流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期原理和方法

流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期原理和方法I流式細(xì)胞儀〔FCM〕檢測(cè)細(xì)胞周期的原理和方法高考和模擬試題中常常會(huì)消滅流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期圖像，那么,什么是流式細(xì)胞儀？如何檢測(cè)細(xì)胞周期?流式細(xì)胞儀是一種在功能水平上對(duì)單細(xì)胞或其他生物粒子進(jìn)展定量分析和分選的檢測(cè)手段，它可以高速分析上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，并能同時(shí)從一個(gè)細(xì)胞中測(cè)得多個(gè)參數(shù)，與傳統(tǒng)的熒光鏡檢査相比，具有速度快、精度高.準(zhǔn)確性好等優(yōu)點(diǎn)，成為當(dāng)代最先進(jìn)的細(xì)胞定量分析技術(shù)。流式細(xì)胞儀，乂稱(chēng)熒光激活的細(xì)胞分選器，作為進(jìn)展流式細(xì)胞分析的儀器，它集電子技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)、激光技術(shù)、流體力學(xué)、圖像技術(shù)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)理論于一體，是一種格外先進(jìn)的檢測(cè)儀器,被譽(yù)為生物醫(yī)學(xué)試驗(yàn)室的“CT“。流式細(xì)胞術(shù)已經(jīng)成為一種用途最廣泛和最先進(jìn)的細(xì)胞分析技術(shù)，在細(xì)胞生物學(xué)、血液學(xué)、腫瘤學(xué)、免疫學(xué)等根底和臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。流式細(xì)胞訃的根本構(gòu)造流犬細(xì)胞計(jì)主要山流淌室與液流系統(tǒng)、激光源與光學(xué)系統(tǒng)、光電管與檢測(cè)系統(tǒng)、計(jì)?算機(jī)與分析系統(tǒng)四局部組成〔如槽品??夕槽品??夕的向第散射尤檢測(cè)話(huà)植Mi信號(hào)正電荷偏 ??負(fù)電典例分析800600400200020408006004002000204060eo100120DNA相対含■比照組 DNA相對(duì)含*Ab峰中細(xì)胞的DNA含量是a2倍Ba峰和b峰之間的細(xì)胞正進(jìn)展DNA復(fù)制C.處于分裂期的細(xì)胞均被計(jì)數(shù)在Q峰中D此抗癌藥物抑制了癌細(xì)胞DNA的復(fù)制【答案】C【解析】從題目圖中我們不難看出有兩個(gè)峰值細(xì)胞的數(shù)U最多，分別對(duì)應(yīng)的DNA408040的應(yīng)當(dāng)是處于分裂間期的G1期細(xì)胞，G180的細(xì)胞應(yīng)當(dāng)是屬于G2期和分裂期的細(xì)胞，DNA含量已經(jīng)加倍。因此A選項(xiàng)中b峰中細(xì)胞的DNA含量是a2倍是正確的。B選項(xiàng)中a峰和b峰之間應(yīng)當(dāng)是細(xì)胞周期中的S期，正在進(jìn)展DNA分子復(fù)制。C選項(xiàng)中，處于分裂期的細(xì)胞DNA含量處于加倍狀態(tài)，應(yīng)當(dāng)i|?數(shù)在b峰中。D選項(xiàng)通過(guò)看右側(cè)圖可知b峰明顯下降，可知應(yīng)當(dāng)是抑制了DNA分子的復(fù)制，DNA加倍的細(xì)胞明顯削減，所以D選項(xiàng)正確。流式細(xì)胞儀的檢測(cè)細(xì)胞周期的原理〔PI〕細(xì)胞周期是指細(xì)胞從一次分裂完成開(kāi)頭到下一次分裂完畢所經(jīng)受的全過(guò)程，細(xì)胞的遺傳物質(zhì)復(fù)制并均等地安排給兩個(gè)子細(xì)胞。細(xì)胞周期分為間期與分裂期兩個(gè)階段。間期乂分為三期：即DNA合成前期〔GI期〕、DNA合成期〔SKID DNA合成后期〔G2期〕。某些細(xì)胞在分裂完畢后臨時(shí)離開(kāi)細(xì)胞周期，停頓細(xì)胞分裂，執(zhí)行肯定生物學(xué)功能〔GO山于細(xì)胞周期各時(shí)相的DNA含量不同，通常正常細(xì)胞的G1/GO期具有二倍體細(xì)胞的DNA含量〔2N〕.而G2/M期具有四倍體細(xì)胞的DNA含量＜4N〕,而S期的DNA含量介于二倍體和四倍體之間。PI可以打DNA結(jié)合，其熒光強(qiáng)度直接反映了細(xì)胞內(nèi)DNA禽量。因此，通過(guò)流式細(xì)胞儀PI染色法對(duì)細(xì)胞內(nèi)DNA含量進(jìn)展檢測(cè)時(shí)，可以將細(xì)胞周期各時(shí)相區(qū)分為G1/G0期，S期和G2/M期，獲得的流式直方圖對(duì)應(yīng)的各細(xì)胞周期可通過(guò)特別軟件計(jì)算各時(shí)相的細(xì)胞口分率。swOS-OONJ3q&nzOS

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nuIMPL9可以與細(xì)胞內(nèi)DNA和RNA結(jié)合。PI不能通過(guò)細(xì)胞膜完整的細(xì)胞〔如活細(xì)胞和早期凋亡細(xì)胞〕，在標(biāo)本制備時(shí)，必需先用乙醇或其他破膜劑增加細(xì)胞膜的通透性，才能使PI進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)與細(xì)胞內(nèi)的核酸結(jié)合。乙70%的冷乙醇。假設(shè)應(yīng)用于流式，承受RNA抑制劑將RNA消化后，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)到的與DNA結(jié)合的PI的熒光強(qiáng)度直接反映了細(xì)胞內(nèi)DNA含量的多少。固然，PI也可用于作細(xì)胞核染色，作為觀看或定量細(xì)胞的方法。流式細(xì)胞儀的工作原理首先將待測(cè)細(xì)胞被制成單細(xì)胞懸液，經(jīng)特異性熒光染料染色〔間接免疫熒光染色或直接免疫熒光染色〕后參加樣品管中，在氣體壓力推動(dòng)下進(jìn)入流淌室，流淌室內(nèi)布滿(mǎn)鞘液，在鞘液的作用下，細(xì)胞排成單列從流淌室噴嘴口噴出，并被鞘液包繞形成細(xì)胞液柱。這種同軸流淌的設(shè)計(jì)，使得樣品流和鞘液流形成的流束始終保持著一種分層鞘流的狀態(tài)。鞘液和樣品流組成一個(gè)圓形的流束，一起自噴嘴的圓形寶石孔噴射出來(lái)，進(jìn)入流淌室，與水平方向的激光光束垂直相交，該區(qū)稱(chēng)為測(cè)量區(qū)。利用樣品流和鞘流的氣壓差的層流原理，使細(xì)胞依次排列成單行，每個(gè)細(xì)胞以均等的時(shí)間依次通過(guò)測(cè)量區(qū)，被熒光染料染色的細(xì)胞受到猛烈的激光照耀后發(fā)出熒光，同時(shí)產(chǎn)生散射光。細(xì)胞發(fā)出的熒光信號(hào)和散射光信號(hào)，同時(shí)被熒光光電倍增管接收，被積分放大反轉(zhuǎn)換為電子信號(hào)，再經(jīng)過(guò)信號(hào)放大、加工處理后存儲(chǔ)于計(jì)算機(jī)中，進(jìn)而利用相關(guān)酵母菌在科研中GoG[GJMG[GJM4N2N重要地位流式細(xì)胞儀的細(xì)胞分別原理流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞的分選杲通過(guò)流束形成含有細(xì)胞的帶電液滴來(lái)實(shí)現(xiàn)的。在具分選功能的流式細(xì)胞儀流淌室的噴嘴上裝備有一個(gè)超聲振蕩圧晶體片，這個(gè)振蕩裝置可將自噴嘴射出的液束裂開(kāi)成千萬(wàn)個(gè)小滴，流淌的細(xì)胞同時(shí)也就被分散在這些小水滴中。?這時(shí)給流束一個(gè)電脈沖信號(hào)，使小水滴就全部帶上電荷。當(dāng)帶有不同電荷的細(xì)胞液流經(jīng)一對(duì)帶正、負(fù)兒千伏恒定靜電電場(chǎng)的偏轉(zhuǎn)板時(shí)，帶電的小水滴就依據(jù)自身所帶的電荷性質(zhì)產(chǎn)生偏轉(zhuǎn)，落入各自的收集容器中，不帶電荷的水滴就進(jìn)入中間的廢液容器中,?從而實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞的分選。流式細(xì)胞儀常用的檢測(cè)方法1?測(cè)定用乙醇固定的DNA的含量。細(xì)胞凋亡檢測(cè)及相關(guān)分子檢測(cè)。用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)展DNA周期分析。免疫熒光標(biāo)記法。流式細(xì)胞儀檢測(cè)中的留意事項(xiàng)比照組的設(shè)fi在流式細(xì)胞術(shù)中所測(cè)得的量都是相對(duì)值，不是確定值。如需知道確定值時(shí)必需設(shè)置比照組樣品。兒點(diǎn)建議在試驗(yàn)過(guò)程中，在保證明驗(yàn)的科學(xué)性和準(zhǔn)確性的根底上，應(yīng)盡量削減試驗(yàn)工序和過(guò)程。山于間接標(biāo)記法的工序多，試驗(yàn)過(guò)程長(zhǎng)，如再加之操作的不嫻熟，細(xì)胞更簡(jiǎn)潔喪失和受損，而造成試驗(yàn)結(jié)果的誤差。因此，在條件允許的范