分子生物學(xué)復(fù)習(xí)題及答案

分子生物學(xué)復(fù)習(xí)題及答案一.病毒癌基因與細(xì)胞癌基因的比較？①C-onc是一個(gè)含有內(nèi)含子的真核結(jié)構(gòu)基因，v-onc不含內(nèi)含子?？冖趘-onc出現(xiàn)堿基取代或缺失較c-onc常見，因此表達(dá)產(chǎn)物功能有差異?？冖踲-onc的外顯子與同源c-onc也略有不同。v-onc表達(dá)的蛋白具有較強(qiáng)的細(xì)胞轉(zhuǎn)化活性性，c-onc的產(chǎn)物正調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖。二.細(xì)胞癌基因的特點(diǎn)？口①它廣泛存在于生物界，從酵母到人類細(xì)胞。②該基因序列在進(jìn)化中高度保守?？冖踓-onc是生命活動(dòng)的基礎(chǔ)，與細(xì)胞增殖分化密切相關(guān)，其表達(dá)與個(gè)體發(fā)育有關(guān)，受到嚴(yán)格程序調(diào)控，但并不具有致癌性。④一些物理、化學(xué)和感染因素可以激活原癌基因。腎素-血管緊張素對(duì)高血壓的影響？腎素-血管緊張素系統(tǒng)（ras）由腎素、血管緊張素原、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶、血管緊張素及其相應(yīng)的受體構(gòu)成。腎素激活從肝臟產(chǎn)生的血管緊張素原，生成血管緊張素i,然后經(jīng)肺循環(huán)的轉(zhuǎn)化酶（ace）生成血管緊張素ii。作用于血管緊張素ii受體，使小動(dòng)脈平滑肌收縮，刺激腎上腺皮質(zhì)球狀帶分泌醛固酮，通過交感神經(jīng)未梢突觸前膜的正反饋使去甲腎上腺素分泌增加，從而導(dǎo)致血壓升高。六.細(xì)胞型和搔癢型的區(qū)別？細(xì)胞型（正常PrPC）和瘙癢型（致病性PrPSc）。這兩種蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)完全相同，共價(jià)鍵沒有變化，差異在于三級(jí)結(jié)構(gòu)。主要表現(xiàn)為螺旋和折疊的含量不同。PrPca-螺旋占42%,B-折疊占3%,而PrPSca-螺旋占30%,B-折疊增加45%,這意味著PrPc分布在組織和細(xì)胞表面，如大腦，而PrPSc存在于細(xì)胞內(nèi)的亞極性酶體中。九pBR322和PUC18/19的結(jié)構(gòu)特征？口①含有兩個(gè)抗生素抗性基因：氨芐青霉素基因，四環(huán)素基因；具有較小分子量，容易純化；具有較高的拷貝數(shù)；復(fù)制起始點(diǎn),保證高拷貝自我復(fù)制。②來源pBR322材料復(fù)制起點(diǎn)；雖然含有ampr基因，但其核苷酸序列發(fā)生變化，不含酶消化位點(diǎn)；含半乳糖苷酶基因的啟動(dòng)子及其編碼方法a-肽鏈DNA序列，又稱lacZ基因。lacZ基因5,端附近有一個(gè)多克隆位點(diǎn)（MCS片段），影響其功能。10、限制性內(nèi)切酶的發(fā)明者、定義、命名、切割產(chǎn)物和修飾酶？①弗諾，史密斯，內(nèi)森。口②限制性核酸內(nèi)切酶（re）是識(shí)別dna的特異序列，并在識(shí)別位點(diǎn)或其周圍切割雙鏈dna的一類核酸內(nèi)切酶，簡(jiǎn)稱為限制性內(nèi)切酶?？冖鄣谝粋€(gè)字母取自產(chǎn)生酶的細(xì)菌的屬名，大寫；第二個(gè)和第三個(gè)字母是細(xì)菌的物種名稱，小寫；第四個(gè)字母代表植物；最后，羅馬數(shù)字被用來表示發(fā)現(xiàn)的順序。④切割產(chǎn)品：粘性端和鈍端。⑤修飾酶：未端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（tdt），堿性磷酸酶，多聚核苷酸激酶（pnp），核糖核核糖核酸酶，脫氧核糖核酸酶。十二.轉(zhuǎn)化：重組載體導(dǎo)入原核細(xì)胞的過程。轉(zhuǎn)染：重組載體導(dǎo)入真核細(xì)胞的過程。感染：病毒載體導(dǎo)入細(xì)胞的過程。十三.藍(lán)白斑篩選法？載體PUC18/19包含：B-半乳糖苷酶基因（lacZ）的調(diào)控序列及其N端146AAa-肽編碼區(qū)；外源DNA克隆位點(diǎn)MCS位于其中并保留了a-肽功能；在B—半糖苷酶基因缺失突變體中轉(zhuǎn)化，由于質(zhì)粒表達(dá)a-肽可以補(bǔ)充缺失的菌株a-肽，因此它們編碼活性B-半乳糖苷酶催化半乳糖的分解。加入B—半乳糖苷酶基因表達(dá)誘導(dǎo)劑IPTGB-半乳糖苷）和底物X-半乳糖苷（5溴4氯3吲哚B-半乳糖苷），分解產(chǎn)物產(chǎn)生藍(lán)色菌落。被稱為a-互補(bǔ)效應(yīng)。當(dāng)MCS插入外源DNA片段時(shí)，B-半乳糖苷酶基因失活，不能產(chǎn)生a-肽，即沒有轉(zhuǎn)錄活性的B-半乳糖苷酶，在添加誘導(dǎo)劑和底物的平板上沒有藍(lán)色菌落，只有白色菌落。這被稱為插入失活。十八DNA印跡、RNA印跡和pro印跡的異同點(diǎn)是什么？DNA印跡和RNA印跡的區(qū)別：□①變性：rna電泳前加熱變性，電泳時(shí)加變性劑保持rna處于變性狀態(tài)；dna電泳后口變性②轉(zhuǎn)膜：rna轉(zhuǎn)膜前不需要變性和中和處理；dna轉(zhuǎn)膜前需要堿變性和中和處理。③限制性內(nèi)切酶：rna不需要內(nèi)切酶切割。④靶核酸：rna；dnM蛋白質(zhì)印跡法不同于DNA和RNA,因?yàn)榈鞍踪|(zhì)轉(zhuǎn)移只能通過電轉(zhuǎn)移完成。此外，蛋白質(zhì)檢測(cè)以抗體為探針，然后與堿性磷酸酶、辣根過氧化物酶或同位素標(biāo)記的第二抗體反應(yīng)。最后，通過放射自顯影、底物顯色或底物發(fā)光顯示靶蛋白的存在和位置。十九.基因組文庫和cdna文庫的比較？□基因組文庫：由某一生物DNA序列的不同DNA片段構(gòu)成的一組，即克隆足夠多的基因或某一基因的總和，包括外顯子和非表達(dá)功能性內(nèi)含子序列。步驟：①純化真核細(xì)胞dna,并用適當(dāng)?shù)南拗泼覆糠窒诜蛛x適當(dāng)大小的基因組片段口③用合適的限制性內(nèi)切酶消化和分離載體DNA,獲得載體④載體與基因組DNA片段相連⑤體外包裝與感染⑥基因組文庫的擴(kuò)增。構(gòu)成了該生物的基因組文庫。□CDNA文庫：通過反轉(zhuǎn)錄生物體所有mRNA合成的CDNA序列的克隆群體。cDNA文庫中的每個(gè)克隆只包含一個(gè)mRNA信息。步驟：□①從生物體或細(xì)胞中提取mrna，mrna具有尾巴結(jié)構(gòu)，應(yīng)用寡聚dt互補(bǔ)配對(duì)，純化口信使核糖核酸②利用逆轉(zhuǎn)錄酶以寡聚（dt）或隨機(jī)寡聚核苷酸為引物合成cdna的第一條鏈。③利用dna聚合酶i,以cdna第一條鏈為模板，用適當(dāng)引物，即可合成第二條鏈。④cdna與載體的體外連接，cdna不含基因的啟動(dòng)子和內(nèi)含子，因而序列比基因短，其口克隆載體可以是質(zhì)?；虿《据d體⑤轉(zhuǎn)基因與核移植技術(shù)在宿主細(xì)胞中擴(kuò)增的比較？“克隆”和“轉(zhuǎn)基因”之間最大的不同是前者紋絲不動(dòng)地保留了原來的遺傳性狀，而后者則改變了原來的遺傳性狀?？寺∈菬o性繁殖，克隆動(dòng)物是不經(jīng)過生殖細(xì)胞而直接由體細(xì)胞獲得的新個(gè)體；而轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和普通動(dòng)物的區(qū)別只在于受精卵或胚胎干細(xì)胞中轉(zhuǎn)入另外的基因。二十一.基因敲除技術(shù)基本步驟？①構(gòu)建與靶基因同源的載體口②通過電穿孔和顯微注射將重組DNA轉(zhuǎn)移到受體的細(xì)胞核中。③將篩選出的細(xì)胞插入受精卵或胚胎中。④雜交育種口二十三.簡(jiǎn)述基因工程的基本步驟？①目的基因的獲取口②向量的構(gòu)造③目的基因與載體的連接成重組體④重組體導(dǎo)入宿主細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增⑤克隆基因的篩選和鑒定特拉科薩-。camp蛋白激酶A通路的組成及其傳遞過程？口組成要素：胞外信息分子（第一信使）、膜受體、g蛋白、腺苷酸環(huán)化酶、第二信使一camp蛋白激酶a口傳遞過程：激素作為細(xì)胞外信息分子（第一信使）及其相應(yīng)的靶細(xì)胞膜受體，催化GS的GDP和GTP的交換，導(dǎo)致GS的一個(gè)亞單位從br中分離。作為GTP發(fā)布；由于GTP激活腺苷酸環(huán)化酶，催化ATP轉(zhuǎn)化為camp,并增加細(xì)胞中的camp；Camp通過變構(gòu)激活激活Camp依賴性蛋白激酶（PKA）,使靶蛋白磷酸化并實(shí)現(xiàn)其調(diào)節(jié)。二十五。PKA營地的功能？□camp—pka的作用主要表現(xiàn)在對(duì)代謝的調(diào)節(jié)作用和對(duì)基本表達(dá)的調(diào)節(jié)作用。對(duì)代謝的調(diào)節(jié)作用主要表現(xiàn)在糖代謝方面：①使糖原合酶磷酸化，抵制糖原合成口②將糖原磷酸化酶B轉(zhuǎn)化為活性糖原磷酸化酶a并促進(jìn)糖原分解?！鯇?duì)基因表達(dá)的調(diào)節(jié)：當(dāng)pka的催化亞基進(jìn)入細(xì)胞核后，可催化反式作用因子一crebr（camp應(yīng)答元件結(jié)合蛋白）中特定的絲氨酸/蘇氨酸殘基磷酸化，磷酸化的creb形成同源二聚體，與dna上cre（camp應(yīng)答元件）結(jié)合，從而激活基因轉(zhuǎn)錄。二十A.jak—stat途徑基本要素及傳遞過程？基本元素：細(xì)胞外信息分子、非催化受體、JAK、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激動(dòng)劑口基本過程：細(xì)胞因子或生長因子+r-受體二聚化fjak-stat-基因轉(zhuǎn)錄活性改變一細(xì)胞生理功能改變?nèi)?噬菌體的結(jié)構(gòu)及其特點(diǎn)？噬菌體是一種可以在體外包裝的細(xì)胞病毒。它能有效感染細(xì)菌細(xì)胞并克隆中等長度的DNA片段。入噬菌體DNA約50kb長，是一種線性雙鏈DNA分子。每條鏈都有一個(gè)12bp長的單鏈互補(bǔ)端，稱為cos序列。進(jìn)入宿主細(xì)胞后，通過粘性端配對(duì)循環(huán)。特點(diǎn)：□①本身有復(fù)制體系;②中間區(qū)域（j-n）為入，非必需區(qū)域可被其他外源DNA替換；□③入dna在體外可包裝成病毒顆粒,感染效率高;④載體容量大,可裝入大片段外源dna（20kb）;①可人工加入多克隆位點(diǎn);②篩選容易一一噬菌斑篩選;□三十一?；魜y與信號(hào)傳導(dǎo)的關(guān)系？霍亂毒素進(jìn)入小腸上皮細(xì)胞以后直接作