第二章液相色譜

第二章液相色譜第1頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3色譜法的用途用途：色譜法已廣泛用于各個(gè)領(lǐng)域，是多組分混合物首選的分離分析方法。以《中國(guó)藥典》2005版為例，一部收載中藥1146個(gè)品種，用薄層色譜進(jìn)行鑒別或含量測(cè)定的有1523項(xiàng)，用高效液相色譜進(jìn)行定量分析的有479種518項(xiàng)，用氣相色譜進(jìn)行檢測(cè)的有47種。二部收載的有1967個(gè)品種，采用高效液相色譜法的品種有848種。現(xiàn)在色譜法已形成一門(mén)專(zhuān)門(mén)的科學(xué)。

第2頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3第3頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3色譜柱

第4頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3RichardLaurenceMillingtonSynge

ArcherJohnPorterMartin

"fortheirinventionofpartitionchromatography".

1952年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)得主

第5頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3一、高效液相色譜法的特點(diǎn)

featureofHPLC

特點(diǎn)：高壓、高效、高速、高靈敏度高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定有機(jī)及生化試樣的高效分離分析方法。第6頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3三、流程及主要部件

processandmainassemblyofHPLC1.流程第7頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3二、液相色譜儀器

highperformanceliquidchromatograph第8頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3液相色譜儀（2）第9頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3液相色譜儀（3）安捷侖公司1100

agilent1100Hplc

瓦里安Varian----Prostar230/325/363

第10頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3液相色譜儀（4）第11頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/32.主要部件(1)高壓輸液泵主要部件之一，壓力：150～350×105

Pa。為了獲得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10μm），液體的流動(dòng)相高速通過(guò)時(shí)，將產(chǎn)生很高的壓力，因此高壓、高速是高效液相色譜的特點(diǎn)之一。應(yīng)具有壓力平穩(wěn)、脈沖小、流量穩(wěn)定可調(diào)、耐腐蝕等特性第12頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3單向閥第13頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3(2)梯度淋洗裝置外梯度:利用兩臺(tái)高壓輸液泵，將兩種不同極性的溶劑按一定的比例送入梯度混合室，混合后進(jìn)入色譜柱。內(nèi)梯度:一臺(tái)高壓泵,通過(guò)比例調(diào)節(jié)閥,將兩種或多種不同極性的溶劑按一定的比例抽入高壓泵中混合。第14頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3(3)進(jìn)樣裝置

流路中為高壓力工作狀態(tài)，通常使用耐高壓的六通閥進(jìn)樣裝置，其結(jié)構(gòu)如圖所示：第15頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3(4)高效分離柱

柱體為直型不銹鋼管，內(nèi)徑1～6mm，柱長(zhǎng)5～40cm。發(fā)展趨勢(shì)是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。第16頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3(5)液相色譜檢測(cè)器

a.紫外檢測(cè)器應(yīng)用最廣，對(duì)大部分有機(jī)化合物有響應(yīng)。特點(diǎn)：靈敏度高；線形范圍高；流通池可做的很?。?mm×10mm，容積8μL）；

對(duì)流動(dòng)相的流速和溫度變化不敏感；波長(zhǎng)可選，易于操作；可用于梯度洗脫。

第17頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3b.光電二極管陣列檢測(cè)器

紫外檢測(cè)器的重要進(jìn)展；光電二極管陣列檢測(cè)器：1024個(gè)二極管陣列，各檢測(cè)特定波長(zhǎng)，計(jì)算機(jī)快速處理，三維立體譜圖，如圖所示。第18頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3第19頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3光電二極管陣列檢測(cè)器第20頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3c.示差折光檢測(cè)器

（differentialrefractiveindexdetector）

除紫外檢測(cè)器之外應(yīng)用最多的檢測(cè)器；可連續(xù)檢測(cè)參比池和樣品池中流動(dòng)相之間的折光指數(shù)差值。差值與濃度呈正比；

通用型檢測(cè)器（每種物質(zhì)具有不同的折光指數(shù)）；靈敏度低、對(duì)溫度敏感、不能用于梯度洗脫；偏轉(zhuǎn)式、反射式和干涉型三種；第21頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3d.熒光檢測(cè)器

（fluorescencedetector）

高靈敏度、高選擇性；對(duì)多環(huán)芳烴，維生素B、黃曲霉素、卟啉類(lèi)化合物、農(nóng)藥、藥物、氨基酸、甾類(lèi)化合物等有響應(yīng)；第22頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3e.電導(dǎo)檢測(cè)器屬電化學(xué)檢測(cè)器,廣泛應(yīng)用于離子色譜.一對(duì)鍍鉑黑的鉑電極,構(gòu)成電橋的測(cè)量臂第23頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3f.發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)

ELSD適用揮發(fā)性低于流動(dòng)相的待測(cè)物分離。事實(shí)上，新一代ELSD檢測(cè)器在操作上提供更低的溫度，允許半揮發(fā)性被分析物的定量，即使檢測(cè)器的靈敏度可能較低。不揮發(fā)溶質(zhì)，在分析柱的檢測(cè)極限可以達(dá)到毫微克(ng)水平。澳大利亞的UnionCarbide研究實(shí)驗(yàn)室

ELSD最大的優(yōu)越性在于能檢測(cè)不含發(fā)色團(tuán)的化合物，如：碳水化合物、脂類(lèi)、聚合物、未衍生脂肪酸和氨基酸、表面活性劑、藥物，并在沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)品和化合物結(jié)構(gòu)參數(shù)未知的情況下檢測(cè)未知化合物。

ELSD檢測(cè)只要分為三個(gè)步驟：（1）用惰性氣體霧化脫洗液（2）流動(dòng)相在加熱管（漂移管）中蒸發(fā)（3）樣品顆粒散射光后得到檢測(cè)。

ELSD檢測(cè)DAD不能檢測(cè)到的氨基酸分析。

EvaporativeLight-scatteringDetector

第24頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3第二章

高效液相色譜分析法一、液-液分配色譜liquid-solidadsorptionchromatograph二、液-固吸附色譜liquid-liquidpartitionchromatograph三、離子交換色譜ion-exchange

chromatograph四、離子對(duì)色譜ionchromatograph五、離子色譜ion-pairchromatograph六、排阻色譜size-exclusionchromatograph七、親和色譜(AC)Affinity

chromatograph第二節(jié)

主要分離類(lèi)型與原理highperformanceliquidchromatographbasicprincipleandmainseparatingtypes第25頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3一、液-液分配色譜

liquid-liquidpartitionchromatography

固定相與流動(dòng)相均為液體（互不相溶）；

基本原理：組分在固定相和流動(dòng)相上的分配；

流動(dòng)相：對(duì)于親水性固定液，采用疏水性流動(dòng)相，即流動(dòng)相的極性小于固定液的極性（正相

normalphase），反之，流動(dòng)相的極性大于固定液的極性（反相

reversephase）。正相與反相的出峰順序相反；

固定相：早期涂漬固定液，固定液流失，較少采用；

化學(xué)鍵合固定相：（將各種不同基團(tuán)通過(guò)化學(xué)反應(yīng)鍵合到硅膠（擔(dān)體）表面的游離羥基上。C-18柱（反相柱）。第26頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3二、液-固吸附色譜

liquid-solidadsorptionchromatography

固定相：固體吸附劑為，如硅膠、氧化鋁等，較常使用的是5～10μm的硅膠吸附劑；

流動(dòng)相：各種不同極性的一元或多元溶劑。

基本原理：組分在固定相吸附劑上的吸附與解吸；

第27頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3Xm+nSaXa+nSm適用于分離相對(duì)分子質(zhì)量中等的油溶性試樣，對(duì)具有官能團(tuán)的化合物和異構(gòu)體有較高選擇性；

缺點(diǎn)：非線形等溫吸附常引起峰的拖尾；第28頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3三、離子交換色譜

ion-exchangechromatography

固定相：陰離子離子交換樹(shù)脂或陽(yáng)離子離子交換樹(shù)脂；

流動(dòng)相：陰離子離子交換樹(shù)脂作固定相，采用酸性水溶液；陽(yáng)離子離子交換樹(shù)脂作固定相，采用堿性水溶液；

基本原理：組分在固定相上發(fā)生的反復(fù)離子交換反應(yīng)；組分與離子交換劑之間親和力的大小與離子半徑、電荷、存在形式等有關(guān)。親和力大，保留時(shí)間長(zhǎng)；陽(yáng)離子交換：R—SO3Na+M+=R—SO3M+Na+陰離子交換：R—NR4Cl+X-=R—NR4X+Cl-

第29頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3陰離子交換：R—NR4Cl+X-=R—NR4X+Cl-應(yīng)用：離子及可離解的化合物，氨基酸、核酸等。第30頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3四、離子對(duì)色譜

ionpairchromatography

原理：將一種（或多種）與溶質(zhì)離子電荷相反的離子（對(duì)離子或反離子）加到流動(dòng)相中使其與溶質(zhì)離子結(jié)合形成疏水性離子對(duì)化合物，使其能夠在兩相之間進(jìn)行分配；

Aw++Bw-(A+·B-)o

第31頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3陰離子分離：常采用烷基銨類(lèi)，如氫氧化四丁基銨或氫氧化十六烷基三甲銨作為對(duì)離子；

陽(yáng)離子分離：常采用烷基磺酸類(lèi)，如己烷磺酸鈉作為對(duì)離子；反相離子對(duì)色譜：非極性的疏水固定相(C-18柱)，含有對(duì)離子Y+的甲醇-水或乙腈-水作為流動(dòng)相，試樣離子X(jué)-進(jìn)入流動(dòng)相后，生成疏水性離子對(duì)Y+X-后；在兩相間分配。第32頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3五、離子色譜

ionchromatography

離子色譜是在20世紀(jì)70年代中期發(fā)展起來(lái)的一中技術(shù)，其與離子交換色譜的區(qū)別是其采用了特制的、具有極低交換容量的離子交換樹(shù)脂作為柱填料，并采用淋洗液抑制技術(shù)和電導(dǎo)檢測(cè)器，是測(cè)定混合陰離子的有效方法。

第33頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3離子色譜儀第34頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3一、離子色譜法原理

principleofIC(IonChromatography,簡(jiǎn)稱(chēng)IC)

以無(wú)機(jī)、特別是無(wú)機(jī)陰離子混合物為主要分析對(duì)象,在七十年代出現(xiàn)、八十年代迅速發(fā)展。

傳統(tǒng)離子交換色譜存在著兩個(gè)難于解決的問(wèn)題：(1)需要高濃度淋洗液洗脫且洗脫時(shí)間很長(zhǎng)；(2)洗脫后的組分缺乏靈敏、快速的在線檢測(cè)方法。第35頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/31.離子色譜法原理

離子交換原理，與傳統(tǒng)離子交換的不同點(diǎn)：采用交換容量非常低的特制離子交換樹(shù)脂為固定相；細(xì)顆粒柱填料，高柱效；采用高壓輸液泵；低濃度淋洗液或本底電導(dǎo)抑制（在分離柱后，采用抑制柱來(lái)消除淋洗液的高本底電導(dǎo)）；可采用電導(dǎo)檢測(cè)器，快速分離分析微量無(wú)機(jī)離子混合物；各種抑制裝置及無(wú)抑制方法的出現(xiàn)，發(fā)展迅速。第36頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/32.離子色譜具有以下優(yōu)點(diǎn)（1）分析速度快可在數(shù)分鐘內(nèi)完成一個(gè)試樣的分析；（2）分離能力高在適宜的條件下，可使常見(jiàn)的各種陰離子混合物分離；例：使用雙柱法，在十幾分鐘內(nèi)，可使七種陰離子完全分離。（3）分離混合陰離子的最有效方法（4）耐腐蝕，儀器流路采用全塑件，玻璃柱第37頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3Br-為例(電導(dǎo)型檢測(cè)器)R-OH+NaBrR-Br+NaOH通常再用NaOH洗脫,Br-進(jìn)入NaOH洗脫液后,電導(dǎo)變化很小,檢測(cè)不靈敏.抑制柱(含高容量的H+陽(yáng)離子交換樹(shù)脂)R-H+NaOHR-Na+H2O(電導(dǎo)小)R-H+NaBrR-Na+HBr(H+淌度大)M+為例(電導(dǎo)型檢測(cè)器)R-H+M+ClR-M+HCl抑制柱(含高容量的OH-陰離子交換樹(shù)脂)R-OH+HClR-Cl+H2O(電導(dǎo)小)R-OH+M+Cl-R-Cl+M+OH-第38頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3二、離子色譜裝置類(lèi)型

suppressedapparatusofIC抑制型：抑制柱型、連續(xù)抑制型分離柱中離子交換樹(shù)脂的交換容量通常在0.01～0.05毫摩爾/克干樹(shù)脂。非抑制型:當(dāng)進(jìn)一步降低分離柱中樹(shù)脂的交換容量(0.007～0.07毫摩爾/克干樹(shù)脂),使用低濃度、低電離度的有機(jī)弱酸及弱酸鹽作淋洗液，如苯甲酸、苯甲酸鹽等。檢測(cè)器可直接與分離柱相連，不需抑制柱。第39頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3離子色譜連續(xù)抑制裝置圖第40頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3離子色譜連續(xù)抑制原理圖第41頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3三、離子色譜的應(yīng)用

applicationofIC

陰離子分析:雙柱；薄殼型陰離子交換樹(shù)脂分離柱(3×250mm),流動(dòng)相：0.003mol·L-1NaHCO3/0.0024mol·L-1Na2CO3，流量138mL/hr。七種陰離子在20分鐘內(nèi)基本上得到完全分離，各組分含量在3～50ppm。第42頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3六、排阻色譜色譜

size-exclusionchromatography

固定相：凝膠(具有一定大小孔隙分布)；

原理：按分子大小分離。小分子可以擴(kuò)散到凝膠空隙，由其中通過(guò)，出峰最慢；中等分子只能通過(guò)部分凝膠空隙，中速通過(guò)；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶劑分子小，故在最后出峰。全部在死體積前出峰；可對(duì)相對(duì)分子質(zhì)量在100-10^5范圍內(nèi)的化合物按質(zhì)量分離第43頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3七、親和色譜(AC)

Affinitychromatograph

原理：利用生物大分子和固定相表面存在的某種特異性親和力，進(jìn)行選擇性分離。

先在載體表面鍵合上一種具有一般反應(yīng)性能的所謂間隔臂(環(huán)氧、聯(lián)胺等)，再連接上配基(酶、抗原等)，這種固載化的配基將只能和具有親和力特性吸附的生物大分子作用而被保留。改變淋洗液后洗脫。第44頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3第二章

液相色譜分析法一、液相色譜固定相stationaryphaseofHPLC二、液相色譜流動(dòng)相mobilephaseofHPLC第三節(jié)

液相色譜的固定相與流動(dòng)相highperformanceliquidchromatographstationaryphaseandmobilephaseofHPLC第45頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3一、液相色譜固定相

stationaryphasesofLC

1.液-液分配及離子對(duì)分離固定相（1）全多孔型擔(dān)體

由氧化硅、氧化鋁、硅藻土等制成的多孔球體；早期采用100μm的大顆粒，表面涂漬固定液，性能不佳已不多見(jiàn)；現(xiàn)采用10μm以下的小顆粒，化學(xué)鍵合制備柱填料；（2）表面多孔型擔(dān)體（薄殼型微珠擔(dān)體）30～40μm的玻璃微球，表面附著一層厚度為1～2μm的多孔硅膠。表面積小，柱容量底；第46頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3（3）化學(xué)鍵合固定相

化學(xué)鍵合固定相:目前應(yīng)用最廣、性能最佳的固定相；

a.硅氧碳鍵型：≡Si—O—C

b.硅氧硅碳鍵型：≡Si—O—Si—C

穩(wěn)定，耐水、耐光、耐有機(jī)溶劑，應(yīng)用最廣；

c.硅碳鍵型：≡Si—C

d.硅氮鍵型：≡Si—N第47頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3化學(xué)鍵合固定相的特點(diǎn)（1）傳質(zhì)快，表面無(wú)深凹陷(無(wú)液坑)，比一般液體固定相傳質(zhì)快；（2）壽命長(zhǎng)，化學(xué)鍵合，無(wú)固定液流失，耐流動(dòng)相沖擊；

耐水、耐光、耐有機(jī)溶劑，穩(wěn)定；

（4）選擇性好，可鍵合不同官能團(tuán)，提高選擇性；（5）有利于梯度洗脫；

存在著雙重分離機(jī)制：(鍵合基團(tuán)的覆蓋率決定分離機(jī)理)高覆蓋率：分配為主；低覆蓋率：吸附為主；

第48頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3

2.液-固吸附分離固定相

種類(lèi)：硅膠、氧化鋁、分子篩、聚酰胺等；結(jié)構(gòu)類(lèi)型：全多孔型和薄殼型；粒度：5～10μm；

第49頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/33.離子交換色譜分離固定相結(jié)構(gòu)類(lèi)別：（1）薄殼型離子交換樹(shù)脂薄殼玻璃珠為擔(dān)體，表面涂約1%的離子交換樹(shù)脂；（2）離子交換鍵合固定相薄殼鍵合型；微粒硅膠鍵合型（鍵合離子交換基團(tuán)）

樹(shù)脂類(lèi)別：（1）陽(yáng)離子交換樹(shù)脂（強(qiáng)酸性、弱酸性）（2）陰離子交換樹(shù)脂（強(qiáng)堿性、弱堿性）第50頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3

4.空間排阻分離固定相（1）軟質(zhì)凝膠葡聚糖凝膠、瓊脂凝膠等。多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)；水為流動(dòng)相。適用于常壓排阻分離。（2）半硬質(zhì)凝膠苯乙烯-二乙烯基苯交聯(lián)共聚物，有機(jī)凝膠；非極性有機(jī)溶劑為流動(dòng)相，不能用丙酮、乙醇等極性溶劑（3）硬質(zhì)凝膠多孔硅膠、多孔玻珠等；化學(xué)穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性好、機(jī)械強(qiáng)度大，流動(dòng)相性質(zhì)影響小，可在較高流速下使用?？煽乜讖讲Ａ⑶颍哂泻愣讖胶驼６确植?。第51頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3二、液相色譜的流動(dòng)相

mobilephasesofLC

1.流動(dòng)相特性

（1）液相色譜的流動(dòng)相又稱(chēng)為：淋洗液，洗脫劑。流動(dòng)相組成改變，極性改變，可顯著改變組分分離狀況；（2）親水性固定液常采用疏水性流動(dòng)相，即流動(dòng)相的極性小于固定相的極性，稱(chēng)為正相液液色譜法，極性柱也稱(chēng)正相柱。（3）若流動(dòng)相的極性大于固定液的極性，則稱(chēng)為反相液液色譜，非極性柱也稱(chēng)為反相柱。組分在兩種類(lèi)型分離柱上的出峰順序相反。第52頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/32.流動(dòng)相類(lèi)別

按流動(dòng)相組成分：?jiǎn)谓M分和多組分；按極性分：極性、弱極性、非極性；按使用方式分：固定組成淋洗和梯度淋洗。常用溶劑：己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、甲醇、水。采用二元或多元組合溶劑作為流動(dòng)相可以靈活調(diào)節(jié)流動(dòng)相的極性或增加選擇性，以改進(jìn)分離或調(diào)整出峰時(shí)間。第53頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/33.流動(dòng)相選擇

在選擇溶劑時(shí)，溶劑的極性是選擇的重要依據(jù)。采用正相液-液分配分離時(shí)：首先選擇中等極性溶劑，若組分的保留時(shí)間太短，降低溶劑極性，反之增加。也可在低極性溶劑中，逐漸增加其中的極性溶劑，使保留時(shí)間縮短。常用溶劑的極性順序：水(最大)>甲酰胺>乙腈>甲醇>乙醇>丙醇>丙酮>二氧六環(huán)>四氫呋喃>甲乙酮>正丁醇>乙酸乙酯>乙醚>異丙醚>二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>環(huán)己烷>己烷>煤油(最小)第54頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/34.選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題（1）盡量使用高純度試劑作流動(dòng)相，防止微量雜質(zhì)長(zhǎng)期累積損壞色譜柱和使檢測(cè)器噪聲增加。（2）避免流動(dòng)相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降或損壞柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶劑破壞氧化鋁固定相等。（3）試樣在流動(dòng)相中應(yīng)有適宜的溶解度，防止產(chǎn)生沉淀并在柱中沉積。（4）流動(dòng)相同時(shí)還應(yīng)滿(mǎn)足檢測(cè)器的要求。當(dāng)使用紫外檢測(cè)器時(shí)，流動(dòng)相不應(yīng)有紫外吸收。第55頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3第二章

液相色譜分析法一、影響分離的因素factorsinfluencedseparation二、分離類(lèi)型的選擇choiceofseparationtypes三、液相色譜的應(yīng)用applicationofHPLC四、液相制備色譜preparativeliquidchromatography第四節(jié)

影響分離的因素與操作條件的選擇highperformanceliquidchromatograph

factorsinfluencedseparationandchoiceofoperationcondition第56頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3一、影響分離的因素

factorsinfluencedseparation1.影響分離的因素與提高柱效的途徑

在高效液相色譜中,液體的擴(kuò)散系數(shù)僅為氣體的萬(wàn)分之一，則速率方程中的分子擴(kuò)散項(xiàng)B/U較小，可以忽略不計(jì)，即：

H=A+Cu

故液相色譜H-u曲線與氣相色譜的形狀不同，如圖所示。第57頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3

液體的黏度比氣體大一百倍，密度為氣體的一千倍，故降低傳質(zhì)阻力是提高柱效主要途徑。由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。

液相色譜中，不可能通過(guò)增加柱溫來(lái)改善傳質(zhì)。恒溫改變淋洗液組成、極性是改善分離的最直接的因素。第58頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3圖示第59頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2023/5/3

2.流速

流速大于0.5cm/s時(shí),H～u曲線是一段斜率不大的直線。降低流速，柱效提高不是很大。但在實(shí)際操作中，流量仍是一個(gè)調(diào)整分離度和出峰時(shí)間的重要可選擇參數(shù)。

3.固定相及分離柱

氣相色譜中的固定液原則上都可以用于液