血清堿性磷酸酶活性測定演示文稿

血清堿性磷酸酶活性測定演示文稿目前一頁\總數(shù)十四頁\編于五點(diǎn)優(yōu)選血清堿性磷酸酶活性測定目前二頁\總數(shù)十四頁\編于五點(diǎn)主要內(nèi)容：⑴實(shí)驗(yàn)?zāi)康蘑茖?shí)驗(yàn)原理⑶實(shí)驗(yàn)器材與試劑⑷實(shí)驗(yàn)操作⑸計(jì)算⑹臨床意義⑺注意事項(xiàng)目前三頁\總數(shù)十四頁\編于五點(diǎn)

酶活力：也稱酶活性，是表示催化某一特定反應(yīng)的能力?？梢杂迷谝欢l件下所催化的某一特定化學(xué)速度表示。

酶催化反應(yīng)速度越快，酶活力升高，反之活力愈低。

底物減少量或生成物增加量酶促反應(yīng)速度=

單位時(shí)間基本概念目前四頁\總數(shù)十四頁\編于五點(diǎn)實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆彰富盍y定的一般方法掌握血清中ALP活力測定方法與臨床意義目前五頁\總數(shù)十四頁\編于五點(diǎn)思考

如何測定酶活力的大??？

酶活力：酶催化某一化學(xué)反應(yīng)的能力，其衡量的標(biāo)準(zhǔn)是酶促反應(yīng)速度的大小。

酶促反應(yīng)的速度：常用單位時(shí)間內(nèi)底物的減少量或產(chǎn)物的生成量來表示。

目前六頁\總數(shù)十四頁\編于五點(diǎn)酶活力測定方法終止測定法（或定時(shí)法）：

*本次實(shí)驗(yàn)的方法

通常是酶作用一段時(shí)間后，加入強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、蛋白沉淀劑等終止酶促反應(yīng)，測定這段時(shí)間內(nèi)底物的減少量或產(chǎn)物的生成量，計(jì)算酶促反應(yīng)的平均速度。

連續(xù)監(jiān)測法：

連續(xù)監(jiān)測法是指每隔一定時(shí)間（2～60s），連續(xù)多次測定酶反應(yīng)過程中某一反應(yīng)產(chǎn)物或底物量隨時(shí)間變化的數(shù)據(jù)，求出酶反應(yīng)初速度，間接計(jì)算酶活性濃度的方法。

適用于自動生化分析儀

目前已取代固定時(shí)間法而成為臨床實(shí)驗(yàn)室測目前七頁\總數(shù)十四頁\編于五點(diǎn)堿性磷酸酶（ALP）是一組在堿性環(huán)境中水解磷酸酯的酶類。來源：廣泛分布于人體的骨、腎、肝、腸、血清、膽汁等部位，但骨骼、牙齒、腎和肝臟中含量較多。正常人血清中ALP主要來源于肝臟。是一種能夠?qū)?yīng)底物去磷酸化的酶，即通過水解磷酸單酯將底物分子上的磷酸基團(tuán)除去，并生成磷酸根離子和自由的羥基，這類底物包括核酸、蛋白、生物堿等。而該脫去磷酸基團(tuán)的過程稱為去磷酸化或脫磷酸化。堿性磷酸酶在堿性環(huán)境中有最大活力。什么是ALP？目前八頁\總數(shù)十四頁\編于五點(diǎn)實(shí)驗(yàn)原理堿性磷酸酶在堿性環(huán)境中作用于磷酸苯二鈉，使之水解生成酚和磷酸。酚在堿性溶液中與4-氨基安替比林作用，經(jīng)鐵氰化鉀氧化形成紅色醌類化合物，其顏色深淺與ALP活性成正比。磷酸苯二鈉+H2O

苯酚+磷酸氫二鈉苯酚+4-氨基安替比林

紅色醌亞胺衍生物ALPpH=10鐵氰化鉀目前九頁\總數(shù)十四頁\編于五點(diǎn)試劑與儀器器材：

5ml移液管，1ml移液管，100或200ul微量可調(diào)式移液器，721E分光光度計(jì)，1cm比色皿，37℃恒溫水浴試劑：

1．0.1mol/L碳酸鹽緩沖液(pH10.0)無水碳酸鈉6.36g，碳酸氫鈉3.36g，4-氨基安替比林1.5g，溶于800mL蒸餾水中，定容至1L。置棕色瓶中保存。

2．20mmol/L磷酸苯二鈉溶液先將500ml蒸餾水煮沸，迅速加入磷酸苯二鈉2.18g(磷酸苯二鈉如含2分子結(jié)晶水，則應(yīng)稱取2.54g)，冷卻后加氯仿2ml防腐，在4℃冰箱保存。（用剩的溶液不應(yīng)再倒回瓶中）

3．顯色液（鐵氰化鉀的硼酸溶液）稱取鐵氰化鉀2.5g，硼酸17g，各自溶于蒸餾水400ml中，兩液混合后，加蒸餾水至1L，置棕色瓶中避光保存(如出現(xiàn)藍(lán)綠色即棄去)。

4．酚標(biāo)準(zhǔn)工作液（0.05mg/ml）購買合格的二級標(biāo)準(zhǔn)品。目前十頁\總數(shù)十四頁\編于五點(diǎn)實(shí)驗(yàn)操作取4支試管，如下操作：立即混勻。用510nm波長（紅色醌物質(zhì)的最大吸收波長）比色，以蒸餾水調(diào)零點(diǎn)，讀取各管吸光度。*保持反應(yīng)時(shí)溫度是均衡的，37°C測定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管對照管血清（ml）0.100——————酚標(biāo)準(zhǔn)液——0.100————蒸餾水————0.100——pH10碳酸鹽緩沖液1.001.001.001.00混勻，37℃水浴保溫5min，同時(shí)將底物預(yù)熱底物液1.001.001.001.00混勻，37℃水浴保護(hù)15min鐵氰化鉀溶液3.003.003.003.00血清———————0.100目前十一頁\總數(shù)十四頁\編于五點(diǎn)計(jì)算公式:參考值:成人：3~13

Kings單位，兒童：5~28Kings單位。ALP活力=（A測定—A對照）（A標(biāo)準(zhǔn)—A空白）X0.05X100（kings單位）目前十二頁\總數(shù)十四頁\編于五點(diǎn)臨床意義在臨床上，血清ALP測定常作為肝膽疾病和骨骼疾病的臨床輔助診斷指標(biāo)。1.血清ALP活性升高

肝膽疾?。?/p>

阻塞性黃疸、急性或慢性黃疸性肝炎、肝癌等；骨骼疾?。河捎诠堑膿p傷或疾病使成骨細(xì)胞內(nèi)所含高濃度的ALP釋放進(jìn)入血液中，引起血清ALP活性增高，如纖維性骨炎、成骨不全癥、佝僂病、骨軟化病、骨轉(zhuǎn)移癌和骨折修復(fù)愈合期等。2.血清ALP活性降低:

比較少見，主要見于呆小癥，重癥慢性腎炎、乳糜瀉、貧血、惡病質(zhì)等。目前十三頁\總數(shù)十四頁\編于五點(diǎn)注意事項(xiàng)酚標(biāo)準(zhǔn)液開后不能久置。底物液不能含有酚，若含酚則