上海市臨檢中心 PCR人員上崗培訓班 課件5、2016年PCR培訓班課件-鮑蕓

個體化藥學基因檢測及質量控制上海市臨床檢驗中心分子生物學室

鮑蕓2016.3上海市臨床檢驗中心Shanghai

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LaboratoryOutline藥物基因組學檢測技術質量控制上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory第一部分：藥物基因組學上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory個體化用藥意義長期以來，人們已經習慣了針對同一種疾病按照相同的劑量服用同樣的藥物。但科學的發(fā)展已經使人們認識到，藥物反應（包括療效和毒性）存在著極大的個體差異。解決藥物治療過程中療效和/或副作用個體差異的問題?

具體的藥物對具體的患者適用不適用,藥物選擇?

具體的患者對具體的藥物敏感不敏感,劑量選擇?

藥物配伍時的相互作用的強弱,

處方選擇上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory藥物基因組學（Pharmacogenomics）研究基因序列多態(tài)性與藥物效應多樣性之間的關系，即基因本身及其突變體與藥物效應相互關系的一門科學。藥物基因組學是以藥物效應及安全性為目標，研究各種基因變異與藥效及安全性的關系。不以發(fā)現(xiàn)人體基因組基因為主要目的簡單運用已知的基因理論知識改善病人的治療上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory藥物基因組學（Pharmacogenomics）20世紀50年代，科學家發(fā)現(xiàn)不同遺傳背景會導致藥物反應的差異。20世紀80年代，發(fā)現(xiàn)基因組中每500-1000個堿基存在1個變異，即基因位點多態(tài)性。許多藥物相關酶基因具有多態(tài)性，并由此建立藥物基因組學。20世紀90年代，世界上第一家基因與制藥公司成立，研究藥物基因組學。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory藥物相關基因的分類?

基于目前的認識，藥物相關基因大致分為四類：參與藥物代謝過程的酶與藥物結合的受體藥物轉運相關的膜通道信號傳導相關的蛋白質上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory藥物代謝酶藥物代謝即藥物生物轉化，可分為2相：第I相：通過藥物分子的氧化、還原、水解等引入極性集團。需要有藥物代謝酶的催化，其中最主要的代謝酶是細胞色素P450（CYP）酶系。第II相：極性集團與受體內源性成分結合，生成極性強、水溶性好、藥理惰性的化合物。催化該反應的酶主要是硫嘌呤甲基轉移酶（TPMT）、N-乙?；D移酶（NAT）、谷胱甘肽S-轉移酶（GST）等。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory藥物代謝酶—P450家族

目前臨床所用的藥物中，約80%的I相代謝反應由CYP家族酶催化，是藥物代謝的主要酶系。

有報道的由于基因多態(tài)性引起的不良反應中，80%是被CYP酶催化的藥物。

目前已發(fā)現(xiàn)至少有53個CYP基因，其中有顯著意義的基因多態(tài)性的酶有CYP2C19、CYP2C9、CYP3A、CYP2D6等。

CYP3A催化許多內源性物質的代謝，如睪酮及可的松的6-β-羥化代謝。

CYP2C19參與代謝多種藥物，如質子泵抑制劑、抗抑郁類及抗癲癇類藥等。

CYP2C9參與華法林、醋酸香豆素、甲苯磺丁脲等藥物代謝。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory藥物代謝酶—P450家族上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory藥物代謝酶—P450家族CYP2B6,

3%CYP2E1,

4%CYP2A6,

3%各亞家族CYP2C19,

8%CYP3A4/5,

36%酶代謝藥物比例CYP1A2,

11%CYP2C8/9,

16%CYP2D6,

19%上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory藥物代謝酶—P450家族

遺傳多態(tài)性使其表達的酶活性存在差異，根據個體的酶活性高低可分為強代謝型和弱代謝型。表型定義動力學結果臨床表現(xiàn)野生型，兩個等位基因表達的蛋白具有正常的酶活強代謝型（EM）代謝標準的藥物劑量正常的藥物反應1、加強藥物的反應與毒性2、延長藥物效應及毒性時間，增強藥物反應及毒性3、可能生成有活性或毒性的代謝物4、某些前體藥物的有效代謝產物生成減少或缺乏，致使治療失敗1、降低的首過效應，產生增加劑量，升高血漿濃度水平弱代謝型

不具有酶活性或酶活

2、降低清除率，延長半衰期，（PM）性極低藥物在體內累積3、改變代謝途徑4、不產生活性代謝物上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory華法林(Warfarin)代謝受CYP2C9基因型影響HigashiMK,etal.

JAMA

287:1690-1698,

2002.上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory華法林(Warfarin)代謝受CYP2C9基因型影響上海市臨床檢驗中心Shanghai

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LaboratoryWhat

is

a

SNP?C>TSNP指在基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性。它是人類可遺傳的變異中最常見的一種。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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LaboratoryWhat

is

a

SNP?

Single

Nucleotide

Polymorphisms（單核苷酸多態(tài)性），在基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性，包括轉換、顛換、缺失和插入。

變異形式以轉換和顛換為主，二者之比為2：1。SNP多在CG序列上出現(xiàn)，而且多是C

>T

。

SNP發(fā)生率>0.1%

,人類基因組上的SNP總量大概是3×106個。

是人類可遺傳的變異中最常見的一種，人體許多表型差異、對藥物或疾病的易感性等等都可能與SNP有關。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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LaboratorySNP重要性

藥物基因組學

與人類健康相關的基因（eg.肥胖、酒精代謝）

每個基因中都存在相關的遺傳標記（包含非編碼區(qū)域的位點）。

快速、準確、低成本的基因分型。

人群多樣性和遷徙歷史上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory等位基因和基因型(genotype)等位基因(alle)指位于基因型(genotyp)指某一生物個體一對同源染色體的相同位

一個或多個位點的特定遺傳變異。置上控制著相對性狀的一

通常指的是兩條染色體同一位點的對基因。多態(tài)性。如A/A,A/G或

G/G。第二部分：檢測技術上海市臨床檢驗中心Shanghai

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LaboratorySNP分型技術

基因芯片技術是在固相支持介質上進行分子雜交和原位熒光檢測的一種高通量SNP分析方法。

Taqman探針技術在PCR反應系統(tǒng)中加入2種不同熒光標記的探針，他們分別與兩個等位基因完全配對。測序法Sanger測序焦磷酸測序法

PCR-RFLP（限制性片段長度多態(tài)性分析法）分型技術

飛行時間質譜（MALDI-TOFMS）

MultiplexSNaPshot分型技術檢測技術—基因芯片技術基因芯片（gene

chip）又稱DNA微陣列（microarray）,是將大量DNA片段通過一定方式固定于某種固相載體（如含硅玻璃片）表面形成致密、有序的DNA分子點陣。檢測技術—基因芯片技術主要技術包括：

芯片制備：先將玻璃片或硅片進行表面處理，然后使DNA片段或蛋白質分子按順序排列在芯片上。

樣本制備：將樣品進行提取、擴增。獲取對象可以是蛋白質或DNA、RNA，然后用熒光標記。

雜交反應：雜交反應是熒光標記的樣品與芯片上的探針進行的反應的過程。合適的反應條件能使生物分子間反應處于最佳狀況中，減少錯配率。

信號檢測和數(shù)據分析：雜交反應后的芯片上各個反應點的熒光位置、熒光強弱經過芯片掃描儀和相關軟件可以分析圖像，將熒光轉換成數(shù)據，獲得有關生物信息。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory基因芯片技術基本流程圖檢測技術—基因芯片技術基因芯片技術掃描結果示意圖上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory檢測技術—Taqman探針技術Taqman探針技術：在pcr反應系統(tǒng)中加入2種不同熒光標記的探針，他們分別與兩個等位基因完全配對。探針的5’端和3’端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。當溶液中存在PCR產物時，該探針與模板退火，即產生了適合于核酸外切酶活性的底物，從而將探針5’-端連接的熒光分子從探針上切割下來，破壞兩熒光分子間的PRET，發(fā)出熒光。通常用于少量SNP位點分析。檢測技術—Taqman探針技術檢測技術—測序法Sanger測序仍是目前基因分型的金標準。相對于其他分型技術具有最高的準確性，并能檢測新的突變。焦磷酸測序(pyrosequencing)是一種新型的酶聯(lián)級聯(lián)測序技術，焦磷酸測序法適于對已知的短序列的測序分析上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory檢測技術—

Sanger雙末端終止法測序1977年，英國人Frederick

Sanger

創(chuàng)建了雙脫氧鏈末端合成終止法（chaintermination

method），簡稱Sanger法、雙脫氧法或酶法。他發(fā)現(xiàn)如果在DNA復制過程中摻入ddNTP，就會產生一系列末端終止的DNA鏈，并能通過電泳按長度分辨。不同末端終止DNA鏈的長度是由摻入到新合成鏈上隨機位置的ddNTP決定的。Frederick

Sanger

：1980年因發(fā)明測序技術獲得諾貝爾化學獎上海市臨床檢驗中心Shanghai

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LaboratorySanger雙末端終止法測序基本原理是利用DNA聚合酶，以待測單鏈DNA為模板，以dNTP為底物，設立四種相互獨立的測序反應體系，在每個反應體系中加

入

不

同

的

雙

脫

氧

核

苷

三

磷

酸

（

dideoxyribonucleosidetriphosphate，ddNTP）作為鏈延伸終止劑。在測序引物引導下，按照堿基配對原則，每個反應體系中合成一系列長短不一的引物延伸鏈，通過高分辨率的變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，放射自顯影檢測后，從凝膠底部到頂部按5′→3′方向讀出新合成鏈序列，由此推知待測模板鏈的序列

。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory自動化測序測序流程--ABI測序儀熒光標記BigDye

Terminators；美國ABI公司擁有專利四色熒光分別標記的起鏈終止劑作用的四種ddNTPs，與四個反應管循環(huán)測序反應及四個泳道電泳檢測的傳統(tǒng)雙脫氧鏈終止法相比，實現(xiàn)了一個反應管完成反應與一個電泳道檢測。由于使用了四色熒光分別標記了四種ddNTPs，可按照四種不同熒光來分別識別A、T、G、C，因此，可在一個反應管中完成循環(huán)測序反應，并通過一個電泳道電泳即可完成測序任務。具有分辨率高、重現(xiàn)性好、靈敏度高、快速和易于實現(xiàn)自動化等優(yōu)點。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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LaboratorySanger測序法基本檢測流程ORTargetregion

PCR

amplification第三部分：質量控制上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory質量控制藥物代謝酶和藥物作用靶點相關基因的檢測質量控制與保證是個體化醫(yī)學檢測質量保證的核心內容，是個體化用藥基因診斷規(guī)范化和標準化的首要前提。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory質量控制

分析前質量保證

分析中質量保證

分析后質量保證上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析前質量保證

采樣前準備

標本采集

標本的運輸與保存

標本的接收與保存上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析前—采樣前準備

分子診斷項目的申請與完善?

填寫規(guī)范的申請單：包含足夠的信息，識別患者和有資質開具申請單的醫(yī)生?

優(yōu)化檢測項目：檢測實驗室應加強與臨床醫(yī)生溝通，幫助醫(yī)生合理解釋檢驗結果，接收合理的反饋意見

患者的正確識別及知情同意?

采集管上患者信息標識：通常應包括姓名、送檢醫(yī)院及科室、住院號等。采樣前需首先核對確定患者的身份，核實能標示患者的信息。?

患者知情同意：告知患者所檢測項目的目的、意義、基本過程、項目可能存在的不足如檢測結果可能出現(xiàn)與臨床用藥實際不相符的情況、剩余核酸的去向及保存時間，保護受檢者的個人隱私。

送檢單的填寫與項目的復核?

申請單需填寫的信息包括：申請的檢測項目、標本編號、受檢者姓名、性別、出生日期、民族、采樣日期及時間、標本來源（組織類型）、相關臨床資料（如身高、體重、疾病診斷、疾病分型分期、合并疾病、用藥情況）、采樣單位及科室名稱、送檢醫(yī)師姓名等信息。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析前—標本采集按要求建立標本采集SOP。人員進行系統(tǒng)培訓。采樣前應對標本采集容器進行評價，確保容器本身不會干擾測定過程，并保存評估記錄。所用的材料如注射器、棉簽、拭子等應為一次性使用，以防止污染。無論采集哪種類型的標本，采樣時都必須戴手套，以避免標本中病原微生物感染和皮膚脫落細胞對標本的污染。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析前—標本采集

全血和骨髓樣本?

一般用EDTA或枸櫞酸鹽抗凝，避免用肝素（抑制PCR反應）。?

全血標本采集外周靜脈血2~3

mL并置于采血管中。?

如檢測目的是細胞內RNA，建議用含RNA穩(wěn)定劑的采樣管，或采樣后盡快將全血或骨髓加入到RNA穩(wěn)定溶液中

組織標本?

新鮮組織和活檢組織：采樣大小取決于組織類型。?

石蠟包埋組織：推薦用10％中性緩沖甲醛溶液固定組織標本，避免使用含重金屬離子的固定液如Bouin液等。?

組織切片：用于DNA檢測時，手術標本需提供10

μm厚的石蠟切片4～8張，面積為成人拇指蓋大?。换顧z穿刺標本提供10

μm厚切片8～10張。

口腔脫落細胞?

可同時用于DNA和RNA分析。?

口腔拭子，患者清水漱口后，將消毒醫(yī)用棉簽伸進口腔，在口腔內側臉頰粘膜處左右反復擦拭20次左右，取出棉簽，將棉簽置于干凈濾紙上陰干，至少棉簽3根。棉簽立即放入干凈封口塑料袋內封閉并放入紙質信封，信封上應做好詳細標記。濾紙應經過滅菌處理。漱口標本也可作為口腔脫落細胞的來源。?

用于RNA分析的口腔脫落細胞必須保存在RNA穩(wěn)定劑中。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析前—標本的運輸與保存分子檢測人員應熟知標本運送與保存的條件要求。標本一經采集，應盡快送到臨檢實驗室。臨檢實驗室應制定樣本運輸與保存的SOP。在運送工具的選擇、標本的運送和保存環(huán)境等方面應嚴格按規(guī)定執(zhí)行。運送過程中應防止盛放標本的容器破碎和標本丟失，注意標本的隔離、封裝、容器的密閉。標本應標明采集的日期和時間、運送時間、實驗室接收時間、實驗室接收時標本的溫度。運送條件根據標本類型和待測靶核酸的性質而定。DNA分析應在采集后8小時內送達實驗室，否則需低溫運送。當待測核酸為RNA時，能在10分鐘內送達實驗室的標本可室溫運送；如果運送時間較長，則應將標本置于干冰中，4小時內送達實驗室；如果標本中添加了RNA穩(wěn)定劑，則可室溫運送或郵寄。標本的長距離運送應符合生物安全要求。標本運輸人員應接受適用于標本類型和遠程運輸?shù)陌踩桶b程序的培訓。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析前—標本的接收與保存

標本的驗收、接受與拒收：

檢查項目包括：申請單的項目填寫、標識；申請單有無醫(yī)師簽字；所填項目是否與標本所示一致；申請單姓名、科別、門診或住院號；知情同意書；標本采集及送檢之間的時間間隔（要求采樣1周以內）；檢查標本的量和外觀質量，血液標本的外觀質量包括采血管是否密閉、有無溶血、管壁有無破損、標本是否有明顯的污染跡象（如開蓋），樣本接收時的溫度，樣本量是否符合要求。

拒收無標簽、標簽不清晰、采血管破裂、已開蓋、運送時間超過1周的樣本。拒收標本時應及時與送檢單位聯(lián)系，要求重新采樣或重新送樣。每個接受的合格標本均應分配一個唯一的標識碼。樣本簽收時實行送樣人和收樣人雙簽名制度。

樣本的登記與錄入：樣本簽收后立即登記樣本基本信息，收樣日期和時間，并盡快將標本信息錄入實驗室（或醫(yī)院）信息系統(tǒng)，后續(xù)的操作過程及樣本保存均用唯一編號。

標本預處理：部分送檢標本到達實驗室后需進行預處理，如保存于濾紙上的血液標本需采用穿孔機將濾紙上的血斑取下裝入離心管中，用溶解液沖洗浸泡濾紙，搖床上室溫孵育以除去濾紙上的血紅蛋白。甲醛固定石蠟包埋組織在進行核酸檢測前需進行徹底的脫蠟。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析中質量保證

實驗室設計要求

檢測方法

儀器設備的使用、維護與保養(yǎng)

人員培訓

檢測體系的性能驗證上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析中質量保證—實驗室設計要求原則上按照《個體化醫(yī)學檢測質量保證指南》的要求進行。檢測實驗室應按《醫(yī)療機構臨床基因擴增實驗室管理辦法》要求進行設置，并按要求嚴格控制空氣流向，避免PCR產物污染。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析中質量保證—檢測方法方

法優(yōu)

點缺

點適用性通量較高，操作簡單，儀器設備

探針較昂貴易普及。對相同位點、大樣本標本進行檢測，可用于mRNA表達檢測。實時熒光PCR高通量，高靈敏度，可以檢測插

需要特殊儀器設備。入/缺失突變和未知突變。等位適合于較大樣本、突變比例高于5％的各種類型SNP檢測、甲基化位點的確定。焦磷酸測序基因含量的比例可用于室內質控。直接獲取序列，分型的金標準，

通量低，不能檢測突變比

各種SNP的檢測，未知突變的篩查以可發(fā)現(xiàn)未知突變。

例小于20％的SNP。

及驗證其他分型的結果。Sanger測序法PCR-RFLP無需特殊的儀器設備，成本較低，通量低，只適用于部分SNP

適用于無條件夠買貴重儀器設備的實實驗過程簡單，可操作性強。

分型

驗室開展小樣本的分型檢測。通量高靈活度低，成本高，需要

適用于具備芯片檢測能力的實驗室對特殊的儀器設備。

已知固定位點、大樣本標本進行檢測。基因芯片法在細胞核原位對基因的異常進行

成本高，通量低，時間較

適于對基因擴增和缺失異常進行檢測。原位雜交（FISH）檢測長。分析中質量保證—儀器設備的使用、維護與保養(yǎng)參考生產商提供的操作說明書編寫書面的、有案可查的預防性維護及校準計劃，確定儀器設備的維護周期，建立儀器設備日常維護的SOP。對于某些計量分析儀器(如移液器等），應依照我國計量法規(guī)定，由計量檢定機構定期進行校驗，并保存好校驗證書。加熱系統(tǒng)及冰箱等設備的維護包括對溫度進行監(jiān)測。儀器維護過程中要注意清潔劑的使用，每臺儀器應該配備專用的清潔工具。在例行儀器的維護和保養(yǎng)后，應填寫儀器維護保養(yǎng)記錄表。如使用或維護中發(fā)現(xiàn)問題，應及時匯報并將出現(xiàn)的問題詳細記錄，專業(yè)工程師上門維修，最后由維護操作人員簽名。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析中質量保證—人員培訓操作人員需要有一定的專業(yè)技術知識和經驗才能獲得穩(wěn)定可靠的檢測結果。加強人員培訓是確保檢測質量的關鍵。人員培訓分為入職培訓、內部培訓和外部培訓。掌握和建立安全操作的概念、“防污染”的概念、具備獨立進行質控活動和儀器維護的能力，可對試劑和質控品的出入庫及使用情況、設備保養(yǎng)等情況進行準確記錄，進行數(shù)據分析。定期對實驗室工作人員開展內部培訓，進行處事能力考核和周期性能力再考核。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析中質量保證—檢測體系性能驗證定性檢測的性能驗證指標主要包括重復性/精密度、準確度（突變型的檢測能力）、分析特異性、檢出限等。定量檢測監(jiān)測體系性能驗證的指標主要包括準確度、精密度、線性、可報告范圍、檢出限、參考區(qū)間、靈敏度、特異性等。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析后質量保證

檢測報告、解釋及報告發(fā)放

檢測后樣本的保存和處理上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析后質量保證—檢測報告、解釋及報告發(fā)放檢測報告的內容及要求檢測結果的解釋檢測結果的報告流程與發(fā)放檢測后咨詢服務上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析后質量保證—檢測報告的內容及要求

報告單要求有統(tǒng)一的格式和內容，報告應包含：醫(yī)療機構或實驗室名稱、項目名稱、標本編號或條碼、送檢單位及（或）科室名稱、患者信息（姓名、性別、年齡）、標本類型、標本采集與接收時間、送檢醫(yī)生姓名、疾病診斷、報告單出具的時間、標本處理過程、檢測方法和主要設備、檢測過程、檢測結果并附相關圖表、結果解釋、用藥方案建議、檢測的局限、必要的參考文獻、檢測人員、審核人員和復核人員簽字、結果報告日期和備注，檢測單位聯(lián)系信息。

檢測結果應以清晰易讀且易被醫(yī)師和患者理解的形式進行報告，報告單上應采用標準化的基因命名和計量單位。定量檢測應注明參考區(qū)間、檢測方法的線性或測定范圍；定性檢測可直接寫基因型、基因擴增有或無、微衛(wèi)星不穩(wěn)定的程度（低、中、高）、甲基化有無等。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析后質量保證—檢測結果的解釋根據個體的遺傳信息調整用藥劑量，以增加藥物療效，減少藥物不良反應的發(fā)生。

藥物劑量的調整往往需根據隨機對照臨床研究的結果；對目前缺乏隨機對照臨床研究的遺傳變異，可依據基因型對藥物藥代動力學曲線下面積影響的大小估算用藥劑量；當一個藥物的反應性受多個基因或基因與環(huán)境因素間相互作用影響時，可根據國內國際大規(guī)模臨床試驗推導出的、納入了個體基因型及其他因素的用藥劑量計算公式確定用藥劑量。根據個體的遺傳信息確定用藥的種類，避免應用針對特定基因型個體無效或可能產生嚴重藥物不良反應的藥物。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析后質量保證—檢測結果的報告流程與發(fā)放

首先要對檢測結果報告進行審核分析，包括審核檢測過程的有效性，受檢者的基本信息，結果數(shù)據分析。審核者應當是主管技師以上的工作人員、本專業(yè)實驗室負責人、高年資檢驗人員和臨床實驗室主任授權人，審核者對檢驗報告的質量負責。

應建立檢測報告單發(fā)出和管理制度。明確檢測結果報告發(fā)放的程序和責任，設定并公示檢測結果報告時間，報告時間是指從接受送檢標本起，到檢測結果發(fā)放的時間。應制定個體化用藥基因檢測數(shù)據管理制度，數(shù)據中應錄入患者信息和檢驗數(shù)據；檢測數(shù)據的修改必須征得報告結果簽發(fā)人員同意后，由操作人員進行修改；所有檢測報告和原始記錄應當歸檔保存，實驗室信息系統(tǒng)數(shù)據至少要拷貝3份并保存在不同的地方，以便日后核對。

一般檢驗報告單和檢測結果數(shù)據至少保存兩年；室內質控和參加室間質量評價的記錄和質控信息至少保存兩年；儀器狀態(tài)和維修記錄要保留到儀器使用終身。檢測結果的查詢通常可根據患者姓名、標本編號、檢測項目和送檢日期進行查詢。分析后質量保證—檢測后樣本的保存和處理

樣本完成檢測后要進行一定時間的保留，以備必要時復查。

標本的保存也可為科研工作的開展和回顧性調查提供條件。完成檢測后剩余的DNA樣本至少在-20℃保存2年。DNA在-70℃的環(huán)境下可保存至少7年。純度不高的DNA樣品建議保存在-20℃或更低的溫度中，以確保DNA的完整性。在不影響受檢者個人隱私及利益的前提條件下，DNA及臨床資料也可匿名用于科學研究，但需在知情同意書中明確。

廢棄的樣本應作為生物危險品處置。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析后質量保證—檢測后咨詢服務個體化醫(yī)學分子診斷實驗室應配備相關資質、取得國家衛(wèi)生計生委個體化醫(yī)學檢測培訓基地培訓合格證的個體化用藥咨詢人員，對檢測項目提供咨詢服務，負責對檢測報告在臨床上出現(xiàn)的各種情況進行解釋和檢后服務。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory質量保證室內質量控制室間質量評價上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory室內質控室內質量控制（IQC）是實驗室質量管理體系的一個重要環(huán)節(jié)。通過對已知陰性和弱陽性質控品進行檢測，由實驗室內部連續(xù)自評價本實驗室檢測結果的可靠程度，判斷檢驗報告是否可發(fā)出。在每次檢測時，結合試劑要求設立試劑對照、陰性質控、陽性質控，并且將質控樣本與待測樣本同步檢測。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory室內質控—華法林項目包含3個基因位點：CYP2C9*2、*3及VKORC1(-1639

)陰性質控：野生型樣本或ddH2O陽性樣本：留樣標本或含特定突變質粒或細胞株陽性質控樣本無需在每次檢測中都包括所有的突變位點，可根據需要設立針對1-2個位點的對照。但實驗室應設有多個突變的質控品，在不同批次檢測中輪流更換使用。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory室內質控—華法林項目如使用質粒作為質控品，則無法監(jiān)控核酸提取過程。純化后的核酸可以使用凝膠電泳對其完整性進行評價提取濃度和純度可以使用紫外分光光度計，通過A260讀數(shù)確定濃度，A260/A280比率判定核酸純度。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory目前開展個體化用藥檢測項目室間質評序號

開展項目涉及藥物相關基因位點分型*2(681)rs4244285

A>G*3(636)rs4986893

A>G氯吡格雷（Clopidogrel）藥物相關基因檢測12CYP2C19*17

rs12248560

C>T*2(430)

rs1799853

C>T*3(1075)

rs1057910

A>CCYP2C9華法林藥（Warfarin）物相關基因檢測VKORC1CYP3A5(-1639G>A)rs9923231*3

(698G>