備課素材：微生物計數(shù) 高二下學(xué)期生物人教版選擇性必修3

微生物計數(shù)2019版高中生物學(xué)選擇性必修二介紹了酵母細(xì)胞血細(xì)胞計數(shù)板顯微鏡直接計數(shù)法：2019版高中生物學(xué)選擇性必修三介紹了微生物的平板計數(shù)：那么，除此之外，還有其它的計數(shù)方法嗎？微生物個體細(xì)胞的生長難以測定,而且生長與繁殖是交替進(jìn)行的,因此，微生物的生長繁殖一般不是依據(jù)個體細(xì)胞的大小,而是以群體細(xì)胞數(shù)目的增加作為指標(biāo)的。測定微生物細(xì)胞數(shù)量的方法很多,主要有顯微鏡直接計數(shù)法、平板菌落計數(shù)法、光電比濁法、最大可能數(shù)(MPN)法、膜過濾法等。測定酵母細(xì)胞數(shù)或霉菌孢子數(shù)常采用在顯微鏡下直接進(jìn)行計數(shù)的方法,該計數(shù)方法被廣泛應(yīng)用于酒精、啤酒和白酒等的工業(yè)化生產(chǎn)中。平板菌落計數(shù)法被廣泛應(yīng)用于食品、飲品、水質(zhì)和活菌制劑等的含菌指數(shù)或污染程度的檢測。該計數(shù)方法又稱平板活菌計數(shù)法,其最大優(yōu)點是可以獲得活菌數(shù)的信息。但是,該計數(shù)法操作過程較繁,需要培養(yǎng)一定時間才有結(jié)果,且測定結(jié)果易受多種因素的影響。光電比濁計數(shù)法是采用光電比色計或分光光度計,測定菌懸液的光密度或透光度,其優(yōu)點是簡便迅速,可以連續(xù)測定,適合于自動控制。但該法除了受菌體濃度影響外,還受細(xì)胞形態(tài)、大小、培養(yǎng)液成分及所采用光波長等因索的影響。(一)顯微鏡直接計數(shù)法該法是將酵母菌或霉菌孢子懸液,放在血球計數(shù)器載玻片與蓋玻片之間的計數(shù)室中，在顯微鏡下直接進(jìn)行計數(shù)，是一種常用的微生物計數(shù)方法。Thoma血球計數(shù)板是一塊特制的厚載玻片,玻片的中間部分刻有四條溝槽,形成三個平臺。中間的平臺較寬且比兩邊的平臺略低,其中央刻有一小方格網(wǎng)的計數(shù)區(qū),計數(shù)區(qū)的面積為l平方毫米。另一種計數(shù)器中間平臺的中間又被一短的橫溝槽分為兩半,成為兩個小平臺,每個小平臺上面各刻有一個計數(shù)區(qū),共有兩個計數(shù)區(qū)。當(dāng)蓋上特定蓋玻片時,蓋玻片與計數(shù)室的空間厚度正好是0.l毫米,這樣計數(shù)室的體積為0.l立方毫米,即0.000l毫升。計數(shù)室有兩種刻度形式,一種是全區(qū)分16大格,每大格再分25小格,一共400小格。另一種是全區(qū)分25大格,每大格再分16小格,也是400小格。計數(shù)時,可將酵母菌液(或孢子懸液)充滿計數(shù)室,在顯微鏡下按規(guī)定數(shù)4個或5個大格的總細(xì)胞數(shù),再求得每小格內(nèi)平均的細(xì)胞數(shù),即可計算出每ml培養(yǎng)液中的細(xì)胞總數(shù)。每ml菌液酵母菌細(xì)胞數(shù)=每小格平均酵母細(xì)胞數(shù)×400×10000×稀釋倍數(shù)。(二)平板菌落計數(shù)法該法的基本原理是：將待測含菌樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋,使其中的微生物充分分散成單個細(xì)胞,然后取一定量的稀釋樣品液,接種到平板上。經(jīng)過一定時間培養(yǎng)后,由每個單細(xì)胞生長繁殖而形成肉眼可見的單菌落,即一個單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個活菌。最后統(tǒng)計菌落數(shù),根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣量,換算出單位樣品中所含的活菌數(shù)。實際上，由于待測樣品不易完全分散成單個細(xì)胞,故所形成的菌落并非都是單菌落,有一部分是由2個以上的細(xì)胞長成的,因此平板菌落計數(shù)的結(jié)果會比實際偏低?，F(xiàn)在已采用菌落形成單位(cfu)來表示樣品的活菌含量。(三)光電比濁計數(shù)法光電比濁計數(shù)法的原理是：光線透過菌懸液時,其透光率與細(xì)胞濃度成反比,而光密度與細(xì)胞濃度成正比。透光率或光密度可以由光電池精確測出(光波通常選擇在400～700nm之間),因此,可用一系列已知菌