專題13發(fā)酵工程-備戰(zhàn)2023年高考生物二輪復(fù)習(xí)重難點精講課件（新教材專用）

二輪復(fù)習(xí)發(fā)酵工程判斷正誤并找到課本原話1．發(fā)酵的實質(zhì)是將原料通過微生物的代謝轉(zhuǎn)化為人類所需要的產(chǎn)物的過程。(選擇性必修3P5正文)(

)2．乳酸菌是厭氧細菌，無氧呼吸產(chǎn)物是乳酸與CO2。(選擇性必修3P5正文與反應(yīng)簡式)(

)3．葡萄酒的自然發(fā)酵中，起主要作用的是突變型酵母菌。(選擇性必修3P7“探究·實踐”)(

)4．只要O2充足醋酸發(fā)酵的產(chǎn)物是一樣的。(選擇性必修3P7正文與反應(yīng)簡式)(

)5．培養(yǎng)基只能用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物。(選擇性必修3P9正文)(

)6．培養(yǎng)乳酸菌的營養(yǎng)物質(zhì)只需水、碳源、氮源和無機鹽。(選擇性必修3P10正文)(

)7．在高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)進行的滅菌屬于濕熱滅菌。(選擇性必修3P11“資料卡”)(

)√×××××√8．由單一個體繁殖所獲得的微生物群體稱為培養(yǎng)物。(選擇性必修3P11正文)(

)9．平板劃線時要注意將最后一次的劃線與第一次的劃線相連。(選擇性必修3P13“探究·實踐”)(

)10．利用顯微鏡直接計數(shù)法統(tǒng)計的細菌數(shù)量便是活菌的數(shù)量。(選擇性必修3P18正文)(

)11．細菌計數(shù)板與血細胞計數(shù)板的計數(shù)原理不同。(選擇性必修3P18“相關(guān)信息”)(

)12．發(fā)酵工程中所需的性狀優(yōu)良的菌種只能從自然界中篩選出來。(選擇性必修3P22正文)(

)13．發(fā)酵工程與傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)最大的區(qū)別就是前者可以利用微生物來進行發(fā)酵。(選擇性必修3P28“概念檢測”)(

)××××××傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)固體半固體有氧或無氧操作簡單，適用于家庭式或作坊式生產(chǎn)。乳制品發(fā)酵、泡菜制作的原理：乳酸菌分類分布代謝類型作用原核生物分布廣泛空氣、土壤、植物體表、人或動物腸道異養(yǎng)厭氧型在無氧情況下能將葡萄糖分解成乳酸C6H12O62C3H6O3+少量能量酶1、配置鹽水2、新鮮蔬菜處理、裝壇3、倒冷卻鹽水4、封壇發(fā)酵方法步驟清水與鹽配置質(zhì)量分數(shù)為5﹪-20﹪的鹽水，配制好后煮沸冷卻。①鹽的作用：②鹽水濃度要適宜的目的：③鹽水煮沸的目的：④鹽水冷卻后使用的目的：為了不影響乳酸菌的生命活動調(diào)味，抑制其他微生物生長過高，乳酸發(fā)酵將受抑制；過低，雜菌易繁殖，

導(dǎo)致泡菜變質(zhì)殺菌，去除水中的溶解氧水封閉壇口起著使壇內(nèi)與壇外空氣隔絕的作用，這是最簡易的造成無氧環(huán)境的方法。說明乳酸菌進行乳酸發(fā)酵需無氧環(huán)境。時期乳酸菌乳酸亞硝酸鹽發(fā)酵前期發(fā)酵中期發(fā)酵后期變化曲線少（O2抑制乳酸菌活動）少增加（硝酸鹽還原菌的作用）最多（乳酸菌比其他雜菌更耐酸。乳酸積累，抑制其他菌活動）增多達到最多后開始下降（硝酸鹽還原菌受抑制，部分亞硝酸鹽被分解）減少（乳酸積累，pH下降，抑制乳酸菌活動）繼續(xù)增多，最后保持穩(wěn)定下降至保持相對穩(wěn)定（硝酸鹽還原菌被完全抑制）泡菜制作過程中乳酸菌、乳酸和亞硝酸鹽含量的變化情況分析（拓展應(yīng)用P8,2）某同學(xué)在制作泡菜前，查閱資料得知，可以向泡菜壇中加些“陳泡菜水”，在用5﹪的食鹽水制作泡菜時，他在不同時間測定了泡菜中亞硝酸鹽的含量，結(jié)果見右欄曲線圖，請你幫他分析問題。（1）據(jù)圖分析，從亞硝酸鹽含量來看，你認為該泡菜在什么時間食用比較合適？為什么？（2）他第一次制作出的泡菜“咸而不酸”，造成這個結(jié)果最可能的原因是什么？（3）加入“陳泡菜水”的目的是什么？10天后食用比較好，因為此時亞硝酸鹽含量已經(jīng)降到較低水平。鹽濃度高，殺死了乳酸菌等微生物?！瓣惻莶怂焙樗峋煽焖侔l(fā)酵產(chǎn)生乳酸。果酒制作與果醋制作的比較項目果酒制作果醋制作發(fā)酵菌種菌種來源發(fā)酵原理發(fā)酵條件溫度時間氧氣pH酶酶酶酶傳統(tǒng)的葡萄酒釀造采用自然發(fā)酵，菌種主要是附著在葡萄皮上的野生型酵母菌空氣中的野生型醋酸菌或購買醋酸菌的菌種或從食醋中分離醋酸菌酵母菌醋酸菌①

在有氧條件下：C6H12O6+6O26CO2+6H2O+能量②

在無氧條件下C6H12O62C2H5OH+2CO2+能量①

氧氣、糖源都充足時：C6H12O6+2O22CH3COOH+2CO2+2H2O+能量

②

缺少糖源時C2H5OH+O2CH3COOH+H2O+能量一般控制在18～30℃30～35℃10～12d7～8d初期需氧，后期不需氧始終需要氧最適pH為4.5～5.0最適pH為5.4～6.0方法步驟器具消毒將發(fā)酵瓶、榨汁機用洗潔精洗凈，并用70﹪酒精消毒，晾干備用。沖洗葡萄取新鮮葡萄，用清水沖洗1-2次，去除枝梗和腐爛的籽粒，瀝干。榨汁裝瓶用榨汁機榨取葡萄汁將葡萄汁裝入發(fā)酵瓶中，（要留大約1／3的空間）蓋好瓶蓋。酒精發(fā)酵溫度在18－300C發(fā)酵每隔12h擰松瓶蓋一次發(fā)酵時間為10-12d，可從瓶口取樣監(jiān)測不能連續(xù)沖洗，避免沖洗掉附著在葡萄皮上的野生酵母菌去梗前沖洗可避免葡萄破損，減少被雜菌污染的機會。A.先讓酵母菌進行有氧呼吸，快速繁殖，耗盡O2后，再進行酒精發(fā)酵；B.防止發(fā)酵過程中產(chǎn)生的CO2造成發(fā)酵液溢出。方法步驟打開瓶蓋蓋上紗布當(dāng)葡萄酒制作完成后，打開瓶蓋，蓋上一層紗布，進行葡萄醋的發(fā)酵。發(fā)酵溫度為30～35℃，時間為7～8d。果醋檢測問題：由果酒制作改為果醋制作需要改變哪些條件？由無氧條件改為有氧條件溫度由18－300C改為30～35℃，提高溫度有3位同學(xué)分別采用了3種不同的發(fā)酵裝置來制作果醋。結(jié)合果醋的制作原理，你認為哪一種發(fā)酵裝置更適合制作果醋？你還能繼續(xù)改進這種裝置嗎？C同學(xué)的裝置更適合制作果醋。防止空氣中雜菌進入，防止的污染結(jié)構(gòu)作用酒精發(fā)酵時狀態(tài)醋酸發(fā)酵時狀態(tài)充氣口排氣口出料口通入空氣關(guān)閉打開，并接入氣泵排出CO2打開打開便于取樣檢測關(guān)閉關(guān)閉填充棉花或者安裝其他過濾裝置發(fā)酵工程是指利用

的特定功能，通過現(xiàn)代工程技術(shù)，

生產(chǎn)對人類有用的產(chǎn)品。它涉及

、

等方面。發(fā)酵工程：微生物規(guī)模化菌種的選育和培養(yǎng)產(chǎn)物的分離和提純微生物純培養(yǎng)技術(shù)的建立密閉式發(fā)酵罐的設(shè)計成功嚴格控制的環(huán)境條件人們對發(fā)酵原理的認識嚴格控制的環(huán)境條件大規(guī)模生產(chǎn)發(fā)酵產(chǎn)品選育高產(chǎn)菌種擴大培養(yǎng)配制培養(yǎng)基滅菌接種發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵分離、提純產(chǎn)物獲得產(chǎn)品1.可通過哪些途徑獲得發(fā)酵工程使用的優(yōu)良菌種?（1）從自然界中獲取（2）誘變育種（3）基因工程育種2.微生物菌種資源豐富，選擇發(fā)酵工程用的菌種時考慮哪些因素？優(yōu)良的菌種對周圍環(huán)境適應(yīng)能力強，其發(fā)酵產(chǎn)品的產(chǎn)量高、質(zhì)量穩(wěn)定繁殖能力強等優(yōu)點3.獲得優(yōu)良菌種后為什么要對菌種進行擴大培養(yǎng)？工業(yè)發(fā)酵要想在短時間內(nèi)得到大量的發(fā)酵產(chǎn)物，則需要大量菌體，因此需要進行擴大培養(yǎng)一般使用液體培養(yǎng)基。培養(yǎng)基類型：4.滅菌的原因：發(fā)酵工程所用的菌種大多數(shù)是單一菌種，一旦污染，可能是產(chǎn)量降低滅菌的對象：培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備通入的空氣滅菌生產(chǎn)環(huán)境消毒實例：在青霉素生產(chǎn)過程中如果污染了雜菌，雜菌分泌青霉素酶就會將青霉素分解掉。5.發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵有何要求：要在發(fā)酵過程中隨時取樣，檢測培養(yǎng)液中的微生物數(shù)量、產(chǎn)物濃度等，以了解發(fā)酵進程；嚴格控制溫度、pH、溶解氧、通氣量與轉(zhuǎn)速等發(fā)酵條件，已獲得所需的發(fā)酵產(chǎn)物。加酸或堿加緩沖物質(zhì)通風(fēng)攪拌6.發(fā)酵過程中為什么還要控制發(fā)酵條件呢？環(huán)境條件不僅會影響微生物的生長繁殖，而且會影響微生物代謝物的形成。例如：谷氨酸的發(fā)酵生產(chǎn)：在中性和弱堿性條件下會積累谷氨酸；在酸性條件下則容易形成谷氨酰胺和N-乙酰谷氨酰胺。抽取樣本進行檢測調(diào)節(jié)罐溫控制溶解氧調(diào)節(jié)罐壓培養(yǎng)物或營養(yǎng)物質(zhì)的加入口觀察孔取樣管電動機排氣管pH計冷卻水排出口冷卻夾層發(fā)酵液攪拌葉輪生物傳感器裝置空氣入口溫度傳感器和控制裝置冷卻水進入口閥門放料管控制培養(yǎng)物以一定速度進入、流出發(fā)酵罐，實現(xiàn)連續(xù)培養(yǎng)通過肉眼觀察、儀器檢測等監(jiān)控發(fā)酵條件以及發(fā)酵過程，抽取樣品進一步檢測。使微生物與發(fā)酵液混合均勻，加快O2的溶解以及散熱通過加料裝置添加酸或堿進行調(diào)節(jié)，也可以在培養(yǎng)基中添加pH緩沖液。電動機排氣管pH計冷卻水排出口冷卻夾層發(fā)酵液攪拌葉輪生物傳感器裝置空氣入口放料管閥門培養(yǎng)物或營養(yǎng)物質(zhì)的加入口觀察孔取樣管溫度傳感器和控制裝置冷卻水進入口（1）溫度：通過發(fā)酵罐上的溫度傳感器和控制裝置進行監(jiān)測和調(diào)整（2）溶解氧：通過通氣量和攪拌速度加以調(diào)節(jié)。（3）pH：7.分離、提純產(chǎn)物的方法措施有哪些過濾、沉降①發(fā)酵產(chǎn)品是微生物細胞本身時②發(fā)酵產(chǎn)品是代謝物時適當(dāng)?shù)奶崛?、分離和純化措施發(fā)酵工程的特點溫和豐富低廉專一污染小容易處理發(fā)芽焙烤碾磨糖化蒸煮發(fā)酵消毒終止加啤酒花冷卻接種過濾主發(fā)酵后發(fā)酵酵母菌繁殖，大部分糖分解和代謝物生成。在低溫、密閉的環(huán)境下儲存一段時間，形成澄清、成熟的啤酒。1.啤酒的發(fā)酵過程分為________和_________兩個階段；2.主發(fā)酵階段完成_________________________________________________；3.后發(fā)酵的條件________________________________；4.焙烤的目的：________________________________；5.蒸煮的目的：主發(fā)酵后發(fā)酵酵母菌的繁殖、大部分糖分解和代謝物的生成低溫、密閉的環(huán)境下儲存一段時間加熱殺死種子胚但不使淀粉酶失活產(chǎn)生風(fēng)味組分，終止酶的進一步作用，并對糖漿滅菌思考討論發(fā)酵工程的應(yīng)用①在食品工業(yè)上的應(yīng)用a．生產(chǎn)傳統(tǒng)的發(fā)酵產(chǎn)品。b．生產(chǎn)各種各樣的____________。c．生產(chǎn)________。②在醫(yī)藥工業(yè)上的應(yīng)用a．獲得具有________生產(chǎn)能力的微生物。b．直接對________進行改造，再通過發(fā)酵技術(shù)大量生產(chǎn)所需要的產(chǎn)品。c．利用基因工程，將病原體的________________基因轉(zhuǎn)入適當(dāng)?shù)奈⑸锛毎@得的表達產(chǎn)物可以作為疫苗使用。食品添加劑酶制劑某種藥物菌種某個或某幾個抗原③在農(nóng)牧業(yè)上的應(yīng)用：生產(chǎn)微生物____________________④其他方面的應(yīng)用a．利用纖維廢料發(fā)酵生產(chǎn)____________等能源物質(zhì)。b．極端微生物的應(yīng)用：嗜熱菌、嗜鹽菌可以用來生產(chǎn)________、嗜低溫菌有助于提高____________的產(chǎn)量。肥料、農(nóng)藥和飼料酒精、乙烯洗滌劑熱敏性產(chǎn)品1.培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。培養(yǎng)基作用：用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物或積累其代謝物。按物理性質(zhì)劃分：按化學(xué)成分劃分：按用途劃分：培養(yǎng)基類型：固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基種類特點用途物理性質(zhì)化學(xué)成分用途不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂工業(yè)生產(chǎn)觀察微生物的運動、分類鑒定微生物分離、鑒定、活菌計數(shù)、保藏菌種含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)培養(yǎng)基成分明確分類、鑒定在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長,促進所需要的微生物的生長培養(yǎng)、分離出特定微生物在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品,用以鑒別不同種類的微生物鑒別不同種類微生物選擇培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基的基本成分：水碳

源無機鹽氮

源一般情況下，不添加氮源培養(yǎng)基可用來培養(yǎng)_____微生物固氮①

含C、H、O、N有機物可作為異養(yǎng)型微生物的碳源、氮源、能源。②

自養(yǎng)型微生物與異養(yǎng)型微生物培養(yǎng)基的主要差別在于碳源。自養(yǎng)型微生物所需的碳源來自無機碳源，異養(yǎng)型微生物所需的碳源來自有機碳源，因此可以根據(jù)培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)判斷微生物的代謝類型。③

氮源主要用于合成蛋白質(zhì)、核酸及含氮代謝產(chǎn)物等。無機氮源不但能給自養(yǎng)型微生物提供氮源，也能作為能源物質(zhì)，如NH3既作為硝化細菌的氮源，也作為能源（NH3氧化釋放的化學(xué)能）。④

無機鹽除了可以調(diào)節(jié)酸堿平衡、維持一定的滲透壓之外，提供無機營養(yǎng)，有些無機鹽離子可以作為化能合成菌的能源（如鐵細菌）。⑤水的功能：良好的溶劑，維持生物大分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。

類型適用范圍操作方法消毒滅菌較為溫和理化方法，殺死部分微生物（不包括芽孢、孢子）強烈的理化方法，殺死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法日常生活100℃煮沸5～6min巴氏消毒法不耐高溫的液體62～65℃煮30min或80-90℃煮30s-1min化學(xué)藥劑生物活體、水源等擦拭等,如用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源紫外線紫外線照射30min灼燒滅菌接種的金屬工具、接種時用的試管口或瓶口等直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒干熱滅菌耐高溫、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金屬用具等物品放入干熱滅菌箱,160～170℃加熱2～3h濕熱滅菌培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi),100kPa,溫度121℃,15～30min接種室、接種箱，超凈工作臺微生物的純培養(yǎng)培養(yǎng)物純培養(yǎng)物純培養(yǎng)將接種于培養(yǎng)基內(nèi)，在合適條件下形成的含特定種類微生物的群體稱為培養(yǎng)物。由單一個體繁殖所獲得的微生物群體獲得純培養(yǎng)物的過程配制培養(yǎng)基滅菌接種分離培養(yǎng)微生物群分散或稀釋單個細胞單個菌落繁殖菌落1.概念：2.特征：

分散的微生物(單一個體)在適宜的

表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的

。

固體培養(yǎng)基子細胞群體形狀、大小、光澤度、顏色、透明度等?！氰b定菌種的重要依據(jù)3.獲得單菌落的方法：①平板劃線法②稀釋涂布平板法毛霉倒平板待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時，在酒精燈火焰附近倒平板。冷凝后平板為什么倒置①拔出錐形瓶的棉塞②將瓶口迅速通過火焰③用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，將培養(yǎng)基（10～20mL）倒入培養(yǎng)皿，立即蓋上皿蓋④等待培養(yǎng)基冷卻凝固后，將培養(yǎng)皿倒轉(zhuǎn)過來放置2.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。

防止空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。將所倒平板放入37℃的恒溫箱中培養(yǎng)12h～24h，觀察是否有菌落存在以確定是否被污染或滅菌是否徹底。3.怎么確定所倒平板未被雜菌污染？1.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，將平板倒置可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。思考討論①灼燒接種環(huán)，直至接種環(huán)金屬絲燒紅②在火焰旁冷卻接種環(huán)，拔出酵母菌培養(yǎng)液試管的棉塞③試管口通過火焰④在火焰附近用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌液平板劃線法是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體。⑤試管口通過火焰，并塞上棉塞⑥將皿蓋打開一條縫隙，用接種環(huán)在培養(yǎng)基表面迅速劃三至五條平行線，蓋上皿蓋平板劃線過程⑦灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一次劃線的末端開始作第二次劃線。重復(fù)以上操作，作第三、四、五次劃線。平板劃線過程注意：1.不要將最后一次的劃線與第一次劃線相連。2.劃3個平板（重復(fù)實驗）1個不劃線（空白對照）3.一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達到分離單菌落的目的；4.存留在劃破處的單個細胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時,仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？灼燒時期目的取菌種前每次劃線前接種結(jié)束后殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者殺死上次劃線時殘留菌種，使下一次劃線的菌種直接來源上次劃線的末端，從而使每次劃線時菌種數(shù)目逐漸減少，直至得到單個細胞殺死接種環(huán)上原有微生物3.培養(yǎng)酵母菌

完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的平板和一個未接種的平板倒置，放入28℃左右的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-28h。作對照，該培養(yǎng)皿無菌落說明培養(yǎng)基沒有污染既可以防止培養(yǎng)基表面的水分揮發(fā)；又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染選擇培養(yǎng)基的概念

在微生物學(xué)中，將允許

生長，同時

或

其他種類微生物生長的培養(yǎng)基稱為選擇培養(yǎng)基。特定種類的微生物抑制阻止思考怎么證明一個選擇培養(yǎng)基具有選擇性呢？

應(yīng)該設(shè)置基礎(chǔ)培養(yǎng)基（如牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）或完全培養(yǎng)基

作為對照基礎(chǔ)培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基問題：如果讓你分離土壤中分解尿素的細菌，你應(yīng)該怎么設(shè)計呢？尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，尿素不能直接被農(nóng)作物吸收，土壤中的細菌將尿素分解成NH3，再被轉(zhuǎn)化為NO3-、NH4+等被植物吸收。土壤中的細菌分解尿素是因為他們能合成脲酶。CO(NH2)2+H2O2NH3+CO2

脲酶選擇培養(yǎng)基配方的設(shè)計尿素的立體結(jié)構(gòu)1.稀釋涂布平板法（1）原理：

當(dāng)樣品的稀釋度足夠___時，培養(yǎng)基表面生長的一個____，來源于__________中的一個____；通過計數(shù)平板上的____數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少_____；高菌落樣品稀釋液活菌菌落活菌（2）計數(shù)原則①選擇菌落數(shù)為_________的平板計數(shù)30-300②同一稀釋度下，應(yīng)至少對___個平板進行重復(fù)計數(shù)，然后求出______；3平均值樣品的

______將直接影響平板上的菌落數(shù)目；稀釋度微生物的數(shù)量測定稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍空白對照注意事項①為了保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)在

_________上進行計數(shù)。②為增強實驗說服力與準確性，設(shè)計實驗時，需要涂布_________作為重復(fù)組。（重復(fù)實驗，減少誤差）。③統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實際數(shù)目_________

。④因此，統(tǒng)計結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)表示。⑤分析實驗結(jié)果時，要考慮重復(fù)組結(jié)果_________，如果相差太大，意味著操作有誤，需重新實驗。30—300的平板至少三個平板低是否接近因為當(dāng)兩個或多個細胞連在一起時，繁殖后形成的還是一個菌落不能區(qū)分死菌與活菌；個體小的細菌在顯微鏡下難以觀察；①原理：利用細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。②缺點：2.顯微鏡直接計數(shù)——直接計數(shù)法優(yōu)點：快速直觀每毫升原液所含細菌數(shù)＝每小格平均細菌數(shù)×400×10000×稀釋倍數(shù)1.實驗?zāi)康模和寥乐蟹纸饽蛩氐募毦姆蛛x與計數(shù)（1）從土壤中分離出能夠分解尿素的細菌（2）統(tǒng)計每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細菌2.實驗原理：絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，可以從土壤中分離出分解尿素的細菌。葡萄糖10.0g尿素1.0gKH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g瓊脂15.0g蒸餾水1000mlKH2PO4和Na2HPO4的作用是：①提供無機鹽；②調(diào)節(jié)pH。3.研究思路；土壤取樣制備培養(yǎng)基樣品稀釋與取樣涂布微生物的培養(yǎng)與觀察細菌宜在酸堿度接近中性的潮濕土壤中生長，絕大部分分布在距地表3~8cm的土壤層。鏟去表層土3cm左右，取樣，將樣品裝入事先準備好的信封中。（1）土壤取樣取土樣時用的鐵鏟和取樣袋在使用前都需要滅菌。操作完成后，一定要洗手。（2）配制培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基—————以尿素為唯一氮源完全培養(yǎng)基（如牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）——作為對照，

來判斷選擇培養(yǎng)基是否具有選擇作用（3）樣品的稀釋將10g土樣加入盛有90mL無菌水的錐形瓶中，充分搖勻。取1mL上清液加入盛有9mL無菌水的試管中，依次等比稀釋。1×101mL1mL1mL1mL1mL1mL1×1021×1031×1041×1051×1061×1079mL無菌水90mL無菌水10g①取0.1mL菌液滴加到培養(yǎng)基表面1×107移液槍②將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中③將涂布器放在火焰上灼燒，待酒精燃盡、涂布器冷卻后，再進行涂布④用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使涂布均勻（4）涂布平板操作每個濃度至少設(shè)置4個平板1、2、3平板是選擇培養(yǎng)基（實驗組，三個重復(fù)），4為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用以判斷選擇培養(yǎng)基是否具有選擇作用）。恒溫培養(yǎng)箱（5）微生物的培養(yǎng)與觀察①培養(yǎng)條件：

不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間。②觀察：

每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果。（一般來說，在相同的培養(yǎng)條件下，同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征，如形狀、大小和顏色等）。（細菌一般在30-37℃的溫度下培養(yǎng)1-2d）分解纖維素的細菌鑒定：

纖維素能與剛果紅形成紅色復(fù)合物，但纖維素水解產(chǎn)物纖維二糖和葡萄糖不能與剛果紅形成紅色復(fù)合物。

在以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基中加入剛果紅，接種土壤微生物培養(yǎng)，菌落周圍出現(xiàn)透明圈，說明這些細菌能分解纖維素。透明圈長句專練1.深挖教材類(1)(選擇性必修3P6“進一步探究”)日常生活中要多吃新鮮蔬菜，不宜多吃腌制蔬菜的原因是________________________________________________________。(2)(選擇性必修3P8“拓展應(yīng)用2”)制作的泡菜“咸而不酸”的原因是______________________________________________。(3)(選擇性必修3P10“旁欄思考”)培養(yǎng)基中加入氮源的原因是_________________________________________________________。(4)(選擇性必修3P12～13“探究·實踐”)①平板冷凝后，要將平板倒置，原因是_________________________________________________________。②如果在未接種的培養(yǎng)基表面有菌落，說明________________。在腌制過程中有亞硝酸鹽產(chǎn)生，亞硝酸鹽攝入過量會發(fā)生中毒，甚至死亡可能是食鹽濃度過高、發(fā)酵溫度過低導(dǎo)致泡菜未能正常發(fā)酵培養(yǎng)基中的氮元素是微生物合成蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)所必需的可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染；避免培養(yǎng)基水分過快揮發(fā)培養(yǎng)基被雜菌污染(5)(選擇性必修3P18“相關(guān)信息”)___________常用于相對較大的酵母菌細胞、霉菌孢子等的計數(shù)；___________常用于相對較小的細菌等的計數(shù)。(6)(選擇性必修3P20“拓展應(yīng)用2”)在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌的原因是___________________________________________________________________________________。血細胞計數(shù)板細菌計數(shù)板在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對較高，從這種土樣中獲得目的微生物的概率要高于普通環(huán)境2．事實概述類(1)[全國卷Ⅱ，39(2)]某小組采用平板劃線法分離水樣中的細菌，操作時，接種環(huán)通過________滅菌。在第二次及以后的劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線。這樣做的目的是________________________________________