體內(nèi)藥物分析實(shí)驗(yàn)

1. lnβ-βee，氮n5,,,,,μL10~D~g。原理吸進(jìn)入體后多以二相代謝物形式，故用加入水解使代謝物水解后C進(jìn)行C×4.6mm5μm4%n20μL。g置L量瓶中用甲醇溶解并定容。精密吸取適量0.3、0.63692030μg/mL取黃芩素適量精密稱定0.1mg/mL的溶1.5mL10mL置4℃冰箱存。、1%含Lβ-）LL3育n，加入內(nèi)標(biāo)溶液L然后加無水乙醚L漩渦混合n于12000r/min5min；取上清液在氮?dú)饬飨聯(lián)]干100μLnnft”照”項(xiàng)下方法標(biāo)準(zhǔn)曲線制備120μL9L0.+、0.050.10.51.53和5μg/mLft3~5份”項(xiàng)下自1%32μL”起，同法處理后進(jìn)樣分析，記錄峰面積。以ft奈酚與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值（R）對ft奈酚血漿濃度（C）進(jìn)行線性回歸（兩個(gè)空白不計(jì)入回歸ar（（）比較，計(jì)算偏差（%=

C'C100%C

）和準(zhǔn)確度（準(zhǔn)確度=×100（。6.120μL入不同濃度的ft奈酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制低、中、高（0.11、4μg/mL）ft5標(biāo)準(zhǔn)曲線制備”D至3d）重復(fù)上述測定，計(jì)算日間精密度。120μL同濃度的ft4μg/mL濃度的ft奈酚血漿5100μL甲醇復(fù)溶，12000r/min5min，取同ft120μL”2h存110，2d℃— 3結(jié)果0時(shí)結(jié)果進(jìn)行較并測溶液6246h測將1mg／kg劑量尾靜脈給予禁食hDn50535、60nL／n離心n分離處理”處理，繪制藥時(shí)曲線。1.5 注意事項(xiàng)應(yīng)注意避光操作。受是否尾靜脈注射給藥影響故這種對優(yōu)于尾靜脈注射。Q≦%r≧.ft奈酚和內(nèi)的萃取收率接近差異不超±10%。1.6參考文獻(xiàn)田楊,,楊平等.HPLC測定大鼠血漿中ft奈酚.,2008,23(3):357.2 -S測定人尿中左氧氟沙星目的要求掌握尿樣測定的前處理方LC-MS測定中基質(zhì)效和專屬的考察方LC-MS分析中質(zhì)譜條件的選擇。主要實(shí)驗(yàn)材料與儀器（g或gn）和環(huán)丙沙星（ciprofloxacin）對照品色譜純甲醇、甲酸分析純醋酸銨；液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)儀氮吹裝置恒溫水浴漩渦混合器，2000（0，)1。2.3S-(MRM)2.4C ×2.1m3.5)；lL55)n)(MRM)MS2→2→.0zS5.5k。5mg置25mL瓶解并容精密吸取適稀釋成51、500、0μL5mg25mLμL4℃冰箱保存。1mL10μL入mL(，0.45μm 10μL、添加左氧沙星和內(nèi)標(biāo))按尿處理項(xiàng)下自再加入2mL”進(jìn)作適當(dāng)mmL0.45μm得在中別加入0.5和4μg／mL每3液處理方法的積A A )1m0.050.10.250.511.52.55μg／mL點(diǎn)平行2按處理以左氧沙星與內(nèi)標(biāo)峰面積比值對左氧沙星行線回歸得回歸方程。品定健康男0.1～0.2g鹽酸。按處理”沙4℃冷藏或加防腐劑。左氧氟沙以原型自腎排泄在體謝甚少口服48h量80%~90%中隨給量變化而變化中達(dá)時(shí)間約為h可先進(jìn)行預(yù)試根據(jù)中實(shí)際調(diào)整稀釋倍數(shù)。不同型號LC-MS儀色譜柱測定條件可能有較大差異，需進(jìn)行優(yōu)化。參考文獻(xiàn)施愛明,潘杰,張全英,等LC-MS／MS法測定人血漿中左氧氟沙3法測定大鼠肝臟組織中酸克倫特羅目求掌握固相萃取法原理和方法。熟悉組織樣品前處理方法。GC-MS質(zhì)譜條件選擇。實(shí)驗(yàn)器材儀器（clenbuterolhydrochloride）雙甲基硅烷三氟乙酰胺GC-MS D~g。3.3 GC-MS3.4 C S 柱7n，以℃n至n以n至℃保持n以℃n至n度不L純nI度度V度℃；~n~n／z~0／z6，15.0min~最后，關(guān)閉燈絲。10mg100mL量瓶制0.、550和L組織樣品的處理L0L離心管中，15%2后，于高速冷凍離心機(jī)上6000r／min5min10mL乙酸乙酯15min0.2mol／L5000r／min5min，吸取下層水相，重復(fù)萃取一次，合并兩次萃取的水相，NaOHpH5.5。5mL5mL20mmol／L稀鹽酸活化，然后將處理好的稀酸5mL5mL5mL50100μLBSTFA30s80℃的烘箱中加熱1h（反應(yīng)容器加蓋蓋緊）。完畢待冷卻后轉(zhuǎn)移入GC-MS檢測。1L50500g20mLS。相應(yīng)峰面積性回歸獲得測定50μg/kg給藥劑量灌胃給予D1h1g”測定將獲得峰面積代計(jì)算3.5注意事項(xiàng)再用沖洗。對于陽離子或陰離子交換小柱還需用或堿一步活化。.6 參考文獻(xiàn)檢測動(dòng)物.中吳銀良,李曉薇,楊挺,等.-質(zhì)譜測定4.原子吸收光光測定頭發(fā)鋅含量.1 目要求4.2 計(jì)、空心陰極燈、電熱板4.3 采用-高氯對頭發(fā)進(jìn)行解使微量以金屬離狀，待元素基態(tài)來自同種元素空心陰極燈發(fā)射共振線其強(qiáng)在一定范圍內(nèi)待元素濃成正比采用標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量。4.4 參數(shù)：213.9nm；0.4~0.8nm；燈電流3~4mA5~6L/min1L/min6~12mm。g置LL~加1000mL搖勻即得濃1mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；精密移取100mL量瓶中用蒸餾水稀釋至刻搖勻即得濃度10mL100mL量瓶中用蒸餾水稀釋至刻搖勻即得濃為標(biāo)準(zhǔn)溶液。0.3g1~2cmL5pH~5n3~44~565℃烘箱4。g100mL加入5mL濃硝酸蓋上表面皿在電熱板上冒白煙至溶液剩余1~2mL時(shí)切不可蒸干下冷卻后加入適量蒸餾定量轉(zhuǎn)移至100mL量瓶并稀釋至刻度1份空白溶液。L0，2468L6個(gè)L液稀釋至刻度光度值做線性回歸獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線。3按”，。4.5注意事項(xiàng)本實(shí)驗(yàn)采-高氯酸消解法對進(jìn)行這是濕法有一需要.6參考文獻(xiàn)黃明孫林超.人體頭發(fā)中含分析研究.農(nóng)產(chǎn)品加工學(xué)刊馬威袁英賢.原吸收法頭發(fā)中含的方法探討.河南科學(xué)張桂文.原吸收法兒童頭發(fā)中含.遼寧工，2009,38(10):770.5 雙芬鈉的生物利用度.1 目的要求掌握藥物生物利用度的設(shè)計(jì)數(shù)據(jù)處理方法。掌握鼠眼眶采血技術(shù)常用給藥技術(shù)。5.2 主要材料與儀器c色分析純KH2PO4；13000r／minDg。5.3 C。根據(jù)靜脈注射給藥和灌胃給藥的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（AUC）和給藥劑量(D)計(jì)算的生物利。5.4 方法C ×4.6m5μ182 l／LHO（H3002 適量配制出L002和／mL的溶液作準(zhǔn)溶液。取適量溶解并稀釋制成L準(zhǔn)溶液0μL和溶液L混勻再加入250μL溶液混勻在nnL獲得準(zhǔn)曲線。122gggg51050450，000nLnL。LLrnnL進(jìn)濃度。12DAS2.0計(jì)算物動(dòng)力學(xué)參數(shù)并以下公式計(jì)算生物利用度：5.5

AUCpoAUCiv

DivDpo

×100%如70可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室已有軟件進(jìn)行計(jì)算開始計(jì)算需保證時(shí)間濃度的。開始幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)樣品濃度有可能超出標(biāo)準(zhǔn)范圍上限出現(xiàn)這種情況時(shí)應(yīng)將樣品用空白大鼠稀釋測定。1 不同時(shí)間點(diǎn)的血濃度（μg/mL）時(shí)間號（min）1234565101530……2 時(shí)間 號（min） 1 2 3 4 5 65101530…….6 參考文獻(xiàn)León-ReyesMR,Castaneda-HernándezOrtizePharmacokineticofdeclofenacinthepresenceandabsenceglibenclamideintherat.JPharmPharmaceutSci2009,12(3):280.MusmadeP,SubramanianSrinivasanKK,High-performanceud y and s of c in AnalyticalChmicaActa.2007,585:103.6.1 。熟悉實(shí)驗(yàn)條件考察與選擇。6.2 主實(shí)驗(yàn)材料與儀器龍膽苦苷（e，S，正常人，色譜純甲醇，（）離心管，高效液相色譜儀；昆明種小鼠。6.3 實(shí)驗(yàn)原理管，分別中龍膽苦苷總濃度和管中龍膽苦苷游離濃度，計(jì)算。6.4實(shí)驗(yàn)C2n；檢274nm。標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：取干燥至恒重GPS25mg，精密稱，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，即得濃度為1mg/mL1mL10mLLL40.824LS45LLnn3℃L入L旋snnHPLC析計(jì)算如果藥物多應(yīng)飽處理法如上述項(xiàng)低、、高3種各，然后再血漿蛋白結(jié)合率精密1mg/mLGPS照品52.LL420LS吸3SLP4n3℃100μL照法操作將代入求GPS同100μL300μLsnn20μL12SρSρ121 2 ρ-ρ ρ1 2 6.5 注意事項(xiàng)法是利用半透原理對游藥物藥物行設(shè)僅十幾鐘至數(shù)十鐘即可收集到足夠供的但此法藥物的游難以準(zhǔn)檢；③藥物在透會(huì)出現(xiàn)泄的附性必要對反應(yīng)的溫、pH值等因素行考察?！嫜猄3、于01、34h考察不同溫GPS穩(wěn)性選擇試驗(yàn)的適溫pH7.4緩沖溶的穩(wěn)性考察標(biāo)準(zhǔn)pH7.42~5μg/mL24分別取L與0比較考察龍膽苦苷pH7.4中穩(wěn)定性。.6參考文獻(xiàn)王長虹,王崢濤.超濾法測定龍膽苦苷血漿蛋白結(jié)合率.中國王立,任君剛.超濾法測定表沒食子兒茶素沒食子酯人血漿趙淑紅,蔣袁絮,高亦瓏,等.家兔血漿中龍膽苦苷高效7 木犀草素離體腸吸收實(shí)驗(yàn).1 目要求掌握離體腸吸收實(shí)驗(yàn)原理與計(jì)算方法。熟悉離體外翻腸囊法實(shí)驗(yàn)操作。7.2 主要實(shí)驗(yàn)器材與儀器Krebs-Ringer木犀草素（luteolion）,色譜純甲醇分析D~g。7.3 ~m。通過往充盈K氏液并浸在定積K漿側(cè)溶液進(jìn)行測定分析藥物透過道情況。7.4 方法色譜條件分析住為C18柱；流動(dòng)相為甲醇-0.2磷酸溶液0n。2r K l 和22lgl22lg2

PO

g

1.4g4233 lLHO H4233 LK含0.20.0.01.0μLμL樣測得峰面積以草濃度對相應(yīng)峰面積進(jìn)行線性回歸得腸段選外翻腸囊選健康SD大鼠頸動(dòng)脈放處空腸段去除腸系℃K玻璃棒小心將腸段翻轉(zhuǎn)腸粘膜層在外漿膜層在內(nèi)放K扎緊通過樣細(xì)軟管刻度注射器往腸囊內(nèi)充盈K2般）有K含μgL含O 于0，250.52L腸囊內(nèi)體，并同時(shí)快速補(bǔ)充等K樣完畢確測腸囊表面aanc2，并以累積吸收量t時(shí)間點(diǎn)濃度的對數(shù)與時(shí)間進(jìn)Kt（K（apparentpermeabilitycoefficients,aaP。PP=appP=.5

app

0A(C0

VCend

)

Ct腸的性。離體腸吸收法作一種離體物吸收的，在有，K中，能腸在60min內(nèi)的活性，2h離體腸段活2h內(nèi)成。一物在K中度，因此可以用DMSO，量必須于3.0‰ ，腸速活。2的K中入5%CO 的時(shí)，必須過，大以，容成體外。2采樣品腸囊內(nèi)的量的K 的度必須是。8.地西泮的體外代謝試驗(yàn).1 目的要求掌握藥物體外代謝實(shí)驗(yàn)原理和酶動(dòng)力學(xué)參數(shù)的計(jì)算方法。熟悉體外代謝反應(yīng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇。8.2 主要實(shí)驗(yàn)材料與儀器地西泮（diazepam,M=284.74）,N去甲地西泮（nordiazepam,4）,氯硝西泮（clonazepa2鼠肝微粒體還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（H5緩沖液色譜純乙腈；高效液相色譜儀。83 N-HPLC84 C×5L0n。3HHgOLH。322MgCllpH至l0.1L備22樣品N-適精密稱別DMSO解并濃度10,20,50,100,200300,L-,,,,,0另適精密稱DMSO 至濃度為1mmol/L上均于4℃放置備樣品處LnnnpLnnLL-1μ-1000L1050，L”1000μL1μL10，33育nH溶L啟反反30min后30s止反”計(jì)算剩余以及N-去生成利非程（Lineweaver Burk 或e-生K 成速率圖計(jì)算米氏常最大反K m max8.5 注意事項(xiàng)親藥常劑做劑往孵育底物時(shí)保證劑超過孵育反總0.5%NADPH各種試劑均應(yīng)置冰浴中保存。所用酶濃度和孵育時(shí)間需要優(yōu)化，酶濃度和孵育時(shí)間在線性20%度應(yīng)取倍K 值范圍，并至少取6m行做3份，取平均值計(jì)算。采用底物地西泮的消除量計(jì)算獲得的K 值與采用產(chǎn)物N-地m西泮的生成量計(jì)算獲得的K m的K m活性而以去甲地西泮的生成量計(jì)算獲得的K m代謝地西泮生成N-去甲基代謝物的酶的活性。參考文獻(xiàn)匡唐永,樓雅卿.應(yīng)用中國成人肝微粒體研究地西泮代謝.中國藥理與毒理學(xué)雜志，1995,9(2):81.劉菊芳,張遠(yuǎn).血漿中去甲地西泮及代謝物奧沙西泮的HPLC09：9 鑒定目的要求LC-MS／MS法鑒定代謝產(chǎn)物的方法。熟悉大鼠血管膽管插管的操作方法。主要實(shí)驗(yàn)材料與儀器la、酸、酸銨；LC-MS聯(lián)用儀大鼠代謝籠、手術(shù)臺(tái)。9.3實(shí)驗(yàn)原理收集服藥大鼠的尿液和膽汁LC-MS／MS9.4實(shí)驗(yàn)方法18C柱×4.6m5；0.1%l／L)采n18nSV。灌胃給藥溶液的配制取對乙酰氨基酚適量1%gL。3.樣品采集與處理按gg并將大鼠放在代謝籠中自由飲水6h內(nèi)分別收集尿樣4℃保存?zhèn)溆?。，打開腹腔進(jìn)行膽插收集0.5mL左右空白膽汁然后按kg。樣品處理取適量尿液和膽汁1:1稀釋并加2倍體積的甲醇渦旋偏氟膜過濾收集濾液備用。4.樣品分析1全掃描分析對上述樣品進(jìn)行分析獲得全掃描總流圖~z456.231.33羥基對乙酰氨基酚232。.5注意事項(xiàng)的濃過高可能導(dǎo)致嚴(yán)重的基質(zhì)抑制效應(yīng)因此需要稀釋后進(jìn)樣另等有機(jī)溶劑。要注意剪成斜面，這樣便于插管。的LC-MS，的最分條，，在