免疫學(xué)防治與診斷課件

免疫學(xué)防治與診斷課件第一頁，共44頁。免疫學(xué)防治免疫預(yù)防：利用各種生物或非生物制劑來建立機(jī)體的免疫應(yīng)答，以達(dá)到預(yù)防疾病的目的。用免疫學(xué)原理，防病、治病所采取的措施免疫治療：應(yīng)用免疫學(xué)原理，針對(duì)疾病的發(fā)生機(jī)制，增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，以達(dá)到治療目的所采取的措施。第二頁，共44頁。特異性免疫類型自然免疫人工免疫自然主動(dòng)免疫：自然感染自然被動(dòng)免疫：IgG通過胎盤、初乳SIgA人工自動(dòng)免疫：接種疫苗、類毒素人工被動(dòng)免疫：動(dòng)物免疫血清、胎盤球蛋白等第三頁，共44頁。（一）免疫學(xué)預(yù)防1.人工免疫的概念和種類

通過人工的方法使機(jī)體獲得免疫力，包括人工自動(dòng)免疫、人工被動(dòng)免疫。（1）人工自動(dòng)免疫：是指給機(jī)體接種疫苗、類毒素等抗原物質(zhì),刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答，以獲得免疫力的方法，也稱預(yù)防接種。主要用于傳染病的特異性預(yù)防。（2）人工被動(dòng)免疫：是給人體輸入抗體等制劑，使機(jī)體獲得特異性免疫力。臨床多用于治療和緊急預(yù)防。

第四頁，共44頁。人工自動(dòng)免疫與人工被動(dòng)免疫的比較比較類別人工自動(dòng)免疫人工被動(dòng)免疫輸入物質(zhì)抗原（疫苗、類毒素）抗體、活化的淋巴細(xì)胞、細(xì)胞因子等接種次數(shù)1-3次1次免疫力出現(xiàn)時(shí)間慢（2~3周）快（注射即生效）免疫力維持時(shí)間較長，數(shù)月~數(shù)年較短，2~3周用途多用于預(yù)防多用于治療或緊急預(yù)防，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，治療腫瘤第五頁，共44頁。（1）死疫苗（滅活疫苗）是選用免疫原性強(qiáng)的病原體，經(jīng)理化方法使其失去活力制備而成的疫苗。如傷寒、乙型腦炎、霍亂、狂犬病疫苗等。（2）減毒活疫苗是用減毒或無毒力的活病原體制成的疫苗。脊髓灰質(zhì)病毒、卡介苗、麻疹病毒疫苗是常用的減毒活疫苗。2.人工自動(dòng)免疫常用生物制劑（3）類毒素：外毒素類毒素0.3-0.4%甲醛第六頁，共44頁。種類死疫苗活疫苗制劑特點(diǎn)滅活，毒強(qiáng)株活，弱毒或無毒株接種途徑多采取皮下注射多模擬自然感染途徑、少數(shù)經(jīng)皮下注射制品類型可多種疫苗混合使用一般單獨(dú)使用接種量及次數(shù)量大，2-3次（7-10天）用量小，1次保存及有效期易保存，穩(wěn)定，有效期1年不易保存，穩(wěn)定性差，4℃數(shù)周免疫效果較差，維持?jǐn)?shù)月-2年較好，維持3-5年甚至更長時(shí)間副作用較大,但無毒力回復(fù)突變較小,但有毒力回復(fù)突變滅活疫苗與減毒疫苗比較第七頁，共44頁。3.人工被動(dòng)免疫生物制品抗毒素：外/類毒素→馬→Ab人丙種球蛋白：血漿和胎盤丙種球蛋白細(xì)胞因子單抗/基因工程抗體人工被動(dòng)免疫注意事項(xiàng)注意防止超敏反應(yīng)早期和足量不濫用丙球被動(dòng)免疫不能激活免疫系統(tǒng)，故不能產(chǎn)生記憶反應(yīng)，其保護(hù)作用是短暫的。溫馨提示第八頁，共44頁。4．新型疫苗

1）亞單位疫苗：提取有效免疫原成分。如HA、NA，HBSAg

2）合成肽疫苗：人工合成抗原肽。

3）基因工程疫苗編碼免疫原基因→載體→體內(nèi) ↓ 酵母菌、大腸桿菌（體外培養(yǎng)）如：重組抗原疫苗、重組載體疫苗、DNA疫苗、轉(zhuǎn)基因植物疫苗第九頁，共44頁。5.計(jì)劃免疫我國兒童計(jì)劃免疫程序年齡疫苗年齡疫苗出生時(shí)BCG，乙肝疫苗（第1針）6個(gè)月乙肝疫苗（第3針）1個(gè)月乙肝疫苗（第2針）8個(gè)月麻疹疫苗（初種）2個(gè)月三價(jià)脊灰疫苗（初服）1.5歲三價(jià)脊灰疫苗（加服），百白破（加強(qiáng)）3個(gè)月三價(jià)脊灰疫苗（復(fù)服），百白破（第1針）4歲三價(jià)脊灰疫苗（加服），麻疹疫苗（復(fù)種）4個(gè)月三價(jià)脊灰疫苗（復(fù)服），百白破（第2針）7歲BCG（復(fù)種），麻疹疫苗（復(fù)種），百白破（加強(qiáng)）5個(gè)月百白破（第3針）12歲BCG（農(nóng)村）第十頁，共44頁。人工自動(dòng)免疫的注意事項(xiàng)接種對(duì)象：免疫功能低下、與病原體接觸機(jī)會(huì)多、易感者。接種劑量、次數(shù)和間隔時(shí)間：死疫苗：2～3次，間隔7～10天?；钜呙缃臃N一次。類毒素接種2次，間隔需4～6周。接種途徑：死疫苗：皮下；活疫苗：皮內(nèi)注射、皮上劃痕和自然途徑接種，脊髓灰質(zhì)炎疫苗以口服為佳，流感、腮腺炎疫苗以霧化吸入為好。接種后反應(yīng)：常于接種后24小時(shí)發(fā)生，表現(xiàn)為局部紅腫、疼痛、淋巴結(jié)腫大。禁忌癥：高熱、嚴(yán)重心血管疾病、急性傳染病、惡性腫瘤、甲亢、活動(dòng)性肺結(jié)核、糖尿病和免疫缺陷病等患者，均不宜接種疫苗。第十一頁，共44頁。（二）免疫治療概念：指針對(duì)機(jī)體低下或亢進(jìn)的免疫狀態(tài)，人為地增強(qiáng)或抑制機(jī)體的免疫功能達(dá)到治療疾病的治療方法。1.抗體免疫治療：單克隆抗體、多克隆抗體、基因工程抗體3.藥物治療免疫增強(qiáng)療法、免疫抑制療法2.細(xì)胞免疫治療造血干細(xì)胞、過繼免疫、腫瘤細(xì)胞疫苗第十二頁，共44頁。（二）免疫治療概念：指針對(duì)機(jī)體低下或亢進(jìn)的免疫狀態(tài)，人為地增強(qiáng)或抑制機(jī)體的免疫功能達(dá)到治療疾病的治療方法。

1、被動(dòng)免疫治療：被動(dòng)增強(qiáng)：抗體、細(xì)胞免疫、小分子免疫肽間接作用：過繼免疫2、免疫增強(qiáng)療法免疫抑制療法第十三頁，共44頁。二、免疫學(xué)診斷目的：用于多種免疫性疾病（感染性疾病、免疫缺陷病、超敏反應(yīng)、自身免疫病、免疫增殖病、移植排斥反應(yīng)和腫瘤等）的診斷、療效評(píng)估、發(fā)病機(jī)制探討、以及對(duì)抗原性物質(zhì)或免疫細(xì)胞的定性、定量，對(duì)細(xì)胞因子、粘附分子及細(xì)胞受體的檢測等。方法：檢測抗原和抗體的體外實(shí)驗(yàn)免疫細(xì)胞的測定第十四頁，共44頁。

（一）體外免疫學(xué)檢測1.體液免疫檢測抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)外均可發(fā)生特異性結(jié)合，體外可出現(xiàn)凝集、沉淀等反應(yīng)現(xiàn)象。據(jù)此可利用已知的抗原（抗體）檢測未知的抗體（抗原），抗原抗體結(jié)合反應(yīng)也稱為血清學(xué)反應(yīng)。具有特異性、可逆性、可見性、比例性等特點(diǎn)。常見的血清學(xué)反應(yīng)有凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)及免疫標(biāo)記技術(shù)等。第十五頁，共44頁。凝集反應(yīng)定義：顆粒性抗原+抗體→凝集現(xiàn)象（顆粒性抗原：細(xì)菌、細(xì)胞等）第十六頁，共44頁。第十七頁，共44頁。沉淀反應(yīng)定義：可溶性抗原+抗體→沉淀現(xiàn)象（可溶性抗原：血清蛋白質(zhì)、細(xì)胞裂解液或組織浸液等）大多沉淀反應(yīng)是用半固體瓊脂凝膠為介質(zhì)，進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散故也稱免疫擴(kuò)散。第十八頁，共44頁。

單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)

是將一定量已知抗體混于瓊脂凝膠中制瓊脂板，在適當(dāng)位置打孔后將抗原加入孔中擴(kuò)散。抗原在擴(kuò)散過程中與凝膠中的抗體相遇，形成以抗原孔為中心的沉淀環(huán)，環(huán)的直徑與抗原含量成正比相關(guān)。本法常用于測定血清IgG、IgM、IgA和C3等的含量。含抗體的凝膠沉淀環(huán)第十九頁，共44頁。第二十頁，共44頁。雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)

是將抗原與抗體分別加入瓊脂凝膠的小孔中，二者自由向周圍擴(kuò)散并相遇，在比例合適處形成沉淀線。如果反應(yīng)體系中含兩種以上的抗原抗體系統(tǒng)，則小孔間可出現(xiàn)兩條以上的沉淀線。本法常用于抗原或抗體的定性、組成和兩種抗原相關(guān)性分析的檢測。第二十一頁，共44頁。第二十二頁，共44頁。對(duì)流免疫電泳是先將待側(cè)血清標(biāo)本作瓊脂凝膠電泳，血清中各蛋白組分被分成不同的區(qū)帶，然后與電泳方向平行挖一小槽，加入相應(yīng)的抗血清，把分成區(qū)帶的蛋白抗原成分作雙向免疫擴(kuò)散，在各區(qū)帶相應(yīng)的位置形成沉淀弧。該法常用于血清蛋白種類分析，以觀察Ig的異常增多或缺失。第二十三頁，共44頁。第二十四頁，共44頁。

定義：是用酶、熒光素、放射性核素等標(biāo)記物標(biāo)記抗原或抗體的試驗(yàn)技術(shù)。通過檢測標(biāo)記物來反映抗原抗體反應(yīng)情況，間接測出待檢抗原或抗體的含量。本法特異性強(qiáng)，敏感性高。第二十五頁，共44頁。主要的免疫標(biāo)記物類別標(biāo)記物用途熒光素FITC、RB200、TRITC免疫組化鑭系元素螯合物免疫分析測定放射性核素3H、14C、32P、57Gr免疫分析測定

125I、131I酶HRP、AP免疫組化免疫分析測定化學(xué)發(fā)光物L(fēng)uminol、lucigenin免疫分析測定金屬顆粒膠體金、鐵蛋白免疫組化免疫分析測定

第二十六頁，共44頁。

是用酶（常用的有辣根過氧化物酶，HRP和堿性磷酸酶，AP)標(biāo)記的抗體進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)。EIA將抗原抗體反應(yīng)的特異性與酶催化作用的高效性相結(jié)合，通過酶作用于底物后顯色來判定結(jié)果。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)：是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行。用洗滌法將液相中游離成分洗除。主要有雙抗體夾心法、間接法等。測定可溶性抗原或抗體酶免疫組化法：測定組織中或細(xì)胞表面的抗原。酶免疫技術(shù)第二十七頁，共44頁。第二十八頁，共44頁。第二十九頁，共44頁。概念：用熒光素（常用的有異硫氰酸熒光素，F(xiàn)ITC)與抗體連接成熒光抗體，再與待測標(biāo)本的抗原反應(yīng)，置熒光顯微鏡下觀察，抗原抗體復(fù)合物散發(fā)出熒光，借此對(duì)標(biāo)本中的抗原作鑒定和定位。有直接、間接及補(bǔ)體結(jié)合熒光法。直接熒光法：將熒光素直接標(biāo)記抗體作標(biāo)本染色。該法的優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)，但其缺點(diǎn)是每檢測一種抗原必須制備相應(yīng)的熒光抗體。熒光免疫技術(shù)第三十頁，共44頁。間接熒光法：用一抗與標(biāo)本中的抗原結(jié)合，再用熒光素標(biāo)記的二抗染色。該法的優(yōu)點(diǎn)是敏感性比直接法高，制備一種熒光素標(biāo)記的二抗可用于多種抗原的檢測，但非特異性熒光亦會(huì)增加。補(bǔ)體結(jié)合熒光免疫法：此法是在間接法的第一步抗原—抗體反應(yīng)時(shí)加入補(bǔ)體，使之與抗原——抗體復(fù)合物結(jié)合；再用熒光素標(biāo)記的抗C3抗體進(jìn)行示蹤。第三十一頁，共44頁。第三十二頁，共44頁。(RIA)是用放射性核素標(biāo)記抗原進(jìn)行的免疫學(xué)檢測技術(shù)。它將放射性核素顯示的高靈敏性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合，使檢測的敏感性達(dá)pg水平。常用于標(biāo)記的放射性核素有I125和I131。常用于胰島素、生長激素、藥物等微量物質(zhì)的測定。放射免疫技術(shù)第三十三頁，共44頁。

Ag*AbAg

標(biāo)記抗原特異性抗體待測抗原(Ag*-Ab)+(Ag-Ab)抗原抗體復(fù)合物分離Ag*-Ab和游離Ag*從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀知含量測定Ag*-Ab和/或游離Ag*放射性放射免疫測定法(RIA)示意圖第三十四頁，共44頁。是以硝酸纖維薄膜為載體吸附抗原，用膠體金標(biāo)記代替酶標(biāo)抗體的免疫標(biāo)記技術(shù)。斑點(diǎn)金免疫層析實(shí)驗(yàn)（一步金法）：HCG免疫膠體金技術(shù)第三十五頁，共44頁。

2.細(xì)胞免疫檢測免疫細(xì)胞數(shù)量檢測免疫細(xì)胞的功能檢測淋巴細(xì)胞類型和數(shù)量的測定（1）E花環(huán)試驗(yàn)：E花環(huán)試驗(yàn)可用于檢測T細(xì)胞數(shù)目。EA花環(huán)試驗(yàn)可用于檢測B細(xì)胞數(shù)目。（2）熒光免疫法：常采用間接免疫熒光法。（3）流式細(xì)胞術(shù)：用流式細(xì)胞儀（FCM)。第三十六頁，共44頁?；ōh(huán)試驗(yàn)示意圖第三十七頁，共44頁。免疫細(xì)胞功能的測定----T細(xì)胞功能測定體內(nèi)法：用生物抗原或化學(xué)抗原作皮內(nèi)試驗(yàn)。OT-PPD皮試SD-SK皮試

體外法：T細(xì)胞增殖試驗(yàn)（淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)）形態(tài)學(xué)檢查3H-TdR摻入法第三十八頁，共44頁。淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)（形態(tài)學(xué)示意圖）