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做中藥研究,你能幫我做什驗(yàn)技術(shù)的限制,沒能有5分以上的文章。中藥研究中,大道至簡(jiǎn),總結(jié)一句話就是“藥物E通過調(diào)控A影響B(tài)信號(hào)通C疾病是我們研究人員自己定的,藥物E也是我們研究人員自己定的。那么研究什么呢,最重要的就是A了。藥物下游發(fā)揮功能的,也就是藥靶。所以,我們的方案,就是尋找這個(gè)A-藥物的藥靶。中藥功能研究方案(腫瘤方向?yàn)樯哆@里不說確定檢測(cè)指標(biāo)呢,因?yàn)檫@個(gè)不用說呀,藥物治療就是腫瘤細(xì)胞為最同的藥物不同的細(xì)胞,IC50是不同的。高要求,必須在后續(xù)使用的工具細(xì)胞上進(jìn)行IC50檢測(cè)。是3組),CCK8檢測(cè)藥物抑制細(xì)胞增殖情況,連續(xù)檢測(cè)4天。這個(gè)步驟是從藥是做4V4。為啥組內(nèi)做4張呢,3張不就有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義了嗎。大家注意,高要“rubbishinrubbishout”,數(shù)據(jù)基本沒啥用了。為確保做了就一定能有東西,組內(nèi)43個(gè)這一步很多人有疑問。比如我做肺癌,A在肝癌中過,但在肺癌中沒報(bào)以防癌嗎”里面的6分范文)。如果在其他腫瘤也沒過,我重點(diǎn)就先落從分析的中,選取加藥后下降的30個(gè)。為啥選擇下降的,因?yàn)榧铀幒蠹?xì)具也可以用cas9-SAM進(jìn)行過表達(dá)高通量功能篩選。不過,風(fēng)險(xiǎn)大些,您的經(jīng)費(fèi)要多三、候選功能篩選取的30個(gè),采用QPCR技術(shù),在加藥細(xì)胞與對(duì)照細(xì)胞間進(jìn)行檢測(cè)。確保進(jìn)入后續(xù)的是加藥后下降的。這里選擇20個(gè)進(jìn)入下游。這里的操作工具是慢介導(dǎo)的RNA干擾。每個(gè)設(shè)計(jì)3條以上片段,3個(gè)片段混合包裝成慢(MIX)。RNAi-MIX進(jìn)入下游。有老師問,為什么不把這20個(gè)的有效片段檢測(cè)出來后,用單獨(dú)的有效片段去個(gè)細(xì)節(jié)。一般我們20個(gè)篩選,陽性率為10%,會(huì)獲得2個(gè)陽性。如果我一這算不算商業(yè)呀)。注意,RNA干擾在沒有獲諾貝兒獎(jiǎng)之前,商業(yè)化提供服務(wù)的時(shí)候就,一個(gè)設(shè)計(jì)3個(gè)靶點(diǎn),至少有一個(gè)靶點(diǎn)是有效的。所以,MIX用來進(jìn)步驟。在這一步,我們獲得了,MIX干擾后細(xì)胞增殖受到抑制的。這個(gè)CCK8、BrdU、細(xì)胞凋亡、caspase3/7markerWB檢測(cè)、中,至少有3個(gè)實(shí)驗(yàn)是陽性的,才算OK。如果不OK,返回高通量功能篩選,重新PS:希望和在學(xué)習(xí)、實(shí)驗(yàn)上有交流的朋友們,可以關(guān)注

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