四艾滋病梅毒丙肝檢測及結(jié)果意義演示文稿

四艾滋病梅毒丙肝檢測及結(jié)果意義演示文稿當(dāng)前第1頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)內(nèi)容提要：1.艾滋病檢測程序、方法應(yīng)用和注意事項(xiàng)。2.梅毒檢測程序、方法應(yīng)用和注意事項(xiàng)。3.丙肝檢測程序、方法應(yīng)用和注意事項(xiàng)。4.影響實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果的因素分析當(dāng)前第2頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)艾滋病檢測方法常用HIV病原學(xué)檢測方法:

1.核酸檢測（PCR、病毒載量）

2.病毒培養(yǎng)分離

3.

P24抗原檢測常用HIV抗體檢測方法:初篩：1.酶聯(lián)免疫吸附法ELISA：第三代、第四代2.快速檢測RT：金標(biāo)、硒標(biāo)3.簡單法PA:明膠顆粒凝集確證：免疫印跡法WB:（WesternBlot）、RIBA其他相關(guān)檢測方法:

免疫功能測定：CD4/CD8檢測當(dāng)前第3頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)HIV抗體檢測目的1HIV抗體檢測可用于診斷、血液篩查、監(jiān)測等。2以診斷為目的的檢測是為了確定個(gè)體HIV感染狀況，包括臨床檢測、自愿咨詢檢測、根據(jù)特殊需要進(jìn)行的體檢等。3以血液篩查為目的的檢測是為了防止輸血傳播HIV，包括獻(xiàn)血員篩查和原料血漿篩查。4以監(jiān)測為目的的檢測是為了解不同人群HIV感染率及其變化趨勢(shì)，包括各類高危人群、重點(diǎn)人群和一般人群。當(dāng)前第4頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)1根據(jù)目的選擇檢測方法及檢測策略。2嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室SOP。3篩查試驗(yàn)陽性，須作確證試驗(yàn)。4篩查試驗(yàn)陰性，不應(yīng)做確證試驗(yàn)。5篩查及確證試驗(yàn)陽性均應(yīng)做好咨詢工作。HIV抗體檢測的要點(diǎn)當(dāng)前第5頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)樣品初篩試驗(yàn)篩查試劑陽性反應(yīng)陰性反應(yīng)復(fù)檢試驗(yàn)原有試劑+另一不同原理（或廠家）試劑或另外兩種不同原理（或廠家）試劑均陽性反應(yīng)一陰一陽均陰性反應(yīng)確證試驗(yàn)報(bào)告陰性圖1HIV抗體篩查檢測流程HIV抗體篩查檢測流程當(dāng)前第6頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)初篩試驗(yàn)

1、HIV抗體檢測分為篩查試驗(yàn)（包括初篩和復(fù)檢）和確證試驗(yàn)。2、根據(jù)檢測目的選用符合要求的篩查試劑對(duì)樣品進(jìn)行初篩檢測，對(duì)呈陰性反應(yīng)的樣品，可出具HIV抗體陰性（-）報(bào)告；對(duì)呈陽性反應(yīng)的樣品，需要進(jìn)一步做復(fù)檢試驗(yàn)和確證試驗(yàn)。當(dāng)前第7頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)復(fù)檢試驗(yàn)對(duì)初篩呈陽性反應(yīng)的樣品，應(yīng)使用原有試劑和另外一種不同原理（或廠家）的試劑，或另外兩種不同原理或不同廠家的試劑進(jìn)行復(fù)檢試驗(yàn)。如果初篩檢測使用抗原抗體聯(lián)合試劑，則復(fù)檢必須包括一種抗原抗體聯(lián)合試劑。如兩種試劑復(fù)檢均呈陰性反應(yīng)，則報(bào)告HIV抗體陰性（-）；如均呈陽性反應(yīng)，或一陰一陽，需送艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確證試驗(yàn)。如果抗原抗體聯(lián)合試劑檢測呈陽性反應(yīng)，而抗體試劑檢測為陰性反應(yīng)，則應(yīng)考慮進(jìn)行HIV-1p24抗原或核酸檢測，必要時(shí)進(jìn)行隨訪。當(dāng)前第8頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)確證試驗(yàn)1確證試劑必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)批準(zhǔn)、在有效期內(nèi)的試劑。2確證樣品可采用血清、血漿、濾紙干血斑樣品。3確證方法包括免疫印跡試驗(yàn)（WB）、條帶免疫試驗(yàn)、放射免疫沉淀試驗(yàn)（RIPA）及免疫熒光試驗(yàn)（IFA）等。當(dāng)前第9頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)HIV抗體不確定（±）

結(jié)合流行病學(xué)資料，可以在4周后隨訪檢測，如帶型沒有進(jìn)展或呈陰性反應(yīng)，則報(bào)告陰性；如隨訪期間出現(xiàn)陽性反應(yīng)，則報(bào)告陽性；如隨訪期間帶型有進(jìn)展，但不滿足陽性標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)繼續(xù)隨訪到8周。如帶型沒有進(jìn)展或呈陰性反應(yīng)則報(bào)告陰性；滿足HIV抗體陽性診斷標(biāo)準(zhǔn)則報(bào)告陽性，不滿足陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)可視情況決定是否繼續(xù)隨訪。隨訪期間可根據(jù)需要，檢測病毒核酸或P24抗原作為輔助診斷。如果出現(xiàn)HIV-2型的特異性指示條帶，根據(jù)實(shí)際情況需用HIV-2型免疫印跡試劑再做HIV-2的抗體確證試驗(yàn)或HIV-2核酸檢測，以進(jìn)一步明確HIV-2感染狀態(tài)，疑難樣品送國家艾滋病參比實(shí)驗(yàn)室進(jìn)一步分析。當(dāng)前第10頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)HIV-2抗體陽性出現(xiàn)HIV-2型特異性指示帶的樣品：如果同時(shí)呈HIV-1抗體陽性反應(yīng)，報(bào)告HIV-1抗體陽性，不推薦進(jìn)一步做HIV-2抗體確證試驗(yàn)；如果同時(shí)呈HIV-1抗體不確定或陰性反應(yīng)，需用HIV-2型確證試劑再做HIV-2的抗體確證試驗(yàn)。同時(shí)符合以下二條標(biāo)準(zhǔn)，即出現(xiàn)至少2條env帶（gp36和gp140/gp105），和試劑盒提供的陽性判定標(biāo)準(zhǔn)，可判為HIV-2抗體陽性。當(dāng)前第11頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)孕產(chǎn)婦新生兒檢測當(dāng)前第12頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)艾滋病快速檢測試驗(yàn)（RT）是在ELISA基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種檢測技術(shù)，它用膠體金或硒標(biāo)記抗原、抗體后以層析方法進(jìn)行檢測。突出優(yōu)點(diǎn)為快速、試劑便于保存、檢測不需要特殊設(shè)備并可以單份檢測，比較適用于基層醫(yī)療單位和標(biāo)本初篩。挑戰(zhàn)：進(jìn)一步提高檢測靈敏度和特異性，實(shí)現(xiàn)檢測多元化，進(jìn)行定量和半定量檢測膠體金紙條將會(huì)更加廣泛地應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域。當(dāng)前第13頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)

快速試劑使用中存在的問題快速檢測只是初篩檢測，存在較高的假陽性率和假陰性率；技術(shù)上屬于主觀判讀，不具備標(biāo)準(zhǔn)化條件；快速檢測的質(zhì)量控制問題目前沒有有效方法；價(jià)格是常規(guī)技術(shù)的5倍。行政經(jīng)費(fèi)政策不支持，個(gè)人支付價(jià)位高；存在較大的批間誤差，加上不屬于政策規(guī)定項(xiàng)目，風(fēng)險(xiǎn)較大，基層醫(yī)療衛(wèi)生單位不愿意承擔(dān)責(zé)任。擔(dān)心敏感性不夠高，不敢出陰性報(bào)告；當(dāng)前第14頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)HIV-1抗原檢測的用途：1HIV-1感染窗口期、HIV抗體不確定或HIV-1陽性母親所生嬰兒的鑒別診斷。2第四代HIV檢測試劑的陽性結(jié)果的輔助診斷。3監(jiān)測病程進(jìn)展或抗病毒治療效果。4HIV分離培養(yǎng)，病毒復(fù)制狀況的監(jiān)測。當(dāng)前第15頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)HIV-1抗原檢測方法和結(jié)果報(bào)告方法：ELISA，有定量檢測。結(jié)果報(bào)告和解釋：HIV-1P24抗原篩選試驗(yàn)有反應(yīng)的標(biāo)本必須經(jīng)過中和試驗(yàn)確證以后才能判斷陽性或陰性。HIV-1P24抗原陽性僅作為HIV感染的輔助診斷依據(jù)，不能據(jù)此確診。HIV-1P24抗原陰性結(jié)果不能排除HIV感染。監(jiān)測病程進(jìn)展或抗病毒治療效果應(yīng)進(jìn)行HIV-1P24抗原的定量檢測。當(dāng)前第16頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)HIV核酸檢測的意義1早期診斷：嬰幼兒或成人有急性HIV感染綜合癥或流行病學(xué)史，且不同時(shí)間的兩次HIV核酸檢測結(jié)果均為陽性，即可診斷。使用多樣品集合的方法，HIV抗體陰性的高危人群樣品進(jìn)行集合核酸檢測，及時(shí)發(fā)現(xiàn)窗口期感染。2疑難樣本的輔助診斷：幫助提供HIV感染早期或終末期的證據(jù)。3遺傳變異監(jiān)測：用于HIV-1和HIV-2感染的鑒別診斷、HIV感染傳播鏈的分析、HIV基因亞型和重組病毒的鑒定和分析以及人群HIV遺傳變異趨勢(shì)的監(jiān)測。4耐藥性監(jiān)測：了解耐藥性病毒株流行的態(tài)勢(shì)和指導(dǎo)臨床醫(yī)生判斷抗病毒治療效果和修改抗病毒治療方案。5病程監(jiān)控及預(yù)測：有助于確定疾病發(fā)展的階段，以確定相應(yīng)的治療方案。6指導(dǎo)抗病毒治療及療效判定當(dāng)前第17頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)艾滋病感染產(chǎn)婦所生兒童HIV感染早期診斷檢測流程

當(dāng)前第18頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)HIV-1耐藥檢測1耐藥監(jiān)測用于HIV-1感染人群和抗病毒治療人群。用于新近感染人群的耐藥性監(jiān)測，了解耐藥毒株流行的情況；用于治療前人群的監(jiān)測，指導(dǎo)制定一線抗病毒治療方案；用于抗病毒治療人群的耐藥性監(jiān)測，進(jìn)行HIV-1耐藥發(fā)生、發(fā)展趨勢(shì)以及影響因素的分析，指導(dǎo)和完善大規(guī)模公共衛(wèi)生模式抗病毒治療的程序，以及制定二線治療方案。.2耐藥檢測用于個(gè)體患者的耐藥檢測。在抗病毒治療前進(jìn)行耐藥檢測，可指導(dǎo)臨床醫(yī)生制定抗病毒治療方案，保證抗病毒治療的效果；在抗病毒治療過程中進(jìn)行耐藥檢測，可指導(dǎo)臨床醫(yī)生分析治療失敗的原因，并制定補(bǔ)救治療方案。當(dāng)前第19頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測病原體檢測

暗視野顯微鏡檢查

鍍銀染色熒光抗梅毒螺旋體單克隆抗體法血清學(xué)檢測非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)（非特異性試驗(yàn)）梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)（特異性試驗(yàn)）當(dāng)前第20頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)病原體檢測——暗視野顯微鏡檢查

螺旋狀，纖細(xì)、白色、有折光的。長約為兩個(gè)紅細(xì)胞，有6-12個(gè)螺旋。具有旋轉(zhuǎn)、蛇行及伸縮等3種特征性的運(yùn)動(dòng)方式。當(dāng)前第21頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)病原體檢測——鍍銀染色檢查方法:涂片干燥→固定→洗滌→媒染→銀染→鏡檢

可見到染成棕褐色的梅毒螺旋體。當(dāng)前第22頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)病原體檢測——直接熒光法

FITC熒光素標(biāo)記的抗梅毒螺旋體單克隆抗體與樣本中的梅毒螺旋體結(jié)合，在熒光顯微鏡下，可見到發(fā)黃綠色熒光的梅毒螺旋體。當(dāng)前第23頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)病原體檢測具有快速、方便、易操作的特點(diǎn)。是診斷早期現(xiàn)癥梅毒的最好方法。未見到梅毒螺旋體，不能排除罹患梅毒，可讓患者復(fù)查及進(jìn)行血清學(xué)檢查。當(dāng)前第24頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)血清學(xué)檢測非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)（VDRL）不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)（USR）快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR、TRUST）梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS）梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)（TPHA）梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）梅毒螺旋體抗體酶聯(lián)免疫試驗(yàn)（TP-ELISA）梅毒螺旋體快速診斷試驗(yàn)（TP-RT）當(dāng)前第25頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)以心磷脂、卵磷脂、膽固醇為抗原,檢測抗類脂質(zhì)抗體（反應(yīng)素），主要是IgM和IgG混合體。方法簡單、快速、價(jià)格低廉、敏感性和特異性較好，適用于大量人群的篩查。治療后血清滴度可下降并轉(zhuǎn)為陰性，可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染指征。梅毒治療后部份病人存在血清固定現(xiàn)象。用于鑒別先天梅毒與被動(dòng)反應(yīng)素血癥。VDRL試驗(yàn)主要用于神經(jīng)梅毒的腦脊液檢查。艾滋病人合并感染梅毒，血清試驗(yàn)呈陰性。存在一定的假陽性。不同試驗(yàn)的結(jié)果沒有可比性。當(dāng)前第26頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)前帶現(xiàn)象指非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)中，有時(shí)血清中存在高濃度的抗體時(shí)出現(xiàn)的弱陽性或陰性反應(yīng)的結(jié)果，而臨床上又象二期梅毒。將血清稀釋后再進(jìn)行試驗(yàn)，出現(xiàn)陽性的結(jié)果。有前帶現(xiàn)象的病人在臨床治療中應(yīng)注意“賈赫氏反應(yīng)”。當(dāng)前第27頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)血清固定（耐血清性）指經(jīng)抗梅毒治療后，非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)在一定時(shí)期內(nèi)不陰轉(zhuǎn)，而保持低滴度陽性（1：4以內(nèi)）的反應(yīng)。早期的血清固定常與治療量不足或不規(guī)則治療、復(fù)發(fā)、再感染或有神經(jīng)系統(tǒng)梅毒等因素有關(guān)。晚期血清固定與梅毒的類型及開始治療的時(shí)間早晚有關(guān)。對(duì)于這種病人，在經(jīng)過詳細(xì)的檢查，特別是在除外神經(jīng)、心臟與其他內(nèi)臟梅毒后，應(yīng)停止治療，作定期隨訪。當(dāng)前第28頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)方法原理優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)FTA-ABS完整形態(tài)的梅毒螺旋體作為抗原,吸收過的梅毒患者血清熒光素標(biāo)記的抗人Ig。陽性可見蘋果綠色熒光的螺旋體最敏感特異性高“金標(biāo)準(zhǔn)操作繁瑣技術(shù)要求高TPHA超聲裂解的梅毒螺旋體致敏紅細(xì)胞，產(chǎn)生肉眼可見的凝集反應(yīng)敏感性好操作簡單紅細(xì)胞易產(chǎn)生非特異性凝集TPPA原理與TPHA相同，以人工合成的惰性明膠作為載體試劑穩(wěn)定結(jié)果清晰早期梅毒敏感性低于FTA-ABSTP-ELISA超聲裂解或重組的梅毒螺旋體抗原，雙抗原夾心法價(jià)格較低大樣本，自動(dòng)化廠家間敏感性和特異性差異較大TP-RT雙抗原夾心法，膠體金標(biāo)記免疫層析或免疫滲濾試驗(yàn)簡便快速無需儀器敏感性特異性有待評(píng)估當(dāng)前第29頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)梅毒血清學(xué)試驗(yàn)的假陽性反應(yīng)非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)感染因素肺結(jié)核病毒性肝炎肺炎球菌性肺炎亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎傳染性單核細(xì)胞增多癥水痘、麻疹、鉤端螺旋體病麻風(fēng)傳染性單核細(xì)胞增多癥麻風(fēng)萊姆病瘧疾非感染因素自身免疫性疾病（系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、干燥綜合征等）毒品成癮者肝硬化衰老甲狀腺炎系統(tǒng)性紅斑狼瘡當(dāng)前第30頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)梅毒血清學(xué)試驗(yàn)假陽性反應(yīng)的對(duì)策技術(shù)性假陽性反應(yīng)由于標(biāo)本的保存不當(dāng)（如細(xì)菌污染或溶血）、試劑質(zhì)量差或過期、或?qū)嶒?yàn)室操作錯(cuò)誤所造成，可通過重復(fù)試驗(yàn)來排除。生物學(xué)假陽性反應(yīng)是由于患者有其他疾病或生理狀態(tài)發(fā)生變化，使梅毒血清試驗(yàn)出現(xiàn)陽性。非梅毒螺旋體抗原的血清學(xué)試驗(yàn)可做FTA-ABS、TPHA（TPPA）等確證試驗(yàn)進(jìn)行排除。梅毒螺旋體抗原的血清學(xué)試驗(yàn)時(shí)應(yīng)對(duì)病人進(jìn)行全面檢查、密切隨訪。當(dāng)前第31頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)梅毒血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果USRRPRVDRLTPHATPPAFTA-ABS意義

-

-排除梅毒一期梅毒的早期艾滋病患者合并梅毒++現(xiàn)癥梅毒（梅毒孕婦所生嬰兒除外）+-生物學(xué)假陽性-+早期梅毒經(jīng)治療后當(dāng)前第32頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)梅毒血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果

非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)(確證是否為現(xiàn)癥病人)↓↑互為確證梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)(確證是否為感染者)當(dāng)前第33頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)胎傳梅毒的實(shí)驗(yàn)診斷方法早期先天梅毒暗視野檢查：胎盤、臍帶、鼻分泌物、皮膚黏膜。血清學(xué)檢查晚期先天梅毒血清學(xué)檢查當(dāng)前第34頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)胎傳梅毒的實(shí)驗(yàn)診斷暗視野檢查梅毒螺旋體陽性。患兒非梅毒螺旋體血清抗體滴度持續(xù)上升?；純悍敲范韭菪w血清學(xué)定量試驗(yàn)結(jié)果比母親高4倍?；純簷z出19S-IgM抗體。當(dāng)前第35頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)神經(jīng)梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷梅毒血清學(xué)檢查陽性。腦脊液細(xì)胞計(jì)數(shù)蛋白質(zhì)測定結(jié)果異常。腦脊液VDRL試驗(yàn)陽性。腦脊液檢測到IgM抗體。當(dāng)前第36頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)丙肝實(shí)驗(yàn)室檢測抗-HCV檢測HCV抗原檢測定量HCVRNA檢測HCV基因型和亞型檢測當(dāng)前第37頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)HCV-RNA檢測1.HCVRNA測定定性套式PCR.2.HCVRNA定量方法包括DNA探針技術(shù)、競爭PCR法、熒光定量法等，3.定量測定有助于了解病毒復(fù)制程度、抗病毒治療的選擇及療效評(píng)估等。4.對(duì)HCVRNA尚可進(jìn)行基因分型，方法包括序列測定、PCR、酶切、探針雜交等。

當(dāng)前第38頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)4影響實(shí)驗(yàn)室檢測的因素分析每一個(gè)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)都有可能得出假陽性或假陰性的結(jié)果生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性用以下三種參數(shù)來描述:?敏感性?特異性?（陰、陽性）預(yù)示值?應(yīng)考慮人群感染率當(dāng)前第39頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)4.1檢測結(jié)果準(zhǔn)確性的計(jì)算檢測結(jié)果真實(shí)的狀態(tài)合計(jì)感染未感染陽性ABA+B陰性CDC+D合計(jì)A+CB+DA+B+C+DA=感染，檢測陽性結(jié)果(真陽性)B=未感染，檢測陽性結(jié)果(假陽性)C=感染，檢測陰性結(jié)果(假陰性)D=未感染，檢測陰性結(jié)果(真陰性)A+C=真正感染HIV的總?cè)藬?shù)B+D=真正未感染HIV的總?cè)藬?shù)當(dāng)前第40頁\共有44頁\編于星期四\16點(diǎn)