液相色譜概論

液相色譜分析

主講:文娜新疆分析測(cè)試中心0991-383592113899992951講課提綱一、色譜法基礎(chǔ)二、液相色譜儀組成及工作原理三、液相色譜固定相和流動(dòng)相四、液相色譜儀定性、定量方法五、液相色譜操作條件的選擇第一章色譜基礎(chǔ)本章內(nèi)容：液相色譜發(fā)展史液相色譜的基本概念影響峰形擴(kuò)展的因素固定相——CaCO3顆粒流動(dòng)相——石油醚

色帶第一節(jié)色譜的發(fā)展史一、起源二、色譜的發(fā)展：30～40年代發(fā)展了柱分配色譜、紙色譜50年代發(fā)展了氣相色譜、薄層色譜60年代發(fā)展了高效液相色譜法高效液相色譜法（HPLC)是在氣相色譜和經(jīng)典色譜的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的，是一種以液體做流動(dòng)相的新色譜技術(shù)。從分析原理上講，現(xiàn)代液相色譜和經(jīng)典液相色譜沒有本質(zhì)的區(qū)別。不同點(diǎn)僅僅是現(xiàn)代液相色譜比經(jīng)典液相色譜有較高的效率和實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化

操作。經(jīng)典的液相色譜法，流動(dòng)相在常壓下輸送，所用的固定相柱效低，分析周期長(zhǎng)。而現(xiàn)代液相色譜法引用了氣相色譜的理論，流動(dòng)相改為高壓輸送（最高輸送壓力可達(dá)4.9107Pa）;色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成，從而使柱效大大高于經(jīng)典液相色譜（每米塔板數(shù)可達(dá)幾萬(wàn)或幾十萬(wàn)）；同時(shí)柱后連有高靈敏度的檢測(cè)器，可對(duì)流出物進(jìn)行連續(xù)檢測(cè)。因此，高效液相色譜具有分析速度快、分離效能高、自動(dòng)化等特點(diǎn)。所以人們稱它為高壓、高速、高效或現(xiàn)代液相色譜法。三、液相色譜分離原理及分類和氣相色譜一樣，液相色譜分離系統(tǒng)也由兩相——固定相和流動(dòng)相組成。液相色譜的固定相可以是吸附劑、化學(xué)鍵合固定相（或在惰性載體表面涂上一層液膜）、離子交換樹脂或多孔性凝膠；流動(dòng)相是各種溶劑。被分離混合物由流動(dòng)相液體推動(dòng)進(jìn)入色譜柱。根據(jù)各組分在固定相及流動(dòng)相中的吸附能力、分配系數(shù)、離子交換作用或分子尺寸大小的差異進(jìn)行分離。色譜分離的實(shí)質(zhì)是樣品分子（以下稱溶質(zhì)）與溶劑（即流動(dòng)相或洗脫液）以及固定相分子間的作用，作用力的大小，決定色譜過(guò)程的保留行為。按分離機(jī)制分：

分配色譜法

吸附色譜法

離子交換色譜法體積排阻色譜法親合色譜法化學(xué)鍵合相色譜法

正相分配色譜反相分配色譜按分離過(guò)程物理化學(xué)原理分類的各種液相色譜法的比較

吸附色譜分配色譜離子色譜體積排阻色譜親和色譜固定相

全多孔固體吸附劑

固定液載帶在固相基體上

高效微粒離子交換劑

具有不同孔徑的多孔性凝膠

多種不同性能的配位體鍵聯(lián)在固相基體上

流動(dòng)相

不同極性有機(jī)溶劑

不同極性有機(jī)溶劑和水

不同pH值的緩沖溶液

有機(jī)溶劑或一定pH值的緩沖溶液

不同pH值的緩沖溶液，可加入改性劑

分離原理

吸附與解吸

溶解與揮發(fā)

可逆性的離子交換

多孔凝膠的滲透或過(guò)濾

具有鎖匙結(jié)構(gòu)絡(luò)合物的可逆性離解

液相色譜與氣相色譜的比較液相色譜所用基本概念：保留值、塔板數(shù)、塔板高度、分離度、選擇性等與氣相色譜一致。液相色譜所用基本理論：塔板理論與速率方程也與氣相色譜基本一致。但由于在液相色譜中以液體代替氣相色譜中的氣體作為流動(dòng)相，而液體和氣體的性質(zhì)不相同；此外，液相色譜所用的儀器設(shè)備和操作條件也與氣相色譜不同，所以，液相色譜與氣相色譜有一定差別，主要有以下幾方面：四、高效液相色譜法的特點(diǎn)分離效能高

柱效可達(dá)2×103～5×104塊/m理論塔板數(shù)，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于氣相色譜填充柱103塊/m理論塔板數(shù)的柱效選擇性高可分析不同類型的有機(jī)化合物及其同分異構(gòu)體，還可分析在性質(zhì)上極為相識(shí)的旋光異構(gòu)體檢測(cè)靈明度高紫外檢測(cè)器最小檢出量可達(dá)10-9g;熒光檢測(cè)器最小檢出量可達(dá)10-12g。分析速度快相對(duì)經(jīng)典液相色譜，分析時(shí)間大大縮短。第二節(jié)色譜基本理論

定性參數(shù)定量參數(shù)柱效參數(shù)分離參數(shù)一、色譜參數(shù)續(xù)前

（一）色譜流出曲線和色譜峰1．色譜流出曲線是由檢測(cè)器輸出的電信號(hào)強(qiáng)度對(duì)時(shí)間作圖所繪制的曲線，又稱為色譜圖。2．基線是在操作條件下，沒有組分流出時(shí)的流出曲線。一、色譜流出曲線和有關(guān)概念

二、定性參數(shù)（一）保留值1．保留時(shí)間(retentiontime；tR)

是從進(jìn)樣到某組分在柱后出現(xiàn)濃度極大時(shí)的時(shí)間間隔，即從進(jìn)樣開始到某個(gè)組分的色譜峰頂點(diǎn)的時(shí)間間隔。2．死時(shí)間(deadtime；t0)

是分配系數(shù)為零的組分，即不被固定相吸附或溶解的組分的保留時(shí)間。

3．調(diào)坐整保分留時(shí)蒙間(ad縮慧ju立st詳ed演r憲et隊(duì)en映ti舞on盡t描im窮e；)4．保出留體橫積(re泛te告nt俘io堡n森vo蔥lu沈me；VR)是從臭進(jìn)樣慮開始保到某脾個(gè)組獄分在誕柱后出現(xiàn)艘濃度蘋極大靜時(shí)，恨所需難通過(guò)錫色譜錦柱的流動(dòng)頸相體宮積。2．半什峰寬(pe云ak足w課id剛th烤a熟t郊ha嶼lf矮h通ei甩gh膽t；W1/城2)是峰而高一哨半處禾的峰參寬。W1/勻2=2德.3味55σ3．峰寬(pe脖ak能w青id孕th；W)是通目過(guò)色揀譜峰渠兩側(cè)森拐點(diǎn)起作切際線在逃基線價(jià)上所蹤蝶截得遣的距劫離。W=4σ或W=1鋒.6斑99W1/炸2四、分離納參數(shù)若R=1，兩峰包基本柱分開。若R=1功.5，兩峰主完全登分開(基線兩分離)。2.基本災(zāi)分離書方程歪式（1）柱著色譜a項(xiàng)取席決于矮柱效，n↑注，a項(xiàng)↑b、襖c項(xiàng)相含關(guān)在GC中：b項(xiàng)主較要受腔色譜蹤蝶柱性炎質(zhì)影蔽響c項(xiàng)主間要受際柱溫圖影響在HP權(quán)LC中：b項(xiàng)主煙要取復(fù)決于揪流動(dòng)汽相的完種類c項(xiàng)主兵要取嶺決于疏流動(dòng)票相的牢配比3．容運(yùn)量因漠子(ca扮pa野ci顫ty肝f潤(rùn)ac斃to贈(zèng)r；k)組分?jǐn)[在固扎定相雀和流當(dāng)動(dòng)相廳中的含量(m)之比士。（一虎）影葬響板值高因壟素的添討論1．渦倚流擴(kuò)憂散(ed嶺dy般d詢if頑fu舉si血on歪)也稱犬為多叛徑擴(kuò)細(xì)散。A=2dp---腎--填充神不規(guī)子則因像子dp--桶--填料(固定易相)顆粒嫩的平粱均直翠徑二、絨液相潔色譜加法速刺率理輸論（一遼）Gi餓dd日in留gs液相統(tǒng)色譜龍速率涂方程遮式Gi扭dd貝in秒gs與Sn灑yd贈(zèng)er等人阿提出貫的液索相色悲譜速辯率方拔程式貫：H=He+Hd+Hm+Hsm+Hs或：H=A+B/u+Cmu+Csmu+Csu討論吼：1.流動(dòng)昨相流報(bào)速與方板高渴的關(guān)泳系H=A+Cuu∝H2.渦流畏擴(kuò)散編項(xiàng)A=2λdp采用絲式小粒稼度、隆球形懶固定丸相。消常用3～出10μm的填草料。株勻漿灰法裝禮柱。3.傳質(zhì)稻阻抗耍系數(shù)在液叛相中胳，采葬用化份學(xué)鍵賠合相妙，“塘固定駕液”碌只是朽在載伍體表甜面的題一層賤單分壤子層危，因李此，爬在液店相中悠的傳吐質(zhì)阻息抗可誼以忽格略。悶則：H=A+Cmu+Csmu4.傳質(zhì)蝕阻抗演對(duì)板宮高的灘影響①Cm及Csm都與暮固定迫相的就粒徑粘平方dp2成正絕比，磚與擴(kuò)釘散系含數(shù)Dm成方臥比。眨因此態(tài)，采雞用小砍粒度傭固定鵲相及丙低粘墨度流透動(dòng)相狡。②高柱柱溫可講以增欣大Dm，但是貓，有殿機(jī)溶厲劑為漲流動(dòng)孔相時(shí)申，容雜易產(chǎn)幟生氣提泡，租因此躲，一鉛般采纏用室灣溫。（二旁）柱屑外效伶應(yīng)色譜槳峰展糠寬的葬總方科差，明等于門柱內(nèi)夠、柱戶外及縣其他輛獨(dú)立甩因素著的方監(jiān)差和狗：2.柱外飛峰展狗寬（狐柱外烈效應(yīng)窮，σ外）一、濤影響恩分離浩的因丑素（fa走ct住or醋s謎in導(dǎo)fl充ue晴nc日ed慨s相ep行ar節(jié)at膏io預(yù)n）1.影響分離科的因唇素與估提高爛柱效襲的途氏徑在高催效液帝相色蒜譜中,液體椅的擴(kuò)醒散系膀數(shù)僅衫為氣室體的橋萬(wàn)分度之一，墳則速挎率方嘴程中交的分件子擴(kuò)勞散項(xiàng)B/大U較小秒，可斗以忽僑略不紫計(jì)，即：H=捆A+殺Cu故液兼相色霧譜H-拳u曲線填與氣嘩相色戒譜的陷形狀驕不同劈燕，如降圖所拔示。2.流速流速預(yù)大于0.鄰5cm案/s時(shí),H～u曲線是一緞段斜車率不宴大的乖直線遙。降議低流速，浸柱效阿提高冤不是掘很大遺。但頃在實(shí)糕際操作艘中，泊流量薄仍是鼻一個(gè)伶調(diào)整腿分離北度和出疲峰時(shí)兵間的會(huì)重要手可選揪擇參臂數(shù)。3.固定泄相及兆分離惕柱氣相沈色譜刻中的位固定奇液原鹿則上撿都可舅以用執(zhí)于液強(qiáng)相色健譜，擁其選憐用原初則與博氣相書色譜校一樣杰。但引在高齒效液黨相色蘿譜中墾，分忙離柱倆的制混備是頌一項(xiàng)薄技術(shù)茫要求望非常微高的扯工作液，一標(biāo)般很團(tuán)少自凝行制紙備。第二簡(jiǎn)章HP民LC儀器鋸的簡(jiǎn)賠介及腎工作示原理本章棄內(nèi)容出：往復(fù)打式活溝塞泵灰的結(jié)責(zé)構(gòu)及廟工作爽原理手動(dòng)冊(cè)精樣圣器（翁六通露閥）涌結(jié)構(gòu)秧及工晝作原掙理常見勝檢測(cè)它器檢雹測(cè)的形原理第一窄節(jié)閉高起效液隔相色置譜儀高效球液相來(lái)色譜能儀由高壓征輸液混系統(tǒng)系、進(jìn)病樣系振統(tǒng)、斷分離總系統(tǒng)狀、檢爹測(cè)系隊(duì)統(tǒng)、愚記錄片系統(tǒng)等五叢大部嘴分組李成（參見圖溪）。分析項(xiàng)前，男選擇種適當(dāng)潛的色植譜柱績(jī)和流托動(dòng)相裂，開兆泵，倚沖洗談柱子檔，待駕柱子必達(dá)到詠平衡派而且叫基線涼平直敵后，轉(zhuǎn)用微掛量注累射器渣把樣冰品注鎖入進(jìn)剃樣口嘴，流割動(dòng)相擊把試權(quán)樣帶肆入色博譜柱絨進(jìn)行語(yǔ)分離燃，分諒離后晃的組上分依巷次流祥入檢落測(cè)器齡的流渣通池求，最甚后和銅洗脫天液一痰起排來(lái)入流贏出物購(gòu)收集向器。根當(dāng)有甲樣品直組分夠流過(guò)性流通拔池時(shí)華，檢釘測(cè)器惠把組辛分濃欲度轉(zhuǎn)仁變成替電信漠號(hào)，扎經(jīng)過(guò)鋸放大亞，用萌記錄膏器記目錄下農(nóng)來(lái)就翠得到頑色譜素圖。歇色譜鴨圖是脖定性用、定胖量和甲評(píng)價(jià)哨柱效卡高低綢的依掘據(jù)。HP低LC結(jié)構(gòu):輸液想系統(tǒng);進(jìn)樣戲系統(tǒng);分離折系統(tǒng);檢測(cè)崖系統(tǒng);梯度怪洗脫臘裝置;數(shù)據(jù)糧處理蔥系統(tǒng)第二槐節(jié)鼓系濟(jì)統(tǒng)介揀紹一、針高壓農(nóng)輸液誦系統(tǒng)高壓遺輸液奧系統(tǒng)浙由溶劑范貯存健器、寫高壓含泵、倡梯度當(dāng)洗脫錘裝置蜘和壓絲式力表等組允成。1.溶劑修貯存宮器溶劑祖貯存望器一職般由痕玻璃大、不今銹鋼聯(lián)或氟商塑料歌制成技，容唯量為1到抗2L，用來(lái)稻貯存的足夠憐數(shù)量?jī)r(jià)、符王合要迅求的鳥流動(dòng)路相。注意：密期閉、漢經(jīng)0.鑰45μm濾膜縣過(guò)濾分！2.高壓賊輸液星泵高壓震輸液糧泵是蘭高效燃液相涼色譜族儀中番關(guān)鍵翠部件灰之一郵，其齡功能絡(luò)是將溶箏劑貯喊存器職中的猾流動(dòng)構(gòu)相以痰高壓誓形式訊連續(xù)蕉不斷岔地送咳入液勇路系挎統(tǒng)，化使樣裳品在貼色譜木柱中翻完成京分離蕉過(guò)程。由串于液息相色蒜譜儀起所用呀色譜狼柱徑揮較細(xì)絹，所類填固幣定相折粒度驅(qū)很小錫，因長(zhǎng)此，剪對(duì)流愉動(dòng)相勉的阻章力較般大，去為了筋使流壇動(dòng)相苗能較偏快地映流過(guò)陸色譜憂柱，做就需戒要高漂壓泵螺注入府流動(dòng)辣相。第二裝節(jié)周系近統(tǒng)介倒紹對(duì)泵商的要米求：叔輸出木壓力庭高、束流量么范圍間大、趁流量跪恒定陽(yáng)、無(wú)繩脈動(dòng)匙，流饞量精柱度和拳重復(fù)名性為0.遷5%左右休。此特外，威還應(yīng)朵耐腐迎蝕，投密封攝性好遞。高壓辭輸液劑泵，復(fù)按其期性質(zhì)問(wèn)可分收為恒壓片泵和恒流驚泵兩大忠類。恒流設(shè)泵是冬能給方出恒克定流電量的籮泵，強(qiáng)其流且量與占流動(dòng)爆相粘孤度和育柱滲揚(yáng)透無(wú)星關(guān)。恒壓聞泵是瞞保持紫輸出桂壓力牙恒定武，而然流量膏隨外昨界阻辰力變阻化而旺變化代，如贏果系毛統(tǒng)阻鴿力不震發(fā)生售變化疑，恒唐壓泵返就能容提供卷恒定添的流禾量。泵圖第二尖節(jié)換系副統(tǒng)介宋紹3.梯度疊洗脫衡裝置梯度秩洗脫就是工在分親離過(guò)漿程中遮使兩別種或頭兩種廣以上狹不同撕極性遷的溶袍劑按您一定鞏程序扎連續(xù)船改變乒它們逐之間貓的比堅(jiān)例，碼從而約使流幼動(dòng)相隔的強(qiáng)智度、魔極性古、pH值或丘離子棄強(qiáng)度棟相應(yīng)尚地變鼻化，越達(dá)到專提高戴分離精效果距，縮尖短分艦析時(shí)濕間的辰目的選。梯度幣洗脫牌裝置謹(jǐn)分為灘兩類全：一類店是外梯庸度裝昌置（又冬稱低熔壓梯預(yù)度）徐，流銜動(dòng)相嚴(yán)在常演溫常例壓下銜混合目，用梨高壓逢泵壓咬至柱溉系統(tǒng)悲，僅侄需一塌臺(tái)泵備即可榨。另一庭類是內(nèi)梯階度裝湯置（又趴稱高撲壓梯感度）咱，將斯兩種須溶劑補(bǔ)分別竊用泵繁增壓景后，慘按電終器部和件設(shè)脖置的則程序活，注間入梯姓度第二伴節(jié)就系樹統(tǒng)介景紹混合友室混合，彼再輸埋至柱疾系統(tǒng)鞋。梯度夸洗脫匹的實(shí)倘質(zhì)是通宿過(guò)不城斷地該變化壇流動(dòng)補(bǔ)相的朗強(qiáng)度丟，來(lái)遣調(diào)整獵混合雷樣品蹲中各傷組分的k值，角使所自有譜娛帶都時(shí)以最坦佳平此均k值通德過(guò)色桂譜柱晝。它羊在液躲相色奶譜中薯所起悔的作陜用相讀當(dāng)于摟氣相婦色譜長(zhǎng)中的蝴程序雪升溫蒸，所餃不同穴的是陷，在李梯度圣洗脫弄中溶瘡質(zhì)k值的未變化罰是通慨過(guò)溶么質(zhì)的諸極性甘、pH值和船離子陰強(qiáng)度著來(lái)實(shí)帽現(xiàn)的兼，而鋼不是神借改叨變溫禁度（討溫度濃程序城）來(lái)尤達(dá)到形。二、蓬進(jìn)樣肅系統(tǒng)進(jìn)樣臘系統(tǒng)冤包括班進(jìn)樣跳口、喝注射張器和它進(jìn)樣那閥等磁，它于的作碗用是糞把分雷析試棕樣有咽效地暗送入若色譜季柱上拼進(jìn)行消分離暮。進(jìn)樣壞系統(tǒng)采用肆六通昂閥進(jìn)膏樣使用辟手動(dòng)宴進(jìn)樣鞏器是般要注犯意以捧下事幻玉項(xiàng)：進(jìn)樣遠(yuǎn)針：沙應(yīng)選康用液察相專侮用的醬平頭救針。進(jìn)樣暗量：纏要么絕小于運(yùn)定量庫(kù)環(huán)體厚積的渾一半獄，要略么滿建刻度疏進(jìn)樣摘（需臥要推巖進(jìn)3～榨5倍定葡量環(huán)鄭體積原的樣尸品）進(jìn)樣繞動(dòng)作襖：在Lo距ad狀態(tài)恰下動(dòng)寧作要栗平緩款，以后防樣餓品沖果出。真進(jìn)樣撫后先婚切換伸到In暈je兩ct狀態(tài)硬再拔驚針，艷以防鍛倒吸許或產(chǎn)柱生氣頑泡。清洗仰進(jìn)樣貨口：寇在In驚je夏ct狀態(tài)牽清洗咬進(jìn)樣衫口。廢液陡口：持廢液奶管的直出口險(xiǎn)應(yīng)于禮進(jìn)樣衰口水?dāng)_平，俊以防誤樣品再倒流振泄露案或產(chǎn)踐生虹粱吸。自動(dòng)盾進(jìn)樣闊器：國(guó)是由貪計(jì)算份機(jī)自蹤蝶動(dòng)控融制定氏量閥盤，按套預(yù)先袍編制寺的操撇作程書序工景作。玩取樣得、進(jìn)疏樣、舞復(fù)位醉、樣拳品管擇路清煌洗和飽樣品頌盤的再轉(zhuǎn)動(dòng)燃，全饑按程確序自沿動(dòng)進(jìn)反行。第二仍節(jié)妻系倚統(tǒng)介尚紹三、就分離貸系統(tǒng)分離餅系統(tǒng)喪包括淹色譜民柱、窄恒溫雜器和鮮連接甜管等曠部件姿。色痛譜柱臉一般雙用內(nèi)宗部拋牌光的乳不銹揮鋼制蝦成。瞧其內(nèi)柄徑為2費(fèi)~僅6mm興，柱長(zhǎng)宰為10爸~均50cm蛾，柱形臥多為振直形類，內(nèi)換部充畜滿微王粒固糾定相抵。分離尸部分柱溫秩一般位為室霧溫或霸接近土室溫奇。在以異下幾述種情孟況需破要精頃確控蠅制柱劍溫：在一鏈些法階定標(biāo)甘準(zhǔn)分釣析方哄法中儲(chǔ)，要毒求保翅留時(shí)干間具傅有再架現(xiàn)性誕。必須焰通過(guò)傾改變享柱溫療來(lái)提絨高分止離效泡率。對(duì)高躬分子邀化合銅物或位粘度示大的鐵樣品驗(yàn)，分袖析時(shí)堅(jiān)柱溫執(zhí)必須宿高于他室溫蠻。四、改檢測(cè)屬器檢測(cè)振器是突液相屠色譜拼儀的恨關(guān)鍵晚部件盤之一棕。對(duì)檢怎測(cè)器旅的要宮求是或：靈敏曬度高滅；重復(fù)秋性好總；線性坦范圍轟寬；死體憐積小侮；對(duì)溫搭度和諒流量恒的變蝦化不沙敏感磚等。第二影節(jié)猛系偷統(tǒng)介蠢紹在液母相色霜譜中四，有臘兩種拴類型煤的檢席測(cè)器釣：一類紛是溶質(zhì)野性檢木測(cè)器，它樹僅對(duì)上被分礎(chǔ)離組估分的譜物理修或物巾理化誤學(xué)特泡性有碰響應(yīng)雨。屬哭于此獻(xiàn)類檢泛測(cè)器遵的有穴紫外臺(tái)吸收個(gè)檢測(cè)百器（UV窄D）霧、熒光葉檢測(cè)碰器（FL介D）察、電化策學(xué)檢炒測(cè)器夾（EC猶D）等。姓靈明注度高頭，適票用于俗痕量絲式分析幸和梯匙度洗今脫。另一辨類是總體馬檢測(cè)攀器，它批對(duì)試父樣和軌洗脫州液總燒的物罪理和優(yōu)化學(xué)假性質(zhì)煮響應(yīng)垂。屬辰于此慘類檢略測(cè)器司有示悼差折去光檢儲(chǔ)測(cè)器快（RI鴉D）保、電導(dǎo)漿檢測(cè)的器（CD離）等。嚷靈明視度低寫，不窩適用蒼于痕笛量分破析和創(chuàng)梯度控洗脫捎。檢測(cè)熄系統(tǒng)紫外棵檢測(cè)政器:(常用)根據(jù)想朗伯—比爾卷定律豪，樣蒙品濃柏度越宮大，榨產(chǎn)生掏的信針號(hào)越大賞.靈敏占度高赤，線蠢性范呼圍廣視，對(duì)奏溫度輪和流私速不差敏感故，適打于梯蹦度洗考脫?？煞挚藶?固定這波長(zhǎng)修、可理變波地長(zhǎng)和止二極路管陣睬列檢執(zhí)測(cè)三偵種類倚型可變窗波長(zhǎng)府檢測(cè)千器示鴉意圖光電縫二極眨管陣是列吸胳光度殲檢測(cè)隆器是同節(jié)時(shí)可愈以得庸到吸堵光度腐、波將長(zhǎng)、迷時(shí)間——這樣餐三維逝情報(bào)苦的檢期測(cè)器示差葉折光選檢測(cè)般器它是桶通過(guò)露連續(xù)晚監(jiān)測(cè)鳴參比江池和慚測(cè)量遼池中當(dāng)溶液借的折國(guó)射率駁之差錘來(lái)測(cè)用定試賣樣濃蛛度的舅檢測(cè)稱器。至洗脫攏液組下成的葉變化撈會(huì)使期折射偏率變蜘化很惑大，肝因此巧，這架種檢變測(cè)器蚊也不機(jī)適用勸于梯棗度洗矮脫。熒光休檢測(cè)畫器利用勉某些害溶質(zhì)階在受弊紫外頸光激椒發(fā)后編，能婚發(fā)射撕可見夢(mèng)光（啄熒光介）的鵲性質(zhì)稼來(lái)進(jìn)館行檢稅測(cè)的首．無(wú)探熒光載物質(zhì)六，可馳使其庫(kù)與熒隊(duì)光試質(zhì)劑反儀應(yīng)，渾制成厘可發(fā)膝生熒須光的抱衍生羨物再雀進(jìn)行娃測(cè)定d.熒光態(tài)檢測(cè)宰器纏（fl倡uo忘re淡sc故en春ce斑d栗et敬ec狗to建r）高靈卸敏度慣、高在選擇潮性；對(duì)多芒環(huán)芳知烴，是維生堪素B、黃曲著霉素妹、卟屋啉類丹化合細(xì)物、挖農(nóng)藥教、藥陡物、別氨基醬酸、私甾類蹲化合程物等輕有響界應(yīng)。第三木章電固另定相煉結(jié)構(gòu)本章蠅內(nèi)容甚：固定司相載諸體結(jié)汽構(gòu)正相嚇色譜獸固定討相鍵合昏相色礦譜固剪定相第三炕章礎(chǔ)高弄效液倦相色錄譜的宜固定幼相蜜和流爐動(dòng)相一、等固定獎(jiǎng)相高效猶液相育色譜枕固定技相以承勤受高叔壓能瞞力來(lái)分處類，舍可分殘為剛性口固體司和硬梁膠兩大拐類。剛性踐固體召以二氧粱化硅為基股質(zhì)，汗可承鑒受7.殿0108~1漿.0109Pa的高抵壓，氏可制繼成直醒徑、忌形狀掘、孔殺隙度悼不同披的顆汁粒。得如果稠在二待氧化犁硅表嚇面鍵拒合各田種官蝦能團(tuán)蓄，可卵擴(kuò)大突應(yīng)用鮮范圍慮，它愁是目勸前最篩廣泛峰使用牲的一憑種固刪定相或。硬膠浪主要綁用于反離子佩交換近和尺純寸排盒阻色遼譜中期，它億由聚苯溪乙烯捕與二永乙烯皂苯基偶交聯(lián)稼而成?？闪谐惺芟亯毫舷尥隇?.當(dāng)5108Pa震。固定叢相按孔隙牢深度分類駛，可遙分為雞表面脈多孔抬型和姻全多邀孔型梢固定嗚相兩婚類。第三絕章標(biāo)高喬效液槳相色詞譜的閥固定襖相艙和流雨動(dòng)相1.表面陸多孔倚型固探定相它的爐基體煉是實(shí)氣心玻緞璃球翻，在炎玻璃估球外拾面覆例蓋一鼠層多戴孔活披性材產(chǎn)料，菌如硅吳膠、賄氧化野硅、絨離子執(zhí)交換什劑、落分子脈篩、密聚酰黎胺等義。這暫類固追定相仗的多升孔層鄉(xiāng)豐厚度承小、些孔淺圾，相險(xiǎn)對(duì)死姐體積握小，糖出峰棉迅速田、柱斃效亦從高；多顆粒規(guī)較大襯，滲妙透性堆好，懷裝柱蹤蝶容易生，梯辮度淋耐洗時(shí)株能迅救速達(dá)蟲到平椒衡，廉較適擱合做舊常規(guī)渡分析觀。由滔于多眾孔層法厚度賢薄，耐最大餓允許約量受愛到限近制。2.全多喂孔型稼固定舌相由直森徑為10nm的硅識(shí)膠微監(jiān)粒凝升聚而催成。勞這類分固定赴相由扭于顆塵粒很量細(xì)（5~釘10m）倘，孔仍習(xí)然較憲淺，脹傳質(zhì)農(nóng)速率斷快，印易實(shí)襪現(xiàn)高咱效、驗(yàn)高速域。特倒別適它合復(fù)清雜混敘合物饞分離默及痕羞量分放析。第三中章責(zé)高表效液雅相色蓮譜的邀固定騾相惱和流勸動(dòng)相在正匆相鍵卻合相早色譜暖法中宗使用江的是誕極性悲鍵合團(tuán)固定叢相。杠它是插將全循多孔羨微粒鼻硅膠露載體穩(wěn)，經(jīng)沉酸化法處理銜制成少表面掩含有只大量前硅羥績(jī)基的禽載體幸后，炭再與嘗含有憲胺基強(qiáng)（—NH菌2)躁、腈基舟（-CN萬(wàn)）、醚基（—O—當(dāng)）的硅靠烷化鹽試劑壇反應(yīng)劃，生間成表已面具功有胺枕基、爺腈基聲、醚培基的巷極性株固定您相。第三請(qǐng)章搭高織效液應(yīng)相色芒譜的結(jié)固定繡相往和流眠動(dòng)相在反勞相鍵死合相繭色譜收法中娛使用底的是短非極概性鍵言合固鋼定相通。它崖是將班全多具孔微殲粒硅喊膠載名體，長(zhǎng)經(jīng)酸淚化處豬理制啊成表啄面含喂有大畏量硅凳羥基棗的載傲體后敢，再騰與含戴有烷武基鏈排（C4耀、C燭8、頭C1燈8）或苯島基的釀硅烷貨化試豆劑反秋應(yīng)，極生成悲表面僚具有嫌烷基各或苯牌基的音非極是性固捧定相。二、付液相胃色譜汽的流案動(dòng)相辭（mo霧bi刺le害ph烘as滲es獻(xiàn)o捆f后L期C）1.流動(dòng)蹦相特相性（1）液濤相色司譜的崖流動(dòng)斧相又歲稱為宏：淋賊洗液鉛，洗訊脫劑役。流嫩動(dòng)相嫁組成另改變霸，極用性改壯變，偉可顯格著改控變組錦分分洋離狀累況；（2）親矩水性剖固定醒液常房誠(chéng)采用陳疏水征性流唉動(dòng)相賄，即乏流動(dòng)姿相的株極性榆小于醒固定湖相的純極性都，稱齊為正碼相液蜂液色弱譜法距，極塘性柱詳也稱杜正相潤(rùn)柱。二、級(jí)液相鍵色譜剛的流柳動(dòng)相恒（mo饞bi館le剖ph解as窯es燭o栽f發(fā)L街C）（3）若燥流動(dòng)取相的繁極性遼大于高固定堤液的若極性東，則削稱為俘反相丑液液丹色譜忽，非化極性么柱也督稱為凳反相軌柱。錦組分有在兩走種類艘型分森離柱紡上的攝出峰寶順序國(guó)相反盜。2.流動(dòng)堪相類揭別按流題動(dòng)相茶組成泰分：?jiǎn)位@組分雜和多守組分峽；按極期性分：極饞性、簡(jiǎn)弱極塵性、耕非極醉性；按使政用方汗式分：固褲定組悅成淋委洗和診梯度孩淋洗格。常用澆溶劑：己翅烷、編四氯侮化碳蓋、甲六苯、亞乙酸豈乙酯援、乙歐醇、漠乙腈、菌水。采用途二元掠或多進(jìn)元組狀合溶暫劑作粱為流躲動(dòng)相怪可以你靈活寄調(diào)節(jié)芽流動(dòng)相的濤極性窩或增懸加選棋擇性宗，以恒改進(jìn)憤分離冷或調(diào)軋整出沃峰時(shí)散間。3.流動(dòng)厚相選芹擇在選航擇溶山劑時(shí)廉，溶亂劑的棟極性毀是選乘擇的作重要槍依據(jù)攀。采用找正相工液-液分杏配分牲離時(shí)擁：首碎先選闊擇中虜?shù)葮O龍性溶烈劑，土若組分競(jìng)的保峰留時(shí)嘴間太翻短，籮降低繼溶劑筍極性聾，反擦之增擔(dān)加。也可肯在低雀極性升溶劑謙中，淘逐漸細(xì)增加繁其中尤的極深性溶和劑，森使保留時(shí)響間縮秘短。常用分溶劑橫的極畝性順拾序：水(最大)落>甲酰恰胺>乙腈>甲醇>乙醇>丙醇>丙酮>二氧藏六環(huán)>四氫巾呋喃>甲乙丟酮>正丁瓶醇>乙酸玻乙酯>乙醚>異丙醚>二氯障甲烷>氯仿>溴乙椅烷>苯鉆>四氯抗化碳>二硫請(qǐng)化碳>環(huán)己舊烷>己烷>煤油(最小)4.俯選臘擇流瓣動(dòng)相臨時(shí)應(yīng)委注意諒的幾蟻個(gè)問(wèn)急題由于料高效俘液相尿色譜及中流仍動(dòng)相起是液準(zhǔn)體，流它對(duì)煌組分曲有親怒合力延，并活參與歲固定魯相對(duì)桌組分甘的競(jìng)敗爭(zhēng)，食因此優(yōu)，正誦確選吸擇流刻動(dòng)相家直接朋影響羽組分撕的分木離度撲。對(duì)堆流動(dòng)紙相溶股劑的無(wú)要求賞是：（1）溶進(jìn)劑對(duì)袍于待報(bào)測(cè)樣節(jié)品，舉必須跟具有針合適奏的極姻性和捐良好欣的選顧擇性懶。（2）溶迫劑與前檢測(cè)墻器匹敏配。鏈對(duì)于湯紫外膨吸收跟檢測(cè)著器，薄應(yīng)注貧意選賺用檢這測(cè)器漂波長(zhǎng)沸比溶劑哭的紫貍外截少止波浴長(zhǎng)要長(zhǎng)點(diǎn)。所旺謂溶哀劑的長(zhǎng)紫外抓截止將波長(zhǎng)庭指當(dāng)帳小于截止軋波長(zhǎng)蠢的輻儲(chǔ)射通奮過(guò)溶潔劑時(shí)營(yíng)，肉溶劑更對(duì)此蒜輻射穗產(chǎn)生耽強(qiáng)烈尖吸收終，此爺時(shí)溶怪劑被聽看作侵是光妻學(xué)不靠透明稱的，大它嚴(yán)耍重干期擾組觸分的梁吸收連測(cè)量誘。對(duì)于底折光擇率檢僚測(cè)器用，要崇求選犬擇與塑組分費(fèi)折光顧率有俱較大激差別妻的溶索劑作涼流動(dòng)助相，叛以達(dá)蒜到最創(chuàng)高靈第敏度起。（3）高掩純度由于年高效舊液相壤色譜抄靈敏水度高嘆，對(duì)幻玉流動(dòng)筐相溶蔽劑的簽純度練也要著求高明。防吊止微推量雜預(yù)質(zhì)長(zhǎng)艷期累環(huán)積損委壞色都譜柱青和使鄭檢測(cè)慨器噪疊聲增短加。歸不純視的溶痰劑會(huì)丹引起驅(qū)基線申不穩(wěn)瘦。第三斗章煌高口效液簽相色君譜的漲固定錯(cuò)相妨和流突動(dòng)相（4）化扣學(xué)穩(wěn)裳定性昆好（5）低研粘度磨（粘給度適源中）若使猴用高枝粘度音溶劑飛，勢(shì)觀必增預(yù)高壓偷力，惑不利你于分仿離。悟常用嫌的低肺粘度害溶劑室有丙播酮、話甲醇炊和乙籌腈等往；但潔粘度接過(guò)低錄的溶弊劑也惹不宜鐵采用醒，例歲如戊跌烷和重乙醚螺等，探它們蛛容易嘆在色槳譜柱倉(cāng)或檢籌測(cè)器偵內(nèi)形作成氣際泡，寒影響召分離撿。第四腸章耳液鍋相色痰譜儀撿定性桶、定丹量方捏法色譜兔法分離蟻好,定性最難色譜施分析甜分三請(qǐng)個(gè)階湯段儀器屆調(diào)試操作未條件棉選擇定性綢定量--華-保留綿值定偷性--苦-峰高,峰面左積定舟量4.巖1定性保留版值定鴨性（1）利餅用已程知標(biāo)顛樣對(duì)研照定包性優(yōu)點(diǎn)?。汉?jiǎn)裂單缺點(diǎn)萌：要?jiǎng)P有純?cè)O(shè)樣，蹲適用催于已簽知物封，操作辰條件兄要穩(wěn)橡定2、趣利用騾紫外雄或熒借光光膏譜定輕性停泵偉做全潔波長(zhǎng)羽光譜恩掃描3、煮收集坑柱后俱留出愚組分臭，再因用其抽他化恐學(xué)或蔽物理別方法嘩定性如：旗紅外寬光譜尤、質(zhì)自譜、核磁聞共振第等4.兇2定愧量分藏析1.外標(biāo)騰法(標(biāo)準(zhǔn)艘曲線學(xué)法)用待授測(cè)組牛分的嘩純樣忙制標(biāo)涉準(zhǔn)曲肥線優(yōu)點(diǎn)態(tài)：快溜速簡(jiǎn)騎單,只要蹤蝶待測(cè)鋼組分由出峰吉且完富全分凍離即紐奉可缺點(diǎn)以：絕烘對(duì)法,進(jìn)樣截量,操作仇條件肅要不變2.內(nèi)標(biāo)習(xí)法(外加傅標(biāo)準(zhǔn)盈法)不能千全出踢峰或析只需顏測(cè)某勵(lì)幾個(gè)半組分礙時(shí)采樓