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酶制劑生產(chǎn)技術(shù)回顧上節(jié)課介紹了酶的分類命名與作用機(jī)制,簡(jiǎn)單回顧一下,做幾個(gè)小練習(xí),命名下列催化反應(yīng)的酶:1.6-磷酸葡萄糖→6-磷酸果糖2.丙氨酸+α-酮戊二酸→丙酮酸+谷氨酸3.引入酶的活性如何定量呢?國際通用的單位是什么?生產(chǎn)中如何測(cè)定酶的活性?影響酶活性的因素有哪些呢?模塊一、酶學(xué)基礎(chǔ)學(xué)習(xí)情境二酶活與影響酶活性的因素工作任務(wù)(一)
酶活與酶的活力單位工作任務(wù)
(二)酶活力的測(cè)定方法工作任務(wù)
(三)影響酶活性的因素工作任務(wù)(一)
酶活與酶的活力單位
1961年國際酶學(xué)會(huì)議規(guī)定:在特定條件(25℃,其它為最適條件)下,在1分鐘內(nèi)能轉(zhuǎn)化1微摩爾底物的酶量,或是轉(zhuǎn)化底物中1微摩爾的有關(guān)基團(tuán)的酶量,稱為一個(gè)國際單位(IU,又稱U)。酶活力單位(U,activeunit)表示酶活力大小的單位,通常用酶量表示。催量(kat):EC.推薦表示酶活性
在特定條件下,每秒鐘催化1摩爾底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物所需的酶量為1個(gè)催量(kat)國際單位與催量的換算:
1IU=16.67×10-9kat
比活力(specificactivity)是指每毫克質(zhì)量的蛋白質(zhì)所含的某種酶的活力單位數(shù)。是用來度量酶純度的指標(biāo)。是生產(chǎn)和酶學(xué)研究中經(jīng)常使用的基本數(shù)據(jù)酶的比活力應(yīng)用1有1g淀粉酶制劑,用水溶解生成1000ml,從中取出1ml測(cè)定淀粉酶活力,測(cè)知每5min分解0.25g淀粉。計(jì)算每克酶制劑所含的淀粉酶活力。(淀粉酶活力單位的定義:在最適條件下每小時(shí)分解1g淀粉的酶量稱為1U)計(jì)算過程定義的意思是每個(gè)活力單位的酶量催化效率是一樣的,即1U為一小時(shí)分解1g,而測(cè)得5min分解0.25g即1h分解3g所以需要3U,這是1ml的1000ml則為3000U應(yīng)用2有1克酶制劑,用凱氏定氮法測(cè)得蛋白質(zhì)含量為10%,該酶的比活力為2000U/mol酶蛋白,問該酶制劑的總活力單位數(shù)是多少?若一個(gè)酶活力單位數(shù)(U)規(guī)定為:在最適條件下,10分鐘內(nèi)水解300mmol底物所需的酶量。問每毫克酶制劑在每秒鐘內(nèi)水解了多少摩爾底物?此酶分子量為125000,由單一肽鏈組成,問每毫克純酶中有多少mol的活性中心?
作業(yè)1.定義:酶活力單位;酶的比活力2.某一粗酶液,每ml含蛋白質(zhì)20mg,取10ul,測(cè)得其酶反應(yīng)速度為0.1umol/min。取此粗酶液50ml經(jīng)鹽析法分離得沉淀物。再溶于10ml緩沖液中。此時(shí)酶液每ml含蛋白質(zhì)24mg,同樣取10u
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