實(shí)驗(yàn)一薄層層析板的制備

試驗(yàn)一薄層層析板的制備一、試驗(yàn)?zāi)康闹苽浔訉游霭澹谷~綠素在層析板上分別顯色。二、試驗(yàn)原理薄層層析，常用TLC〔Chromatography〕表示，又稱薄層色譜，屬于液一固吸譜的優(yōu)點(diǎn)。一方面適用于小量樣品〔0.01卩g〕的分離；另一方500mg的樣不能用氣相色譜分析的物資。粒大小，一般要求直徑為10 40卩刃硅膠是無定形多孔性物質(zhì)，略具酸性，適用于酸性物質(zhì)的分別和分析。薄層色譜用的硅膠分為： “硅膠H“—不含粘合劑；“硅膠G”一含焜石膏粘合劑；“硅膠HF254”一含熒光物質(zhì)， 可用于波長為254nm紫外光下觀看熒光；“硅膠GF254”一既含鍛石膏又含熒光劑等類型。粘合劑除上述的鍛石膏〔半水合硫酸鈣：

2CaSQHQ〕夕卜，還可用淀粉、竣甲基纖維素鈉。三、試驗(yàn)材料、器具1、試劑硅膠、4%。的CMC溶液〔竣甲基纖維素鈉〕2、試驗(yàn)用具：藥匙、研缽、載玻片、量筒、玻棒1干凈?！哺蓛舻臉?biāo)準(zhǔn)：水不是呈股流下，而是呈瀑布狀態(tài)流下?！?、與硅膠混合：CMC—Na3:1〔3ml:1g〕。取CMC—Na溶液下，以趕盡氣泡為佳。3、鋪板：將載玻片置于平臺(tái)上，用藥匙舀取糊狀硅膠，均勻地鋪在載玻片外表。鋪板板上，倒時(shí)也要留意不要引入小氣泡。尤其是載板的四個(gè)角，簡潔高出玻璃板其他部位〔3g7.5x2.5cm5-6塊〕4、晾干：置水平臺(tái)上于室溫下晾干。5105C30min，然后取出，放入枯燥器中，備體。通過活化硅膠，主要轉(zhuǎn)變了硅膠內(nèi)部的微孔構(gòu)造，使其孔徑的大小及難。下面先介紹一下配置方法：CMC—Na溶液的配置：一般其濃度為0.3 0.5%，依據(jù)自己閱歷而定〔我習(xí)慣用 0.4%使之溶解，即得。

60 70C,CMC—Na，邊加邊攪拌，與硅膠混合：CMC—Na3:1CMC—Na溶液倒卜-而上，然后自上而下，以趕盡氣泡為佳。

”按一個(gè)方向研磨3鋪板：手動(dòng)或機(jī)械。手動(dòng)鋪出的板的薄厚與所加的混合后的硅膠量有矢，而機(jī)械鋪出的板的薄厚 所選用的鋼板有尖， 可依據(jù)需要來定。但此過程中最尖鍵的是板子邊緣鋪得好壞，手動(dòng)鋪板確定要將玻璃板邊緣硅膠涂勻 〔我習(xí)慣用兩頭掂法，即板下方的中間墊一物體，兩頭懸空，兩手均勻掂動(dòng)〕。而機(jī)械鋪板要留意板與板之間平坦性， 或者由高到低排列。4晾干：自然晾干。5105C30min，取出，放入枯燥器中，備用。這是試驗(yàn)室和檢驗(yàn)室薄層層析板常用的制備方法之一，供大家參考！層析英文名稱：chromatography1:基于不同物質(zhì)在流淌相和固定相之間的安排系數(shù)不同而將混合組分分別的技術(shù)。當(dāng)流淌相〔液體或氣體〕流經(jīng)固定相〔〕備。2：質(zhì)，在流淌相和固定相之間進(jìn)展分別的一種生物化學(xué)技術(shù)。層析〔chromatography〕是“色層分析”的簡稱。利用各組分物理性質(zhì)的不同，將多的區(qū)分力在把微細(xì)分散的固體或是附著于固體外表的液體作為，把液體〔與上述液體不相混合的〕或氣體作為移動(dòng)相的系統(tǒng)中，使試料中的各成分邊保持向兩相分布的平衡狀態(tài)邊固定相的有、、氧化鋁、樹脂、離子交換纖維等，或是在硅藻土和纖維素那樣的無活性的載體上附著適當(dāng)?shù)囊后w，也可使用其他物質(zhì)。將作為固定相的微細(xì)粉末狀物質(zhì)裝入瘦長形 筒中進(jìn)展的層析稱為〔colum或是在硅藻土和纖維素那樣的無活性的載體上附著適當(dāng)?shù)囊后w，也可使用其他物質(zhì)。將作為固定相的微細(xì)粉末狀物質(zhì)裝入瘦長形 筒中進(jìn)展的層析稱為〔column涂上一層薄而均的物質(zhì)作為固定相的稱為薄層層析〔thin-layerchromatography〕，后器中，使移動(dòng)相〔液體〕斑點(diǎn)狀移動(dòng)到各自的位置上，再依據(jù)Rf值的測定進(jìn)展鑒定。當(dāng)斑點(diǎn)不易為肉眼觀看種移動(dòng)相開放后再用另一移動(dòng)相進(jìn)開放放〔這時(shí)的開放方向應(yīng)與原方向垂直〕，使各成分分別完全的雙相層析〔two-dimensionalchromatography〕。分別后、后，連續(xù)開放使各成分和移動(dòng)相一起向柱外分別溶出，這就是廣泛使用的所謂洗提層析〔elutionchromatography〕。層析依據(jù)固定相與〔試料〕間親和力的差異分為吸附型、安排型、離子交換型〔換層析〕用親和層析，馬上與基質(zhì)類似的〔通常為共價(jià)鍵〕和性沉淀與其對(duì)應(yīng)的特定的酶或蛋白質(zhì)。按層析的機(jī)理劃分：吸附層析、安排層析、離子交換層析、、層析等。析：利用不同組分對(duì)離子交換劑親和力的不同。:利用某些凝膠對(duì)于不同分子大小的組分阻滯作用的不同。?按流淌相與固定相的不同劃分：相，劃分為：、氣液層析、和液液層析等。?按操作形式劃分：柱層析、紙層析、薄層層析、高效液相層析等。紙做液體的載體，點(diǎn)樣后，用流淌相開放，以到達(dá)分別鑒定的目的。和鑒定。層析，紙層析是一種安排層析，柱層析可做各種層析。根本原理層析須在兩相系統(tǒng)間進(jìn)展。一相是固定相，需支持物，是固體或液體。另一相為流動(dòng)相帶，這個(gè)過程叫展層。系數(shù)K是物質(zhì)在兩相中的濃度比。K值大，則在固定相中吸附牢，K值小吸附差。各物質(zhì)間的K值差異大，則易被分別。不同類型層析的義不同，可視為吸附平衡常數(shù)，安排常數(shù)或離子交換常數(shù)等。

K值含來，到達(dá)純化的目的。在層析時(shí)用理論塔板數(shù)能。

n來衡量層析效tR為物質(zhì)在上的保存時(shí)間，W為洗脫下來的物質(zhì)峰形的寬度。表示層析柱的效能愈高。如用 H表示， 則包含了層析柱長度的因子。式中L為層析柱的柱長。H值越大，則柱效越低。

n值愈大好層析的尖鍵幾種常用的層析吸附劑的吸附力強(qiáng)弱，是由能否有效地承受或供給，或供給和承受活潑氫來決少用于無丙酮、乙乙酯、醸、氯仿、苯、和己烷等。為了能得到較好的分別效果，常用兩種或效果。溶解，但安排比率不同，展層時(shí)就會(huì)形成以不同速度向前移動(dòng)的區(qū)帶。纖維素、離子交換凝膠等。帶陽離子基團(tuán)的，如磺酸基〔一S03H、竣甲基〔一CH2C00〕和磷酸基等為陽離子交換劑。帶陰離子基團(tuán)的，如DEA-〔二乙基胺乙基〕和QAE-〔四級(jí)胺乙基〕等為陰離子交換劑。離子交換層析只適用于能在水中解數(shù)，K值愈高，被吸附愈牢。洗脫時(shí)，增加溶液的離子強(qiáng)度，如轉(zhuǎn)變 pH，增加鹽濃度，離子被取代而解吸下來。洗脫過程中，按區(qū)帶。?凝膠過濾層析

K值不同，分成不同的方法曾被稱為分子篩。目前常用的凝膠商品有：凝膠〔sephadex〕、凝膠〔bio-gel〕、凝膠〔sepharose〕和凝膠〔styragel〕等。?素等。?屬于安排層析或吸附層析，僅適用于分析分別性和低揮發(fā)性物質(zhì)。固定相是在惰性支持物〔如磨細(xì)的〕上掩蓋一層高沸點(diǎn)液體，如硅油、高沸點(diǎn)和油脂、環(huán)氧類聚合物。外涂層約為支持物重量的 20%。分析時(shí)操作溫度范圍，一般從室溫到200C。特別的層析柱能到達(dá)500C。流淌相常用氨、氮或氮為展層氣體。氣相層析分別的區(qū)帶格外清楚，是由于揮發(fā)性物質(zhì)在兩相間能很快達(dá)到平衡，所需分析時(shí)間大為縮短，一般為數(shù)分鐘至 10余分鐘。檢測記錄系統(tǒng)繪出的各峰是測定流出氣體電阻變化的結(jié)果，因而測定樣品量可到微克和毫微克水平。具有快速、靈敏和微量的優(yōu)點(diǎn)。氣相層析也能用于分別制備樣品，但需增加將流出氣體通過冷凍將分別物回收的裝置?？勺鰡蜗?qū)游觥?duì)于簡潔的混合物，可做。

1944年A.J.P第一次用紙層析分析氨基酸，得到很好的分別效果，開創(chuàng)了近 代層析的發(fā)展和應(yīng)用的局面。

70年月以后，紙層析已漸漸為其他區(qū)分力代替。在玻璃片、金屬箔或塑料片上鋪上一層約 1 2毫米的支持物，如纖維效果。如用薄層層析做，一般約需半小時(shí)，分別效果更好。薄層層析一般用于定性分析。也能用于定量分析和制備樣品?！灿置?0年月進(jìn)展的層析法。其特點(diǎn)是：用高壓輸液泵，壓強(qiáng)最高可達(dá)5000psi〔相當(dāng)于34個(gè)〕。用直徑約3 10微米的超細(xì)支持物裝填均勻的不銹鋼柱。常用的支持物是在玻璃小珠上涂一層應(yīng)生成Si—C， 進(jìn)一步連接疏水的烷基，

1 2微米的，經(jīng)硫酰氯反Si—C18H37,或陽離子交換基團(tuán)一Si〔CH2n—C6H4SO3H或陰離子交換基團(tuán)一Si〔CH2nNH2這不中支持物能承受很高的壓力，化學(xué)性能穩(wěn)定。用不同類型支持物的吸附層析、離子交換層析和凝膠過濾層析。其分析微量化可達(dá)

HPLC可做10-10克水10

HPLC適于分析分別不揮層析法。

HPLC配有程序把握洗脫溶劑的梯度混合儀，數(shù)據(jù)處中發(fā)揮了重要作用。好的分別效果。這種層析法與一般的相反，故稱為反相層析。目前用HPLC做反相層析常用的ODS柱，C18H37Si—基團(tuán)。在核酸分析中，將樣品經(jīng)局