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文檔簡介
專題二微生物的培育及應用課題一微生物的試驗室培育·培育基:人們依據微生物對養(yǎng)分物質的不同需求,配制出供其生長生殖的養(yǎng)分基質,是進展微生物培育的物質根底?!の锢硇再|可分為液體培育基半固體培育基和固體培育基。在液體培育基中參與凝固劑瓊脂〔是從紅藻中提取的一種多糖,在配制培育基中用作凝固劑〕后,制成瓊脂固體培育基。微生物在固液體培育基固體培育基應半固體培育基則常用于視察微生物的運動和菌種保藏等?!ひ罁煞峙嘤煞譃槿斯ず铣膳嘤妥匀慌嘤?。合成培育基自然培育基是用化學成分不明的自然物質配制而成,常用于實際工業(yè)消費?!ひ罁嘤挠锰?,可將培育基分為選擇培育基和鑒定培育基。選擇培育基鑒別培育基是依據微生物的特點,別的微生物?!づ嘤幕瘜W成分包括 水、無機鹽、碳源、氮源、生長因子等?!ぬ荚矗耗転槲⑸锏拇x供給碳元素的物質。如CO2、NaHCO3等無機碳源;糖類、石油、花生粉餅等有機碳源。異養(yǎng)微生物只能利用有機碳源。單質碳不能作為碳源。·N2、NH3、NO3-、NH4+〔無機氮源〕蛋白質、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨〔有機氮源〕等。只有固氮微生物才能利用N2。·培育基還要滿足微生物生長對pH、特別養(yǎng)分物質以和氧氣的要求。乳酸桿菌時必要在培育基中添加維生素霉菌時須將培育基的pH酸性,培育細菌pH調至中性或微堿性,培育厭氧型微生物是則必要供給無氧的條件·無菌技術·獲得純潔培育物的關鍵是防止外來雜菌的入侵,要留意以下幾個方面:①對試驗操作的空間、操作者的穿著和手,進展清潔和消毒。②③為避開四周環(huán)境中微生物的污染,試驗操作應在酒精燈火焰旁邊進展。④試驗操作時應避開已經滅菌處理的材料用具及四周的物品相接觸。無菌技術除了用來防止試驗室的培育物被其他外來微生物污染外,還有什么目的?答:無菌技術還能有效避開操作者自身被微生物感染?!は炯皽缇膮^(qū)分消毒指運用較為溫存的物理或化學方法僅殺死物體外表或內部一局部對人體有害的微生物〔不包括芽孢和孢子〕煮沸〔對于一些不耐高溫的液體〕〔酒精、氯氣、石炭酸等〕消毒、紫外線消毒。滅菌則是指運用猛烈的理化因素殺死物體內外全部的微生物,包括芽孢和孢子。滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。滅菌方法:①接種環(huán)、接種針、試管口等運用灼燒滅菌法;②玻璃器皿、金屬用具等運用干熱滅菌法,所用器械是干熱滅菌箱;③滅菌鍋。④外表滅菌和空氣滅菌等運用紫外線滅菌法,所用器械是紫外燈。比較理化因素的作殲滅微生物的數芽孢和孢子能否項用強度量被殲滅消毒較為溫存局部生活狀態(tài)的微生物不能滅菌猛烈全部微生物能制作牛肉膏蛋白胨固體培育基方法步驟:計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。倒平板操作的步驟:①瓶,左手拔出棉塞。②右手拿錐形瓶,將瓶口快速通過火焰。③錐形瓶中的培育基〔約10~20mL〕倒入培育皿,左手馬上蓋上培育皿的皿蓋。④5~10min使培育皿蓋在下、皿底在上?!さ蛊桨宀僮鞯奶接懪嘤鶞缇?,必要冷卻到50℃左右時,才能用來倒平板。你用什么方法來估量培育基的溫度?降到剛剛不燙手時,就可以進展倒平板了。為什么必要使錐形瓶的瓶口通過火焰?答:通過灼燒滅菌,防止瓶口的微生物污染培育基。3.平板冷凝后,為什么要將平板倒置?比較高,將平板倒置,既可以使培育基外表的水分更好地揮發(fā),又可以防止皿蓋上的水珠落入培育基,造成污染。4位,這個平板還能用來培育微生物嗎?為什么?好不要用這個平板培育微生物。純化大腸桿菌平板劃線法和稀釋涂布平板法。平板劃線法是通過接種環(huán)在瓊脂固體培育基外表連續(xù)劃線的操逐步稀釋落。稀釋涂布平板法是將菌液進展一系列的梯度稀釋,然后將不同列稀釋操作和涂布平板操作兩步。用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種的目的是:使聚攏在一起便于純化菌種。平板劃線法操作步驟:①將接種環(huán)放在火焰上灼燒,直到接種環(huán)燒紅。②在火焰旁冷卻接種環(huán),并翻開棉塞。③將試管口通過火焰。④將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液。⑤⑥左手將皿蓋翻開一條縫隙,右手⑦灼燒接種環(huán),待其冷卻后,從第一區(qū)域劃線的末端開場往其次區(qū)域內劃線。重復以上操作,在三、四、五區(qū)域內⑧將平板倒置放入培育箱中培育?!て桨鍎澗€操作的探討為什么在操作的第一步以和每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)?在劃線操作完畢時,照舊必要灼燒接種環(huán)嗎?為什么?環(huán)上殘留的菌種,避開細菌污染環(huán)境和感染操作者。在灼燒接種環(huán)之后,為什么要等其冷卻后再進展劃線?答:以免接種環(huán)溫度太高,殺死菌種。端開場劃線?答:劃線后,線條末端細菌的數目比線條起始處要少,每次從上一次劃線的末端開場,能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐步削減,最終能得到由單個細菌生殖而來的菌落。涂布平板操作的步驟:①將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。②取少量菌液,滴加到培育基外表。③將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃,待酒精燃盡后,冷卻8~10s。④用涂布器將菌液均勻地涂布在培育基外表。涂布平板操作的探討2提示:應從操作的各個微小環(huán)節(jié)保證“無菌”。例如,酒精燈及培育皿的間隔要適宜、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰四周;等等。菌種的保存對于頻繁運用的菌種,可以承受臨時保藏的方法。①臨時保藏方法將菌種接種到試管的固體斜面培育基上,在適宜的溫度下培育。當菌落長成后,將試管放入4℃的冰箱中保藏。以后每3~6個月,都要重將菌種從舊的培育基上轉移到簇的培育基上。②缺點對于必要長期保存的菌種,可以承受甘油管藏的方法。在3mL1mL1mL培育的菌液-20℃的冷凍箱中保存。疑難解答生物的養(yǎng)分生命活動,保證發(fā)育、生殖所需的外源物質。人和動物的養(yǎng)分物質:水、無機鹽、糖類、脂質、蛋白質、維生素六類。植物的養(yǎng)分物質:礦質元素、水、二氧化碳等三類。微生物的養(yǎng)分物質:水、無機鹽、碳源、氮源和特別養(yǎng)分物質五類。確定培育基制作是否合格的方法1~2育基的制備是成功的,否則必要重制備。課題二土壤中分解尿素的細菌的分別及計數尿素是一種重要的農業(yè)氮肥,尿素并不能干脆被農作物吸取。只尿液中覺察的選擇菌株試驗室中微生物的選擇應用的原理人為供給有利于目的菌株生長的條件〔包括養(yǎng)分、溫度、pH〕,同時抑制或阻擋其他微生物生長。選擇性培育基在微生物學中,將允許特定種類的微生物生長,同時抑制或阻擋其他種類微生物生長的培育基,稱作選擇培育基。配制選擇培育基的依據依據選擇培育的菌種的生理代謝特點參與某種物質以到達選擇的目的。例如,培育基中不參與有機物可以選擇培育自養(yǎng)微生物;培育鹽可選擇培育金黃色葡萄球菌等。統(tǒng)計菌落數目稀釋涂布平板法和顯微鏡干脆計數。稀釋涂布平板法統(tǒng)計樣品中活菌的數目的原理當樣品的稀釋度足夠高時,培育基外表生長的一個菌落,來源于品中大約含有多少活細菌。為了保證結果準確,一般設置3~5個平板,選擇菌落數在30~300的平板進展計數,并取平均值。統(tǒng)計的是活菌數來表示。展計數2.為了防止菌落集中,影響計數,可在培育基中參與TTC3.本法僅限于形成菌落的微生物設置比照設置比照的主要目的是解除試驗組中非測試因素對試驗結果的影響,進步試驗結果的可信度。比照試驗是指除了被測試的條件以外,由的干擾,證明確實是所測試的條件引起相應的結果。試驗設計試驗設計包括試驗方案,所需儀器、材料、用具和藥品,具體的施行步驟以和時間支配等的綜合考慮和支配。土壤取樣:同其他生物環(huán)境相比,土壤中的微生物,數量最大,種類最多。在富含有機質的土壤表層,有更多的微生物生長。從富含有機物、潮濕、pH≈73~8cm的土壤層取樣。樣品的稀釋:樣品的稀釋程度將干脆影響平板上生長的菌落數目。在實際操作中,通常選用確定稀釋范圍的樣品液進展培育,以保30300之間、適于計數的平板。測定土壤中細菌的數量,一般選用104 105 106測定放線菌的數量,一般選用103 104 105測定真菌的數量,一般選用102 103 104微生物的培育及視察不同種類的微生物,往往必要不同的培育溫度和培育時間。細菌30~37℃1~2天25~28℃5~7天霉菌25~28℃3~4天每隔24說,在確定的培育條件下〔一樣的培育基、唯獨和培育時間〕,同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征。形態(tài)、大小、隆起程度、顏色。疑難解答〔1〕如何從平板上的菌落數推想出每克樣品中的菌落數?統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數,最好能統(tǒng)計3個平板,計算出平板菌落數的平均值每克樣品中的菌落數=〔C/V〕*M其中,C板上生長的平均菌落數,V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積〔ml〕,M代表稀釋倍數課題三分解纖維素的微生物的分別最豐富的多糖類物質。纖維素及纖維素酶棉花是自然界中纖維素含量最高的自然產物,木材、作物秸稈等也富含纖維素。纖維素酶是一種復合酶,一般認為它至少包括三種組分,即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶,前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖,第三物的生長供給養(yǎng)分。纖維素分解菌的選擇選擇方法:剛果紅染色法??梢酝ㄟ^顏色反響干脆對微生物進展選擇。剛果紅染色法選擇纖維素分解菌的原理剛果紅是一種染料,它可以及像纖維素這樣的多糖物質形成紅色復合物就無法形成,培育基中會消滅以纖維素分解菌為中心的透亮圈。這樣,我們就可以通過是否產生透亮圈來選擇纖維素分解菌。分別分解纖維素的微生物的試驗流程土壤取樣→選擇培育〔此步是否必要,應依據樣品中目的菌株數量的多少來確定育基上→選擇產生透亮圈的菌落土壤采集 選擇富含纖維素的環(huán)境。剛果紅染色法分別纖維素分解菌的步驟 倒平板操作制備菌懸液、涂布平板剛果紅染色法種類一種是先培育微生物,再參與剛果紅進展顏色反響,另一種是在倒平板時就參與剛果紅。課題延長對分解纖維素的微生物進展了初步的選擇后,只是分別純化的第液體發(fā)酵和固體發(fā)酵展定量的測定。疑難解答為什么要在富含纖維素的環(huán)境中找尋纖維素分解菌?由于生物及環(huán)境的相互依存關系,在富含纖維素的環(huán)境中,纖維要高于一般環(huán)境。將濾紙埋在土壤中有什么作用?你認為濾紙應當埋進土壤多深?將濾紙埋
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