試驗5腸道桿菌課件

實驗五

腸道桿菌

Content?示教：

?主要腸道桿菌，大腸埃希菌、痢疾志賀菌、傷寒沙門菌及變形桿菌的形態(tài)、染色性

?主要腸道桿菌的培養(yǎng)特性：SS平板/EMB平板

?主要腸道桿菌的生化反應(yīng)：雙糖、尿素分解反應(yīng)

?

操作：

?肥達反應(yīng)

?糞便腸道致病菌的分離和鑒定

?甘露醇發(fā)酵實驗結(jié)果觀察

?藥敏試驗結(jié)果觀察

?

錄像：

厭氧菌

腸道桿菌的分類

腸桿菌科

志賀菌屬

埃希菌屬

沙門菌屬

克雷伯菌屬

變形桿菌屬

ETEC,EIEC,EPEC,EHEC,EAEC痢疾、福氏、

鮑氏、宋內(nèi)

傷寒，副傷寒，

豬霍亂，腸炎

腸道桿菌的基本特征

?形態(tài)結(jié)構(gòu)相似

?培養(yǎng)要求不高

?生化反應(yīng)活躍

?抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜

?抵抗力不強

?易發(fā)生變異

肥達試驗

原理：用已知傷寒沙門菌O、H抗原，以及引起副傷寒甲、乙桿菌H抗原的診斷菌液與受檢血清作定量凝集試驗，測定受檢血清中有無相應(yīng)抗體及其效價的試驗。

用途：輔助診斷傷寒，副傷寒

肥達試驗

?原理：

傷寒沙門菌菌體O抗原

傷寒沙門菌鞭毛Ｈ抗原

甲型副傷寒沙門菌鞭毛H抗原

肖氏沙門菌鞭毛Ｈ抗原

已知抗原

病人血清中的未知抗體

凝集

微量板

12345678傷寒O0.2ml0.2ml傷寒H0.2ml0.2ml副甲H0.2ml0.2ml副乙H0.2ml0.2ml1:201:401:801:1601:3201:6401:1280生理鹽水

Ag測Ab已知

未知

滴度

病人1：10血清

血清1：200.2ml×4第一列小孔

0.8ml吸管吹打3次1.6ml生理鹽水0.8ml混勻0.8ml混勻1：400.2ml×4第二列小孔

生理鹽水0.8ml0.8ml混勻

……

生理鹽水0.8ml

1：80

……

Ag加樣方向

1.稀釋Ab2.加Ag3.45℃孵育30'

4.結(jié)果觀察

糞便標(biāo)本腸道致病菌鑒別流程

標(biāo)本

鑒別培養(yǎng)基

（SS培養(yǎng)基）

生化反應(yīng)

（雙糖管）

血清學(xué)鑒定

SS平板挑取可疑菌落2個

(無色,透明,小菌落)接種雙糖管

培養(yǎng),觀察

SS平板——

分離腸道病原菌的強選擇培養(yǎng)基

成分：

?基礎(chǔ)培養(yǎng)基、乳糖、枸櫞酸鈉、硫代硫酸鈉、枸櫞酸鐵、膽鹽、煌綠、中性紅（pH6.8-8.0，紅→橙黃）

作用：

?乳糖，中性紅：致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨產(chǎn)生堿性物質(zhì)→菌落淡黃色；大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸，菌落呈紅色。

?膽鹽、枸櫞酸鈉、煌綠：抑制腸道非致病菌如E.coli的生長，對腸道致病菌抑制作用弱?？稍黾訕?biāo)本接種量以提高腸道病原菌分離率。

?病原菌:小,無色,透明

?非致病菌:大,紅色

EMB平板

病原菌:透明,無色

非致病菌:紫黑色

雙糖管

發(fā)酵乳糖

H2S試驗

發(fā)酵葡萄糖(產(chǎn)酸產(chǎn)氣)及動力

上層：乳糖,Fe2+固體

下層：葡萄糖

半固體

指示劑:酚紅（pH6.8-8.4,黃

紅）

致病菌紅色

非致病菌黃色

▼

觀察：

乳糖

葡萄糖

動力

硫化氫

尿素酶

大腸埃希菌

＋+-痢疾志賀菌

－+--傷寒沙門菌

－+++/-副傷寒沙門菌

－

++-變形桿菌

－

+++紅色

黃色

雙糖管結(jié)果觀察

黃色

黃色

可疑腸道致病菌

大腸埃希菌

肥達試驗

?原理：

傷寒沙門菌菌體O抗原

傷寒沙門菌鞭毛Ｈ抗原

甲型副傷寒沙門菌鞭毛H抗原

肖氏沙門菌鞭毛Ｈ抗原

已知抗原

病人血清中的未知抗體

凝集

肥達試驗結(jié)果分析（1）

?凝集程度：

（＋＋＋＋）上層液澄清，細菌全部凝集于孔底

（＋＋＋）上層液基本透明，細菌大部分（75％）凝集于孔底

（＋＋）上層液半透明，細菌在孔底有明顯凝集

（＋）上層液混濁，孔底有少量凝集

（－）不凝集，同于對照

?書寫報告：＋＋反應(yīng)的最高稀釋度為凝集效價

肥達試驗結(jié)果分析（2）

?凝集效價：傷寒沙門菌O≥1：80，H≥1：160

副傷寒沙門菌H≥1：80?動態(tài)觀察：雙份血清，效價≥