實驗三細菌形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察及革蘭染色

實驗三細菌形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察及革蘭染色第一頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五實驗?zāi)康模闭莆占毦幕拘螒B(tài)及特殊結(jié)構(gòu)2掌握革蘭染色的原理、方法、結(jié)果3掌握油鏡的使用原理及使用方法實驗原理

G染色原理：等電點學說化學學說通透性學說

第二頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五實驗用品1、菌種

培養(yǎng)24h的葡萄球菌、大腸桿菌。2、染液革蘭氏染液

草酸銨結(jié)晶紫染液、盧戈氏碘液、95%乙醇、稀釋石炭酸復紅染液。3、其他物品接種環(huán)、吸水紙、酒精燈、載玻片、顯微鏡、香柏油、擦鏡紙、細菌標本片等。實驗內(nèi)容細菌的基本形態(tài)、特殊結(jié)構(gòu)（示教）細菌的G染色（操作，6人/組）第三頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五病原生物學實驗室守則1、學生進實驗室應(yīng)穿好實驗室專用隔離衣；與實驗無關(guān)物品不準帶入實驗室，所有實驗材料嚴禁帶出實驗室。2、實驗室內(nèi)禁止吸煙及飲食。3、嚴格操作規(guī)程，杜絕生物安全事故。污染標本及使用過的有菌器材放于指定的消毒缸內(nèi)，統(tǒng)一進行消毒處理。需要培養(yǎng)的物品做好標記，放于指定培養(yǎng)箱內(nèi)。4、如在實驗過程中發(fā)生有菌材料濺出、污染環(huán)境或化學藥品灼傷等意外情況，應(yīng)立即報告老師，以便及時處理。

第四頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五5、愛護儀器設(shè)備，不經(jīng)老師批準，不準自行接通、斷開電源或拆卸儀器。對儀器設(shè)備造成人為損壞的，要酌情賠償。實驗結(jié)束后，儀器設(shè)備狀態(tài)復原。6、實驗結(jié)束后，清潔臺面、所有循環(huán)使用器材復原；安排值日生打掃衛(wèi)生；檢查水、電、門、窗等設(shè)施，并經(jīng)實驗室負責人檢查認可。7、用肥皂或消毒液洗手、脫隔離衣后方可離開實驗室。第五頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五一、細菌基本形態(tài)、特殊結(jié)構(gòu)觀察（一）、細菌基本形態(tài)觀察1.球菌：G+：葡萄球菌、鏈球菌、肺炎球菌G-：淋球菌2.桿菌：大腸桿菌（G-）

3.螺形菌：霍亂弧菌（G-）第六頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五葡萄球菌鏈球菌G+球菌：第七頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五肺炎球菌G+球菌：

痰液中的肺炎鏈球菌（革蘭染色，×1000）第八頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五肺炎鏈球菌電鏡圖第九頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五G-球菌：

淋球菌第十頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五大腸埃希菌G-桿菌：第十一頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五霍亂弧菌G-弧菌：第十二頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五（二）、細菌特殊結(jié)構(gòu)觀察莢膜：肺炎球菌鞭毛：變形桿菌（周鞭毛）、霍亂弧菌（單鞭毛）芽胞：破傷風桿菌（頂端）、炭疽桿菌（中部）第十三頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五概念:某些細菌在其細胞壁外包繞一層粘液性物質(zhì)生物學意義:

1.保護細菌，與細菌致病性有關(guān)

2.用于細菌的鑒別與分型肺炎鏈球菌莢膜莢膜莢膜：第十四頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五肺炎鏈球菌

莢膜：第十五頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五概念：許多細菌在菌體上附有細長并呈波狀彎曲的絲狀物生物學意義

1.鞭毛是運動器官。有鞭毛的細菌能主動運動，可通過動力試驗進行細菌鑒定。

2.有的細菌其鞭毛與致病性有關(guān)。

3.可作為細菌分類、分型的依據(jù)。鞭毛：第十六頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五變形桿菌（周鞭毛）鞭毛鞭毛：霍亂弧菌（單鞭毛）第十七頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五概念:某些細菌在一定的環(huán)境條件下，能在菌體內(nèi)部形成一個圓形或卵圓形小體，是細菌的休眠形式。生物學意義

1.芽胞抵抗力強，故應(yīng)以殺滅芽胞作為可靠的滅菌指標。高壓蒸汽滅菌法是殺滅芽孢最有效的方法。

2.芽胞的抵抗力強，可在自然界中存在多年，是重要的傳染源。但芽胞并不直接引起疾病，只有發(fā)芽成為繁殖體后，才能迅速大量繁殖而致病。

3.鑒別細菌每種細菌形成一種類型芽胞芽孢：第十八頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五芽胞的大小、形狀、位置等隨菌種而異，有重要的鑒別意義炭疽芽胞桿菌肉毒梭菌破傷風桿菌第十九頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五

二、革蘭染色法革蘭染色法是細菌學中最廣泛使用的一種鑒別染色法。由丹麥醫(yī)師ChristianGram創(chuàng)立。方法是先將細菌用結(jié)晶紫染色，加媒染劑（增加染料和細胞的親和力）媒染后，用脫色劑（乙醇）脫色，再用復染劑染色。第二十頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五G+菌G-菌一一半半結(jié)晶紫盧戈氏碘液95%乙醇石碳酸復紅初染

媒染

脫色復染第二十一頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五（一）、革蘭染色原理G+菌G-菌等電點學說PI2~3PI4~5帶負電荷多帶負電荷少化學學說含核糖核酸鎂鹽多含核糖核酸鎂鹽少通透性學說低高肽聚糖多，脂質(zhì)少肽聚糖少，脂質(zhì)多酒精不易進入酒精易進入第二十二頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五（二）、G染色步驟與方法

1、涂片制備涂片干燥固定

2、染色初染（結(jié)晶紫）1min媒染（盧戈氏碘液）1min脫色（95%乙醇）30s復染（石碳酸復紅）30s吸水紙吸干

3、鏡檢（油鏡下觀察）每次染色后都要進行沖洗時間：一、一、半、半第二十三頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五葡萄球菌大腸桿菌（三）、G染色結(jié)果

革蘭氏陽性

革蘭氏陰性第二十四頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五（四）、革蘭染色注意事項涂片要均勻，不可太厚干燥時切勿在火焰上直烤染色時脫色最關(guān)鍵細流水沖洗，不要直沖涂膜涂片上積水不能太多，以免稀釋染液第二十五頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五（五）、革蘭染色的意義1、鑒別細菌通過染色將細菌分為G+、G-兩大類細菌2、研究與致病性的關(guān)系

G+菌致病一般為外毒素

G-菌致病一般為內(nèi)毒素3、指導臨床用藥

G+菌對青霉素、紅霉素、頭孢菌素敏感

G-菌對上述藥物不敏感，對鏈霉素、氯霉素、慶大霉素、卡那霉素等敏感第二十六頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五（一）油鏡工作原理油鏡的透鏡非常小。在不加油的情況下，由于空氣和玻璃對光線的折射率不同，因此光線透過載玻片經(jīng)過空氣時發(fā)生散射，很少能夠進入油鏡，造成物像不清。香柏油（n=1.515）的折光率與玻璃（n=1.52）相近，由于光線透入時不會因折射而減弱，因此視野明亮，物像清晰。三、顯微鏡油鏡的使用第二十七頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五目鏡物鏡載物臺集光器光源鏡臂粗螺旋細螺旋第二十八頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五（二）油鏡使用方法1．對光

接通電源，打開顯微鏡上的電源開關(guān)，內(nèi)置光源燈亮，并可調(diào)節(jié)亮度。使用油鏡時，應(yīng)將燈光調(diào)至最亮，聚光器升至最高，光柵完全打開。2．標本加油

在細菌染色片的菌膜上滴加1滴香柏油，注意勿使載物臺傾斜，以免鏡油流淌。3．識別并轉(zhuǎn)換油鏡頭

油鏡有三種標志：①放大倍數(shù)×100；②鏡頭下緣有一圈白線；③英文標識“oil”。找到油鏡，旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)換器（勿用手直接掰動鏡頭）使油鏡頭轉(zhuǎn)至載物臺中央。4．調(diào)焦、觀察標本

從側(cè)面觀察并緩慢轉(zhuǎn)動粗調(diào)螺旋，使載物臺上升至油鏡頭浸入油中并幾乎與玻片接觸（注意勿使兩者相碰）時為止；眼睛轉(zhuǎn)向目鏡觀察視野，并往相反方向轉(zhuǎn)動粗調(diào)螺旋緩慢下降載物臺，至視野中閃現(xiàn)標本輪廓時為止；再轉(zhuǎn)換細調(diào)螺旋調(diào)節(jié)至物像清晰。若直至油鏡頭脫離油滴仍未看到物象，可重復以上操作。第二十九頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五（三）油鏡使用注意事項顯微鏡屬于精密儀器，使用時需仔細小心、避免震動。調(diào)焦時切忌用力過猛、一味往一個方向調(diào)節(jié)，否則易損壞鏡頭或壓碎標本片。油鏡頭用后應(yīng)下降載物臺，取下標本，立即用擦鏡紙順一個方向擦凈鏡頭上