4種細(xì)胞學(xué)檢測方法對良惡性胸腹腔積液的鑒別價值

4種細(xì)胞學(xué)檢測方法對良惡性胸腹腔積液的鑒別價值【摘要】目的:比較4種細(xì)胞學(xué)檢測方法在鑒別良、惡性胸腹腔積液(胸腹水，malignantpleuraleffusion,MPE)中的差異。方法:對40例胸腔積液患者的胸腹水標(biāo)本分別同時采用石蠟包埋法、液基薄層制片法、細(xì)胞離心涂片法、直接涂片(CS)法檢測，結(jié)合組織病理檢查或治療、隨訪觀察比較4種方法的診斷符合率。結(jié)果:40例胸腹水中CB法、TCT法、細(xì)胞離心涂片法、CS法找到惡性腫瘤細(xì)胞分別為25例、21例、2例、0例,余為良性病變，陽性檢出率分別為%、%、5%、0%。經(jīng)與組織病理或臨床治療、隨訪結(jié)果對比，診斷符合率分別為：%、%、%、%。結(jié)論:CB法診斷符合率最高，TCT次之。這兩種方法在鑒別良、惡性胸腹水方面有較大的診斷價值。

【關(guān)鍵詞】胸腹腔積液；細(xì)胞學(xué)檢測；方法；隨訪觀察

胸腹腔積液(胸腹水)是臨床上較為常見的癥狀、體征之一，細(xì)胞學(xué)檢查是鑒別診斷良、惡性胸腹水的關(guān)鍵。尋找或改進(jìn)細(xì)胞學(xué)檢測方法，提高臨床檢出率，是目前的熱點之一。目前臨床上多采用直接涂片(CS)法和細(xì)胞離心涂片法，少數(shù)采用液基薄層制片法及石蠟包埋法。然而有關(guān)4種細(xì)胞學(xué)方法的系統(tǒng)比較及其與臨床治療、隨訪的比較研究尚不多見。為此我們收集了40例胸腹水標(biāo)本,同時結(jié)合組織病理檢查或臨床隨訪觀察，系統(tǒng)比較了4種細(xì)胞學(xué)方法在診斷符合率上的差異，并對細(xì)胞塊CB法作一些小的改良，獲得了比較滿意的療效，現(xiàn)報道如下。

1材料與方法

臨床病例收集我院呼吸科、腫瘤科胸腹腔積液患者的胸、腹水標(biāo)本共40例，其中男性27例，女性13例；年齡20歲～87歲，平均年齡54歲；對胸腔積液量采取前肋計算法［1］，大量胸腔積液(第2前肋水平以上)13例，中等量胸腔積液(第2至第4前肋水平)13例，少量胸腔積液(第4前肋水平以下)12例，腹水2例。留取胸腹水同時以CS法、細(xì)胞離心涂片法、TCT法和CB法檢測。部分有胸部腫塊的患者作纖維支氣管鏡檢查。全部患者隨訪觀察。

儀器與試劑

儀器液基薄層自動細(xì)胞制片機MZ-1、MZ-2型(寧波美生醫(yī)療器械有限公司)，生物組織自動脫水機ZT-12P2型，石蠟切片機LEICARM2135，生物組織包埋機YB-6型，光學(xué)電子顯微鏡OLYMPUSBX51TF型。

材料及試劑細(xì)胞采集器、細(xì)胞收集瓶、標(biāo)本轉(zhuǎn)移注射器、試管、吸嘴、膠環(huán)、載玻片及蘇木精和EA／OG、碳酸鋰染液、橙黃G染液、EA液、95％酒精、二甲苯、氨水、伊紅。

方法

CS法將送檢胸腹水標(biāo)本靜置10min~20min,棄上清，取容器底部液體5ml~10ml,涂于干凈載玻片上,冷風(fēng)吹干后,立即置酒精乙醚混合固定液中固定10min。

細(xì)胞離心涂片法常規(guī)胸腔穿刺，留取胸液100ml,肝素抗凝，以1000r/min的速度離心4min~10min，棄上清，取沉渣涂片，干燥后行常規(guī)蘇木素伊紅(HE)染色和瑞氏染色。

TCT法常規(guī)胸腔穿刺,留取胸液100ml~200ml，靜置沉淀，棄去上清液，剩余液體以1000r/min的速度離心4min,棄上清,剩余約cm左右沉渣,吹打混勻，而后利用離心沉淀技術(shù)自動完成制片過程,最后在載玻片上形成一個直徑約1cm大小的細(xì)胞薄層,再行手工巴氏染色備檢。

CB法參照鄭暉方法［1］加以改良。將送檢胸腹水標(biāo)本靜置5min后,取容器底部液體100ml～200ml,離心10min，1000r/min,棄上清,管底剩余細(xì)胞液視情況不同而改變處理步驟:若送檢胸腹水中含黏液和纖維蛋白質(zhì)樣物質(zhì),離心震蕩后凝結(jié)成團的細(xì)胞團塊不完全溶解,則將細(xì)胞團直接用雙層紗布包好入包埋小框,自動脫水機常規(guī)脫水,浸蠟,石蠟包埋；若送檢胸腹水標(biāo)本離心震蕩后,細(xì)胞團完全溶解,則再次棄上清,其后將剩余底層的液體加入蛋清約1ml，用吸管吹打試管底部液體，使細(xì)胞沉渣與蛋清充分混合，盡量使細(xì)胞成團懸浮于蛋清中；離心4min，1000r/min；去除上層多余蛋清,再次吹打混勻剩余的蛋清和細(xì)胞沉渣,用吸管將其全部移入鋪有雙層紗布塊的包埋框內(nèi),紗布包裹,自動脫水機常規(guī)脫水,浸蠟,包埋，切取3μm石蠟切片,60℃烤片，手工HE染色備檢。

2結(jié)果

細(xì)胞離心涂片法、TCT法與CB法比較本文中以CS法無一例腫瘤細(xì)胞陽性，無法圖示。余如圖所示，細(xì)胞離心涂片法所涂片細(xì)胞量少，細(xì)胞分散不均勻,核漿對比欠清晰(圖1)；TCT法所制玻片背景干凈，染色鮮艷均勻，胞核胞質(zhì)清晰，被檢細(xì)胞集中，有助于對異常細(xì)胞的篩查(圖2)；CB法中用雞蛋清預(yù)包埋脫落細(xì)胞收獲的細(xì)胞多,能像組織塊一樣進(jìn)行脫水、包埋。HE切片顯示細(xì)胞數(shù)目多,厚薄均勻,結(jié)構(gòu)完整,染色鮮艷,核漿對比清晰(圖3)。TCT法及CB法中可見轉(zhuǎn)移性腫瘤引發(fā)的胸腹水細(xì)胞數(shù)較涂片鏡檢明顯增多，可見異型細(xì)胞團分布。CB法制片中還可見較多組織。

圖1細(xì)胞離心涂片法

圖2液基薄層制片法

圖3石蠟包埋制片法

4種細(xì)胞學(xué)檢測方法與組織病理學(xué)檢查或隨訪資料比較見表1。

表14種細(xì)胞學(xué)檢測方法與組織病理學(xué)檢查或隨訪資料比較

注：*在未找到癌細(xì)胞的病例中1例纖維支氣管鏡檢為腺癌。

從表中可見，40例胸腹水中，22例CB片中發(fā)現(xiàn)有惡性腫瘤細(xì)胞，其中10例經(jīng)纖維支氣管鏡檢為惡性腫瘤，2例手術(shù)病檢為惡性腫瘤。隨訪治療觀察，11例1年內(nèi)死亡，11例疾病進(jìn)行性加重。這22例均與石蠟片結(jié)果相符。在18例石蠟片中未找到癌細(xì)胞的病例中，14例臨床診斷為肝硬化、結(jié)核性胸膜炎，經(jīng)治療有效，隨訪無疾病進(jìn)展，與石蠟片檢查結(jié)果相符。另4例中有1例被組織病理學(xué)結(jié)果證實為腺癌，1例在1a內(nèi)死亡，2例疾病進(jìn)行性加重，這4例石蠟片結(jié)果均與組織病理學(xué)或臨床隨訪不符。故綜合檢查結(jié)果和治療隨訪，惡性胸腹腔積液應(yīng)為26例，良性為14例，石蠟片診斷符合率為%。40例胸腹水中，18例以TCT法檢測到有惡性腫瘤細(xì)胞，22例未找到癌細(xì)胞，與組織病理或治療隨訪比較，8例不符；診斷符合率達(dá)%；在以CB法檢出的25例中，細(xì)胞離心涂片法及CS法檢測到惡性腫瘤細(xì)胞分別為2例、0例。

3討論

目前國內(nèi)臨床上檢測胸腹水的方法一般有4種，即CS法、細(xì)胞離心涂片法、TCT法和CB法［2］。許多學(xué)者在檢測中體會到CS法檢出率低，涂片法又存在涂片厚、細(xì)胞重疊、結(jié)構(gòu)不清、細(xì)胞量少而陽性檢出率低［3，4］的特點。近年來有少數(shù)學(xué)者報道了CB法可提高陽性檢出率［5］,但有關(guān)研究注重的多為腫瘤細(xì)胞的陽性檢出率，而對幾種方法與臨床的診斷符合率的關(guān)注不多。本文中我們對同一患者、同一送檢液分別采用4種不同方法進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢查。結(jié)果經(jīng)3名有細(xì)胞學(xué)經(jīng)驗的檢測小組同時比較觀察，結(jié)果顯示，40例胸腹水中，22例CB片中發(fā)現(xiàn)有惡性腫瘤細(xì)胞，18例石蠟片中未找到癌細(xì)胞。我們在對40例患者的分析中發(fā)現(xiàn),22例惡性腫瘤患者中22例全部經(jīng)手術(shù)、纖支鏡組織病理學(xué)結(jié)果或臨床隨訪證實；在18例CB片中未找到癌細(xì)胞的病例中，14例與臨床隨訪相符。4例與組織病理學(xué)或臨床隨訪不符，為漏診。CB片診斷符合率為%,而TCT法診斷符合率也達(dá)到了%；但細(xì)胞離心涂片法及CS法診斷符合率則較低。既往的胸腹水細(xì)胞學(xué)多采用直接涂片法，涂片以瑞氏或HE染色后進(jìn)行細(xì)胞分類及形態(tài)學(xué)檢查，雖然方法簡單易行，但檢出率低。雖然采用細(xì)胞離心涂片法提高了檢出陽性率，但仍然有限。我們的檢測結(jié)果比文獻(xiàn)報道［6］的低。由此我們認(rèn)為，直接涂片法檢出率太低，幾乎對惡性胸腹水沒有診斷價值，應(yīng)予以淘汰，而細(xì)胞離心涂片法雖部分提高了檢出率，但十分有限。這可能是因為該方法干擾因素太多，如標(biāo)本放置時間的長短、涂片的厚簿、染色的質(zhì)量等。加之該方法存在著涂片厚、細(xì)胞重疊、結(jié)構(gòu)不清、細(xì)胞量少的缺點，影響了對結(jié)果的正確判斷，故參考價值亦不大。我國學(xué)者楊玉林曾報道，胸腹水中脫落的細(xì)胞種類較多，如組織細(xì)胞、白細(xì)胞和紅細(xì)胞、惡性腫瘤細(xì)胞、壞死物和黏液以及正常的或反應(yīng)性的間皮細(xì)胞等可以互相重疊，退化變性，在常規(guī)檢查中很難進(jìn)行鑒別做出正確的診斷［7］，我們的結(jié)果與此相符。液基薄層細(xì)胞學(xué)技術(shù)是近年來推廣的一項新技術(shù)，它以在婦科宮頸癌早期診斷方面的優(yōu)越性而受到國內(nèi)外學(xué)者的青睞［8］。但在非婦科領(lǐng)域，尤其是在胸腔積液細(xì)胞學(xué)檢測方面的應(yīng)用研究尚不多見。在我們檢測的40例中，18例通過該方法檢測到惡性腫瘤細(xì)胞，22例未找到癌細(xì)胞，與手術(shù)或纖維支氣管鏡組織病理學(xué)結(jié)果、治療及隨訪觀察結(jié)果比較，其診斷符合率達(dá)%，且無一例假陽性結(jié)果。比該方法在宮頸癌及痰細(xì)胞學(xué)檢出率高［9］，提示該方法在惡性胸腹水的診斷方面有較大的診斷價值。同時該方法涂片厚薄均勻一致，細(xì)胞單層分布，容易辨認(rèn)，對病理診斷醫(yī)師的要求相對沒有涂片嚴(yán)格。如果多次檢測可更大地提高陽性檢出率。但該方法也有其不足，一方面是如果細(xì)胞數(shù)太少時陽性檢出率不高，另一方面是在細(xì)胞分類上只能靠經(jīng)驗，在免疫細(xì)胞化學(xué)檢測中其細(xì)胞核著色的免疫標(biāo)記物的陽性率和表達(dá)強度均較石蠟切片低［10］。近年來石蠟包埋切片技術(shù)因其陽性診斷率高而受到廣大學(xué)者關(guān)注［1］，本文中我們采用多次反復(fù)離心沉淀法，搜集到較多的細(xì)胞，并觀察到該方法對凝固的標(biāo)本檢測也不受影響。我們在凝固物中找到了大量的細(xì)胞及組織，由此可以觀察到細(xì)胞的形態(tài)及組織結(jié)構(gòu)，提高了石蠟切片的陽性檢出率。這與文獻(xiàn)報道一致［7］。此外我們參照鄭暉［1］的方法，用雞蛋清作為介質(zhì),預(yù)包埋細(xì)胞使其凝聚成團塊,再按組織塊標(biāo)本一樣進(jìn)行常規(guī)脫水、包埋、石蠟切片、染色,同時對該方法作了部分改良，取消了甲醛固定，這一方面使收集到的細(xì)胞

［1］鄭暉,顏亞暉.介紹一種簡單適用的胸腹水脫落細(xì)胞石蠟包埋法［J］.中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志,2003,12(4):445446.

［2］張智慧，孫耘田.免疫細(xì)胞化學(xué)在細(xì)胞病理學(xué)中的應(yīng)用［J］.中華病理學(xué)雜志,2005,34(10):672673.

［3］郭智俊，彭掛香,潘乃梁.胸腹水沉淀物瓊脂石蠟雙包埋切片法與常規(guī)涂片法的對比［J］.臨床與實驗病理學(xué)雜志，2002,18(4):437.

［4］李琳，胡海，黃曉楠.胸腹水沉淀物制片方法介紹［J］.診斷病理學(xué)雜志，2003，10(1)：50．

［5］邱前程，盧善明，黃杰雄.胸腹水細(xì)胞塊石蠟包埋及免疫細(xì)胞化學(xué)染色在胸腹水細(xì)胞病理學(xué)診斷中的價值［J］.汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2005,18(1):4344.

［6］楊文君,任曉冰,沈?qū)氈?等.免疫組織化學(xué)方法在良惡性胸腹水鑒別診斷中的意義［J］.實用醫(yī)學(xué)雜志,2004,20(4):374375.

［7］楊玉林，陳麗，王玉萍.胸腹水細(xì)胞石蠟切片技術(shù)的臨床應(yīng)用［J］.臨床檢驗雜志,2004,22(2):102.

［8］潘秦鏡，李凌，喬友林，等．液基細(xì)胞學(xué)篩查宮頸癌的研究［J］．中華腫瘤雜志，2001，23