非發(fā)酵菌2010的學(xué)習(xí)材料

非發(fā)酵菌2010的學(xué)習(xí)材料第1頁/共51頁非發(fā)酵菌(nonfermenters)是指一群不利用或僅以氧化形式利用糖類的革蘭陰性無芽胞桿菌,需氧或兼性厭氧.基本特點(diǎn):1.大多數(shù)為機(jī)會致病菌;2.存在于自然環(huán)境;3.多為正常菌群的一部分;4.對很多抗生素有天然的抗藥性。一.概論第2頁/共51頁近幾年，從臨床標(biāo)本中分離的非發(fā)酵菌的比例逐年上升，目前已經(jīng)約占分離的陰性菌的40%。非發(fā)酵菌的耐藥性一般情況下都比腸桿菌科細(xì)菌明顯，常常表現(xiàn)為多重耐藥性，并且耐藥性發(fā)展很快。第3頁/共51頁非發(fā)酵菌菌病原學(xué)分類假單胞菌屬：代表菌為銅綠假單胞菌；不動桿菌屬：代表菌為鮑曼不動桿菌；窄食單胞菌屬：嗜麥芽窄食單胞菌；伯克霍爾德菌屬：洋蔥伯克霍爾德菌；產(chǎn)堿桿菌屬：木榶氧化其他菌屬等第4頁/共51頁第5頁/共51頁第6頁/共51頁第7頁/共51頁第8頁/共51頁非發(fā)酵菌與其他細(xì)菌的區(qū)別1.與其他陰性桿菌的區(qū)別:腸桿菌，弧菌科等2.與易脫色的革蘭陽性菌區(qū)別.第9頁/共51頁辨認(rèn)非發(fā)酵菌的基本方法1.在克氏鐵瓊脂（KIA)上為K/K；2.大多數(shù)氧化酶陽性；3.細(xì)菌多不能在麥康凱平板上生長或生長不良.第10頁/共51頁非發(fā)酵菌的初步分群1.葡萄糖的利用;2.麥康凱平板上生長能力;3.氧化酶;4.動力.第11頁/共51頁非發(fā)酵菌各菌屬間的鑒別O-F葡萄糖OXH2O2尿素鞭毛其它特征假單胞菌屬

O/-+/-+-/+極生不動桿菌屬O/--+-無無色桿菌屬O++-/+周生土壤桿菌屬O+++周生產(chǎn)堿桿菌屬-++-周生黃桿菌屬(F)++-/+無產(chǎn)黃色素莫拉菌屬-++-無對營養(yǎng)要求高金氏桿菌屬(F)+--無艾肯氏菌屬-+--無菌落小第12頁/共51頁非發(fā)酵菌嗜麥芽窄食單胞菌葡萄糖產(chǎn)酸無色桿菌屬土壤桿菌屬假單胞菌屬動力+OXOX－不動桿菌屬+葡萄糖產(chǎn)酸黃色素摩拉氏菌屬黃桿菌屬－－－++端鞭毛－+－++產(chǎn)堿桿菌屬尿素－+常見不發(fā)酵菌的鑒定雙岐索引第13頁/共51頁第一節(jié)假單胞菌屬(Pseudomonas)一、概述

1.分類

2.臨床意義

3.微生物特性

4.微生物檢驗(yàn)

(1)檢驗(yàn)程序

(2)鑒定

(3)藥物敏感性試驗(yàn)(AntibacterialSusceptibilityTest)第14頁/共51頁1.分類假單菌屬按rRNA同源性分為5群及未確定rRNA同源群有關(guān)的種一群需氧、不發(fā)酵葡萄糖無芽胞，有鞭毛氧化酶陽性的革蘭陰性桿菌多為條件致病菌第15頁/共51頁

2.臨床意義假單胞菌屬分布廣泛，人類不發(fā)酵菌感染中，假單胞菌超過50％，其中主要為銅綠假單胞菌.第16頁/共51頁3.微生物特性革蘭陰性、無芽胞、專性需氧有端鞭毛或叢鞭毛生長溫度范圍廣，最適生長溫度為35℃產(chǎn)生各種水溶性色素：綠膿素、膿玉紅素、熒光素、膿褐素對理化因素耐受性較強(qiáng)，對多種抗生素耐藥

第17頁/共51頁二.銅綠假單胞菌生物學(xué)特征：1：形態(tài)和染色;革蘭陰性，長短不一單鞭毛生長溫度25～42℃第18頁/共51頁菌落形態(tài)：常見有5種菌落形態(tài)：典型菌落：菌落呈灰綠色，扁平濕潤，邊緣不規(guī)則，表面常可見金屬光澤；大腸菌樣型：圓形凸起，灰白色半透明；粘液型：菌落光滑呈粘液狀侏儒型：細(xì)小，無光澤的半透明狀菌落；粗糙型：中央凸起，邊緣扁平，表面粗糙。有生姜味可產(chǎn)生多種色素：熒光素與綠膿素第19頁/共51頁第20頁/共51頁毒力因子致病機(jī)制結(jié)構(gòu)成分粘附素：粘附莢膜多糖：抗呑噬毒素內(nèi)毒素：LPS外毒素：A阻止真核細(xì)胞蛋白質(zhì)合成S干擾吞噬殺菌作用綠膿素：具有氧化還原活性，催化超氧化物和過氧化氫產(chǎn)生有毒基團(tuán)酶類彈性蛋白酶:絲氨酸蛋白酶（Las-A）降解彈性鋅金屬蛋白酶（Las-B）蛋白磷脂酶C:分解脂質(zhì)和卵磷脂，損傷組織細(xì)胞第21頁/共51頁（1）分離培養(yǎng)與鑒定：標(biāo)本可接種于血瓊脂平板培養(yǎng)基和選擇性培養(yǎng)基鑒定根據(jù)鏡下特征、菌落形態(tài)、生化反應(yīng)等3.微生物檢驗(yàn)第22頁/共51頁42℃生長明膠液化鞭毛++極單鞭毛···銅綠假單胞菌-+極多鞭毛···熒光假單胞菌--極多鞭毛···惡臭假單胞菌OF試驗(yàn)：O氧化酶：+精氨酸水解：+葡萄糖酸氧化：+氮?dú)猓?標(biāo)本分離培養(yǎng)基涂片檢查肉湯培養(yǎng)基血瓊脂平板SS、麥康凱瓊脂平板挑選可疑菌落（37℃培養(yǎng)18－24h觀察有無色素產(chǎn)生，色素鑒別接種金氏A、B培養(yǎng)基）無色素菌株42℃+綠膿素+綠膿菌熒光素銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌的鑒定程序-第23頁/共51頁銅綠假單胞菌的最低鑒定特征單端鞭毛（三根以下）＋97動力＋97氧化分解（O-F培養(yǎng)基）葡萄糖＋98乳糖、蔗糖－0木糖＋/－85氧化酶＋100賴氨酸脫羧酶－0精氨酸雙水解酶＋99鳥氨酸脫羧酶－0H2S產(chǎn)生－0在42℃生長＋100第24頁/共51頁（2）抗原檢測：血清學(xué)分型、噬菌體分型（3）核酸檢測：質(zhì)粒指紋圖分析、脈沖場凝膠電泳分析（PFGEpulsedfieldgelelectrophoresis）、基因芯片、PCR技術(shù)、16SrDNA分型鑒定技術(shù)第25頁/共51頁銅綠假單胞菌的耐藥性耐藥機(jī)制：①產(chǎn)酶：金屬酶，OXA酶②外膜蛋白的改變（Outermembraneproteins，OMP）③主動泵出機(jī)制：對喹諾酮類，

MexA-MexB-OprM及MecC-MexD-Oprj④整合子：1類，3類第26頁/共51頁其他假單胞菌1.熒光假單胞菌：特點(diǎn)：4℃生長2.惡臭假單胞菌：特點(diǎn)：產(chǎn)熒光素，4℃和42℃不生長，不產(chǎn)綠膿素3.斯氏假單胞：

特點(diǎn)：42℃生長，精氨酸雙水解酶陰性

第27頁/共51頁不動桿菌屬共同特征:氧化酶陰性,不發(fā)酵糖類,無動力，硝酸鹽試驗(yàn)陰性。生物學(xué)性狀:1.形態(tài):革蘭陰性桿菌，多為球桿狀，常見成對排列無芽胞，無鞭毛。2.培養(yǎng)特性:專性需氧菌,最適生長溫度為35℃，營養(yǎng)要求不高，麥康凱、血平板均生長。

第28頁/共51頁第29頁/共51頁不動桿菌屬主要菌種系列生化特征醋酸鈣鮑曼溶血瓊氏約翰遜洛菲葡萄糖氧化+++/－－－－木糖氧化－＋+/－－－－乳糖氧化＋＋－＋＋＋精氨酸雙水解酶＋＋＋＋－/＋－鳥氨酸脫羧酶＋＋－－－－苯丙氨酸脫氨酶＋＋－－－－丙二酸鹽利用＋＋＋－－/＋－枸椽酸鹽利用＋＋＋＋/－＋－明膠液化－－＋－－－生長溫度:37℃＋＋＋＋－＋41℃－＋－＋－－42℃－＋－－－－第30頁/共51頁鮑曼不動桿菌臨床意義：鮑曼不動桿菌分布廣泛，特別是在醫(yī)院環(huán)境中廣泛存在，極易引起醫(yī)院感染的發(fā)生，最近幾年，在國內(nèi)很多大型醫(yī)院ICU病房，鮑曼不動桿菌的分離率已經(jīng)占到第一位。第31頁/共51頁抵抗力強(qiáng)，耐藥性強(qiáng)容易引起院內(nèi)傳播：消毒隔離、洗手感染危險因素：長期住院，入住ICU高齡，伴基礎(chǔ)疾病移植、免疫抑制插管、人工通氣事先用過抗生素第32頁/共51頁生物學(xué)性狀:1.形態(tài):革蘭陰性桿菌，球桿狀，無鞭毛。2.培養(yǎng)特性:專性需氧菌,最適生長溫度為35℃，42℃能生長，營養(yǎng)要求不高，麥康凱、血平板均生長。3.血平板：菌落圓形、灰白色、光滑、邊緣整齊、直徑2~3mm。第33頁/共51頁耐藥特性對全部氨基青霉素、一代二代頭孢菌素、氨曲南天然耐藥。獲得性耐藥：1：產(chǎn)生β內(nèi)酰胺酶類型舉例底物譜發(fā)生頻率超廣譜頭孢菌素碳青霉稀abapae青霉素酶TEM-1--++頭孢菌素酶AmpC+-++++ESBLCTX-M+-+/-++B類酶IMP，VIM+++++D類酶OXA+/-+++-第34頁/共51頁OMP通透性外排泵整合子、基因盒第35頁/共51頁臨床對策增加藥敏試驗(yàn)藥物Tigecycline多粘菌素B/粘菌素聯(lián)合藥敏試驗(yàn)第36頁/共51頁嗜麥芽窄食單胞菌生物學(xué)性狀:1.形態(tài)：革蘭陰性桿菌，有端鞭毛，無芽胞，無莢膜。2.培養(yǎng)特征：營養(yǎng)要求不高，最適溫度35℃，4℃不生長，在血平板上24h可形成中等偏小的濕潤菌落,48h形成中等大小，不溶血的帶黃色色素的菌落。第37頁/共51頁嗜麥芽窄食單胞菌鑒定：氧化酶–

動力+

明膠+42?C+/-

七葉苷+

賴氨酸+麥芽糖O第38頁/共51頁第39頁/共51頁耐藥性對亞胺培南天然耐藥，主要是產(chǎn)金屬酶；經(jīng)驗(yàn)用藥首選磺胺類，但目前磺胺類抗生素的耐藥率已經(jīng)開始上升。K-B法可選用的藥物有SXT、LEV和MNO。第40頁/共51頁洋蔥伯克霍爾德菌一般不引起人致病，但易從纖維囊腫病人中分離，在一些免疫力低下的患者中也可能分離到。生物學(xué)特性：氧化酶>90%陽性，賴氨酸陽性，多鞭毛。第41頁/共51頁洋蔥伯克霍爾德菌鑒定要點(diǎn)葡萄糖O/F：O賴氨酸：+枸櫞酸：+硝酸鹽還原：+精氨酸水解：-甘露醇：+（依此可以與Pma鑒別）第42頁/共51頁軍團(tuán)菌生物學(xué)性狀：1.形態(tài)與染色：革蘭陰性桿菌，不易著色，端生或側(cè)生鞭毛。2.培養(yǎng)特征：需氧菌，在2.5~5%的CO2環(huán)境下生長良好，營養(yǎng)要求苛刻，生長緩慢，生長需要L-半胱氨酸和鐵離子。最適的培養(yǎng)基為活性炭酵母浸出液瓊脂（BCYE）培養(yǎng)基。第43頁/共51頁3生化反應(yīng)：OX弱陽性或陰性，H2O2陽性，能水解明膠，不發(fā)酵糖。4抗原結(jié)構(gòu)：有O抗原和H抗原，O抗原有特異性。5.抵抗力：抵抗力強(qiáng)，在水中可存活數(shù)月。對化學(xué)消毒劑敏感。第44頁/共51頁致病性可引起肺炎型（重癥類型）、流感樣型（輕癥類型）和肺外感染三種類型；肺炎型死亡率高感染后對該菌有一定的抵抗力。第45頁/共51頁微生物學(xué)檢驗(yàn)臨床標(biāo)本：痰、氣管分泌物、胸水和血液為主。病理組織標(biāo)本：必須制成懸液，再進(jìn)行涂片和分離培養(yǎng)。環(huán)境污染標(biāo)本：應(yīng)先濃縮再接種。第46頁/共51頁分離培養(yǎng)：初次分離必須采用(BCYE)3~5天可形成1~2mm直徑的光澤菌落第47頁/共51頁核酸檢測：是快速特異的方法，采用DNA探針及PCR擴(kuò)增rRNA的方法均可用于軍團(tuán)菌的快速診斷抗體檢測：是檢測軍團(tuán)菌感染臨床常用手段，