新冠核酸檢測技術PCR實驗室質量體系文件

經典word整理文檔，僅參考，轉Word此處可刪除頁眉頁腳。本資料屬于網絡整理，如有侵權，請聯(lián)系刪除，謝謝！新冠核酸檢測技術PCR實驗室質量體系文件****醫(yī)院臨床檢驗中心臨床基因擴增實驗室管理程序標準操作程序（SOP）起草人：批準人：生效日期：年月日新冠核酸檢測技術PCR實驗室質量體系文件目錄臨床基因擴增實驗室的設置····································································3臨床基因擴增實驗室內部管理規(guī)章·························································11臨床基因擴增實驗室人員管理、配置及培訓··············································15臨床基因擴增實驗室的設施和環(huán)境·························································18臨床基因擴增實驗室清潔制度規(guī)章·························································19臨床基因擴增實驗室儀器設備管理規(guī)章···················································21Roche480II實時熒光定量PCR儀操作規(guī)程、維護方法、校準（）未修改·26Finnpipette可調式移液器的使用與維護標準操作(SOP-2)······························35Finnpipette可調式移液器校準標準管理程序(SOP-3)····································39溫度計及濕溫度計的校正標準管理程序(SOP-4)··········································40離心機使用與維護標準操作程序(SOP-5)··················································41超凈工作臺使用與維護標準操作程序(SOP-6)·············································45恒溫水浴箱使用、維護與校正（）·················································46旋渦振蕩器使用與維護標準操作程序（）·········································49冰箱的使用與維護標準操作程序（）··············································50可移動紫外燈標準操作程序（）···················································52儀器故障時標記、放置標準操作程序（）·······································53儀器設備發(fā)生故障時的應急處理程序（）·······································54臨床標本的收集管理標準操作程序（）··········································57檢驗標本的驗收和保存標準操作程序（）·······································58新冠核酸檢測技術PCR實驗室質量體系文件樣本編號的標準操作程序(SOP-15)··························································63PCR標本管理標準操作程序（）···················································65標本前處理標準操作程序（）······················································67核酸擴增及產物分析檢測標準操作程序（）····································68乙型肝炎病毒基因擴增檢測標準操作程序（SOP-19）·································70基因擴增檢測實驗結果分析標準操作程序(SOP-20)·····································75實驗結果有效性判斷標準操作程序（）··········································78室內質量控制標準操作程序(SOP-22)·······················································79實驗室試劑耗材購買、驗收和貯存的標準操作程序（）·····················85試劑質檢標準操作程序（SOP-24）·························································91實驗室耗材質檢標準操作程序（）················································94手套使用及左右手分開的原則（）················································97實驗室化學試劑貯存使用、廢棄物處理及生物防護（）·····················98抱怨的處理程序（SOP-28）·································································101實驗室記錄管理規(guī)章標準操作程序（）·········································105檢驗報告單管理標準操作程序（）···············································108實驗室臺面擺放順序程序（）·····················································112實驗室常用溶液配置標準操作程序（）·········································113****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁1目的：依照實驗室設置規(guī)范實現核酸擴增熒光檢測實驗室配置合理，以保證實驗工作健康有序及實驗結果的可靠性2范圍：臨床基因擴增實驗室及相關工作人員，并明確各項規(guī)章制度3操作人：****4實驗室設置規(guī)章：4.1依據：號）中臨床基因擴增檢驗實驗室基本設置標準結合本實驗室的條件進行設置，并嚴格按照《臨床基因擴增檢驗實驗室工作規(guī)范》（衛(wèi)檢字2002第8號）的要求開展臨床基因擴增工作(擬開展基因擴增檢驗項目見附表1)4.2實驗室設置:4.2.1擴增及產物分析區(qū)(PCR-Ⅲ）三個工作室組成。這三區(qū)各自獨立，每個區(qū)設有緩沖間。其布局見實驗室平面圖（見附圖4.2.2擴增及產物分析區(qū)本室工作人員不得進入”標記。4.2.3建立實驗室內務管理，并放在進入實驗室的明顯位置（如置于緩沖區(qū)的墻上；內務管理應有進入實驗的工作流程、進入實驗室的要求、實驗前的準4.2.4三個工作區(qū)各配備專用的設備、儀器、輔助設施、耗材、清潔用品、辦公用品、專用工作服，并有明顯的區(qū)分標識：試劑準備區(qū)—藍色，標本制備區(qū)—紫色，PCR擴增及產物分析區(qū)—黑色。各區(qū)的實驗物品不得混用（實驗室主要設備一覽表見表4.2.5進入各區(qū)的工作流程為：試劑儲存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→PCR擴增及產物分析區(qū)。****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁4.2.6進入實驗室必須更換有本室標識的工作服及清潔鞋套，工作人員離開某4.3各區(qū)實驗設備及用品配置：4.3.1試劑儲存和準備區(qū)：車、固定紫外線燈，混勻器，專用工作服，一次性用品（手套、帶濾心的吸4.3.2標本制備區(qū)：器、可調式移液器（覆蓋作服，一次性用品（手套、帶濾心的吸頭、鞋套、吸水紙、耐高壓處理的離4.3.3PCR擴增及產物分析區(qū)：Line-Gene全自動熒光定量PCR核酸擴增儀、紫外消毒車、固定紫外線記號筆等。4.4實驗室人員設置：實驗室人員配置：我院PCR實驗室配備有3名工作人員，其中1人具檢驗師職稱，2人具主管檢驗師職稱。已全部經過安徽省臨床檢驗中心培訓，并取得培訓合格證（實驗室工作人員一覽表見表年月日****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁附表1擬開展臨床基因擴增檢驗項目一覽表****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁表2臨床基因擴增檢驗實驗室工作人員一覽表所學畢業(yè)從事本備注專業(yè)時間專業(yè)時間格證號1×××√∥2×××√∥3×××√∥主管檢驗82．7主管檢驗81．7檢驗師檢驗95．7****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁表3臨床基因擴增檢驗實驗室儀器設備一覽表儀器設備生產廠家儀器型號名稱備注公司樣本浙江大學凈化****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁儀器設備生產廠家儀器型號名稱備注公司12恒溫醫(yī)療器械S.HH.W21.42001006水浴廠箱微型上海醫(yī)科13混勻大學儀器XW-80AQ/DAALC-20002003-2-15準備區(qū)樣本準備區(qū)樣本準備區(qū)樣本準備區(qū)PCR擴增全新擴增Magnetic****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁儀器設備生產廠家儀器型號名稱備注有限公司江陰市光電儀器有限公司械廠區(qū)PCR擴增區(qū)全新19線消毒車****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁基因擴增實驗室平面圖圖1****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁1目的：依照實驗室管理規(guī)范實現全面質量管理，實現核酸擴增熒光檢測實驗室有專人負責，以保證實驗工作健康有序及實驗結果的可靠性2范圍：臨床基因擴增實驗室及相關工作人員，并明確了各項規(guī)章制度3操作人：**4規(guī)章：4.1實驗室內務管理規(guī)章：4.1.1本接收時同時進行以下記錄：在標本與化驗單上同時進行標本的唯一性編號，在標本接收登記本上記錄患者的姓名、年齡，標本接收日期，標本的特性、狀態(tài)，接收者簽名。經驗收合格后接收的標本直接運送至標本制備區(qū)。4.1.2實驗過程中須嚴格遵守實驗的工作流程：試劑準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增及產物分析區(qū)的唯一流向制度。4.1.3開啟實驗區(qū)前逐一打開設在緩沖區(qū)外墻上的紫外線燈開關（控制實驗區(qū)30分鐘。4.1.4工作開始前，在緩沖區(qū)換好本實驗區(qū)工作衣，戴上一次性口罩、帽子，套上一次鞋套，關閉紫外燈。打開緩沖的排風裝置，開啟實驗區(qū)門鎖，工作時反鎖隔離門。4.1.5進行測定前的準備和工作記錄（實驗前的準備和工作記錄見表a)記錄冰箱溫度、紫外線消毒時間；b)消毒液、清潔液、75%酒精配制；c)查看加樣器、擴增儀、離心機、滅菌的吸頭等是否在有效期限內；d)校正水浴鍋溫度；e)試劑準備：試劑是否在有效期范圍內，根據標本量確定準備模板的數量及陰陽性對照數量；4.1.6實驗過程的記錄（見SOP4.1.7檢測結果的記錄（見SOP****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁4.1.8實驗完成后實驗室清潔消毒處理及記錄：實驗臺面、加樣器、離心機、超凈工作臺、振蕩器、擴增儀、實驗室空間、實驗室地面等（詳見實驗室清潔4.1.9工作結束，內務整理完畢，關閉排風裝置及實驗區(qū)，加鎖。4.1.10唯一流向制度同樣運用于實驗室物流管理及內務管理。4.2質量控制規(guī)章：4.2.1制定各種SOP文件并嚴格執(zhí)行。4.2.2參加室間質評。4.2.3開展室內質控工作。4.3人員行為規(guī)章：4.3.1要有強烈的時間觀念，按時上下班，不遲到、早退。4.3.2實驗室人員須保持儀表整潔。4.3.3嚴格遵守實驗操作規(guī)范，不得隨意更改操作步驟。4.3.4實驗室技術人員必須嚴格按照PCR實驗室操作程序進行，包括實驗室擦洗、臺面消毒，離心管、吸頭的無菌滅活準備，儀器使用和廢棄物的處理等。4.3.5進入實驗室工作人員必須遵守實驗室唯一流向制度，無必要盡量減少進入實驗室的次數。4.3.6實驗室內嚴禁飲食、吸煙。4.3.7非本室工作人員未經允許不得進入實驗室。4.3.8語言有禮貌、舉止講文明，對待來訪病人或電話應和藹禮貌，解釋明確耐心，不得推脫或生硬回絕。4.3.9晚上下班要關門、窗，檢查空調和儀器的電源是否關閉。4.4儀器管理規(guī)章：4.4.1實驗人員必須熟悉儀器性能方允許操作，嚴格遵守操作規(guī)程。4.4.2所有儀器（如PCR擴增儀）須有專人負責，有使用維修記錄。4.4.3儀器使用前必須檢查是否完好，一旦發(fā)現問題，及時向負責人反映，不得擅自拆裝。4.4.4注意保持儀器衛(wèi)生整潔，嚴禁在室內抽煙，吃零食，非儀器操作員應盡量少入。4.4.5每天了解儀器運轉情況，負責儀器的整潔，安全，檢查電源，水龍頭。4.4.6定期校正和維護PCR儀、離心機、水浴箱、冰箱等儀器、設備，并建立儀器質量認證檔案。4.5試劑管理規(guī)章：4.5.1實驗室根據需要，定期提交試劑申購單，并做到及時盤存清點，入庫做****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁到心中有數。4.5.2所購試劑一律按試劑和耗材的SOP進行，并做到來源渠道正規(guī)，質量保證。4.5.3實驗室對試劑庫存定期檢查，不使用過期變質的試劑。4.5.4自配試劑須經嚴格校正后方可使用。4.5.5試劑的保存應嚴格按照規(guī)定存放，確保有效期內能有效使用，杜絕浪費現象。4.5.6易燃易爆試劑應分開存放，遠離火源和電源。4.5.7試劑外借一律須經負責人同意方可。5．本制度的變動程序：本制度的變動，可由任一使用該文件的工作人員向主管負責人提出，主管負責人則召集與本制度相關的所有人員進行討論，根據討論結果是否通過，如通過則公布實施。批準人****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁表4年月日目緩沖區(qū)處在排風狀態(tài)冰箱溫度記錄實驗室紫外線照射30分鐘更換新配制的消毒液清潔液配制10%84液擦洗75%乙醇清潔在有效期內在有效期內在有效期內在有效期內在有效期內在有效期內所用模板數量所用陽性對照所用陰性對照表4年月日目緩沖區(qū)處在排風狀態(tài)冰箱溫度記錄實驗室紫外線照射30分鐘更換新配制的消毒液清潔液配制10%84液擦洗75%乙醇清潔在有效期內在有效期內在有效期內在有效期內在有效期內在有效期內所用模板數量所用陽性對照所用陰性對照****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁1．目的：保證實驗室具備開展該項實驗的能力。2．適用范圍：臨床核酸擴增熒光檢測實驗人員。3．負責人：**4．內容：4.1人員要求：4.1.1由于PCR檢測干擾因素較多，結果分析復雜。因此，PCR實驗室工作人員應具備較廣泛的分子生物知識。4.1.2PCR實驗室工作人員應取得上崗培訓合格證書，臨床PCR檢驗過程須在具培訓合格證書的技術人員監(jiān)督指導下完成，檢驗報告須由具培訓合格證書的技術人員審核簽。4.1.3工作人員上崗前必須學習掌握PCR實驗管理文件及要求，并由實驗室主任核查。4.2人員配置：4.2.1根據衛(wèi)生部臨檢中心對實驗室人員的在求選擇人員；4.2.2我科PCR實驗室配備3名工作人員（PCR實驗室工作人員一覽見表4.2.3實驗室主任負責實驗室全面管理、解決技術疑難及與臨床溝通、組織人員參加培訓，室主任不在崗時，應指定代理人負責。4.2.3資深檢驗技師及青年技師負責實驗室技術管理及臨床標本的檢驗。4.3人員管理：a)嚴格遵守實驗室內務規(guī)章制度；b)嚴格執(zhí)行年度考核制度：1)日常工作質量的評價；2)室內質控的評測；3)室間質控的評測；4)年度考試；5)在日常抱怨工作中的應變能力。c)科年度獎勵制度：1)參加室間質評優(yōu)秀；2)年度在CN級刊物上在論文發(fā)表；****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁3)在本地刊物有多篇論文發(fā)表；4)考試成績優(yōu)秀；5)受到有關部門或群眾特別嘉獎。d)科主任建立實驗室工作人員業(yè)績檔案。4.4人員培訓計劃：4.4.1本室現有人員已參加安徽省臨床檢驗中心基因擴增實驗室人員培訓班，并取得上崗證。見附件14.4.2自學及考核：室主任督促指導實驗室人員通過繼續(xù)教育或自學提高業(yè)務素質。工作人員根據自身情況，每年完成一篇學術論文、綜述或經驗總結提交室主任，室主任以此作為年度考核技術人員的一項依據。4.4.3室主任每年必須參加臨床檢驗中心的PCR質控總結會議。4.4.4室成員每年至少有一個月脫產的理論和技能的學習。4.4.5經常同其它PCR室的同道進行理論和技術交流。4.4.6訂閱與分子生物學及PCR技術有關的文獻、雜志。4.4.7每年底對下一年的人員培訓做出具體安排。4.4.8實驗室主任對技術人員的技術檔案每兩年修正補充一次。5.該程序的變動程序：本標準操作程序的改動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經下述人員批準簽字：檢驗科主任、室技術負責人注:所引用表格:1.實驗室工作人員一覽表見表22.實驗室工作人員檔案記錄見表5****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁表5畢業(yè)學校及所學專業(yè)****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁1目的保證環(huán)境良好，工作有序，結果可靠2范圍PCR實驗室及相關工作人員3操作人****4規(guī)章：4.1擴增及產物分析區(qū)（備區(qū)（PCR-Ⅰ）——標本制備區(qū)（PCR-Ⅱ）——PCR擴增及產物分析區(qū)（PCR-4.2每個實驗區(qū)的門上有本區(qū)的標識及非本室人員不得進入字樣。4.3每個實驗區(qū)配有溫度調控設備、溫濕度計，可移動及固定紫外燈。4.4PCR擴增儀配有UPS多功能穩(wěn)壓電源。4.5工作人員在操作過程中嚴格遵守實驗室內務管理，嚴格執(zhí)行操作程序。4.6實驗室人員進入本工作區(qū)時須穿該區(qū)具有標識專用工作服，同時配備其它保護性裝備如手套、口罩、帽子、鞋套并遵守實驗室的唯一流向制度。4.7嚴禁將本區(qū)的物品和工作服帶離本區(qū)，以防擴增產物污染擴增前區(qū)。4.8在實驗過程中使用過的廢棄槍頭等材料應立即浸泡于裝有84消毒液的容器4.9標本蓋子的開閉及移取應在超凈臺內進行，操作時應，關閉抽風機，操作時小心謹慎，防止液體外濺。4.10每天實驗開始前，打開紫外燈及紫外消毒車照射30分鐘。4.11工作結束后，對該區(qū)的工作臺用84消毒液消毒30分鐘后，再用該區(qū)專用的清潔干凈的抹布用自來水擦拭兩遍。對地面用該區(qū)專用的拖把用84消毒液消毒30分鐘后，再用該區(qū)專用的拖把用自來水拖擦兩遍。用紫外消毒車距實驗臺面和實驗儀器30cm照射1小時，同時打開該區(qū)紫外消毒燈消毒1小時。批準人****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁1目的保證實驗室日常內務管理及清潔工作順利進行2范圍PCR實驗室臺面、地面及儀器、設備等3操作人****4規(guī)章：4.1實驗室臺面和地面清潔4.1.1每次實驗結束后由專人負責并記錄，各區(qū)的清潔工具不得混用。4.1.2實驗臺面選用84液擦拭;擴增區(qū)實驗臺面用75%的酒精清潔;實驗室地面用先用10%的84液清潔，再用自來水清潔。4.1.3清潔完成后,按各區(qū)要求紫外線照射消毒。同時可移動擴增區(qū)紫外線燈照實驗臺30-60分鐘。4.1.4實驗操作過程中出現血液/痰液等不慎泄露至實驗臺面，應立即停止實驗，用10%84液浸住污染區(qū)域，再用濾紙片覆蓋可繼續(xù)實驗，30分鐘左右后可用軟布蘸10%84液溶液反復清洗，再用75%酒精擦拭；實驗結束后用紫外線燈照30-60分鐘。4.2高速離心機清潔4.2.1每次實驗開始前，用75%的酒精擦拭離心的心機外表。4.2.2每次實驗完畢后，先用10%84消毒液浸過的軟布擦洗離心機的轉頭及內壁,再用潔凈的濕布擦洗,待干后蓋上機蓋。4.2.3如果離心時及時發(fā)現離心管破裂，必須先停止實驗，將有破裂管的離心管放入盛有10%84消毒液缸內，取備用離心管繼續(xù)下一步操作。4.3超凈工作臺清潔4.3.1每次使用后用10%84消毒液擦拭工作臺面，再用潔凈的濕布擦洗。75%酒精棉球擦拭紫外燈；4.3.2每星期清潔凈化工作臺的周圍環(huán)境，去除塵埃。4.3.3如果操作過程中出現液體不慎泄露，應立即停止實驗，用10%84液浸住污****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁染區(qū)域，再用濾紙片覆蓋可繼續(xù)實驗，30分鐘左右后用軟布蘸10%84消毒液溶液反復清洗，再用潔凈的濕布擦洗，然后用75%酒精擦拭。4.4加樣器清潔4.4.1每次實驗結束后用75%的酒精擦拭。4.4.2當懷疑加樣器有可能污染時在121C及1巴壓力下消毒20分鐘。各區(qū)的加04.5工作服清潔4.5.1每周將工作服交院洗衣房洗滌消毒，不同實驗區(qū)的工作服隔天洗滌。4.5.2如在實驗過程中疑有污染，立即用10%84液浸泡消毒。4.6擴增儀的清潔：見儀器的維護。4.7實驗室空間消毒：實驗結束及后續(xù)工作（如地面及儀器清潔）完成后，將固定紫外燈打開照射60分鐘。5.本制度的變動程序：本制度的變動，可由任一使用該文件的工作人員向主管負責人提出，主管負責人則召集與本制度相關的所有人員進行討論，根據討論結果是否通過，如通過則公布實施。（注：實驗室清潔消毒見表6）批準人年月日****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁1目的保證PCR實驗室的儀器設備得到妥善管理，控制在用儀器設備的工作狀態(tài)2范圍PCR實驗室所有的儀器、設備3操作人****4操作：4.1儀器設備的管理，維護，保養(yǎng)等的具體事項由實驗室設備管理人員負責執(zhí)行；4.2由PCR實驗室負責人負責組織執(zhí)行和監(jiān)督管理；5內容：5.1建檔管理：儀器設備的檔案管理應包括以下內容（實驗室主要儀器設備相關文件一覽表見表5.1.1儀器設備的一般情況：a)名稱b)制造商，型號，序號c)d)目前存放地點，接受人員簽字等。e)校準和檢定的日期、結果及下次校準和檢定的日期、結果。f)迄今為止所進行的維護及今后維護計劃。5.1.2儀器設備的相關文件：儀器設備的說明書，操作手冊等，有關文件（或復印件）的文件序號，名稱，保存方式，管理負責人等。5.1.3儀器設備的損壞，故障，修理須作如下記錄(相關表格見表7)：日期，設備名稱，設備標記號，維修內容（損壞或故障的表現、損壞故障的5.1.4正常運轉的儀器設備貼上綠色正常使用標識牌。有問題的儀器設備加貼明顯的紅色停用標識，標識上應有停用日期及原因；可搬動的儀器移至設備處報修，不可移動的設備原地使用布罩封存待修，直至修復校驗后重新標識正常使用。****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁5.1.5儀器設備的報廢處理（報廢申請表見表因使用壽命，損壞，故障導致儀器設備不能滿足檢測需要時，該設備即行報廢。由管理人員填寫報廢申請，科質量負責人核實，設備科批準后由質量負責人在設備檔案中簽名注銷。5.2儀器設備實行嚴格的分區(qū)專用。5.3使用的儀器設備應進行校準和檢定，具體見SOP文件。5.4為保持儀器設備工作狀態(tài)的穩(wěn)定，應對其進行定期的、必要的維護和保養(yǎng)，具體見SOP文件。5.5為了使擴增儀處于穩(wěn)定的工作狀態(tài)，在該電腦上不得使用非本室的外來軟盤，不能在電腦內加載其它程序和軟件；在使用本室軟盤進行資料備份時，需在報告系統(tǒng)電腦上預先殺毒方可使用。5.6非本室工作人員不得使用儀器。6該程序的變動程序：本標準操作程序的改動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經下述人員批準簽字：檢驗科主任、室技術負責人批準人年月日****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁表7臨床基因擴增檢驗實驗室主要儀器設備相關文件一覽表文件負備責人注明書√√√√√√√√√√√√√√√√√√√√√√√√√√√原件√原件√原件√原件√原件√原件√原件√原件√原件Line-Gene擴增儀江陰市光學儀有限PCR擴公司增區(qū)17紫外線消毒車****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁表8質量負責人簽名放置地點****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁表9備注****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁校準（）未修改1目的：確保Line-Gene型核酸擴增熒光檢測儀正確及正常使用。2適用范圍：Line-Gene型核酸擴增熒光檢測儀。3操作人****4標準操作方法：4.1在打開電源以前，先確認以下內容：4.1.1確認電源線插頭已插入電源插座中。4.1.2Line-Gene與計算機及電源的連接是否可靠。4.2．核酸擴增儀操作方法：4.2.1依次打開電腦顯示器和電腦主機的電源開關,進入“熒光定量PCR檢測系統(tǒng)”界面；4.2.2模板制好后，按模擬模板反應孔的樣式放入擴增儀反應槽，注意陰陽性、陽性標準品、質控品位置，標本不夠用空白管填補；4.2.3打開PCR儀電源開關,預熱5分鐘；4.2.4點擊“運行”鍵，打開“運行”文件中“達安”試劑程序；4.2.3點擊工具欄中的“樣本資料”按鈕，輸入樣本資料，并清空缺省樣本號；點擊“確認”保存樣本資料信息，保存的文件名為：年月日+批次（批次用a、b、c表示）如20030516a文件自動形成后綴名為*.flr4.2.44.2.5檢測結果分析：a.程序運行結束后，系統(tǒng)自動進入分析界面并將檢測結果自動保存，在熒光定量PCR檢測系統(tǒng)界面單擊“數據分析”鍵，進入結果分析界面。b.定量分析：1）單擊“分析模式”菜單中的“定量分析”命令，在分析方法選擇中可選擇樣點擬合法。2）樣點數選擇：樣點為循環(huán)數/熒光強度對數曲線中基線以上各循環(huán)的點，****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁系統(tǒng)根據選擇的樣點數，將被選中的樣點擬合成直線，該直線與域值的交叉點即為CT的起始循環(huán)至終止循環(huán)熒光強度的平均值為零點設置時盡可能選擇樣本熒光強度穩(wěn)定（用“達安”試劑在Line-Gene熒光定量擴增儀對標本及控制品4）檢測，通常起始及終止為在各樣本噪聲的上方并盡可能的底，對同一種試劑在各個實驗的結果分析時基線設置盡可能相同。同一實驗結果分析，基線設置不同CT值不同。的截距控制在42±2、斜率控制在-2.7±0.2、相關系數小于-0.98。設置完成后界面顯示分析結果。（在每進一批試劑的時候，用本批試劑測定上一批穩(wěn)定的試劑已測定過的控制品及陰陽對照，根據上批試劑測定的結果求出本批試劑在這種結果下本室其它人員判斷結果，這些參數必須控制在此范圍，這樣結果判斷在本室才具一致性。每進購一批試劑后，在SOP文件中，這些參數也需調4.3分析結果打印。4.4Line-Gene基因擴增儀使用過后要及時記錄（Line-Gene基因擴增儀的使用記錄見表9）5維護方法及注意事項：5.1PCR儀屬于精密電子儀器，應放在水平臺上，PCR儀在運行的時候，室溫應當控制在15℃至25℃之間，溫度過高或過低均會引起內部的程控芯片或其它電子元件的不正常工作。5.2PCR儀配有單獨使用的ups穩(wěn)壓電源。PCR儀不能靠近水池、火爐、腐蝕性物質、強磁場等，均會影響儀器正常工作。5.3每次實驗時，最好能將擴增儀的孔位全部放置樣品管，若樣品管少時可用空的樣品管代替，以保證實驗田的一致性和重復性。5.4實驗結束后應及時擦干孔內存在的水份，蓋上機蓋。5.5本儀器表面如有污跡，可用軟布沾清潔膏擦拭干凈。5.6每周五清洗樣品槽一次。方法是用棉棒沾75%的乙醇清洗若干次，以有灰塵****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁或其它殘留物影響擴增效果。5.7每月末清潔熱蓋和反應孔。具體方法是：正常關機后，將反應槽取出，將熱蓋翻開，用浸透95%酒精棉棒擦拭反應孔和熱蓋，待乙醇揮發(fā)后再將熱蓋和反應槽安裝好，熱蓋恢復原位。5.8熒光定量PCR檢測系統(tǒng)軟件的維護：5.8.1安裝熒光定量PCR檢測系統(tǒng)軟件計算機進入Window98/2000/XP系統(tǒng)后，將熒光定量PCR檢測系統(tǒng)安裝光盤放入光驅,找到光盤根目錄下的SETUP.EXE雙擊它，進入設置程序熒光定量PCR檢測系統(tǒng)。據屏幕提示進行操作即可完成熒光定量PCR檢測系統(tǒng)軟件的安裝。5.8.2卸載熒光定量PCR檢測系統(tǒng)軟件：在【開始】/【設置】/【控置面板】菜單中單擊“添加刪除程序”項，選擇“熒光定量PCRPCR檢測系統(tǒng).5.9Line-Gene基因擴增儀的維護保養(yǎng)后要及時記錄（Line-Gene基因擴增儀的維護保養(yǎng)記錄見表6校準：Line-Gene基因擴增儀校準工作需由專業(yè)工程師進行。除與儀器廠家達成協(xié)議以外，以實驗判斷儀器校準狀態(tài)也可為何時進行儀器校準提供信息。通過對室內質控圖的分析，及時發(fā)現系統(tǒng)誤差的出現。經過分析排除了試劑和人員誤差后，應進行儀器狀態(tài)校驗實驗：6.1使用標準化試劑作為校驗試劑。6.2在儀器處于校準狀態(tài)下，由固定人員用標準化試劑對10、10、10、10、4236標準品進行擴增實驗。該實驗在兩個月應進行20次。分別計算標準曲線的斜率、截距、相關性的控制限。6.3每年6月、12月由固定人員進行上述實驗，觀察標準曲線的三個參數是否處在控制范圍和10標準品是否檢出。26.4當10標準品未檢出、標準曲線的三個參數控制超出控制范圍或僅出現后2者時，先排除實驗人員、試劑因素，再重復實驗。如結果依然，聯(lián)系廠家立即進行儀器校準。6.5當僅有10標準品未檢出時，檢查實驗全過程。再次上機檢測10標準品22兩枚。如仍未檢出，則聯(lián)系廠家進行儀器校準。****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁6.6儀器經過校準后，重復該實驗。結果歸入儀器檔案。6.7本程序的變動程序：本程序的變動，可由任一使用該文件的工作人員向主管負責人提出，主管負責人則召集與本制度相關的所有人員進行討論，根據討論結果是否通過，如通過則公布實施。附：Line-GenePCR擴增儀文件的創(chuàng)建：1.檢測文件的創(chuàng)建：1.1在熒光定量PCR檢測系統(tǒng)界面單擊“運行”鍵，進入程序設置界面。單擊1.2按1.3樣本信息輸入：扭。框內選擇屬性或性別。位”欄輸入：單擊濃度單位的下拉鍵在下拉框內選擇濃度單位，缺省項為“copyies/ml”。欄的輸入：選中該欄中某輸入內容，單擊“缺省樣本列表”鍵，名稱欄自動按1、2、3……33名稱設置，其余欄全部清空。行，該行自動形成比上一行大一個值的號碼，也可修改。的內容，也可修改。出自動形成上一行的內容，也可單擊該行重新選擇。顯示當天日期，按Enter鍵輸入該日期，或點擊對話框左邊的下拉鍵彈出日歷界面，選擇需輸入的日期按Enter鍵輸入，點擊下一行（無輸入內空****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁9）樣本信息內容在打印報表時將會打?。ù蛴r類型、樣本編號、編號、姓名、年齡、性別、住院號、門診號、病歷號、臨床醫(yī)師、送檢科室、臨床診斷、采樣時間最多可選取10以缺省打印。1.4樣本輸入模板：單擊“編輯”菜單中的“樣本輸入模板”命令。在樣本輸入模板中添加送檢科室、臨床醫(yī)生內容。在樣本信息輸入時，送檢科室、臨床醫(yī)師項的輸入可選擇樣本輸入模板中已添加的送檢科室、臨床醫(yī)師內容。1.5設置檢測通道、熒光強度增益：選擇Ｆ1通道，增益值須根據不同的試劑進行設置，定量分析，熒光強度初試值調整在70左右。1.6實驗參數設置:1)“下移”鍵可對選中的程序進行編輯。2)選擇分析模式：單擊插入鍵，在彈出的顯示框內設置各參數，最多可插入六個。分析模式選擇定量分析時，單擊采樣模式欄的下拉鍵在彈出的下拉3)設置循環(huán)數。1.7保存程序設置文件：單擊“文件”采單中的保存命令；如果要保存在另一個文件夾中，請找到并打開該文件夾，在“文件名”框中，鍵入文件名稱，單擊“保存”按扭。2.運行程序設置文件：2.1運行程序設置文件:單擊“運行”菜單中的“運行設置程序組”命令；單擊工具欄中的“運行”按鈕。2.2保存檢測結果：運行程序設置文件時彈出檢測結果保存對話框，如果要保存在另一個文件夾中，請找到或新建文件夾并打開該文件夾，在“文件名”框中，鍵入文件名稱，單擊“保存”按扭。保存的文件名為程序設置文件名+日期+時間，其文件名的后綴為*.flr2.3檢測結果保存設置完后，彈出運行界面，系統(tǒng)進行樣本位置檢測并彈出樣本位置檢測對話框。樣本位置檢測完成后系統(tǒng)運行已設置的程序。3.檢測結果分析：3.1程序運行結束后，系統(tǒng)自動進入分析界面并將檢測結果自動保存，在熒光定量PCR檢測系統(tǒng)界面單擊“數據分析”鍵，進入結果分析界面。****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁3.2定量分析：1)單擊“分析模式”菜單中的“定量分析”命令，在分析方法選擇中可選擇最大二階倒數法或樣點擬合法。2)樣點數選擇：樣點為循環(huán)數/熒光強度對數曲線中基線以上各循環(huán)的點，系統(tǒng)根據選擇的樣點數，將被選中的樣點擬合成直線，該直線與域值的交叉點即為CT3)a)自動調整：以第一至第十循環(huán)熒光強度的平均值為零點。b）手動調整：以設置的起始循環(huán)至終止循環(huán)熒光強度的平均值為零點設置時盡可能選擇樣本熒光強度穩(wěn)一種試劑在各個實驗的結果分析時基線設置盡可能相同。同一實驗結果分析，基線置不同CT值不同。4)數，設置完成后界面顯示分析結果.4.分析結果打印4.1單擊“文件”菜單中的“設置打印模板”命令，在彈出的對話框內進行設4.2“刪除”項的排列順序。樣本類型、樣本編號、編號、姓名、性別、住院號、門診號、臨床醫(yī)師、送檢科室、臨床診斷、采樣時間等所需項目。4.3在打印欄內，選擇參考濃度、參考CT值選項并輸入數值，打印時顯示參考標準。4.4在打印欄內,輸入最大濃度、最小濃度、打印時當某一樣本計算濃度大于最大濃度或小于最小濃度將顯示≥最大濃度或≤最小濃度值。4.5在打印選項欄內,選中結果判斷、打應曲線、計算濃度、CT值后在打印報表內容中將顯示結果判斷、熒光強度/循環(huán)數曲線、計算濃度、CT值。4.6在打印選項欄內,設置每項打印兩個樣本時選中打印注釋選項可打印注釋對話框內輸入的內容。4.7打印模板設置完成后按“確定”鍵，保存設置。****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁4.8單擊“文件”菜單中的“打印報表”命令,在彈出的對話框內進行設置,單擊“確定”即可打印。批準人年月日****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁表10臨床基因擴增檢驗實驗室Roche480II實時熒光定量PCR儀使用記錄檢測項目運行情況使用人簽字****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁表11臨床基因擴增檢驗實驗室Roche480II實時熒光定量PCR儀擴增儀維護保養(yǎng)記錄保養(yǎng)人室質量負責簽名人檢查簽名****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁1目的：正確使用移液器，確保移液器的精確性。2適用范圍：各種品牌、型號的固定、可調式和多通道加樣器。3操作人：****4操作：4.1設定容量值：a)根據所需取液量選擇相應的加樣器；可調式加樣器應在允許的范圍內調節(jié)；連續(xù)可調式加樣器容量讀數由三位撥號數字組成（顯示所轉移液體容刻度可將容量調節(jié)到更精確度的分度。b)各種不同的型號，F至FFFF4.2吸液和放液：首先選擇一支合適的吸嘴安放在加樣器套筒上。稍加扭轉壓緊吸頭使之與套筒間無空氣間隙。未裝吸頭的加樣器絕不可用來吸取任何液體。最常用的吸液和放液方式有兩種。4.2.1前進式：a)吸液：把按扭壓至第一點；垂直握持加樣器,使吸頭浸入液樣中，浸入液面深度視加樣器型而定：F和FF和F2—3mm2—4mm然后緩慢、平穩(wěn)地松開按鈕吸入液樣，待移液器吸滿液體后等一秒鐘，然后將吸頭提離液面，貼壁停留2-3秒，使管尖外側的液滴滑落。b)放液:將吸頭口貼到容器內壁并保持10°～40°傾斜。平穩(wěn)地把按鈕壓到****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁c)第一停點,放出液體，等1-2秒鐘后再把按鈕壓到第二停點以排出剩余液體。壓住按鈕,停頓1-2秒，提起加樣器,使吸頭貼容器壁擦過。松開按鈕。按吸頭彈射器除去吸頭(只有改用不同的液體時才需更換吸嘴)。d)此種加樣方式適合加樣本時使用。4.2.2倒退式a)吸液：把按扭壓至第二點；垂直握持加樣器,使吸頭浸入液液樣中,然后緩慢平穩(wěn)地松開按鈕吸入液樣，吸滿液體后，將吸頭撤出液面，貼壁停留2-3秒，使管尖滴滑落。b)放液:將吸頭口貼到容器內壁并保持10°～40°傾斜。平穩(wěn)地把按鈕壓到第一停點,放出液體。遺留在管嘴尖的液體隨吸嘴一起扔掉或按至第二點壓回到原來液體管中。c)此種方式適用于高粘度液體；易起泡沫的液體或極小量的液體。4.3預洗a)當取液體積大于10ul時，為了保證吸液的精確度和準確性，在裝上一個新吸嘴（或改變吸取的容量值）后應預洗吸嘴，即先吸入一次液樣并將之排回原容器中，反復2-3次。這是因為第一次吸取的液體會在吸嘴內壁形成液膜，導致計量誤差。而同一吸嘴在連續(xù)操作時液膜相對保持不變，故第二次吸液時誤差即可消除。b)而當液體體積小于10ul，只有在沒有預洗，同時要將吸取的液體在要轉入的液體中反復吸打幾次，排空液體，再將吸嘴提出并貼壁停留1-2秒，才能保證取液的精確度和準確性。4.4致密及粘稠液體對于密度低于水的液體，可將容量計的讀數調到低于所需值來進行補償。例如：用F加樣器轉移10ul血清。先將讀數調到10ul，吸取后以重量40法測定。如實測體積為9.5ul，即偏差0.5ul，則將讀數調到10.5ul并重復一次。如第二次仍不夠準確，根據偏差再作調整。吸取或排放血清或粘稠液體時，宜在第一點多等一兩秒鐘再壓到第二點。4.5加樣器吸頭加樣的準確性與精密度與加樣器的吸嘴的質量也密切相關，吸嘴的選擇也至關重要?；驍U增實驗因為要使用大量的吸嘴，并有許多微量操作，因此在選擇時應注意以下幾點：****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁b)形狀（密封良好的環(huán)口、薄壁和嘴口尖細）使安裝或卸脫更加容易、管壁有彈性、不會產生漩渦，從而精度更高。c)嘴口決無毛刺。吸嘴表面光潔平滑，沾濕性極小，避免液體留外壁引起的誤差。e)每個嘴口上都有模具編號，確保品質跟蹤系統(tǒng)。f)吸嘴與吸嘴套筒密封完好，防止空氣泄漏造成精度或準確度的誤差。g)有液體容量刻度線。D200吸嘴在20和100ul處標出、D1000吸嘴在300ul處標出、D10吸嘴在2ul處標出，這樣吸液量不夠可以及時發(fā)現。h)可在121C及1巴壓下消毒20分鐘。0i)應選用帶慮芯的吸頭，以避免樣品與樣品、樣品與加樣器或樣品與操作人員的污染。4.6故障排除a)發(fā)現漏氣或計量不準，其可能原因和解決方法為：套筒松動？用手擰緊螺帽。套筒括花或破裂？卸下彈射器，檢查套筒。活塞或密封受化學腐蝕？更換活塞或密封圈。用蒸餾水洗滌套內壁。b)發(fā)現套筒內有液體可依下法清潔：卸下彈射器，擰下螺帽并用蒸餾水洗滌套筒、活塞、密封圈及0形環(huán)，待完全干燥后重新組裝。c)需要時，雷勃加樣器的吸管部分及套筒、螺帽和彈射器在121C及1巴壓0力下消毒20分鐘。注意密封圈及0形環(huán)不能高溫消毒。d)發(fā)現吸液時有氣泡：先將液體排回原容器，檢查吸嘴浸入是否合適，再更慢地吸取液體；如仍有氣泡應更換吸嘴。4.7凡是更換了活塞或操縱桿的加樣器需進行全面調校。4.8加樣器使用注意事項：a)根據所需取液量選擇相應的移液器及吸嘴，基因擴增實驗要求使用帶慮心的吸嘴，防止污染。b)取液時應緩慢勻速吸取，避免液體淺到移液器頭上；打出液體后拇指不應松開按鈕，將吸嘴壓掉后再將拇指松開，避免液體回吸。c)調整取液量的按鈕時，不要用力過猛，并應注意計數器顯示的數值不要超過其可調范圍。d)連續(xù)可調移液器在取樣加樣過中應注意移液嘴不能觸及其它物品，以免被污染。****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁e)連續(xù)可調移液器在使用完畢后應置于移液器架上，遠離潮濕及腐蝕性物品。連續(xù)可調移液器不可在無吸嘴時使用，吸嘴有液體時不能平放或倒置。f)在取液之前，所取液體應在室溫（15-25C）平衡；液體溫度與室溫有異0時，將吸嘴預洗多次再用；移液溫度不得超過70C。0g)操作時要慢和穩(wěn)，吸嘴浸入液體深度要合適，吸液過程盡量保持不變；改吸不同的液體、樣本或試劑前要更換新吸嘴；發(fā)現吸嘴內有殘液時必須更換；新吸嘴使用前應先預洗。h)為防止液體進入移液器套筒內，應注意以下幾點：壓放按鈕時保持平穩(wěn)；移液器不得倒轉；吸嘴有液體時不得平放。i)切勿用油脂等潤滑活塞或密封圈。j)不可把容量調到超過其適用范圍。k)使用了酸或有腐蝕性蒸氣的溶液后，最好拆下套筒，用蒸餾水清洗活塞及密封圈。4.9加樣器的維護a)每天實驗完畢后用75%酒精清潔。b)如有液體進入加樣器內造成污染，可以將加樣器拆開后進行清潔。c)各區(qū)加樣器具有各區(qū)的標識，清潔時分別對待。4.10本標準操作程序的變動程序：可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經下述人員批準簽字：室技術負責人，檢驗科主任。批準人年月日****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁1目的：保證移液器加量的準確性。2適用范圍：各種品牌、型號的固定、可調式和多通道加樣器。3操作人**4校準管理程序：4.1使用全自動PCR實時擴增儀，三區(qū)、四區(qū)合并，第三區(qū)可調式加樣器轉為備用狀。4.2每年由本室工作人員分批對可調式加樣器打包，運至生產廠家進行校正。4.3每年的四月份對試劑貯存和準備區(qū)的加樣器進行校正，同時把備用加樣器換上試劑貯存和準備區(qū)的區(qū)域標識，把劑貯存和準備區(qū)貼上待校正標識，打包，郵遞、托運或專門派人送交及運送日期，在實驗室日志上要注明清楚。4.4加樣器校正完畢取回后，貼上正常運行標識，并注明本次校正日期、下次校正日期。4.5把備用加樣器去掉試劑貯存和準備區(qū)標識，消毒，再轉入備用狀態(tài)。4.6每年的八月份對標本制備區(qū)的加樣器進行校正，步驟同上。4.7每年的十二月份對備用加樣器進行校正，步驟同上。4.8本標準操作程序的變動程序：可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經下述人員批準簽字：室技術負責人，檢驗科主任。批準人年月日****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁1目的：保證溫度計及濕溫度計對環(huán)境溫度衡量的準確性。2適用范圍：常規(guī)溫度計、低溫溫度計、濕溫度計3操作人**4校準管理程序：4.1常規(guī)溫度計、低溫溫度計校正：a)本室工作人員取同其它溫度計規(guī)格相同的常規(guī)溫度計、低溫溫度計各一支，送到當地計量部門進行校正，并保存好校正記錄和校正溫度計的編號。b)溫度計自我標定：用已校正過的溫度計及未校正的溫度計在同一溫度條件下，對同一溫度的刻度顯示來進行校正，標定。4.2濕溫度計校正：a)本室工作人員取同其它溫度計規(guī)格相同的濕溫度計一支，送到當地計量部門進行校正，并保存好校正記錄和校正溫度計的編號。b)濕溫度計自我標定：用已校正過的濕溫度計及未校正的濕溫度計在同一環(huán)境溫度條件下，對同一溫度濕度的刻度顯示來進行校正，標定。4.3標準操作程序的變動程序：可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經下述人員批準簽字：室技術負責人，檢驗科主任。批準人****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁1目的：保證離心機的正常使用。2適用范圍：各種品牌、型號的高速離心機。3操作人****4操作4.1使用方法：4.1.1高速離心機a)離心機應放在水平堅固的地板或平臺上，并力求使儀器處于水平位置以免離心時造成儀器振蕩。b)打開電源開關，將預先平衡好的樣品對稱放置于轉頭的樣品架上，關閉機蓋。c)旋動定時旋鈕設定離心時間，緩慢旋轉轉速調節(jié)旋鈕使儀器轉速達到預定的要求。d)離心完畢后，將轉速調節(jié)旋鈕調回零位，關閉電源開關。e)待離心機停止轉動時打開機蓋，取出離心樣品，再次關閉機蓋結束離心。4.2校準：每年6月、12月請本單位專業(yè)設備科專業(yè)人員對該類儀器進行定期檢修校準。5使用時的注意事項：5.1離心機應始終處于水平位置，外接電源系統(tǒng)的電源要匹配，并要有良好的接地線;開機前應檢查機腔內有無異物掉入。5.2樣品應預先平衡，使用離心機微量離心時離心套管與樣品應同時平衡;使用離5.3揮發(fā)性或腐蝕性液體離心時應使用帶蓋的離心管，并確保液體不外漏，以免侵蝕機腔或造成事故。5.4離心機運行時，離心機周圍30cm范圍內不得有人與危險物品。5.5每次操作完畢，應做好使用情況記錄，每年6月、12月請本單位設備科專業(yè)人員對儀器各項性能進行檢修。5.6離心過程中如發(fā)現異?，F象，應立即關閉電源，報請有關技術員檢修。****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁5.7每年6月、12月視使用頻率而由設備科專業(yè)人員行清潔機腔和轉頭。5.8離心機的維護：一般清潔見實驗室清潔程序中的高速離心機的清潔；離心及轉子的清潔下，再用中性去污劑（75%的異丙醇/水混合物/或乙醇去污染）清潔離心室；離心室內的橡膠密封圈經去污劑處理后用水沖洗，再用甘油潤滑。5.9離心機的轉速用相對離心力表示。離心機轉速與相對離心力（RCF）換算公式如下：N=（RCF×105）/（1.18×R）RCF=0.011238095×R×NN表示轉速，單位為轉/分(r/min)；R表示離心半徑，即離心管底端至軸心的距離，單位為厘米(cm)；RCF表示相對離心力，單位用重力加速度g(g=9.8m/s)；注：所引表格：離心機使用情況記錄見表12離心機維護保養(yǎng)記錄見表135.10本標準操作程序的變動程序：可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經下述人員批準簽字：室技術負責人，檢驗科主任。批準人年月日****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁表12離心機使用情況記錄表****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁表維護保養(yǎng)內容室質量負責人檢查簽名日期儀器放置地點運行標識清潔儀器性能狀態(tài)意外情況記錄****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁1目的：保證超凈工作臺內的高清潔，無污染。2適用范圍：醫(yī)用超凈工作臺3操作人****4使用方法4.1接通電源，打開電源開關。4.2超凈工作臺使用時必須預先用紫外線消毒至少30分鐘。4.3消毒及工作期間嚴禁打開風機，始終保持工作臺內“死屏”即無空氣對流效果。4.4每次使用后，即刻以消毒液洗擦工作臺面后，再用潔凈的濕布擦洗，然后以75%酒精擦洗；紫外線燈消毒30分鐘后關機。4.5經常用紗布沾上酒精將紫外線燈殺菌表面揩擦干凈，保持表面整潔，以免影響紫外線燈消毒效果。紫外線燈按規(guī)定交醫(yī)院統(tǒng)一檢測。4.6定期將預過濾器中的濾料拆下清洗，一般間隔時間為3～6個月。4.7定期（一般每半年1次）計測工作區(qū)風速，如發(fā)現不符合技術參數要求，則可調大風機供電電壓。當風機組電壓調到最大時，工作區(qū)風速仍達不到4.8本標準操作程序的變動程序：可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經下述人員批準簽字：室技術負責人，檢驗科主任。批準人年月日****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁）1目的：保證水浴箱工作溫度恒定。2適用范圍：電熱恒溫水浴箱3操作人：****4電熱恒溫水浴箱的操作：4.1水浴箱應置于堅固的平臺上。4.2電源接地，在首次插入電源插頭將儀器通電以前應先確認以下內容：4.2.1電源是否與儀器要求的電壓相符合。4.2.2確認電源插頭已插入電源插座中。4.3在水浴箱內注入清潔溫水至總高度的1/2～2/3處。4.4合上水浴箱蓋，打開電源開關，待水沸騰后，放入需裂解的Ependoff管，計時，到時間后取出繼續(xù)其它操作。4.5每次水浴箱使用前，應做溫度穩(wěn)定性校正：放入標準溫度計同監(jiān)測實際水溫，連續(xù)監(jiān)測10分鐘，水浴箱工作溫度應在±1℃以內。水浴箱掛有溫度質量控制表，記錄每天溫度；如有溫度超出范圍，該溫度應劃上紅圈，并把修正操作記錄下來。4.6注意事項：在操作過程中應注意Ependoff管蓋是否崩開，以防止樣品損失及污染到水浴箱中。4.7水浴箱內外應保持清潔，外殼忌用腐蝕性溶液擦拭。5、電熱恒溫水浴箱溫度的校準5.1．校準依據：溫度計測量校準法，顯示溫度觀察法。5.2校準環(huán)境及用具：5.2.1校準環(huán)境：儀器的正常工作條件。5.2.2校準用具：經校準的溫度計。5.2.3設置溫度：以該水浴箱使用溫度作為校準的設定溫度。5.3校準方法：5.3.1溫度波動性校準：采用顯示溫度連續(xù)觀察法，連續(xù)10次觀察水浴箱在設置溫度下的顯示溫度波動，每隔20秒記錄一次顯示溫度。接受標準為：記錄的顯示溫度值在10分鐘內其波動范圍≤±0.5℃。****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁5.3.2溫度準確性校準：比較水浴箱中實測溫度與顯示溫度的偏差，按溫度誤差修正方法（見水浴箱使用說明書）來調整儀器。5.3.3溫度均勻性校準：以水浴箱左上角，左下角，正中點，右上角，右下角五點的實測溫度進行比較，觀察溫度均勻性。5.4．校準步驟：5.4.1使水浴箱在設置的溫度恒溫30分鐘使其穩(wěn)定。5.4.2在水浴箱左上角，左下角，正中點，右上角，右下角五點分別放入已加入0.5ml石蠟油的Ependoff管。5.4.3把溫度計放入Ependoff管中測量溫度。5.4.4連續(xù)觀察記錄水浴箱的顯示溫度在設置溫度的波動情況10分鐘。5.4.5比較記錄的顯示溫度數據，若數據在接受標準內，則認為該水浴箱溫度波動性合格，繼續(xù)下列校準。5.4.5若記錄數據不在接受標準內，則停止校準，停用，報修。5.6記錄水浴箱中的實測溫度。5.4.7比較顯示溫度值與實測溫度，若二者一致，該儀器無溫度誤差，繼續(xù)下列校準。5.4.8若顯示溫度與實測溫度不一致，則按溫度誤差修正方法校準儀器，并重復測定，待其一致后，繼續(xù)下列校準。5.4.9分別測量水浴箱左上角，左下角，正中點，右上角，右下角五點的度并記錄。5.4.10比較水浴箱邊四角與中間的實測溫度，若偏差≤±1℃，則認為該水浴箱溫度均勻性合格，校準完畢。5.4.11若水浴箱周邊四角與中間的實測溫度﹥±1℃，停用，報修。5.4.12校準記錄見表145.5本標準操作程序的變動程序：可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經下述人員批準簽字：室技術負責人，檢驗科主任。起草人批準人生效日期年月日****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁表℃℃℃波動性是否合乎要求審核人(℃)注：校準日期一到，在進行校準時用鋼筆填寫當日日期。完成后，在下一欄用鉛筆填上預定下次校準日期。****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁）1目的：保證待處理的樣品完全混勻。2適用振蕩器范圍：XW——80A旋渦振蕩器。3操作人：×××××××××4標準操作：4.1旋渦振蕩器應置于堅固的平臺上。4.2接通電源。4.3將樣品管垂直或略為傾斜地放置在振蕩盤上，開機振蕩數秒或數分鐘直至樣品完全混勻后關機。4.4切忌將樣品管平躺或倒轉振蕩，以免管內液體滲出。4.5保持振蕩器清潔、干燥。4.6本標準操作程序的變動程序：可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經下述人員批準簽字：室技術負責人，檢驗科主任。批準人****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁）1目的：確保冰箱內溫度恒定（冷藏室：0～10℃，冷凍室：-202適用范圍：各種品牌、型號的冰箱、低溫冰箱。3操作人：****4操作：4.1冰箱應放置于水平地面并留有一定的散熱空間。4.2外接電源電壓必須匹配，并要求有良好的接地線。4.3冰箱內禁止存放與實驗室無關的物品。4.4放入冰箱內的所有試劑、樣品、質控品等必須密封保存。4.5保持冰箱出水口通暢；非自動除霜冰箱應定期除霜；定期清潔冰箱，清潔時切斷電源，用軟布蘸水擦拭冰箱內外，必要時可用中性洗滌劑。4.6每日由專人負責觀察冰箱內溫度并記錄于表中，記錄表掛于門上，每月一張，一年裝訂成冊存檔（冰箱溫度記錄表見表154.7若溫度超出規(guī)定范圍，調節(jié)溫控器使其回到正常范圍，并進行記錄。4.8若溫控調節(jié)無效，報請設備科維修，修理后須驗收簽字后方可正常使用。4.9本標準操作程序的變動程序：可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經下述人員批準簽字：室技術負責人，檢驗科主任。批準人****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁表１5冰箱溫度記錄表年月日至日區(qū)記錄人日期123456789987654321冷藏室0℃0℃冷-1-2-3凍室-4-5-6-7-8-9-10-11-12-13-14-15-16-17-18-19-20-21-22-23-24-25-26-27-28-29-30****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁）1目的：保證可移動紫外燈的正常使用。2適用范圍：Ⅰ3操作人****4步驟：4.1使用前進行通電實驗，檢查是否有漏電現象，電源接地。用畢后將開關切斷，拔掉插頭。4.2本儀器不能在易燃易爆的體環(huán)境中使用，放置于無腐蝕性氣體和通風良好的室內4.3每周五用干布擦干外殼和燈管，以保持清潔光亮。經常用酒精進行消毒、滅菌，特別是電源開關等觸摸部位，以防交叉?zhèn)魅尽?.4紫外線燈波長要定期由醫(yī)院統(tǒng)一檢測。4.5本標準操作程序的變動程序：可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經下述人員批準簽字：室技術負責人，檢驗科主任。批準人年月日****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁）1目的：保證故障的儀器明顯區(qū)別于正常儀器，而不被錯誤使用。2適用范圍：核酸擴增熒光檢測實驗室的各種儀器。3操作人****4步驟：4.1找到出現故障的儀器。4.2用紅牌故障標志標示故障儀器。4.3小型儀器送儀器部門維修。4.4大型貴重儀器關閉電源開關，取下電源插頭。用相應防塵罩遮蔽儀器。4.5維修完成后取下紅色故障標志，換上黃色標識牌。4.6調整實驗通過，去掉未校準標識牌，換上綠色標識牌。4.7儀器重新正常使用。4.8本標準操作程序的變動程序：可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經下述人員批準簽字：室技術負責人，檢驗科主任。批準人年月日****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁）1．目的：在實際操作中，儀器設備發(fā)生故障是不可避免的。為在最大程度上減輕類似情況所帶來的不利影響，特制定本程序。2．范圍：與PCR檢測、試劑存儲、污染預防等有關的設備。3．操作人：****4操作：4.1每一個工作人員在職責范圍內均有責任有意識地注意以求及時發(fā)現并報告儀器設備的異常情況。4.2室主任負責啟動本程序。4.3作為應急處理，潛藏著一定的可能影響檢測質量的不確定因素。室主任有責任組織并直接監(jiān)督本程序的實施。4.4室主任負責在第一時間檢查核實應急措施的有效性。5．工作流程：5.1室主任接到異常情況報警后，立即現場確認異常情況的性質：觀察有誤、誤操作、偶發(fā)現象或確屬不能立即排除的故障。5.2對于發(fā)生故障的儀器設備，在聯(lián)系有關部門維修的同時，采取以下處理辦法。5.2.1有滿足要求的替用設備，啟用替用設備。5.2.2可借用其他部門儀器設備時，及時聯(lián)系借用并核實該設備的使用狀態(tài)。5.2.2及時與供應方會同解決。5.2.2.1根據雙方合同約定，及時通知供應方。供應方技術人員將在規(guī)定的時間內隨身攜帶備用設備到達現場。5.2.2.2在經必要的驗收工作后，啟用備用設備。5.2.3替用、借用或備用設備的使用在滿足質量要求的同時，必須同時滿足實驗室管理措施（特別是防污染）的要求。5.3室主任須檢查并隨時跟蹤所采取措施的有效性。5.4儀器設備故障處理見表16。5.5本標準操作程序的變動程序：可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經下述人員批準簽字：室技術負責人，檢驗科主任。****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁批準人年月日****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁表年月日****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁）1目的：確保標本收集正確和采集時間合適；確保樣品檢測準確、有效。2適用范圍：血漿/清、分泌物、痰液、胸/腹水、腦脊液和尿液的采集。3操作人：****臨床專業(yè)醫(yī)生及護士4操作：4.1血清/漿標本：用無菌注射器抽取受檢者的靜脈血2ml，注入PCR專用試管中，盡快在2小時內分離血清/血漿后轉入另一1.5mlEppendoff管。如用血漿標本，預先加入EDTA-Na、枸櫞酸鈉抗凝。24.2分泌物：a)男性：取尿道分分泌物或細小棉拭子伸入到尿道約2～4厘米，略捻拭子取b)女性：陰道——用無菌棉球洗去宮頸外分泌物，再用無菌棉拭子插入宮頸內停留5送檢。c)尿道——用無菌棉球洗凈尿道口，再用無菌棉拭子插入尿道約2厘米處，4.3痰液：用一次性痰盒取受檢者肺深部咳出痰液1～3毫升，密閉送檢。4.4胸/腹水、腦脊液：用無菌注射器抽取胸/腹水或腦脊液后，注入PCR專用試管密閉送檢。4.5尿液：直接取中段晨尿入PCR專用試管密閉送檢。4.6本程序用于對臨床標本采集及收集有關人員的培訓，臨床標本采集及收集有關人員要掌握本程序。4.7本標準操作程序的變動程序：可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經下述人員批準簽字：室技術負責人，檢驗科主任。批準人****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁）1目的：保證所收集的標本符合實驗要求，保證標本的保存質量。2適用范圍：核酸擴增熒光檢測實驗室的現行項目：HBV。3操作人：****4驗收、保存程序：4.1驗收步驟：4.1.1簽收：嚴格對各類標本執(zhí)行查對和雙簽制度，不符合要求的標本一律退回，并記錄登記。4.1.2分類驗證：4.1.2.1住院部、門診及院外病人的標本用未加抗凝劑的一次性真空負壓管由臨床護士或專業(yè)人員按操作規(guī)程采集。4.1.2.2標本的運送：住院及門診病人的標本，采集后2小時內由專人送至PCR實驗室；院外病人的標本，須用加有冰塊的容器在采集后2小時內由專人運送。4.1.2.3查對姓名，聯(lián)號，住院號，病區(qū)床號，項目等。對不符合要求的者應作記錄，并及時通知采樣科室，正確及時地補采樣，以免延誤病人的檢測報告。姓名，住院號，性別，年齡，病區(qū)床號，檢驗項目等。4.1.2.4按檢測項目驗證標本：HBV所需標本類型為未溶血的血清或血漿，注意血漿標本所用的抗凝劑，一般用EDTA-Na或枸櫞酸鈉抗凝，不可有用肝素。標本為全血時及時分離2出血漿保存。4.1.3符合拒檢的不合格病人標本的范圍：標本的處理：標本收到后，立即分離血清并分裝到兩只離心管內，一份用****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁于檢測，另一份用于標本的保存。4.1.4拒檢程序：a)對拒檢的不合格的標本應登記在不合格標本處置記錄本上。b)填寫不合格標本處置單，并隨同申請單送返送檢單位。c)必要時電話告知相關科室醫(yī)生或護士。4.2標本的保存：HBV標本：血標本可在4℃下短期保存，分離出的血清或血漿保存于-15℃下。4．PCR實驗室應有專人專門保存檢測標本的冰箱并加鎖，確保標本的真實性及初、復檢的一致性。4.3特殊標本的處理：對暫不檢測的項目和規(guī)定時間外收到的零散標本，要隨時登記和正確保管，以免漏檢、遺失和延誤檢驗。對特殊樣本或特殊病人的樣本，實行“首接”負責制，所謂特殊樣本是指難于采集的樣本。無論哪位工作人員一旦收到標本后，均須負其責任，不得以任何借口推諉，及時、正確保管和轉送樣要到有關科室或有關人員，同時作交班記錄和雙簽名。對于做長期病情動態(tài)觀察的病人標本一律置于-70℃下長期保存?zhèn)溆谩?.4所引用的表格如下：a)可接收標本記錄表見表17b)拒收標本記錄表見表18c)標本保存記錄表見19批準人年月日****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁表收記錄（****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室）接收人患者姓名（簽名）****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁表拒收標本記錄表（****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室）送檢人患者姓名性別年齡科別（簽名）（簽名）****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁標本保存記錄表19標本保存記錄標本唯一編號備注至至至至標本保存記錄標本唯一編號備注標本唯一編號備注標本唯一編號備注****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室-103-****醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件第頁共頁1目的：保證樣品編號的一致性，也是準確發(fā)報告單的基礎。2適用范圍：核酸擴增熒光檢測實驗室的現行項目：HBV。3操作人：****4操作：4.1標本唯一標識的規(guī)章:a)標本的唯一性標識須字跡清晰明了，不得隨意作任何涂改；必須時，在舊標識上劃雙線更改，更改后應保持舊標識可辯識；操作人員在更改處必需簽名。b)標本的唯一性標識由三部分構成——標本接收日期、檢測項目類型、化驗單接收順序號，三部分無間隔符號。4.2編號基本原則(三點):a)按標本接收日期標記：如2003年6月15日，則接收標本的編號開始為030615。b)按檢測項目類型分類標記：根據檢測項目的不同，每種檢測項目對應為唯一的一種代號。如乙型肝炎病毒標記為HBV。c)按化驗單接收順序號編號：在同種類型的化驗單中，按化驗單的順序編號。序號為01～99。如第一個檢測乙型肝炎病毒的化驗單編為01，第二個檢測乙型肝炎病毒的化驗單編為02,第三個檢測乙型肝炎病毒的化驗單編為HBV03等。例如：03年06月15日HBV01，項目類型序號標本編號為030615HBV01(整個標識共有11位)4.3編號步驟：a)先統(tǒng)計所有當天送來的標本，根據編號的基本原則，按類型、按順序給當天的標本編好號，每個樣本的每個檢測項目對應一個唯一的編號。b)用記號筆在每一張化驗單和對應的樣本管上做