上海市臨檢中心 PCR人員上崗培訓(xùn)班 課件5、2016年P(guān)CR培訓(xùn)班課件-鮑蕓

個體化藥學(xué)基因檢測及質(zhì)量控制上海市臨床檢驗中心分子生物學(xué)室

鮑蕓2016.3上海市臨床檢驗中心Shanghai

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LaboratoryOutline藥物基因組學(xué)檢測技術(shù)質(zhì)量控制上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory第一部分：藥物基因組學(xué)上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory個體化用藥意義長期以來，人們已經(jīng)習(xí)慣了針對同一種疾病按照相同的劑量服用同樣的藥物。但科學(xué)的發(fā)展已經(jīng)使人們認(rèn)識到，藥物反應(yīng)（包括療效和毒性）存在著極大的個體差異。解決藥物治療過程中療效和/或副作用個體差異的問題?

具體的藥物對具體的患者適用不適用,藥物選擇?

具體的患者對具體的藥物敏感不敏感,劑量選擇?

藥物配伍時的相互作用的強(qiáng)弱,

處方選擇上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory藥物基因組學(xué)（Pharmacogenomics）研究基因序列多態(tài)性與藥物效應(yīng)多樣性之間的關(guān)系，即基因本身及其突變體與藥物效應(yīng)相互關(guān)系的一門科學(xué)。藥物基因組學(xué)是以藥物效應(yīng)及安全性為目標(biāo)，研究各種基因變異與藥效及安全性的關(guān)系。不以發(fā)現(xiàn)人體基因組基因為主要目的簡單運用已知的基因理論知識改善病人的治療上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory藥物基因組學(xué)（Pharmacogenomics）20世紀(jì)50年代，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)不同遺傳背景會導(dǎo)致藥物反應(yīng)的差異。20世紀(jì)80年代，發(fā)現(xiàn)基因組中每500-1000個堿基存在1個變異，即基因位點多態(tài)性。許多藥物相關(guān)酶基因具有多態(tài)性，并由此建立藥物基因組學(xué)。20世紀(jì)90年代，世界上第一家基因與制藥公司成立，研究藥物基因組學(xué)。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory藥物相關(guān)基因的分類?

基于目前的認(rèn)識，藥物相關(guān)基因大致分為四類：參與藥物代謝過程的酶與藥物結(jié)合的受體藥物轉(zhuǎn)運相關(guān)的膜通道信號傳導(dǎo)相關(guān)的蛋白質(zhì)上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory藥物代謝酶藥物代謝即藥物生物轉(zhuǎn)化，可分為2相：第I相：通過藥物分子的氧化、還原、水解等引入極性集團(tuán)。需要有藥物代謝酶的催化，其中最主要的代謝酶是細(xì)胞色素P450（CYP）酶系。第II相：極性集團(tuán)與受體內(nèi)源性成分結(jié)合，生成極性強(qiáng)、水溶性好、藥理惰性的化合物。催化該反應(yīng)的酶主要是硫嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶（TPMT）、N-乙?；D(zhuǎn)移酶（NAT）、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GST）等。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory藥物代謝酶—P450家族

目前臨床所用的藥物中，約80%的I相代謝反應(yīng)由CYP家族酶催化，是藥物代謝的主要酶系。

有報道的由于基因多態(tài)性引起的不良反應(yīng)中，80%是被CYP酶催化的藥物。

目前已發(fā)現(xiàn)至少有53個CYP基因，其中有顯著意義的基因多態(tài)性的酶有CYP2C19、CYP2C9、CYP3A、CYP2D6等。

CYP3A催化許多內(nèi)源性物質(zhì)的代謝，如睪酮及可的松的6-β-羥化代謝。

CYP2C19參與代謝多種藥物，如質(zhì)子泵抑制劑、抗抑郁類及抗癲癇類藥等。

CYP2C9參與華法林、醋酸香豆素、甲苯磺丁脲等藥物代謝。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory藥物代謝酶—P450家族上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory藥物代謝酶—P450家族CYP2B6,

3%CYP2E1,

4%CYP2A6,

3%各亞家族CYP2C19,

8%CYP3A4/5,

36%酶代謝藥物比例CYP1A2,

11%CYP2C8/9,

16%CYP2D6,

19%上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory藥物代謝酶—P450家族

遺傳多態(tài)性使其表達(dá)的酶活性存在差異，根據(jù)個體的酶活性高低可分為強(qiáng)代謝型和弱代謝型。表型定義動力學(xué)結(jié)果臨床表現(xiàn)野生型，兩個等位基因表達(dá)的蛋白具有正常的酶活強(qiáng)代謝型（EM）代謝標(biāo)準(zhǔn)的藥物劑量正常的藥物反應(yīng)1、加強(qiáng)藥物的反應(yīng)與毒性2、延長藥物效應(yīng)及毒性時間，增強(qiáng)藥物反應(yīng)及毒性3、可能生成有活性或毒性的代謝物4、某些前體藥物的有效代謝產(chǎn)物生成減少或缺乏，致使治療失敗1、降低的首過效應(yīng)，產(chǎn)生增加劑量，升高血漿濃度水平弱代謝型

不具有酶活性或酶活

2、降低清除率，延長半衰期，（PM）性極低藥物在體內(nèi)累積3、改變代謝途徑4、不產(chǎn)生活性代謝物上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory華法林(Warfarin)代謝受CYP2C9基因型影響HigashiMK,etal.

JAMA

287:1690-1698,

2002.上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory華法林(Warfarin)代謝受CYP2C9基因型影響上海市臨床檢驗中心Shanghai

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LaboratoryWhat

is

a

SNP?C>TSNP指在基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性。它是人類可遺傳的變異中最常見的一種。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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LaboratoryWhat

is

a

SNP?

Single

Nucleotide

Polymorphisms（單核苷酸多態(tài)性），在基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性，包括轉(zhuǎn)換、顛換、缺失和插入。

變異形式以轉(zhuǎn)換和顛換為主，二者之比為2：1。SNP多在CG序列上出現(xiàn)，而且多是C

>T

。

SNP發(fā)生率>0.1%

,人類基因組上的SNP總量大概是3×106個。

是人類可遺傳的變異中最常見的一種，人體許多表型差異、對藥物或疾病的易感性等等都可能與SNP有關(guān)。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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LaboratorySNP重要性

藥物基因組學(xué)

與人類健康相關(guān)的基因（eg.肥胖、酒精代謝）

每個基因中都存在相關(guān)的遺傳標(biāo)記（包含非編碼區(qū)域的位點）。

快速、準(zhǔn)確、低成本的基因分型。

人群多樣性和遷徙歷史上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory等位基因和基因型(genotype)等位基因(alle)指位于基因型(genotyp)指某一生物個體一對同源染色體的相同位

一個或多個位點的特定遺傳變異。置上控制著相對性狀的一

通常指的是兩條染色體同一位點的對基因。多態(tài)性。如A/A,A/G或

G/G。第二部分：檢測技術(shù)上海市臨床檢驗中心Shanghai

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LaboratorySNP分型技術(shù)

基因芯片技術(shù)是在固相支持介質(zhì)上進(jìn)行分子雜交和原位熒光檢測的一種高通量SNP分析方法。

Taqman探針技術(shù)在PCR反應(yīng)系統(tǒng)中加入2種不同熒光標(biāo)記的探針，他們分別與兩個等位基因完全配對。測序法Sanger測序焦磷酸測序法

PCR-RFLP（限制性片段長度多態(tài)性分析法）分型技術(shù)

飛行時間質(zhì)譜（MALDI-TOFMS）

MultiplexSNaPshot分型技術(shù)檢測技術(shù)—基因芯片技術(shù)基因芯片（gene

chip）又稱DNA微陣列（microarray）,是將大量DNA片段通過一定方式固定于某種固相載體（如含硅玻璃片）表面形成致密、有序的DNA分子點陣。檢測技術(shù)—基因芯片技術(shù)主要技術(shù)包括：

芯片制備：先將玻璃片或硅片進(jìn)行表面處理，然后使DNA片段或蛋白質(zhì)分子按順序排列在芯片上。

樣本制備：將樣品進(jìn)行提取、擴(kuò)增。獲取對象可以是蛋白質(zhì)或DNA、RNA，然后用熒光標(biāo)記。

雜交反應(yīng)：雜交反應(yīng)是熒光標(biāo)記的樣品與芯片上的探針進(jìn)行的反應(yīng)的過程。合適的反應(yīng)條件能使生物分子間反應(yīng)處于最佳狀況中，減少錯配率。

信號檢測和數(shù)據(jù)分析：雜交反應(yīng)后的芯片上各個反應(yīng)點的熒光位置、熒光強(qiáng)弱經(jīng)過芯片掃描儀和相關(guān)軟件可以分析圖像，將熒光轉(zhuǎn)換成數(shù)據(jù)，獲得有關(guān)生物信息。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory基因芯片技術(shù)基本流程圖檢測技術(shù)—基因芯片技術(shù)基因芯片技術(shù)掃描結(jié)果示意圖上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory檢測技術(shù)—Taqman探針技術(shù)Taqman探針技術(shù)：在pcr反應(yīng)系統(tǒng)中加入2種不同熒光標(biāo)記的探針，他們分別與兩個等位基因完全配對。探針的5’端和3’端分別標(biāo)記一個報告熒光基團(tuán)和一個淬滅熒光基團(tuán)。當(dāng)溶液中存在PCR產(chǎn)物時，該探針與模板退火，即產(chǎn)生了適合于核酸外切酶活性的底物，從而將探針5’-端連接的熒光分子從探針上切割下來，破壞兩熒光分子間的PRET，發(fā)出熒光。通常用于少量SNP位點分析。檢測技術(shù)—Taqman探針技術(shù)檢測技術(shù)—測序法Sanger測序仍是目前基因分型的金標(biāo)準(zhǔn)。相對于其他分型技術(shù)具有最高的準(zhǔn)確性，并能檢測新的突變。焦磷酸測序(pyrosequencing)是一種新型的酶聯(lián)級聯(lián)測序技術(shù)，焦磷酸測序法適于對已知的短序列的測序分析上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory檢測技術(shù)—

Sanger雙末端終止法測序1977年，英國人Frederick

Sanger

創(chuàng)建了雙脫氧鏈末端合成終止法（chaintermination

method），簡稱Sanger法、雙脫氧法或酶法。他發(fā)現(xiàn)如果在DNA復(fù)制過程中摻入ddNTP，就會產(chǎn)生一系列末端終止的DNA鏈，并能通過電泳按長度分辨。不同末端終止DNA鏈的長度是由摻入到新合成鏈上隨機(jī)位置的ddNTP決定的。Frederick

Sanger

：1980年因發(fā)明測序技術(shù)獲得諾貝爾化學(xué)獎上海市臨床檢驗中心Shanghai

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LaboratorySanger雙末端終止法測序基本原理是利用DNA聚合酶，以待測單鏈DNA為模板，以dNTP為底物，設(shè)立四種相互獨立的測序反應(yīng)體系，在每個反應(yīng)體系中加

入

不

同

的

雙

脫

氧

核

苷

三

磷

酸

（

dideoxyribonucleosidetriphosphate，ddNTP）作為鏈延伸終止劑。在測序引物引導(dǎo)下，按照堿基配對原則，每個反應(yīng)體系中合成一系列長短不一的引物延伸鏈，通過高分辨率的變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，放射自顯影檢測后，從凝膠底部到頂部按5′→3′方向讀出新合成鏈序列，由此推知待測模板鏈的序列

。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory自動化測序測序流程--ABI測序儀熒光標(biāo)記BigDye

Terminators；美國ABI公司擁有專利四色熒光分別標(biāo)記的起鏈終止劑作用的四種ddNTPs，與四個反應(yīng)管循環(huán)測序反應(yīng)及四個泳道電泳檢測的傳統(tǒng)雙脫氧鏈終止法相比，實現(xiàn)了一個反應(yīng)管完成反應(yīng)與一個電泳道檢測。由于使用了四色熒光分別標(biāo)記了四種ddNTPs，可按照四種不同熒光來分別識別A、T、G、C，因此，可在一個反應(yīng)管中完成循環(huán)測序反應(yīng)，并通過一個電泳道電泳即可完成測序任務(wù)。具有分辨率高、重現(xiàn)性好、靈敏度高、快速和易于實現(xiàn)自動化等優(yōu)點。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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LaboratorySanger測序法基本檢測流程ORTargetregion

PCR

amplification第三部分：質(zhì)量控制上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory質(zhì)量控制藥物代謝酶和藥物作用靶點相關(guān)基因的檢測質(zhì)量控制與保證是個體化醫(yī)學(xué)檢測質(zhì)量保證的核心內(nèi)容，是個體化用藥基因診斷規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化的首要前提。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory質(zhì)量控制

分析前質(zhì)量保證

分析中質(zhì)量保證

分析后質(zhì)量保證上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析前質(zhì)量保證

采樣前準(zhǔn)備

標(biāo)本采集

標(biāo)本的運輸與保存

標(biāo)本的接收與保存上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析前—采樣前準(zhǔn)備

分子診斷項目的申請與完善?

填寫規(guī)范的申請單：包含足夠的信息，識別患者和有資質(zhì)開具申請單的醫(yī)生?

優(yōu)化檢測項目：檢測實驗室應(yīng)加強(qiáng)與臨床醫(yī)生溝通，幫助醫(yī)生合理解釋檢驗結(jié)果，接收合理的反饋意見

患者的正確識別及知情同意?

采集管上患者信息標(biāo)識：通常應(yīng)包括姓名、送檢醫(yī)院及科室、住院號等。采樣前需首先核對確定患者的身份，核實能標(biāo)示患者的信息。?

患者知情同意：告知患者所檢測項目的目的、意義、基本過程、項目可能存在的不足如檢測結(jié)果可能出現(xiàn)與臨床用藥實際不相符的情況、剩余核酸的去向及保存時間，保護(hù)受檢者的個人隱私。

送檢單的填寫與項目的復(fù)核?

申請單需填寫的信息包括：申請的檢測項目、標(biāo)本編號、受檢者姓名、性別、出生日期、民族、采樣日期及時間、標(biāo)本來源（組織類型）、相關(guān)臨床資料（如身高、體重、疾病診斷、疾病分型分期、合并疾病、用藥情況）、采樣單位及科室名稱、送檢醫(yī)師姓名等信息。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析前—標(biāo)本采集按要求建立標(biāo)本采集SOP。人員進(jìn)行系統(tǒng)培訓(xùn)。采樣前應(yīng)對標(biāo)本采集容器進(jìn)行評價，確保容器本身不會干擾測定過程，并保存評估記錄。所用的材料如注射器、棉簽、拭子等應(yīng)為一次性使用，以防止污染。無論采集哪種類型的標(biāo)本，采樣時都必須戴手套，以避免標(biāo)本中病原微生物感染和皮膚脫落細(xì)胞對標(biāo)本的污染。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析前—標(biāo)本采集

全血和骨髓樣本?

一般用EDTA或枸櫞酸鹽抗凝，避免用肝素（抑制PCR反應(yīng)）。?

全血標(biāo)本采集外周靜脈血2~3

mL并置于采血管中。?

如檢測目的是細(xì)胞內(nèi)RNA，建議用含RNA穩(wěn)定劑的采樣管，或采樣后盡快將全血或骨髓加入到RNA穩(wěn)定溶液中

組織標(biāo)本?

新鮮組織和活檢組織：采樣大小取決于組織類型。?

石蠟包埋組織：推薦用10％中性緩沖甲醛溶液固定組織標(biāo)本，避免使用含重金屬離子的固定液如Bouin液等。?

組織切片：用于DNA檢測時，手術(shù)標(biāo)本需提供10

μm厚的石蠟切片4～8張，面積為成人拇指蓋大小；活檢穿刺標(biāo)本提供10

μm厚切片8～10張。

口腔脫落細(xì)胞?

可同時用于DNA和RNA分析。?

口腔拭子，患者清水漱口后，將消毒醫(yī)用棉簽伸進(jìn)口腔，在口腔內(nèi)側(cè)臉頰粘膜處左右反復(fù)擦拭20次左右，取出棉簽，將棉簽置于干凈濾紙上陰干，至少棉簽3根。棉簽立即放入干凈封口塑料袋內(nèi)封閉并放入紙質(zhì)信封，信封上應(yīng)做好詳細(xì)標(biāo)記。濾紙應(yīng)經(jīng)過滅菌處理。漱口標(biāo)本也可作為口腔脫落細(xì)胞的來源。?

用于RNA分析的口腔脫落細(xì)胞必須保存在RNA穩(wěn)定劑中。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析前—標(biāo)本的運輸與保存分子檢測人員應(yīng)熟知標(biāo)本運送與保存的條件要求。標(biāo)本一經(jīng)采集，應(yīng)盡快送到臨檢實驗室。臨檢實驗室應(yīng)制定樣本運輸與保存的SOP。在運送工具的選擇、標(biāo)本的運送和保存環(huán)境等方面應(yīng)嚴(yán)格按規(guī)定執(zhí)行。運送過程中應(yīng)防止盛放標(biāo)本的容器破碎和標(biāo)本丟失，注意標(biāo)本的隔離、封裝、容器的密閉。標(biāo)本應(yīng)標(biāo)明采集的日期和時間、運送時間、實驗室接收時間、實驗室接收時標(biāo)本的溫度。運送條件根據(jù)標(biāo)本類型和待測靶核酸的性質(zhì)而定。DNA分析應(yīng)在采集后8小時內(nèi)送達(dá)實驗室，否則需低溫運送。當(dāng)待測核酸為RNA時，能在10分鐘內(nèi)送達(dá)實驗室的標(biāo)本可室溫運送；如果運送時間較長，則應(yīng)將標(biāo)本置于干冰中，4小時內(nèi)送達(dá)實驗室；如果標(biāo)本中添加了RNA穩(wěn)定劑，則可室溫運送或郵寄。標(biāo)本的長距離運送應(yīng)符合生物安全要求。標(biāo)本運輸人員應(yīng)接受適用于標(biāo)本類型和遠(yuǎn)程運輸?shù)陌踩桶b程序的培訓(xùn)。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析前—標(biāo)本的接收與保存

標(biāo)本的驗收、接受與拒收：

檢查項目包括：申請單的項目填寫、標(biāo)識；申請單有無醫(yī)師簽字；所填項目是否與標(biāo)本所示一致；申請單姓名、科別、門診或住院號；知情同意書；標(biāo)本采集及送檢之間的時間間隔（要求采樣1周以內(nèi)）；檢查標(biāo)本的量和外觀質(zhì)量，血液標(biāo)本的外觀質(zhì)量包括采血管是否密閉、有無溶血、管壁有無破損、標(biāo)本是否有明顯的污染跡象（如開蓋），樣本接收時的溫度，樣本量是否符合要求。

拒收無標(biāo)簽、標(biāo)簽不清晰、采血管破裂、已開蓋、運送時間超過1周的樣本。拒收標(biāo)本時應(yīng)及時與送檢單位聯(lián)系，要求重新采樣或重新送樣。每個接受的合格標(biāo)本均應(yīng)分配一個唯一的標(biāo)識碼。樣本簽收時實行送樣人和收樣人雙簽名制度。

樣本的登記與錄入：樣本簽收后立即登記樣本基本信息，收樣日期和時間，并盡快將標(biāo)本信息錄入實驗室（或醫(yī)院）信息系統(tǒng)，后續(xù)的操作過程及樣本保存均用唯一編號。

標(biāo)本預(yù)處理：部分送檢標(biāo)本到達(dá)實驗室后需進(jìn)行預(yù)處理，如保存于濾紙上的血液標(biāo)本需采用穿孔機(jī)將濾紙上的血斑取下裝入離心管中，用溶解液沖洗浸泡濾紙，搖床上室溫孵育以除去濾紙上的血紅蛋白。甲醛固定石蠟包埋組織在進(jìn)行核酸檢測前需進(jìn)行徹底的脫蠟。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析中質(zhì)量保證

實驗室設(shè)計要求

檢測方法

儀器設(shè)備的使用、維護(hù)與保養(yǎng)

人員培訓(xùn)

檢測體系的性能驗證上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析中質(zhì)量保證—實驗室設(shè)計要求原則上按照《個體化醫(yī)學(xué)檢測質(zhì)量保證指南》的要求進(jìn)行。檢測實驗室應(yīng)按《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增實驗室管理辦法》要求進(jìn)行設(shè)置，并按要求嚴(yán)格控制空氣流向，避免PCR產(chǎn)物污染。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析中質(zhì)量保證—檢測方法方

法優(yōu)

點缺

點適用性通量較高，操作簡單，儀器設(shè)備

探針較昂貴易普及。對相同位點、大樣本標(biāo)本進(jìn)行檢測，可用于mRNA表達(dá)檢測。實時熒光PCR高通量，高靈敏度，可以檢測插

需要特殊儀器設(shè)備。入/缺失突變和未知突變。等位適合于較大樣本、突變比例高于5％的各種類型SNP檢測、甲基化位點的確定。焦磷酸測序基因含量的比例可用于室內(nèi)質(zhì)控。直接獲取序列，分型的金標(biāo)準(zhǔn)，

通量低，不能檢測突變比

各種SNP的檢測，未知突變的篩查以可發(fā)現(xiàn)未知突變。

例小于20％的SNP。

及驗證其他分型的結(jié)果。Sanger測序法PCR-RFLP無需特殊的儀器設(shè)備，成本較低，通量低，只適用于部分SNP

適用于無條件夠買貴重儀器設(shè)備的實實驗過程簡單，可操作性強(qiáng)。

分型

驗室開展小樣本的分型檢測。通量高靈活度低，成本高，需要

適用于具備芯片檢測能力的實驗室對特殊的儀器設(shè)備。

已知固定位點、大樣本標(biāo)本進(jìn)行檢測?；蛐酒ㄔ诩?xì)胞核原位對基因的異常進(jìn)行

成本高，通量低，時間較

適于對基因擴(kuò)增和缺失異常進(jìn)行檢測。原位雜交（FISH）檢測長。分析中質(zhì)量保證—儀器設(shè)備的使用、維護(hù)與保養(yǎng)參考生產(chǎn)商提供的操作說明書編寫書面的、有案可查的預(yù)防性維護(hù)及校準(zhǔn)計劃，確定儀器設(shè)備的維護(hù)周期，建立儀器設(shè)備日常維護(hù)的SOP。對于某些計量分析儀器(如移液器等），應(yīng)依照我國計量法規(guī)定，由計量檢定機(jī)構(gòu)定期進(jìn)行校驗，并保存好校驗證書。加熱系統(tǒng)及冰箱等設(shè)備的維護(hù)包括對溫度進(jìn)行監(jiān)測。儀器維護(hù)過程中要注意清潔劑的使用，每臺儀器應(yīng)該配備專用的清潔工具。在例行儀器的維護(hù)和保養(yǎng)后，應(yīng)填寫儀器維護(hù)保養(yǎng)記錄表。如使用或維護(hù)中發(fā)現(xiàn)問題，應(yīng)及時匯報并將出現(xiàn)的問題詳細(xì)記錄，專業(yè)工程師上門維修，最后由維護(hù)操作人員簽名。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析中質(zhì)量保證—人員培訓(xùn)操作人員需要有一定的專業(yè)技術(shù)知識和經(jīng)驗才能獲得穩(wěn)定可靠的檢測結(jié)果。加強(qiáng)人員培訓(xùn)是確保檢測質(zhì)量的關(guān)鍵。人員培訓(xùn)分為入職培訓(xùn)、內(nèi)部培訓(xùn)和外部培訓(xùn)。掌握和建立安全操作的概念、“防污染”的概念、具備獨立進(jìn)行質(zhì)控活動和儀器維護(hù)的能力，可對試劑和質(zhì)控品的出入庫及使用情況、設(shè)備保養(yǎng)等情況進(jìn)行準(zhǔn)確記錄，進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。定期對實驗室工作人員開展內(nèi)部培訓(xùn)，進(jìn)行處事能力考核和周期性能力再考核。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析中質(zhì)量保證—檢測體系性能驗證定性檢測的性能驗證指標(biāo)主要包括重復(fù)性/精密度、準(zhǔn)確度（突變型的檢測能力）、分析特異性、檢出限等。定量檢測監(jiān)測體系性能驗證的指標(biāo)主要包括準(zhǔn)確度、精密度、線性、可報告范圍、檢出限、參考區(qū)間、靈敏度、特異性等。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析后質(zhì)量保證

檢測報告、解釋及報告發(fā)放

檢測后樣本的保存和處理上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析后質(zhì)量保證—檢測報告、解釋及報告發(fā)放檢測報告的內(nèi)容及要求檢測結(jié)果的解釋檢測結(jié)果的報告流程與發(fā)放檢測后咨詢服務(wù)上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析后質(zhì)量保證—檢測報告的內(nèi)容及要求

報告單要求有統(tǒng)一的格式和內(nèi)容，報告應(yīng)包含：醫(yī)療機(jī)構(gòu)或?qū)嶒炇颐Q、項目名稱、標(biāo)本編號或條碼、送檢單位及（或）科室名稱、患者信息（姓名、性別、年齡）、標(biāo)本類型、標(biāo)本采集與接收時間、送檢醫(yī)生姓名、疾病診斷、報告單出具的時間、標(biāo)本處理過程、檢測方法和主要設(shè)備、檢測過程、檢測結(jié)果并附相關(guān)圖表、結(jié)果解釋、用藥方案建議、檢測的局限、必要的參考文獻(xiàn)、檢測人員、審核人員和復(fù)核人員簽字、結(jié)果報告日期和備注，檢測單位聯(lián)系信息。

檢測結(jié)果應(yīng)以清晰易讀且易被醫(yī)師和患者理解的形式進(jìn)行報告，報告單上應(yīng)采用標(biāo)準(zhǔn)化的基因命名和計量單位。定量檢測應(yīng)注明參考區(qū)間、檢測方法的線性或測定范圍；定性檢測可直接寫基因型、基因擴(kuò)增有或無、微衛(wèi)星不穩(wěn)定的程度（低、中、高）、甲基化有無等。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析后質(zhì)量保證—檢測結(jié)果的解釋根據(jù)個體的遺傳信息調(diào)整用藥劑量，以增加藥物療效，減少藥物不良反應(yīng)的發(fā)生。

藥物劑量的調(diào)整往往需根據(jù)隨機(jī)對照臨床研究的結(jié)果；對目前缺乏隨機(jī)對照臨床研究的遺傳變異，可依據(jù)基因型對藥物藥代動力學(xué)曲線下面積影響的大小估算用藥劑量；當(dāng)一個藥物的反應(yīng)性受多個基因或基因與環(huán)境因素間相互作用影響時，可根據(jù)國內(nèi)國際大規(guī)模臨床試驗推導(dǎo)出的、納入了個體基因型及其他因素的用藥劑量計算公式確定用藥劑量。根據(jù)個體的遺傳信息確定用藥的種類，避免應(yīng)用針對特定基因型個體無效或可能產(chǎn)生嚴(yán)重藥物不良反應(yīng)的藥物。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析后質(zhì)量保證—檢測結(jié)果的報告流程與發(fā)放

首先要對檢測結(jié)果報告進(jìn)行審核分析，包括審核檢測過程的有效性，受檢者的基本信息，結(jié)果數(shù)據(jù)分析。審核者應(yīng)當(dāng)是主管技師以上的工作人員、本專業(yè)實驗室負(fù)責(zé)人、高年資檢驗人員和臨床實驗室主任授權(quán)人，審核者對檢驗報告的質(zhì)量負(fù)責(zé)。

應(yīng)建立檢測報告單發(fā)出和管理制度。明確檢測結(jié)果報告發(fā)放的程序和責(zé)任，設(shè)定并公示檢測結(jié)果報告時間，報告時間是指從接受送檢標(biāo)本起，到檢測結(jié)果發(fā)放的時間。應(yīng)制定個體化用藥基因檢測數(shù)據(jù)管理制度，數(shù)據(jù)中應(yīng)錄入患者信息和檢驗數(shù)據(jù)；檢測數(shù)據(jù)的修改必須征得報告結(jié)果簽發(fā)人員同意后，由操作人員進(jìn)行修改；所有檢測報告和原始記錄應(yīng)當(dāng)歸檔保存，實驗室信息系統(tǒng)數(shù)據(jù)至少要拷貝3份并保存在不同的地方，以便日后核對。

一般檢驗報告單和檢測結(jié)果數(shù)據(jù)至少保存兩年；室內(nèi)質(zhì)控和參加室間質(zhì)量評價的記錄和質(zhì)控信息至少保存兩年；儀器狀態(tài)和維修記錄要保留到儀器使用終身。檢測結(jié)果的查詢通?？筛鶕?jù)患者姓名、標(biāo)本編號、檢測項目和送檢日期進(jìn)行查詢。分析后質(zhì)量保證—檢測后樣本的保存和處理

樣本完成檢測后要進(jìn)行一定時間的保留，以備必要時復(fù)查。

標(biāo)本的保存也可為科研工作的開展和回顧性調(diào)查提供條件。完成檢測后剩余的DNA樣本至少在-20℃保存2年。DNA在-70℃的環(huán)境下可保存至少7年。純度不高的DNA樣品建議保存在-20℃或更低的溫度中，以確保DNA的完整性。在不影響受檢者個人隱私及利益的前提條件下，DNA及臨床資料也可匿名用于科學(xué)研究，但需在知情同意書中明確。

廢棄的樣本應(yīng)作為生物危險品處置。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory分析后質(zhì)量保證—檢測后咨詢服務(wù)個體化醫(yī)學(xué)分子診斷實驗室應(yīng)配備相關(guān)資質(zhì)、取得國家衛(wèi)生計生委個體化醫(yī)學(xué)檢測培訓(xùn)基地培訓(xùn)合格證的個體化用藥咨詢?nèi)藛T，對檢測項目提供咨詢服務(wù)，負(fù)責(zé)對檢測報告在臨床上出現(xiàn)的各種情況進(jìn)行解釋和檢后服務(wù)。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory質(zhì)量保證室內(nèi)質(zhì)量控制室間質(zhì)量評價上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory室內(nèi)質(zhì)控室內(nèi)質(zhì)量控制（IQC）是實驗室質(zhì)量管理體系的一個重要環(huán)節(jié)。通過對已知陰性和弱陽性質(zhì)控品進(jìn)行檢測，由實驗室內(nèi)部連續(xù)自評價本實驗室檢測結(jié)果的可靠程度，判斷檢驗報告是否可發(fā)出。在每次檢測時，結(jié)合試劑要求設(shè)立試劑對照、陰性質(zhì)控、陽性質(zhì)控，并且將質(zhì)控樣本與待測樣本同步檢測。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory室內(nèi)質(zhì)控—華法林項目包含3個基因位點：CYP2C9*2、*3及VKORC1(-1639

)陰性質(zhì)控：野生型樣本或ddH2O陽性樣本：留樣標(biāo)本或含特定突變質(zhì)?；蚣?xì)胞株陽性質(zhì)控樣本無需在每次檢測中都包括所有的突變位點，可根據(jù)需要設(shè)立針對1-2個位點的對照。但實驗室應(yīng)設(shè)有多個突變的質(zhì)控品，在不同批次檢測中輪流更換使用。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory室內(nèi)質(zhì)控—華法林項目如使用質(zhì)粒作為質(zhì)控品，則無法監(jiān)控核酸提取過程。純化后的核酸可以使用凝膠電泳對其完整性進(jìn)行評價提取濃度和純度可以使用紫外分光光度計，通過A260讀數(shù)確定濃度，A260/A280比率判定核酸純度。上海市臨床檢驗中心Shanghai

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Laboratory目前開展個體化用藥檢測項目室間質(zhì)評序號

開展項目涉及藥物相關(guān)基因位點分型*2(681)rs4244285

A>G*3(636)rs4986893

A>G氯吡格雷（Clopidogrel）藥物相關(guān)基因檢測12CYP2C19*17

rs12248560

C>T*2(430)

rs1799853

C>T*3(1075)

rs1057910

A>CCYP2C9華法林藥（Warfarin）物相關(guān)基因檢測VKORC1CYP3A5(-1639G>A)rs9923231*3

(698G>