流式細胞儀檢測細胞周期原理和方法

流式細胞儀檢測細胞周期原理和方法I流式細胞儀〔FCM〕檢測細胞周期的原理和方法高考和模擬試題中常常會消滅流式細胞儀檢測細胞周期圖像，那么,什么是流式細胞儀？如何檢測細胞周期?流式細胞儀是一種在功能水平上對單細胞或其他生物粒子進展定量分析和分選的檢測手段，它可以高速分析上萬個細胞，并能同時從一個細胞中測得多個參數(shù)，與傳統(tǒng)的熒光鏡檢査相比，具有速度快、精度高.準確性好等優(yōu)點，成為當代最先進的細胞定量分析技術。流式細胞儀，乂稱熒光激活的細胞分選器，作為進展流式細胞分析的儀器，它集電子技術、計算機技術、激光技術、流體力學、圖像技術、細胞生物學、免疫學理論于一體，是一種格外先進的檢測儀器,被譽為生物醫(yī)學試驗室的“CT“。流式細胞術已經成為一種用途最廣泛和最先進的細胞分析技術，在細胞生物學、血液學、腫瘤學、免疫學等根底和臨床醫(yī)學領域發(fā)揮著重要作用。流式細胞訃的根本構造流犬細胞計主要山流淌室與液流系統(tǒng)、激光源與光學系統(tǒng)、光電管與檢測系統(tǒng)、計?算機與分析系統(tǒng)四局部組成〔如槽品??夕槽品??夕的向第散射尤檢測話植Mi信號正電荷偏 ??負電典例分析800600400200020408006004002000204060eo100120DNA相対含■比照組 DNA相對含*Ab峰中細胞的DNA含量是a2倍Ba峰和b峰之間的細胞正進展DNA復制C.處于分裂期的細胞均被計數(shù)在Q峰中D此抗癌藥物抑制了癌細胞DNA的復制【答案】C【解析】從題目圖中我們不難看出有兩個峰值細胞的數(shù)U最多，分別對應的DNA408040的應當是處于分裂間期的G1期細胞，G180的細胞應當是屬于G2期和分裂期的細胞，DNA含量已經加倍。因此A選項中b峰中細胞的DNA含量是a2倍是正確的。B選項中a峰和b峰之間應當是細胞周期中的S期，正在進展DNA分子復制。C選項中，處于分裂期的細胞DNA含量處于加倍狀態(tài)，應當i|?數(shù)在b峰中。D選項通過看右側圖可知b峰明顯下降，可知應當是抑制了DNA分子的復制，DNA加倍的細胞明顯削減，所以D選項正確。流式細胞儀的檢測細胞周期的原理〔PI〕細胞周期是指細胞從一次分裂完成開頭到下一次分裂完畢所經受的全過程，細胞的遺傳物質復制并均等地安排給兩個子細胞。細胞周期分為間期與分裂期兩個階段。間期乂分為三期：即DNA合成前期〔GI期〕、DNA合成期〔SKID DNA合成后期〔G2期〕。某些細胞在分裂完畢后臨時離開細胞周期，停頓細胞分裂，執(zhí)行肯定生物學功能〔GO山于細胞周期各時相的DNA含量不同，通常正常細胞的G1/GO期具有二倍體細胞的DNA含量〔2N〕.而G2/M期具有四倍體細胞的DNA含量＜4N〕,而S期的DNA含量介于二倍體和四倍體之間。PI可以打DNA結合，其熒光強度直接反映了細胞內DNA禽量。因此，通過流式細胞儀PI染色法對細胞內DNA含量進展檢測時，可以將細胞周期各時相區(qū)分為G1/G0期，S期和G2/M期，獲得的流式直方圖對應的各細胞周期可通過特別軟件計算各時相的細胞口分率。swOS-OONJ3q&nzOS

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nuIMPL9可以與細胞內DNA和RNA結合。PI不能通過細胞膜完整的細胞〔如活細胞和早期凋亡細胞〕，在標本制備時，必需先用乙醇或其他破膜劑增加細胞膜的通透性，才能使PI進入細胞內與細胞內的核酸結合。乙70%的冷乙醇。假設應用于流式，承受RNA抑制劑將RNA消化后，通過流式細胞術檢測到的與DNA結合的PI的熒光強度直接反映了細胞內DNA含量的多少。固然，PI也可用于作細胞核染色，作為觀看或定量細胞的方法。流式細胞儀的工作原理首先將待測細胞被制成單細胞懸液，經特異性熒光染料染色〔間接免疫熒光染色或直接免疫熒光染色〕后參加樣品管中，在氣體壓力推動下進入流淌室，流淌室內布滿鞘液，在鞘液的作用下，細胞排成單列從流淌室噴嘴口噴出，并被鞘液包繞形成細胞液柱。這種同軸流淌的設計，使得樣品流和鞘液流形成的流束始終保持著一種分層鞘流的狀態(tài)。鞘液和樣品流組成一個圓形的流束，一起自噴嘴的圓形寶石孔噴射出來，進入流淌室，與水平方向的激光光束垂直相交，該區(qū)稱為測量區(qū)。利用樣品流和鞘流的氣壓差的層流原理，使細胞依次排列成單行，每個細胞以均等的時間依次通過測量區(qū)，被熒光染料染色的細胞受到猛烈的激光照耀后發(fā)出熒光，同時產生散射光。細胞發(fā)出的熒光信號和散射光信號，同時被熒光光電倍增管接收，被積分放大反轉換為電子信號，再經過信號放大、加工處理后存儲于計算機中，進而利用相關酵母菌在科研中GoG[GJMG[GJM4N2N重要地位流式細胞儀的細胞分別原理流式細胞儀對細胞的分選杲通過流束形成含有細胞的帶電液滴來實現(xiàn)的。在具分選功能的流式細胞儀流淌室的噴嘴上裝備有一個超聲振蕩圧晶體片，這個振蕩裝置可將自噴嘴射出的液束裂開成千萬個小滴，流淌的細胞同時也就被分散在這些小水滴中。?這時給流束一個電脈沖信號，使小水滴就全部帶上電荷。當帶有不同電荷的細胞液流經一對帶正、負兒千伏恒定靜電電場的偏轉板時，帶電的小水滴就依據(jù)自身所帶的電荷性質產生偏轉，落入各自的收集容器中，不帶電荷的水滴就進入中間的廢液容器中,?從而實現(xiàn)了細胞的分選。流式細胞儀常用的檢測方法1?測定用乙醇固定的DNA的含量。細胞凋亡檢測及相關分子檢測。用流式細胞術進展DNA周期分析。免疫熒光標記法。流式細胞儀檢測中的留意事項比照組的設fi在流式細胞術中所測得的量都是相對值，不是確定值。如需知道確定值時必需設置比照組樣品。兒點建議在試驗過程中，在保證明驗的科學性和準確性的根底上，應盡量削減試驗工序和過程。山于間接標記法的工序多，試驗過程長，如再加之操作的不嫻熟，細胞更簡潔喪失和受損，而造成試驗結果的誤差。因此，在條件允許的范