酵母浸出液提取方法的改進(jìn)

第頁共頁酵母浸出液提取方法的改進(jìn)酵母浸出液提取方法的改進(jìn)1998,32(2):39～40/張瑞婷等中國獸藥雜志?39?酵母浸出液提取方法的改進(jìn)張瑞婷張立春中國獸藥監(jiān)察所北京100081收稿日期:1997-09-18酵母浸出液是支原體培養(yǎng)基中不可能少的成份[1,3]孔濾板過濾除菌或經(jīng)116℃20分鐘高壓滅菌后,置4℃保存?zhèn)溆谩Ｓ么朔椒ü仓迫?批酵母浸出液,批號為9659、9698及96918。1.4培養(yǎng)基制備用1.3項(xiàng)方法制備的3修改進(jìn)酵母浸出液,及用作對照的英國產(chǎn)Oxiod酵母干粉,按《規(guī)程》規(guī)定的方法分別各配制3批支原體培養(yǎng)基及3修改進(jìn)Frey氏培養(yǎng)基,將培養(yǎng)基按1.8ml/支的裝量分裝帶膠塞的小管(1.0×10cm)中備用。1.5培養(yǎng)基質(zhì)量測定對1.4項(xiàng)下制備的改進(jìn)酵母浸出液及英國產(chǎn)Oxiod酵母干粉分別制成的兩種培養(yǎng)基進(jìn)展測定。取分裝好的培養(yǎng)基,每組10支,將對數(shù)生長期的各種支原體(WVU-1853、GX11-T、S株、R株及BTS-7株)種子0.2ml分別接入每組第1管后,按10稀釋法稀釋至第10管(即10-10),置37℃溫箱培養(yǎng)至第7天,以培養(yǎng)物顏色出現(xiàn)明顯變化的最高稀釋管作為終點(diǎn),即一個(gè)變色單位[2]。為防止誤差,每個(gè)樣品要做3組,計(jì)算3組試驗(yàn)的平均值作為判s://..定結(jié)果。2結(jié)果2.1改進(jìn)法制取的酵母浸出液呈淡黃清亮液體與傳統(tǒng)方法制備的浸出液一樣。2.2用改進(jìn)法制取的酵母浸出液配制支原體培養(yǎng)基及改進(jìn)Frey氏培養(yǎng)基,培養(yǎng)支原體的檢測結(jié)果如表1。3討論與結(jié)論用本改進(jìn)法提取酵母浸出液,經(jīng)5株支原體標(biāo)準(zhǔn)菌株測定的數(shù)據(jù)說明均與英國Ox-oid酵母浸出干粉相一致,其質(zhì)量靈敏度也到達(dá)英國Oxoid酵母浸出干粉的標(biāo)準(zhǔn),從而[2]×[1],含有豐富核酸、核酸前體、維生素、氨基酸及生長因子,對于促進(jìn)支原體的生長繁殖及進(jìn)步支原體在培養(yǎng)基中生長率起到重要作用。質(zhì)量合格的酵母浸出液是淡黃色或桔黃色的澄清液體。長期以來,由于酵母浸出液的制備方法煩瑣[1],加之在制備過程中某些環(huán)節(jié)掌握不當(dāng)致使?fàn)I養(yǎng)成份受到破壞。其次是制備中處理時(shí)間過長(超過72小時(shí)),使污染雜菌的概率增加,制備過程中染菌的酵母浸出液其成品顏色發(fā)暗、質(zhì)量降低。受此類因素影響制備出的酵母浸出液各批次間差異很大,質(zhì)量極不穩(wěn)定,從而影響了各項(xiàng)支原體工作的正常進(jìn)展。鑒于上述問題,我們反復(fù)試驗(yàn)找到一種簡便易行提取酵母浸出液的方法,改進(jìn)其傳統(tǒng)的制備方法,進(jìn)步了支原體培養(yǎng)效率。經(jīng)過改進(jìn)后的提取方法主要是通過減少制備過程中的一些中間環(huán)節(jié),將傳統(tǒng)制作全過程需72小時(shí)縮短為8小時(shí),防止了長時(shí)間處理造成污染時(shí)機(jī)增大的可能性。1材料與方法1.1酵母鮮酵母,北京第二食品廠出品;Oxoid酵母浸出干粉(英國產(chǎn))。1.2菌種雞滑液支原體WVU-1853,GX11-T;雞毒支原體S株、R株;豬鼻支原體BTS-7均為本實(shí)驗(yàn)室保存。1.3酵母浸出液的制備取500克鮮酵母,加1500ml雙蒸水,攪拌均勻,充分溶解后煮沸15分鐘,快速冷卻,4000r/min離心15分鐘,提取上清液,再煮沸15分鐘,快速冷卻,用,?40?中國獸藥雜志1998,32(2):40～41/吳金等份沒有受到破壞,能滿足支原體生長繁殖的需要。表1培養(yǎng)基質(zhì)量測定結(jié)果檢測菌株WUV-1853GX11-7S株R株BTS-7改進(jìn)Frey酵母浸出液批號及酵母干粉(英國產(chǎn))培養(yǎng)基969510-10-00冰箱保存,用時(shí)116℃滅菌20分鐘。該提取方法操作復(fù)雜,制備時(shí)間過長。改進(jìn)后的方法操作簡單,節(jié)省時(shí)間,防止了各批次間存在的質(zhì)量差異,同時(shí)防止了因質(zhì)量不合格造成原材料的浪費(fèi)。酵母浸出液提取方法的研制成功,為各單位支原體研究、檢測工作的開展,提供了簡便的制備培養(yǎng)基的條件。【參考文獻(xiàn)】：^p[1]干粉10-10-10-10-10-00969810-10-10-10-10-099干粉96918干粉10-10-10-10-10-010910-10-10-10-10-99010-10-10-10-10-1090培養(yǎng)基10-10-支原體10-培養(yǎng)基999901中華人民共和國農(nóng)業(yè)部.中華人民共和國獸用生物制品規(guī)程.一九九二年版2陳天壽主編.微生物培養(yǎng)基的制造與應(yīng)用.北京∶中國農(nóng)業(yè)出版社,1995,4743RCoteMA.ATCCMediaUnit.ATCCMediahand-book.Firstedition,1984,24酵母浸出液傳統(tǒng)的制備過程要加氯仿,置55℃恒溫中自溶,每天搖動2次,3天后取出,經(jīng)離心棄沉淀,其上清用布氏濾器濾過,用氫氧化鈉調(diào)整pH至7.8,濾過,靜置4℃淺談生物制品的污染吳金武潤杰黑龍江省生物制品一廠哈爾濱150069收稿日期:1997-04-16污染是生物制品的大敵,每年因污染而廢棄生物制品的要占一定的比例,造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。同時(shí)污染也影響著生物制品的質(zhì)量,然而污染又是可以控制的。經(jīng)過多年生物制品工作的'理論,我們認(rèn)為污染的來主要有以下幾方面:1消費(fèi)環(huán)境所引起的污染在消費(fèi)環(huán)境中,避塵室是生物制品消費(fèi)過程中所必備的設(shè)置。首先,避塵室的建造應(yīng)該合理,便于清潔和消毒,以到達(dá)無塵和根本無菌的目的。避塵室封閉要嚴(yán)密,緩沖間的門和避塵室的門不能對開,以防止外界有菌空氣直接流入。同時(shí)緩沖間的門和避塵室的門均應(yīng)采用拉門,以免開關(guān)時(shí)空氣振動造成污傳遞器材等物品。目前,干凈室在國內(nèi)已廣泛建立。有的生物制品廠已根據(jù)GMP標(biāo)準(zhǔn)建造了菌(疫)苗樓;有的廠家在原有避塵室的根底上,經(jīng)過改造也建造了干凈室。干凈室的凈化程度可到達(dá)萬級,有的部分可到達(dá)百級?？墒遣糠謴S家由于種種原因仍然使用老式普通避塵室進(jìn)展菌(疫)苗的消費(fèi)。這樣的避塵室在使