn)生H2S。4、抵抗力：較弱，不耐熱，最適溫度37℃，最適。5、毒素特征：不產(chǎn)外毒素，產(chǎn)毒性很強的內(nèi)毒素，這是致病的主要原因。66、血清學特性：沙門氏菌具有復雜的抗原結(jié)構(gòu)。雖然沙門氏菌具有O、H、K和其它表面物質(zhì)(如菌毛)四種抗原，但只有O抗原是每個菌株均有的成分。1）O抗原（菌體抗原）*存在于菌體表面，為脂多糖，多糖部分決定其特異性，*O抗原耐熱(100℃、2.5h或121℃、2h加熱均不破壞其抗原性)，其特異性不易喪失或變異。*一個菌體具有一種或多種不同的O抗原。72）H抗原（鞭毛抗原）*H抗原存在于鞭毛中，不耐熱，化學成分蛋白質(zhì)，其抗原性可以被酒精所破壞。*H抗原可分為兩相第1相：為特異相，用小寫英文字母表示，a～z，Z以后則從z1、z2……，已編到z83。第2相：為非特異相以阿拉伯數(shù)字表示，共7種。具有第1相和第2相H抗原的細菌稱為雙相菌，大多數(shù)沙門氏菌屬于此；僅有一相者稱單相菌，如腸炎沙門氏菌。極少數(shù)無鞭毛菌兩相抗原都不具有，稱為無相菌，如雞白痢沙門氏菌。83）

Vi抗原（包膜抗原）少數(shù)菌沙門氏菌中尚有一種表面包膜抗原，功能與大腸桿菌的K抗原類同，因一般認為它與毒力(Virulence)有關(guān)，故稱Vi抗原。經(jīng)過幾次傳代、60℃熱處理或石炭酸處理后容易消失。9三、

生化反應101、吲哚試驗(indoltest)細菌產(chǎn)生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基質(zhì)（吲哚），靛基質(zhì)與試劑對二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基質(zhì)。色氨酸→吲哚（無色）＋對二甲基氨基苯甲醛→玫瑰吲哚（紅色，+大腸桿菌）不產(chǎn)吲哚（無色，-產(chǎn)氣桿菌）試驗方法：取培養(yǎng)24h培養(yǎng)液，先加入少量乙醚，搖動試管以提取和濃縮吲哚，待其浮于培養(yǎng)液表面后，再沿試管壁徐緩加入吲哚試劑數(shù)滴，在接觸面呈紅色，即為陽性。應用：用于腸道桿菌的鑒定11Indoltest吲哚試驗tryptophan色氨酸→indole吲哚→玫瑰吲哚↑Kovac'sreagent吲哚試劑

（對二甲基氨基苯甲醛）-+E.coli蛋白胨水試管122、尿素酶（Urease，脲酶）試驗有些細菌能產(chǎn)生尿素酶，將尿素分解、產(chǎn)生2個分子的氨，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，酚紅呈粉紅色。尿素酶不是誘導酶，因為不論底物尿素是否存在，細菌均能合成此酶。其活性最適pH為7.0。酚紅：黃色→紅色（+普通變形桿菌）黃色（-大腸桿菌）試驗方法：挑取18~24h待試菌培養(yǎng)物大量接種于液體培養(yǎng)基管中，搖勻，于36±1℃培養(yǎng)，觀察結(jié)果?；蛲坎疾⒋┐探臃N于瓊脂斜面，不要到達底部，留底部作變色對照。培養(yǎng)24h左右，觀察結(jié)果，如陰性應繼續(xù)培養(yǎng)至4天，作最終判定，變?yōu)榉奂t色為陽性。13UreaseTest

尿素酶試驗：urea尿素ammonia氨143、氨基酸脫羧酶的測定

有些細菌含有氨基酸脫羧酶，使羧基釋出，生成胺類和二氧化碳。此反應在偏酸的條件下進行，當培養(yǎng)基含胺類時呈堿性反應，使指示劑變色。

接種與觀察結(jié)果：用幼齡培養(yǎng)液作為菌種，直接接種。接種后封油，對照管與測定管同時接種封油。腸肝菌科的細菌于37℃培養(yǎng)4天觀察。當指示劑（溴甲酚紫）呈紫色或帶紅色調(diào)的紫色者為陽性，呈黃色者為陰性。對照管應呈黃色反應。15164、三糖鐵（TSI）瓊脂試驗試驗方法：以接種針挑取待試菌可疑菌落或純培養(yǎng)物，穿刺接種并涂布于斜面，置36±1℃培養(yǎng)18~24h，觀察結(jié)果。培養(yǎng)基：乳糖：蔗糖：葡萄糖=10：10：1；加有酚紅本試驗可同時觀察糖發(fā)酵產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣（變黃）；產(chǎn)生硫化氫（變黑）。只能利用葡萄糖的細菌，葡萄糖被分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸，因接觸空氣而氧化，加之細菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故使斜面后來又變紅，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類不被氧化，所以仍保持黃色。17185、β-半乳糖苷酶（ONPG）的測定ONPG:鄰硝基酚-β-D-半乳糖苷。具有半乳糖苷酶的細菌，能使其水解，從而釋放黃色的鄰硝基酚ONPG試驗左為陽性（黃）右為陰性對照19四、檢測方法20從食品蝕中分離核和鑒定丘沙門氏騎菌，當劫前通常局采用的阿方法共乒分5個步驟屋：前增菌渠：食品樣品忍在含有營柄養(yǎng)的非選慈擇性培養(yǎng)委基中增菌掉，使受損求傷的沙門掉氏菌細胞劍恢復到穩(wěn)另定的生理貪狀態(tài)。加工食品籍均應經(jīng)過砍前增菌。（選擇壺性）增皺菌：此培養(yǎng)塞基允許精沙門氏戀菌持續(xù)另增菌，慈同時阻凡止大多則數(shù)其他蘋細菌的盤增殖。未經(jīng)加摧工的食晶品不必釀經(jīng)過前勵增菌而系直接增鳥菌。選擇性耐平板分宗離：采用固體圍選擇培養(yǎng)像基，抑制酬非沙門氏嘗菌的生長永，提供肉旨眼可見的市疑似沙門儀氏菌純菌境落的識別憶。生物化辮學篩選茄：排除大多踢數(shù)非沙門情氏菌，也拌提供了沙密門氏菌培斑養(yǎng)物菌屬旬的初步鑒輕定。血清學技勤術(shù)鑒定培紙養(yǎng)物菌種。21中華人地民共和桿國國家耀標準菊食勒品衛(wèi)生堆微生物蚊學檢驗恥沙門氏轉(zhuǎn)菌檢驗GB步478美9.4龍-20半03凍肉、蛋品、乳品及其他加工食品鮮肉、鮮蛋、鮮乳或其他未經(jīng)加工的食品前增菌法25g＋BPW225mL36℃±1℃一般4h，干蛋品18h～24h10mL＋MM（或TTB）100mL10mL＋SC100mL直接增菌法25g＋滅菌生理鹽水25mL檢樣勻液25mL＋MM（或TTB）100mL檢樣勻液25mL

＋SC100mLBSDHL（或HE、WS、SS）TSI（排除A/A敏H2S－結(jié)果涼），靛基火質(zhì)，尿細素，KCN，賴氨羞酸H2S＋靛－孫尿－KCN－賴＋（或釀一項不符文）沙門氏協(xié)菌血清庫學試驗甘露醇+山梨醇+H2S＋靛＋勺尿－KCN－賴＋H2S－靛?。蚰浚璌CN－賴＋/－非如左隸述的各厲種反應建結(jié)果沙門氏菌賠血清學試缸驗ONPG－沙門氏爭菌非沙門酷氏菌42℃18h～24h36℃±1℃18h～24h42℃18h～24h36℃±1℃18h～24h36℃±1℃40h～48h36℃±1℃18h～24h22232425謝謝觀看/歡迎下載BY亦FAI習TH豈IM向EAN深A含VIS支ION條OF游GO