核酸的結構與功能

重點、難點：基本概念:核苷酸

,DNA、RNA,Tm等

DNA雙螺旋結構模型的要點；mRNA、tRNA、rRNA的結構特點及功能；

DNA變性與復性等核酸重要的理化性質及其應用。第二章核酸的結構與功能本文檔共111頁；當前第1頁；編輯于星期六\7點11分1869MiescherisolatedDNAforthefirsttime.確定了生物遺傳的物質基礎是DNA

核酸(nucleicacid)

是以核苷酸為基本組成單位的生物大分子，攜帶和傳遞遺傳信息。本文檔共111頁；當前第2頁；編輯于星期六\7點11分核酸的分類及分布存在于細胞核和線粒體

分布于細胞核、細胞質、線粒體(deoxyribonucleicacid,DNA)(ribonucleicacid,RNA)脫氧核糖核酸

核糖核酸攜帶遺傳信息，并通過復制傳遞給下一代。是DNA轉錄的產(chǎn)物，參與遺傳信息的復制與表達。某些病毒RNA也可作為遺傳信息的載體本文檔共111頁；當前第3頁；編輯于星期六\7點11分第一節(jié)核酸的化學組成及其一級結構TheChemicalComponentandPrimaryStructureofNucleicAcid本文檔共111頁；當前第4頁；編輯于星期六\7點11分核酸的基本結構單位是核苷酸核酸在核酸酶的作用下水解成核苷酸。

核苷酸由堿基、戊糖、磷酸組成核苷酸由堿基(base)、戊糖(pentose)和磷酸3種成分以共價鍵依次連接而成。本文檔共111頁；當前第5頁；編輯于星期六\7點11分核酸的化學組成

元素組成C、H、O、N、P（9%~10%）

分子組成——堿基(base)：嘌呤堿，嘧啶堿——戊糖(pentose)：核糖，脫氧核糖——磷酸(phosphate)本文檔共111頁；當前第6頁；編輯于星期六\7點11分核酸(DNA和RNA)核苷酸核苷和脫氧核苷磷酸戊糖堿基嘌呤嘧啶核糖脫氧核糖核酸組成本文檔共111頁；當前第7頁；編輯于星期六\7點11分分子組成堿基(base)：嘌呤堿，嘧啶堿戊糖(ribose)：核糖，脫氧核糖磷酸(phosphate)一、核苷酸是構成核酸的基本組成單位本文檔共111頁；當前第8頁；編輯于星期六\7點11分堿基(base)是含氮的雜環(huán)化合物。堿基嘌呤嘧啶腺嘌呤鳥嘌呤尿嘧啶胸腺嘧啶胞嘧啶存在于DNA和RNA中僅存在于RNA中僅存在于DNA中堿基本文檔共111頁；當前第9頁；編輯于星期六\7點11分嘌呤(purine，Pu)腺嘌呤(adenine,A)鳥嘌呤(guanine,G)本文檔共111頁；當前第10頁；編輯于星期六\7點11分嘧啶(pyrimidine，Py)胞嘧啶(cytosine,C)尿嘧啶(uracil,U)胸腺嘧啶(thymine,T)本文檔共111頁；當前第11頁；編輯于星期六\7點11分戊糖（構成RNA）1′2′3′4′5′核糖(ribose)（構成DNA）脫氧核糖(deoxyribose)本文檔共111頁；當前第12頁；編輯于星期六\7點11分

嘌呤N-9或嘧啶N-1與核糖C-1通過β-N-糖苷鍵相連形成核苷(ribonucleoside)。核苷NNNN9NH2OOHOHHHHCH2OHH1'2'糖苷鍵1′1AR,GR,UR,CR本文檔共111頁；當前第13頁；編輯于星期六\7點11分脫氧核苷嘌呤N-9

或嘧啶N-1與脫氧核糖C-1通過β-N-糖苷鍵相連形成脫氧核苷(deoxyribonucleoside)。1′1HdAR,dGR,dTR,dCR本文檔共111頁；當前第14頁；編輯于星期六\7點11分

“稀有核苷”是由“稀有堿基”所生成的核苷。假尿苷（ψ）β1’,C5-糖苷鍵β1’C5本文檔共111頁；當前第15頁；編輯于星期六\7點11分核苷或脫氧核苷與磷酸通過酯鍵結合構成核苷酸(ribonucleotide)或脫氧核苷酸(deoxyribonucleotide)。核苷酸(ribonucleotide)

AMP,GMP,UMP,CMPNNNN9NH2OOHOHHHHCH2H1'2'OPO-HOO糖苷鍵酯鍵脫氧核苷酸：dAMP,dGMP,dTMP,dCMP

本文檔共111頁；當前第16頁；編輯于星期六\7點11分多磷酸核苷酸本文檔共111頁；當前第17頁；編輯于星期六\7點11分環(huán)化核苷酸：cAMP、cGMP，是細胞信號轉導中的第二信使。cAMP核苷酸衍生物本文檔共111頁；當前第18頁；編輯于星期六\7點11分體內重要的核苷酸衍生物含核苷酸的生物活性物質：NAD+、NADP+、CoA-SH、FAD

等都含有

AMPNADP+NAD+本文檔共111頁；當前第19頁；編輯于星期六\7點11分二、DNA是脫氧核苷酸通過3’,5’-磷酸二酯鍵連接形成的大分子一個脫氧核苷酸3的羥基與另一個核苷酸5的α-磷酸基團縮合形成磷酸二酯鍵(phosphodiesterbond)。

多個脫氧核苷酸通過磷酸二酯鍵構成了具有方向性的線性分子，稱為多聚脫氧核苷酸(polydeoxynucleotide)，即DNA鏈。本文檔共111頁；當前第20頁；編輯于星期六\7點11分5′-末端3′-末端CGA磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵本文檔共111頁；當前第21頁；編輯于星期六\7點11分交替的磷酸基團和戊糖構成了DNA的骨架(backbone)。DNA鏈的方向是5

→

3本文檔共111頁；當前第22頁；編輯于星期六\7點11分三、RNA也是具有3’,5’-磷酸二酯鍵的線性大分子RNA也是多個核苷酸分子通過酯化反應形成的線性大分子，并且具有方向性；RNA的戊糖是核糖；RNA的嘧啶是胞嘧啶和尿嘧啶。本文檔共111頁；當前第23頁；編輯于星期六\7點11分定義核酸中核苷酸的排列順序。由于核苷酸間的差異主要是堿基不同，所以也稱為堿基序列。5′端3′端CGA四、核酸的一級結構是核苷酸的排列順序本文檔共111頁；當前第24頁；編輯于星期六\7點11分AGP5PTPGPCPTPOH3書寫方法：5pApCpTpGpCpT-OH

35

ACTGCT

3本文檔共111頁；當前第25頁；編輯于星期六\7點11分核酸分子的大小常用堿基(base或kilobase)數(shù)目來表示。小的核酸片段(<50bp)常被稱為寡核苷酸(oligonucleotide)。自然界中的DNA和RNA的長度可以高達幾十萬個堿基。本文檔共111頁；當前第26頁；編輯于星期六\7點11分第二節(jié)DNA的空間結構與功能DimensionalStructureandFunctionofDNA本文檔共111頁；當前第27頁；編輯于星期六\7點11分DNA的空間結構又分為二級結構(secondarystructure)和高級結構。DNA的空間結構(spatialstructure)構成DNA的所有原子在三維空間具有確定的相對位置關系。doublehelix：Thenaturalcoiledconformationoftwocomplementary,antiparallelDNAchainsbytheformationofA-TandG-Cbasepairs.本文檔共111頁；當前第28頁；編輯于星期六\7點11分一、DNA的二級結構是雙螺旋結構WatsonandCrick:1953年提出雙螺旋結構模型,TheNobelPrizeinPhysiologyorMedicine1962本文檔共111頁；當前第29頁；編輯于星期六\7點11分不同生物種屬的DNA的堿基組成不同同一個體的不同器官或組織的DNA堿基組成相同。[A]=[T]，[G]=[C]Chargaff規(guī)則（一）DNA雙螺旋結構的研究背景獲得了高質量的DNA分子的X射線衍射照片。提出了DNA分子雙螺旋結構(doublehelix)模型。本文檔共111頁；當前第30頁；編輯于星期六\7點11分AGCTA/TG/CG+C嘌呤/嘧啶大腸桿菌26.024.925.223.91.090.9950.11.04結核桿菌15.134.935.414.61.030.9970.31.00酵母31.718.317.432.60.971.0535.71.00牛29.021.221.228.71.011.0042.41.01豬29.820.720.729.11.021.0041.41.01人30.419.919.930.11.011.0039.81.01不同生物來源DNA堿基組分和相對比例本文檔共111頁；當前第31頁；編輯于星期六\7點11分1953年由Wilkins研究小組的RosalindFranklin獲得了高質量的X線衍射照片，顯示出DNA是螺旋形分子，從密度上也提示了DNA為雙鏈分子。

RosalindFranklin本文檔共111頁；當前第32頁；編輯于星期六\7點11分WatsonandCrick's1953NaturepaperproposingadoublehelixstructureforDNA

StructureforDeoxyriboseNucleicAcid

2April1953MOLECULARSTRUCTUREOFNUCLEICACIDS

本文檔共111頁；當前第33頁；編輯于星期六\7點11分兩條多聚核苷酸鏈在空間的走向呈反向平行(anti-parallel)。兩條鏈圍繞著同一個螺旋軸形成右手螺旋(right-handed)的結構。雙螺旋結構的直徑為2nm，螺距為3.4nm。脫氧核糖和磷酸基團組成的親水性骨架位于雙螺旋結構的外側，疏水的堿基位于內側。雙螺旋結構的表面形成了一個大溝(majorgroove)和一個小溝(minorgroove)。（二）DNA雙螺旋結構模型要點1.DNA是反向平行、右手螺旋的雙鏈結構本文檔共111頁；當前第34頁；編輯于星期六\7點11分DNA二級結構B-DNAhelix：

Aright-handeddoublehelixwiththefollowingcharacteristics:thetwostrandsareantiparallel;thebasesareinsidethehelixandthephosphatesanddeoxyribosesugarsareontheoutside;adenineformshydrogenbondswiththymine,andguanineformsthemwithcytosine;thebasesineachpairarecoplanar;thereare10.4residuesperturn,withapitchof35?.本文檔共111頁；當前第35頁；編輯于星期六\7點11分本文檔共111頁；當前第36頁；編輯于星期六\7點11分大溝與小溝本文檔共111頁；當前第37頁；編輯于星期六\7點11分2.DNA雙鏈之間形成了互補堿基對堿基配對關系稱為互補堿基對(complementarybasepair)。DNA的兩條鏈則互為互補鏈(complementarystrand)。堿基對平面與螺旋軸垂直。本文檔共111頁；當前第38頁；編輯于星期六\7點11分相鄰兩個堿基對會有重疊，產(chǎn)生了疏水性的堿基堆積力(basestackinginteraction)。堿基堆積力和互補堿基對的氫鍵共同維系著DNA結構的穩(wěn)定。3.疏水作用力和氫鍵共同維系著DNA雙螺旋結構的穩(wěn)定。堿基堆積作用力本文檔共111頁；當前第39頁；編輯于星期六\7點11分Z（三）DNA雙螺旋結構的多樣性本文檔共111頁；當前第40頁；編輯于星期六\7點11分旋向螺距(nm)堿基數(shù)（每圈）螺旋直徑（nm）骨架走行存在條件A型右手2.3112.5平滑體外脫水B型右手3.4102.3平滑DNA生理條件Z型左手4.5121.8鋸齒型CG序列三種DNA構型的比較本文檔共111頁；當前第41頁；編輯于星期六\7點11分本文檔共111頁；當前第42頁；編輯于星期六\7點11分（四）DNA的多鏈螺旋結構在酸性的溶液中，胞嘧啶的N-3原子被質子化，可與鳥嘌呤的N-7原子形成氫鍵；同時，胞嘧啶的N-4的氫原子也可與鳥嘌呤的O-6形成氫鍵，這種氫鍵被稱為Hoogsteen氫鍵。Hoogsteen氫鍵Hoogsteen氫鍵，不破壞Watson-Crick氫鍵，由此形成了C＋GC的三鏈結構(triplex)。本文檔共111頁；當前第43頁；編輯于星期六\7點11分三鏈結構本文檔共111頁；當前第44頁；編輯于星期六\7點11分鳥嘌呤之間通過Hoogsteen氫鍵形成特殊的四鏈結構(tetraplex)。四鏈結構本文檔共111頁；當前第45頁；編輯于星期六\7點11分真核生物DNA3-末端是富含GT的多次重復序列，因而自身形成了折疊的四鏈結構。本文檔共111頁；當前第46頁；編輯于星期六\7點11分二、DNA的高級結構是超螺旋結構超螺旋結構(superhelix或supercoil)DNA雙螺旋鏈再盤繞即形成超螺旋結構。正超螺旋(positivesupercoil)盤繞方向與DNA雙螺旋方同相同。負超螺旋(negativesupercoil)盤繞方向與DNA雙螺旋方向相反。

本文檔共111頁；當前第47頁；編輯于星期六\7點11分（一）原核生物DNA的環(huán)狀超螺旋結構原核生物DNA多為環(huán)狀，以負超螺旋的形式存在，平均每200堿基就有一個超螺旋形成。本文檔共111頁；當前第48頁；編輯于星期六\7點11分DNA超螺旋結構的電鏡圖象本文檔共111頁；當前第49頁；編輯于星期六\7點11分右旋，再右旋右旋后，左旋本文檔共111頁；當前第50頁；編輯于星期六\7點11分本文檔共111頁；當前第51頁；編輯于星期六\7點11分本文檔共111頁；當前第52頁；編輯于星期六\7點11分（二）真核生物DNA的高度有序和高度致密的結構真核生物DNA以非常有序的形式存在于細胞核內。在細胞周期的大部分時間里，DNA以松散的染色質(chromatin)形式存在，在細胞分裂期，則形成高度致密的染色體(chromosome)。本文檔共111頁；當前第53頁；編輯于星期六\7點11分DNA染色質呈現(xiàn)出的串珠樣結構。染色質的基本單位是核小體(nucleosome)。DNA染色質的電鏡圖像本文檔共111頁；當前第54頁；編輯于星期六\7點11分DNA：約200bp

組蛋白：H1H2A，H2BH3H4核小體的組成

核心顆粒核小體連接區(qū)核小體：是真核生物染色體的基本結構單元。本文檔共111頁；當前第55頁；編輯于星期六\7點11分核小體串珠樣的結構coreparticlesParticlesresultingfrommicrococcalnucleasedigestionofnucleosomes,consistingof140-bpDNAandthehistoneoctamerofanucleosome.本文檔共111頁；當前第56頁；編輯于星期六\7點11分真核生物的染色體細胞凋亡時，DNA發(fā)生核小體間的斷裂，結果產(chǎn)生含有不同數(shù)量的核小體片段，每個核小體片段都是200bp的整數(shù)倍，瓊脂糖凝膠電泳時，形成梯狀條帶。本文檔共111頁；當前第57頁；編輯于星期六\7點11分結腸癌的凋亡細胞電泳照片小鼠胸腺細胞凋亡照片本文檔共111頁；當前第58頁；編輯于星期六\7點11分DNA的基本功能是以基因的形式荷載遺傳信息，并作為基因復制和轉錄的模板。它是生命遺傳的物質基礎，也是個體生命活動的信息基礎。基因從結構上定義，是指DNA分子中的特定區(qū)段，其中的核苷酸排列順序決定了基因的功能。三、DNA是遺傳信息的物質基礎本文檔共111頁；當前第59頁；編輯于星期六\7點11分兩種最重要的生物大分子比較

項目蛋白質核酸組成單位氨基酸核苷酸種類20種A、C、G、T(DNA)A、C、G、U(RNA)連接方式

肽鍵磷酸二酯鍵一級結構AA排列順序堿基序列空間結構二、三、四級結構雙螺旋、超螺旋、蛋白-核酸非共價結合功能

生命活動直接執(zhí)行者遺傳信息貯存、傳代、表達,決定蛋白結構本文檔共111頁；當前第60頁；編輯于星期六\7點11分第三節(jié)

RNA的結構與功能StructureandFunctionofRNA本文檔共111頁；當前第61頁；編輯于星期六\7點11分RNA與蛋白質共同負責基因的表達和表達過程的調控。RNA通常以單鏈的形式存在，但有復雜的局部二級結構或三級結構。RNA比DNA小的多。RNA的種類、大小和結構遠比DNA表現(xiàn)出多樣性。本文檔共111頁；當前第62頁；編輯于星期六\7點11分RNA的二、三級結構。(a)莖-環(huán)狀結構，發(fā)夾樣結構；(b)“假結”樣結構本文檔共111頁；當前第63頁；編輯于星期六\7點11分RNA的種類、分布、功能本文檔共111頁；當前第64頁；編輯于星期六\7點11分信使RNA(messengerRNA,mRNA)是合成蛋白質的模板。不均一核RNA(hnRNA)含有內含子(intron)和外顯子(exon)。外顯子是氨基酸的編碼序列，而內含子是非編碼序列。hnRNA經(jīng)過剪切后成為成熟的mRNA。一、mRNA是蛋白質合成中的模板本文檔共111頁；當前第65頁；編輯于星期六\7點11分hnRNA內含子(intron)mRNAmRNA成熟過程

外顯子(exon)本文檔共111頁；當前第66頁；編輯于星期六\7點11分從AUG開始，每三個核苷酸為一組編碼了一個氨基酸，稱為三聯(lián)體密碼(codon)。成熟的mRNA由氨基酸編碼區(qū)和非編碼區(qū)構成。5-末端的帽子(cap)結構和3-末端的多聚A尾(poly-Atail)結構。成熟的真核生物mRNA本文檔共111頁；當前第67頁；編輯于星期六\7點11分帽子結構:m7GpppNm（一）大部分真核細胞mRNA的5'末端都以7-甲基鳥嘌呤-三磷酸核苷為起始結構mRNA的帽結構可以與帽結合蛋白(capbindingprotein，CBP)結合。本文檔共111頁；當前第68頁；編輯于星期六\7點11分真核生物的mRNA的3-末端轉錄后加上一段長短不一的聚腺苷酸。（二）在真核生物mRNA的3'末端有多聚腺苷酸結構本文檔共111頁；當前第69頁；編輯于星期六\7點11分mRNA核內向胞質的轉位mRNA的穩(wěn)定性維系翻譯起始的調控帽子結構和多聚A尾的功能本文檔共111頁；當前第70頁；編輯于星期六\7點11分（三）mRNA依照自身的堿基順序指導蛋白質氨基酸順序的合成從mRNA分子5'末端起的第一個AUG開始，每3個核苷酸為一組稱為密碼子(codon)或三聯(lián)體密碼(tripletcode)。AUG被稱為起始密碼子；決定肽鏈終止的密碼子則稱為終止密碼子。位于起始密碼子和終止密碼子之間的核苷酸序列稱為開放閱讀框(openreadingframe,ORF)，決定了多肽鏈的氨基酸序列。本文檔共111頁；當前第71頁；編輯于星期六\7點11分（四）mRNA的成熟過程是hnRNA的剪接過程卵清蛋白mRNA的成熟本文檔共111頁；當前第72頁；編輯于星期六\7點11分轉運RNA(transferRNA,tRNA)在蛋白質合成過程中作為各種氨基酸的載體,將氨基酸轉呈給mRNA。由74～95核苷酸組成；占細胞總RNA的15%；具有很好的穩(wěn)定性。二、tRNA是蛋白質合成中的氨基酸載體本文檔共111頁；當前第73頁；編輯于星期六\7點11分（一）tRNA中含有多種稀有堿基*

tRNA的一級結構特點含10~20%稀有堿基，如DHU3′末端為—CCA-OH5′末端大多數(shù)為G

具有TC本文檔共111頁；當前第74頁；編輯于星期六\7點11分tRNA具有局部的莖環(huán)(stem-loop)結構或發(fā)卡(hairpin)結構。（二）tRNA具有莖環(huán)結構tRNA的二級結構——三葉草形氨基酸臂DHU環(huán)反密碼環(huán)TψC環(huán)附加叉本文檔共111頁；當前第75頁；編輯于星期六\7點11分tRNA的二級結構主要特征：1.三環(huán)四臂2.氨基酸臂3′端有CCA-OH的共有結構3.D環(huán)上有二氫尿嘧啶（D）4.反密碼環(huán)上的反密碼子與mRNA相互作用5.可變環(huán)上的核苷酸數(shù)目可以變動6.TψC環(huán)含有T和ψ7.含有修飾堿基和不變核苷酸Anticodon：

Three-nucleotidesequenceoftRNAthatbase-pairswithacodoninmRNA.本文檔共111頁；當前第76頁；編輯于星期六\7點11分tRNA的倒L三級結構本文檔共111頁；當前第77頁；編輯于星期六\7點11分tRNA的3-末端都是以CCA結尾。3-末端的A與氨基酸共價連結，tRNA成為了氨基酸的載體。不同的tRNA可以結合不同的氨基酸。（三）tRNA的3-末端連接氨基酸本文檔共111頁；當前第78頁；編輯于星期六\7點11分tRNA的反密碼子環(huán)上有一個由三個核苷酸構成的反密碼子(anticodon)。tRNA上的反密碼子依照堿基互補的原則識別mRNA上的密碼子。（四）tRNA的反密碼子識別mRNA的密碼子本文檔共111頁；當前第79頁；編輯于星期六\7點11分核蛋白體RNA(ribosomalRNA，rRNA)是細胞內含量最多的RNA(>80％)。rRNA與核蛋白體蛋白結合組成核蛋白體(ribosome)，為蛋白質的合成提供場所。三、以rRNA為組分的核蛋白體是蛋白質合成的場所本文檔共111頁；當前第80頁；編輯于星期六\7點11分核蛋白體的組成原核生物（以大腸桿菌為例）真核生物（以小鼠肝為例）小亞基30S40SrRNA16S1542個核苷酸18S1874個核苷酸蛋白質21種占總重量的40%33種占總重量的50%大亞基50S60SrRNA23S5S2940個核苷酸120個核苷酸28S5.85S5S4718個核苷酸160個核苷酸120個核苷酸蛋白質31種占總重量的30%49種占總重量的35%本文檔共111頁；當前第81頁；編輯于星期六\7點11分大腸桿菌的核蛋白體本文檔共111頁；當前第82頁；編輯于星期六\7點11分18S

rRNA的二級結構本文檔共111頁；當前第83頁；編輯于星期六\7點11分蛋白質合成時形成的復合體本文檔共111頁；當前第84頁；編輯于星期六\7點11分RNA組學是研究細胞內snmRNA的種類、結構和功能。同一生物體內不同種類的細胞、同一細胞在不同時空狀態(tài)下snmRNAs表達譜的變化，以及與功能之間的關系。四、snmRNA參與了基因表達的調控細胞的不同部位存在的許多其他種類的小分子RNA，統(tǒng)稱為非mRNA小RNA(smallnon-messengerRNAs,snmRNAs)。snmRNAs本文檔共111頁；當前第85頁；編輯于星期六\7點11分核內小RNA核仁小RNA胞質小RNA催化性小RNA小片段干涉RNA

參與hnRNA的加工剪接snmRNAs的種類snmRNAs的功能本文檔共111頁；當前第86頁；編輯于星期六\7點11分核酶某些小RNA分子具有催化特定RNA降解的活性，這種具有催化作用的小RNA亦被稱為核酶(ribozyme)或催化性RNA(catalyticRNA)。本文檔共111頁；當前第87頁；編輯于星期六\7點11分RNA具有酶活性的發(fā)現(xiàn)SidneyAltman，ThomasR.Cech

（1939-）（1947-）TheNobelPrizeinChemistry1989fortheirdiscoveryofcatalyticpropertiesofRNA

本文檔共111頁；當前第88頁；編輯于星期六\7點11分siRNA是生物宿主對外源侵入的基因表達的雙鏈RNA進行切割所產(chǎn)生的特定長度和特定核酸序列的小片段RNA。siRNA可以與外源基因表達的mRNA相結合，并誘發(fā)這些mRNA的降解。基于此機理，人們發(fā)明了RNA干擾(RNAinterference，RNAi)技術。小片段干擾RNA本文檔共111頁；當前第89頁；編輯于星期六\7點11分核酸的理化性質ThePhysicalandChemicalCharactersofNucleicAcid第四節(jié)本文檔共111頁；當前第90頁；編輯于星期六\7點11分核酸的酸堿及溶解度性質核酸為多元酸，具有較強的酸性。核酸的高分子性質粘度：DNA>RNAdsDNA>ssDNA沉降行為:不同構象的核酸分子的沉降的速率有很大差異，這是超速離心法提取和純化核酸的理論基礎。本文檔共111頁；當前第91頁；編輯于星期六\7點11分核酸在波長260nm

處有強烈的吸收，是由堿基的共軛雙鍵所決定的。這一特性常用作核酸的定性和定量分析。一、核酸分子具有強烈的紫外吸收本文檔共111頁；當前第92頁；編輯于星期六\7點11分堿基的紫外吸收光譜本文檔共111頁；當前第93頁；編輯于星期六\7點11分DNA或RNA的定量A260=1.0相當于50μg/ml雙鏈DNA(dsDNA)40μg/ml單鏈DNA(ssDNAorRNA)20μg/ml寡核苷酸確定樣品中核酸的純度

純

DNA:A260/A280=1.8

純

RNA:A260/A280=2.0紫外吸收的應用本文檔共111頁；當前第94頁；編輯于星期六\7點11分二、DNA變性是雙鏈解離為單鏈的過程在某些理化因素作用下，DNA雙鏈解開成兩條單鏈的過程。定義DNA變性的本質是雙鏈間氫鍵的斷裂。常見因素：過量酸，堿，加熱，變性試劑如尿素、酰胺以及某些有機溶劑如乙醇、丙酮等。本文檔共111頁；當前第95頁；編輯于星期六\7點11分協(xié)同性的DNA解鏈高溫或極端的pHDNA的變性本文檔共111頁；當前第96頁；編輯于星期六\7點11分部分變性DNA的電鏡圖像變性后理化性質變化：OD260增高

粘度下降比旋度下降浮力密度升高酸堿滴定曲線改變生物活性喪失本文檔共111頁；當前第97頁；編輯于星期六\7點11分增色效應(hyperchromiceffect)：DNA變性時其溶液OD260增高的現(xiàn)象。DNA解鏈時的紫外吸收變化本文檔共111頁；當前第98頁；編輯于星期六\7點11分DNA的解鏈曲線連續(xù)加熱DNA的過程中以溫度相對于A260值作圖，所得的曲線稱為解鏈曲線。解鏈過程中，紫外吸光度的變化達到最大變化值的一半時所對應的溫度。解鏈溫度(meltingtemperature，Tm)本文檔共111頁；當前第99頁；編輯于星期六\7點11分G+C含量越高