平陽(yáng)霉素局部注射治療瘢痕疙瘩的實(shí)驗(yàn)研究

平陽(yáng)霉素局部注射治療瘢痕疙瘩的實(shí)驗(yàn)研究【摘要】目的:應(yīng)用平陽(yáng)霉素局部注射治療瘢痕疙瘩,進(jìn)一步探討平陽(yáng)霉素治療瘢痕疙瘩的作用機(jī)制。方法:收治瘢痕疙瘩患者126例，隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組(B組：n=52)。治療組取平陽(yáng)霉素8mg,用2%利多卡因5ml稀釋?zhuān)择：圻吘夁M(jìn)針，針尖達(dá)瘢痕中部，自進(jìn)針部位呈扇面均勻注射，使瘢痕呈現(xiàn)蒼白色或桔皮樣外觀為度；對(duì)照組用醋酸潑尼松龍注射液125mg溶于2%鹽酸利多卡因注射劑5ml，皮損基底部封閉治療，注射方法和療程同治療組。各組連續(xù)治療半年取材，進(jìn)行組織學(xué)及組織化學(xué)觀察平陽(yáng)霉素局部注射治療后瘢痕組織中Ⅲ型膠原纖維含量的變化，利用HPIAS-2000圖像分析系統(tǒng)測(cè)定Ⅲ型膠原纖維在以上各組中的平均陽(yáng)性面積率，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果：A組中的Ⅲ型膠原纖維密集分布，B組中的Ⅲ型膠原纖維分布稀疏。圖像分析結(jié)果顯示，A組與B組之間Ⅲ型膠原纖維陽(yáng)性面積率的差異有顯著性意義()。結(jié)論：平陽(yáng)霉素能使瘢痕組織中成纖維細(xì)胞的DNA斷裂,破壞膠原纖維形成，促進(jìn)膠原溶解。

【關(guān)鍵詞】平陽(yáng)霉素;瘢痕疙瘩;Ⅲ型膠原

AbstractObjective:tofurtherexploretherolemechanismofPingyangmycintreatmentionkeloids.Methods:Specimensfrom126casesofKeloidfromtheDepartmentofPathologyinRenminHospitalofWuhanUniversitywerecollected.126caseKeloidpatientswererandomlydividedintotwogroups:Treatmentgroup(groupA：n=74)andcontrolgroup(GroupB:n=52).Treatmentgroup:Pingyangmycinfrom8mg,2%lidocaine5mldiluted,sincetheneedlescaredge,tipofthecentralscar,sinceneedleinjectionsitewerethefan-likeuniformtoshowscarsorpaleappearanceforthekindoforangepeel.Controlgroup:prednisoloneacetateinjection125mgdissolvedin2%lidocainehydrochlorideinjection,5ml,lesionstreatedatthebaseclosed.Injectionandtreatmentmethodsweresamewiththetreatmentgroup.ThespecimensweregetedSixmonthsforeachgroupbasedtreatment,andthecontentofⅢcollagenfiberwereobservedbyhistologicalandhistologicalchemistry.ThepositiveareaofⅢcollagenfiberwereanalyzedusingimageanalysisImageHPIAS-2000AnalysisSystem.Results:ⅢcollagenfiberswereintensivedistributioninAgroup,ⅢcollagenfiberswerethesparsedistributioninBGroup.Imageanalysiswasshowedthat:ThepositiveareaofⅢcollagenfibreswerebetweenAGroupandBGrouphadstatisticallysignificantdiscrepancy().Conclusion:PingyangmycincanmakescartissuefibroblastsDNAbreakage,collagenousfibersformatingtodestroy,andpromotecollagendissolved

KeywordsPYM;keloid;Ⅲcollagen

瘢痕疙瘩是人類(lèi)所特有的良性皮膚瘤，多繼發(fā)于皮膚損傷后，局部突起的瘢痕伴奇癢、疼痛不適，且向周邊正常皮膚不斷擴(kuò)侵，無(wú)自限性，亦不發(fā)生退行性變化，好發(fā)于胸部、肩、臂、腹、頸、耳垂和術(shù)后傷口，影響容貌［`1］。目前，雖然瘢痕疙瘩的治療方法多種多樣，但效果并不令人滿意。經(jīng)歷一百多年的發(fā)展，手術(shù)方式多種多樣，如切除縫合、皮片移植、皮瓣移植等，但是，單純運(yùn)用手術(shù)治療病理性瘢痕尤其是瘢痕疙瘩，其復(fù)發(fā)率很高。非手術(shù)治療創(chuàng)傷相對(duì)較小，治療較簡(jiǎn)單、方便。主要治療方法有以下這些：物理療法、傳統(tǒng)中藥治療、藥物療法?？偠灾@些方法各有所長(zhǎng)，亦有其所短［2］。

平陽(yáng)霉素為一種抗腫瘤藥物，它能抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增生［3］，臨床上治療各種血管瘤，抑制瘢痕組織血液供應(yīng)，使瘢痕組織壞死液化，另外平陽(yáng)霉素還能抑制膠原合成酶的活性，使膠原沉積得以控制［4］。為進(jìn)一步尋找一種方便、快捷、安全、有效的治療瘢痕疙瘩的方法,我們采用平陽(yáng)霉素局部注射治療瘢痕疙瘩,并采用組織學(xué)及組織化學(xué)方法觀察了平陽(yáng)霉素局部注射治療瘢痕疙瘩的組織學(xué)變化,為臨床治療瘢痕疙瘩提供理論依據(jù)。

1材料與方法1材料主要藥品及器械

2%利多卡因，上海復(fù)星朝暉藥業(yè)有限公司；鹽酸平陽(yáng)霉素注射劑8mg，天津太河制藥有限公司；醋酸潑尼松龍注射液5mg，湖北天藥藥業(yè)有限股份公司；光學(xué)顯微鏡，日本奧林巴斯公司；苦味酸天狼猩紅，北京中山生物技術(shù)有限公司。患者來(lái)源

參加治療的兩組126例患者是武漢大學(xué)人民醫(yī)院整形科和赤壁市人民醫(yī)院整形科隨診的門(mén)診病人，年齡4~58歲，病程1~10年。病變特點(diǎn)：均為典型的瘢痕疙瘩。病灶最小面積為×1cm，最大面積為3cm×5cm，隨機(jī)分為治療組與對(duì)照組。治療組74例，男34例，女40例，共有瘢痕疙瘩88塊，位于胸腹部39塊，肩背部27塊，四肢9塊，耳垂8塊，頸部5塊。對(duì)照組52例，男20例，女32例，共有瘢痕疙瘩56塊，其中胸背部30塊，四肢16塊，頸部2塊，肩部3塊，耳垂4塊，腹部1塊。在接受此治療前患者未采用過(guò)其他方法治療。2方法臨床治療

A組：常規(guī)行血常規(guī)和胸部透視，以確定患者能否耐受治療。平陽(yáng)霉素溶液的配制：用平陽(yáng)霉素8mg，溶于2%鹽酸利多卡因注射劑5ml稀釋?zhuān)庥^呈現(xiàn)無(wú)色透明液體，治療前配制，治療后剩余部分丟棄。治療方法：用1%碘酒消毒局部，用5ml注射器，持5號(hào)針頭，沿皮損基底部進(jìn)針，針尖達(dá)瘢痕中部，自進(jìn)針部位呈扇面均勻注射使瘢痕病變部皮膚由原來(lái)紅色變?yōu)樯n白色。注射完畢，加壓注射點(diǎn)，使針孔無(wú)藥液漏出。若瘢痕較大，1次可注射多個(gè)部位，瘢痕高出皮面，先行手術(shù)切除瘢痕，術(shù)后30d行平陽(yáng)霉素注射治療，1次注射用藥最大劑量不超過(guò)/kg體質(zhì)量，2周注射1次，2次為1療程，3個(gè)療程后判決結(jié)果。

B組：用醋酸潑尼松龍注射液125mg溶于2%鹽酸利多卡因注射劑5ml，皮損基底部封閉治療。注射方法和療程同治療組。組織學(xué)切片

所有瘢痕疙瘩標(biāo)本均源于我院自愿行瘢痕疙瘩注射治療后的病人，A組共74例，瘢痕數(shù)88塊；B組共52例，瘢痕數(shù)56塊。取材時(shí)間為注射后6個(gè)月，取材局部無(wú)感染和潰瘍，均無(wú)傳染、免疫、遺傳和皮膚等疾病。取材前均向病人說(shuō)明取材目的，并征得病人同意。麻醉成功后，1%活力碘消毒軀干四肢，切除病變部位的瘢痕疙瘩，取其中10mm×10mm大小瘢痕置入10%甲醛中。切片制作

常規(guī)HE染色：取材、固定、脫水、透明、包埋、切片、HE染色及封片。

組織化學(xué)染色(苦味酸-天狼猩紅染色)：①脫蠟，蠟切片常規(guī)脫蠟至水;②染色，天青石藍(lán)液染10min；蒸餾水洗3次；天狼猩紅飽和苦味酸液梁15~30min；無(wú)水乙醇直接分化與脫水；③脫水、透明、封片，二甲苯透明、中性樹(shù)膠封片。3結(jié)果判斷

出現(xiàn)綠色染色的為Ⅲ型膠原纖維,紅或黃色的為Ⅰ型膠原纖維。

采用HPIAS-2000高清晰度彩色病理圖文報(bào)告管理系統(tǒng)對(duì)苦味酸-天狼猩紅染色進(jìn)行定量分析，每張切片隨機(jī)選取5個(gè)完整而不重疊的高倍鏡視野。4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

2結(jié)果

HE染色

光鏡下可見(jiàn)A組的瘢痕組織中有一些成纖維細(xì)胞,細(xì)胞分布在膠原纖維附近,膠原纖維較密集,呈波浪狀排列。B組的瘢痕組織中成纖維細(xì)胞數(shù)量明顯增多,細(xì)胞分布在膠原纖維附近,膠原纖維密集成束,排列紊亂，部分組織可見(jiàn)有玻璃樣變。

組織化學(xué)染色

A組在光鏡下可見(jiàn)瘢痕組織中以散在分布的綠色纖細(xì)的Ⅲ型膠原纖維為主，紅、黃色粗大Ⅰ型膠原纖維較少。而B(niǎo)組患者增生性瘢痕組織中可見(jiàn)密集分布的紅或黃色的粗大Ⅰ型膠原纖維，纖維呈條束狀，排列紊亂，密度分布不均；Ⅲ型膠原纖維數(shù)量較少，呈疏網(wǎng)狀散布于Ⅰ型膠原周?chē)＝?jīng)單因素方差分析，組間有顯著性差異注：*A組與B組比較，P＜。

3討論

瘢痕是創(chuàng)傷愈合的必然產(chǎn)物。傷口的愈合有兩種形式,一種是完全性修復(fù),即由與原來(lái)?yè)p傷組織結(jié)構(gòu)相同的細(xì)胞和組織來(lái)修復(fù),如胎兒早期的無(wú)瘢痕愈合;或是傷口上皮化最后以瘢痕性愈合而告終,這種瘢痕屬于正常組織修復(fù)過(guò)程的產(chǎn)物,稱(chēng)之為正常瘢痕。另一種是修復(fù)以膠原為主的細(xì)胞外基質(zhì)成分的痕疙瘩。瘢痕疙瘩是皮膚損傷后引發(fā)膠原異常積聚所致的過(guò)度瘢痕化。與增生性瘢痕不同,典型的瘢痕疙瘩無(wú)明顯誘因或僅有輕微創(chuàng)傷(如穿耳洞、注射疫苗等),但瘢痕組織表現(xiàn)為過(guò)度生長(zhǎng),超過(guò)原傷口界限,侵犯鄰近組織,呈瘤樣增生,故有"蟹足腫"之稱(chēng)。常造成功能障礙,有膠原代謝障礙膠原蛋白是細(xì)胞外基質(zhì)中的主要成分,細(xì)胞外基質(zhì)是由膠原、結(jié)構(gòu)性蛋白及蛋白多糖等成分構(gòu)成。增生性瘢痕的形成和細(xì)胞外基質(zhì)的生成與降解平衡之間的失調(diào)有關(guān)。在皮膚內(nèi)主要是Ⅰ、Ⅲ型膠原,正常成年人兩種膠原之比是~6∶1,而在增生性瘢痕中Ⅰ/Ⅲ型膠原之比為2∶1,瘢痕疙瘩中之比為19∶1,研究發(fā)現(xiàn)瘢痕疙瘩中Ⅰ型膠原比例明顯增高,Ⅲ型膠原比例明顯降低。Naitoh查明在瘢痕疙瘩中Ⅰ、Ⅲ型膠原及其伴隨分子熱休克蛋白47明顯地增加,Ⅰ、Ⅲ型膠原的mRNA都上調(diào)20倍,熱休克蛋白47mRNA上調(diào)8倍,其蛋白水平上調(diào)16倍。Santucci［5］經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),瘢痕疙瘩并不因時(shí)間變遷而發(fā)生結(jié)構(gòu)成分的改變,幾乎總是表現(xiàn)為異常厚的玻璃樣膠原纖維。這些說(shuō)明,在瘢痕疙瘩中熱休克蛋白47促進(jìn)膠原迅速合成,Ⅰ/Ⅲ型膠原比值的大幅度提高成為了瘢痕疙瘩不可控制生長(zhǎng)的基礎(chǔ)。最近,Hsu等［6］對(duì)瘢痕疙瘩中的一氧化氮對(duì)成纖維細(xì)胞膠原合成的作用進(jìn)行了系統(tǒng)的研究與分析,發(fā)現(xiàn)由于瘢痕疙瘩中誘導(dǎo)性一氧化氮合酶高表達(dá)導(dǎo)致的Ⅰ型膠原的大量增加。過(guò)度沉積的膠原不僅與膠原合成旺盛有關(guān),還表現(xiàn)為膠原蛋白降解減少。間質(zhì)膠原酶特異性作用于Ⅰ型膠原的前α1和前α2位點(diǎn),使其長(zhǎng)度降解至3/4和1/4,更易于被金屬蛋白酶進(jìn)一步降解。病理性瘢痕與正常皮膚相比,其成纖維細(xì)胞的膠原酶活性明顯降低,且膠原酶mRNA的水平較正常皮膚亦明顯降低,但實(shí)驗(yàn)表明,在瘢痕內(nèi)部注射膠原酶并不能改善瘢痕增生的狀況［7］,這可能與不能滿足膠原酶作用的環(huán)境有關(guān)。

平陽(yáng)霉素(Pingyangmycin,PYM)是一種廣譜抗腫瘤抗生素,作用機(jī)制是抑制腫瘤細(xì)胞的DNA合成和切斷DNA鏈。因其療效確切、安全、簡(jiǎn)便、療程短、美容效果好、對(duì)骨髓和免疫器官的抑制作用小,近年來(lái)已被我國(guó)廣泛應(yīng)用于非癌性病變的治療［8］。平陽(yáng)霉素能抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增生［9］，臨床上治療各種血管瘤，抑制瘢痕組織血液供應(yīng)，使瘢痕組織壞死液化，另外平陽(yáng)霉素還能抑制膠原合成酶的活性，使膠原沉積得以控制［10］。

我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明采用平陽(yáng)霉素局部治療瘢痕疙瘩后,結(jié)締組織中Ⅲ型膠原比對(duì)照組比較明顯增多,差異有顯著性,表明平陽(yáng)霉素起到抑制成纖維細(xì)胞的增殖，減少炎癥細(xì)胞的活性，最終起到治療瘢痕增生的作用。并且證明了平陽(yáng)霉素能起快速控制瘢痕組織的再生與發(fā)展，對(duì)瘢痕有較好的軟化作用。臨床觀察證明了本方法對(duì)瘢痕有確切的療效，具有療程短，見(jiàn)效快，遠(yuǎn)期療效好，實(shí)用、安全、方法易掌握等優(yōu)點(diǎn)。對(duì)臨床治療瘢痕疙瘩有一定的參考價(jià)值。

【參考文獻(xiàn)】

1KhooYT,OngCT,MukhopadhyayA,etofsecretoryconnectivetissuegrowthfactor(CTGF)inkeratinocyte-fibroblastcoculturecontributestokeloidCellPhysiol，2006，208(2):336~343.

2KangN,SivakumarB,SandersR,etinjectionsofcollagenaseareineffectiveinthetreatmentofkeloidandhypertrophicPlastReconstrAesthetSurg，2006，59(7):693~699.

3趙鴻儒，趙大華，孫亦軍.平陽(yáng)霉素聯(lián)合地塞米松注射治療嬰幼兒面部血管瘤28例.中國(guó)美容醫(yī)學(xué)，2006，1:564~565.

4司晉紅，顧瑛，劉風(fēng)光.病理性瘢痕的發(fā)病機(jī)制及臨床治療方法的進(jìn)展.激光生物學(xué)報(bào)，2004，93:126.

5SantucciM,BorgognoniL,RealiUM,et