免疫組織化學(xué)技術(shù)的研究進(jìn)展

PAGEPAGE1免疫組織化學(xué)技術(shù)的研究進(jìn)展（的顯像和放大作用，在細(xì)胞、亞細(xì)胞水平檢測各種抗原物質(zhì)（如蛋白質(zhì)、多肽、酶、激素、病原體以及受體等。免疫組化具有操作簡單、敏感性高、特異性強(qiáng)年代還僅限于免疫熒光技術(shù)，50年代以后逐漸發(fā)展建立起高度敏感，且更為實(shí)用的免疫酶技術(shù)。一、免疫組化技術(shù)的迅猛發(fā)展Nakane60年代末期創(chuàng)立的最早的免疫酶Sternberger70年代初期便在此基礎(chǔ)上建立了非標(biāo)記PAP80Hsu80SPLSABABC4~8PAP8~1690年代，免疫組織化學(xué)又向基因水平深入發(fā)展，與分子生物學(xué)技術(shù)的結(jié)合日益緊密。二、免疫組化技術(shù)在臨床病理診斷中的重要作用中發(fā)揮著重要作用。、高度未分化腫瘤細(xì)胞起源的鑒別CEAVimentinCEA在消化道上皮源性腫瘤的陽性率高，但在鱗癌時(shí)90%以上上皮源性腫瘤呈陽性表達(dá)。、小圓細(xì)胞腫瘤的鑒別EMALCA，Vimentin，NSE，S100HMB45抗體。、大細(xì)胞型腫瘤鑒別EMACEA，Vimentin，S100抗體。、梭形或多形性軟組織肉瘤的鑒別瘤、多形性橫紋肌肉瘤、多形性惡性纖維組織細(xì)胞瘤以及多形性脂肪肉瘤。2.5、惡性淋巴瘤分型LN2NK細(xì)胞淋巴瘤，C123C陽性；樹突網(wǎng)織細(xì)胞淋巴瘤；Ber-MAC-DRC陽性；指陽性；何杰金病R-S細(xì)胞，LeuM1陽性，Ber-H2陽性；大細(xì)胞間變型淋巴瘤Ber-H2陽性。、神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的確立90%NSENSEChromograninASynaptophysin抗體。、腫瘤預(yù)后的推測ERPR，二nm232.8、感染性疾病病原體的檢測HBsAgHBcAgHPVEB三、免疫組化技術(shù)應(yīng)用的基本原則、確定細(xì)胞類型和形態(tài)組織細(xì)胞內(nèi)有些蛋白具有組織特異性，通常把這些具有組織特異性的蛋白稱為標(biāo)形輪廓。、辨認(rèn)細(xì)胞產(chǎn)物的來源、確定細(xì)胞的分化程度3.4、追蹤神經(jīng)纖維束和它的投射區(qū)用于此目的的免疫組織化學(xué)方法常與軸漿運(yùn)輸示蹤法相結(jié)合來研究神經(jīng)元法使示蹤劑定位，再實(shí)施免疫組織化學(xué)方法確定其性質(zhì)。3.5、在臨床病理中的應(yīng)用指導(dǎo)治療和預(yù)后。輔助疾病診斷和分類，尋找感染病因等。四、免疫組化技術(shù)中抗原修復(fù)的研究進(jìn)展、抗原性與抗原修復(fù)過程。、影響石蠟切片抗原性的主要因素、組織固定對抗原性的影響為了達(dá)到保存良好的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)、防止組織自溶，阻止內(nèi)、外源性細(xì)胞內(nèi)分解酶活性和保存某些特殊抗原的目的，需要用福馬林、戊二醛、丙酮、乙醇及碳化二亞銨等對組織進(jìn)行及時(shí)固定，固定對抗原性的影響主要表現(xiàn)在三個(gè)方面。1～20.6cm厚的組織為例，用10%4.275小時(shí)。2%0.4%5-HT、抗原修復(fù)的原理抗原修復(fù)的原理可能是（1）溶解、洗脫變性蛋白：如酶、尿素、表面活性劑和酸等能溶解“被覆”于抗原表面的變性蛋白，易于洗脫（2）水解作用：鹽MW4.4、常用的抗原暴露或抗原修復(fù)方法、蛋白酶、尿素及胰蛋白酶尿素聯(lián)合消化技術(shù),0.1%0.胃蛋白酶最常用。酶消化使用早、消化力強(qiáng)、易掉片、有時(shí)破壞抗原性和組織形態(tài)結(jié)構(gòu)。、微波輔助金屬鹽或緩沖液抗原修復(fù)技術(shù)硫酸鉀、氯化鋁、醋酸鉛等，含鉛的重金屬鹽有毒，易于沉積于切片上，有研究表明氯化鋁對抗原的修復(fù)效果比硫氰酸鉛或醋酸鉛好。微波輔助枸櫞酸緩沖液、鹽酸-甘氨酸緩沖液、和磷酸緩沖液等抗原修復(fù)技術(shù)，其效果都好于金屬鹽，其中以枸櫞酸緩沖液使用最多，效果最好。MW修復(fù)抗原的方法是石蠟切片脫蠟，250W2×5分鐘，待冷卻至室溫后按常規(guī)進(jìn)行。、去污劑暴露抗原技術(shù)TritonX-100等，它們能溶解細(xì)胞膜上的脂質(zhì)，增強(qiáng)細(xì)胞的通透性，其中以Tri-tionX-100使用多，尤其是細(xì)胞涂片及冰凍厚切片上的免疫組化染色效果更好。近來的研究表明0.05%～0.1%TritonX-100在微波輔助作用下，具有很好地暴露多種抗原決定簇的效果，,尤其是免疫電鏡時(shí)慎用。、酸水解暴露抗原技術(shù)CEA，EMA，SMA，Ker等單、多克隆抗體標(biāo)記。18～2013～188～13分鐘，80℃、1～3分鐘均能增強(qiáng)特異性染色，降低背景，具有來源方便、經(jīng)4.4.5、高壓加熱暴露抗原技術(shù)PBS2×51～22五、以免疫組化方法為研究手段的科研最新進(jìn)展P53研究提示，P53的高表達(dá)腫瘤預(yù)后較差。CerbB-2基因產(chǎn)物定位于細(xì)胞膜，其表P53類似。nm23為轉(zhuǎn)移抑制基因，其編碼產(chǎn)物在腫瘤細(xì)胞的胞核及胞MDR-1為人類