實時熒光定量PCR原理和實驗_第1頁
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文檔簡介

所屬分類:基因檢測或者監(jiān)控藥物和療法的治療效果，定量PCR技術(shù)都可以發(fā)揮很大作用。定量PCR技術(shù)的最新進(jìn)展是實時熒光定量。該技術(shù)借可以做到PCR每循環(huán)一次就收集一個數(shù)據(jù)，建立實時擴(kuò)增根據(jù)最終得到的數(shù)據(jù)不同，定量PCR可以分為相對定量和被輕視或忽視，需要著重強(qiáng)調(diào)。當(dāng)然，與定性實驗一樣，定量我們都知道理論上PCR是一個指數(shù)增長的過程，但是實際導(dǎo)忽略PCR效率等細(xì)節(jié)。如果考慮這些因素，可以在方程上增循環(huán)時的熒光信號強(qiáng)度(Rn)等于背景信號強(qiáng)度(RB)加上每個分CTlog(1+Ex)=-logX0+log(RT-RB)-logRs.如果讀者有興趣的話，也可以假設(shè)PCR的效率(即Ex)為偏差的10倍。閾值所在的橫線與PCR擴(kuò)增曲線的交點所指的顯然，CT值取決于閾值，閾值取決于基線，基線取決于實雖然大多數(shù)定量PCR儀都會自動扣除本底，但是仍然需要(圖3)。圖3ROX熒光校正(左)和不校正(右)對實驗數(shù)據(jù)的影響歸一到以拷貝/細(xì)胞或拷貝/基因組為單位比來完成。參比一般選用RNA正方法ternalA板的數(shù)量。PCR循環(huán)，熒ntQuencherR酸多態(tài)性(SNP)分析等。當(dāng)然，7000型也可以作為普通PCRnI分析提供了基礎(chǔ)。多重定量即在同一反應(yīng)管內(nèi)同時對多因進(jìn)行定量，可以大大提高精度并節(jié)約成本。antitativePCRtechnologysferhementoquantitateinducedexp

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