經(jīng)典免疫學(xué)技術(shù)演示文稿

經(jīng)典免疫學(xué)技術(shù)演示文稿當(dāng)前第1頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)（優(yōu)選）經(jīng)典免疫學(xué)技術(shù)當(dāng)前第2頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)第一節(jié)沉淀反應(yīng)第二節(jié)凝集反應(yīng)第三節(jié)補(bǔ)體參與的抗原 抗體反應(yīng)第四節(jié)中和反應(yīng)第五章 經(jīng)典免疫學(xué)技術(shù)當(dāng)前第3頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)第一節(jié)沉淀反應(yīng)根據(jù)抗原與抗體反應(yīng)的條件及附加因素，沉淀反應(yīng)可分為兩種主要形式：1．溶液中沉淀反應(yīng)

2．凝膠中沉淀反應(yīng)當(dāng)前第4頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)第一節(jié)沉淀反應(yīng)根據(jù)抗原與抗體反應(yīng)的條件及附加因素，沉淀反應(yīng)可分為兩種主要形式：

1．溶液中沉淀反應(yīng)

2．凝膠中沉淀反應(yīng)當(dāng)前第5頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)1．溶液中沉淀反應(yīng)

（Precipitationreactioninsolution）

是指在清徹透明的液體中，呈溶解狀態(tài)的抗原與抗體在試管內(nèi)或凹玻片上混勻，可凝聚成為肉眼可見的絮狀或顆粒狀的不溶性沉淀物。當(dāng)前第6頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)溶液中沉淀反應(yīng)

鹽溶液抗原+抗體———沉淀

20~56℃、pH6～8

抗原：沉淀原抗體：沉淀素當(dāng)前第7頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)1．溶液中沉淀反應(yīng)

（Precipitationreactioninsolution）

（1）環(huán)狀沉淀試驗(yàn)（2）免疫比濁法（3）免疫沉淀技術(shù)當(dāng)前第8頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)（1）環(huán)狀沉淀試驗(yàn)

環(huán)狀沉淀試驗(yàn)

（ringprecipitationtest）或毛細(xì)管內(nèi)沉淀反應(yīng) （precipitationin capillarytube）當(dāng)前第9頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)當(dāng)前第10頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)（2）免疫比濁法(immunonephelomytry）

可溶性的抗原、抗體在液相中特異結(jié)合，形成一定大小的抗原抗體復(fù)合物，使反應(yīng)液出現(xiàn)渾濁。復(fù)合物的量與濁度成正比。與標(biāo)準(zhǔn)品比較即可計(jì)算出樣品中的抗原或抗體含量。當(dāng)前第11頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)當(dāng)前第12頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)免疫沉淀技術(shù)當(dāng)前第13頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)當(dāng)前第14頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)免疫共沉淀當(dāng)前第15頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)GSTpull-down技術(shù)

當(dāng)前第16頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)第一節(jié)沉淀反應(yīng)根據(jù)抗原與抗體反應(yīng)的條件及附加因素，沉淀反應(yīng)可分為兩種主要形式：1．溶液中沉淀反應(yīng)

2．凝膠中沉淀反應(yīng)當(dāng)前第17頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)2．凝膠中沉淀反應(yīng)（Precipitationreactioningel）

1968年Ouchterlong發(fā)明的。即將抗原抗體溶液放在瓊脂凝膠板上的小孔中，使它們彼此對(duì)向擴(kuò)散，在抗原抗體相遇的地方形成沉淀線。當(dāng)前第18頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)2．凝膠中沉淀反應(yīng)

此沉淀線的突出性質(zhì)是：特異性抗原抗體不能通過；與沉淀線無關(guān)的抗原和抗體分子則可自由通過此沉淀線。當(dāng)前第19頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)2．凝膠中沉淀反應(yīng)（1）單相免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（2）雙相免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（3）免疫電泳（4）火箭電泳試驗(yàn)（5）免疫印跡技術(shù)當(dāng)前第20頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)單相免疫擴(kuò)散試驗(yàn)當(dāng)前第21頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)當(dāng)前第22頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)雙相免疫擴(kuò)散試驗(yàn)當(dāng)前第23頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)（3）免疫電泳（immunoelectrophoresis）當(dāng)前第24頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)當(dāng)前第25頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)（4）火箭電泳試驗(yàn)當(dāng)前第26頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)當(dāng)前第27頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)當(dāng)前第28頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)又稱Westernblotting電泳印漬及檢測(cè)（5）免疫印漬技術(shù)（immunoblotting）當(dāng)前第29頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)免疫印漬當(dāng)前第30頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)當(dāng)前第31頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)第一節(jié)沉淀反應(yīng)第二節(jié)凝集反應(yīng)第三節(jié)補(bǔ)體參與的抗原 抗體反應(yīng)第四節(jié)中和反應(yīng)第五章 經(jīng)典免疫學(xué)技術(shù)當(dāng)前第32頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)第二節(jié)凝集反應(yīng)1．直接凝集反應(yīng)2．間接凝集反應(yīng)3．橋梁凝集反應(yīng)4．共同凝集反應(yīng)

當(dāng)前第33頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)第二節(jié)凝集反應(yīng)1．直接凝集反應(yīng)2．間接凝集反應(yīng)3．橋梁凝集反應(yīng)4．共同凝集反應(yīng)

當(dāng)前第34頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)1．直接凝集反應(yīng)

（directagglutination）

是將細(xì)菌或紅細(xì)胞與其相應(yīng)抗體結(jié)合產(chǎn)生的細(xì)菌凝集或紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。當(dāng)前第35頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)1．直接凝集反應(yīng)（1）微生物凝集反應(yīng) 如診斷傷寒病的肥達(dá)氏（Widalreaction）反應(yīng)（2）同種紅細(xì)胞凝集反應(yīng)如檢查血型的血細(xì)胞凝集現(xiàn)象當(dāng)前第36頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)當(dāng)前第37頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)第二節(jié)凝集反應(yīng)1．直接凝集反應(yīng)2．間接凝集反應(yīng)3．橋梁凝集反應(yīng)4．共同凝集反應(yīng)

當(dāng)前第38頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)2．間接凝集反應(yīng)

（indirectagglutination）

用可溶性抗原（或抗體）包被在一種與免疫無關(guān)的、具一定大小的不溶性顆粒（即載體顆粒，如：乳膠顆粒或紅細(xì)胞）的表面，然后與相應(yīng)抗體（或抗原）作用，在有適宜電解質(zhì)存在的條件下，結(jié)合產(chǎn)生的凝集現(xiàn)象。當(dāng)前第39頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)2．間接凝集反應(yīng)正向間接凝集反應(yīng)：將抗原先吸附在載體表面，然后與相應(yīng)抗體結(jié)合產(chǎn)生的凝集反應(yīng)。反向間接凝集反應(yīng)：將特異性抗體先吸附在載體表面，然后與相應(yīng)抗原結(jié)合產(chǎn)生的凝集反應(yīng)。既可檢測(cè)抗原，也可檢測(cè)抗體；方法簡(jiǎn)便、敏感。當(dāng)前第40頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)正向間接凝集反應(yīng)當(dāng)前第41頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)

此方法對(duì)檢測(cè)微量抗原具有較高的敏感性。而且由于相關(guān)病原體的抗原成分一般情況下比血清抗體出現(xiàn)早，所以可用于某些傳染病如鉤端螺旋體抗原和乙型肝炎表面抗原(HBsAg)或原發(fā)性肝癌AFP的檢測(cè)等。反向間接凝集反應(yīng)當(dāng)前第42頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)當(dāng)前第43頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)第二節(jié)凝集反應(yīng)1．直接凝集反應(yīng)2．間接凝集反應(yīng)3．橋梁凝集反應(yīng)4．共同凝集反應(yīng)

當(dāng)前第44頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)3．橋梁凝集反應(yīng)

又稱Coombs抗球蛋白試驗(yàn)。此試驗(yàn)用于檢測(cè)不完全抗體。當(dāng)前第45頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)當(dāng)前第46頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)當(dāng)前第47頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)第二節(jié)凝集反應(yīng)1．直接凝集反應(yīng)2．間接凝集反應(yīng)3．橋梁凝集反應(yīng)4．共同凝集反應(yīng)

當(dāng)前第48頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)4．共同凝集反應(yīng)

又稱協(xié)同凝集反應(yīng)。指由兩種顆粒成分相互作用而發(fā)生的凝集反應(yīng)。當(dāng)前第49頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)4．共同凝集反應(yīng)（1）細(xì)菌抗體與攜帶蛋白A的金黃色葡萄球菌CowanⅠ系致敏，即通過其IgG的Fc段與蛋白A結(jié)合，再與相應(yīng)細(xì)菌發(fā)生凝集反應(yīng)。（2）玫瑰花結(jié)試驗(yàn)：主要用于研究各種淋巴細(xì)胞特性。當(dāng)前第50頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)當(dāng)前第51頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)E花環(huán)形成示意圖當(dāng)前第52頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)

B細(xì)胞EA、EAC玫瑰花環(huán)形成示意圖

當(dāng)前第53頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)淋巴細(xì)胞的分離當(dāng)前第54頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)玫瑰花結(jié)當(dāng)前第55頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)淋巴細(xì)胞與紅細(xì)胞形成

玫瑰花結(jié)的主要模式玫瑰花結(jié)的類型紅細(xì)胞的類型及處理淋巴細(xì)胞類型E花結(jié)綿羊紅細(xì)胞T、50%NKEA花結(jié)抗體致敏的紅細(xì)胞B、T、NK、粒細(xì)胞、單核細(xì)胞及巨噬細(xì)胞EAC花結(jié)補(bǔ)體致敏的紅細(xì)胞B當(dāng)前第56頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)第一節(jié)沉淀反應(yīng)第二節(jié)凝集反應(yīng)第三節(jié)補(bǔ)體參與的抗原 抗體反應(yīng)第四節(jié)中和反應(yīng)第五章 經(jīng)典免疫學(xué)技術(shù)當(dāng)前第57頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)

第三節(jié)

補(bǔ)體參與的抗原抗體反應(yīng)

1．補(bǔ)體參與直接的抗原抗體反應(yīng)2．補(bǔ)體參與間接的抗原抗體反應(yīng)當(dāng)前第58頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)

第三節(jié)

補(bǔ)體參與的抗原抗體反應(yīng)

1．補(bǔ)體參與直接的抗原抗體反應(yīng)2．補(bǔ)體參與間接的抗原抗體反應(yīng)當(dāng)前第59頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)1．補(bǔ)體參與直接的

抗原抗體反應(yīng)

（1）溶血反應(yīng)（2）溶菌反應(yīng)當(dāng)前第60頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)（1）溶血反應(yīng)

（hemolyticassay）

溶血反應(yīng)常作為是否存在游離補(bǔ)體的指示系統(tǒng)。當(dāng)前第61頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)（1）溶血反應(yīng)1942年Rutstein和Walker根據(jù)補(bǔ)體能使兔抗羊紅細(xì)胞抗體致敏的羊紅細(xì)胞發(fā)生溶血的特點(diǎn)，建立了測(cè)定血清中總補(bǔ)體活性的方法（即50%溶血反應(yīng)CH50

測(cè)定方法）當(dāng)前第62頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)（2）溶菌反應(yīng)

溶菌反應(yīng)常作為某血清中是否存在相應(yīng)抗體的檢測(cè)方法。當(dāng)前第63頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)

第三節(jié)

補(bǔ)體參與的抗原抗體反應(yīng)

1．補(bǔ)體參與直接的抗原抗體反應(yīng)2．補(bǔ)體參與間接的抗原抗體反應(yīng)當(dāng)前第64頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)2．補(bǔ)體參與間接的

抗原抗體反應(yīng)

（1）補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（2）被動(dòng)紅細(xì)胞溶解試驗(yàn)（3）溶血空斑試驗(yàn)當(dāng)前第65頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)（1）補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（complementfixationtest）

1901年由Bordet和Gengou首先應(yīng)用溶血反應(yīng)作為指示系統(tǒng)，建立的檢測(cè)抗原抗體反應(yīng)的方法。當(dāng)前第66頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)當(dāng)前第67頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)原理當(dāng)前第68頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)當(dāng)前第69頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)（2）被動(dòng)紅細(xì)胞溶解試驗(yàn)

即吸附抗原的紅細(xì)胞在有相應(yīng)抗體和補(bǔ)體存在時(shí)，出現(xiàn)紅細(xì)胞溶解反應(yīng)?？乖旅艏t細(xì)胞——加入待測(cè)血清和補(bǔ)體——判斷結(jié)果（陽性對(duì)照：加入相應(yīng)抗體和補(bǔ)體）

當(dāng)前第70頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)（3）溶血空斑試驗(yàn)

是測(cè)定B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生和分泌抗體功能的一種體外試驗(yàn)方法。當(dāng)前第71頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)當(dāng)前第72頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)當(dāng)前第73頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)溶血空斑試驗(yàn)當(dāng)前第74頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)第一節(jié)沉淀反應(yīng)第二節(jié)凝集反應(yīng)第三節(jié)補(bǔ)體參與的抗原 抗體反應(yīng)第四節(jié)中和反應(yīng)第五章 經(jīng)典免疫學(xué)技術(shù)當(dāng)前第75頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)第四節(jié)中和反應(yīng)中和反應(yīng)（neutralization）：是免疫學(xué)和病毒學(xué)中常用于檢測(cè)中和抗體是否存在及其效價(jià)的試驗(yàn)，反映抗體中和病毒感染性或細(xì)菌毒素的生物學(xué)效應(yīng)。當(dāng)前第76頁\共有81頁\編于星期五\11點(diǎn)

中和抗體：病原微生物侵入機(jī)體后，使之產(chǎn)生能中和相應(yīng)微