無(wú)菌檢查和微生物限度檢查操作規(guī)范

檢生檢規(guī)范藥品）一、無(wú)菌：查于6度2.42.m不里緩應(yīng)個(gè)。大分于。米2.5過(guò)1輻射強(qiáng)距1于70瓦/度18-26℃，對(duì)度于9度0潔度1000。，。濾0降菌測(cè)定方法為：取營(yíng)養(yǎng)肉湯瓊脂平板3個(gè)，置無(wú)菌室的露0在3℃培養(yǎng)2天后，計(jì)算菌落數(shù)。用于無(wú)菌檢查的無(wú)于3個(gè)，浮游菌每立方米應(yīng)于5則查查?；鶄?、培養(yǎng)基的：基水稱(chēng)培基加溶化后節(jié)PH的PH值為7.0-.3的PH為66、，。2、培養(yǎng)基靈敏度試驗(yàn)：培養(yǎng)基是無(wú)菌試驗(yàn)的基準(zhǔn)物質(zhì)，關(guān)系到無(wú)菌試驗(yàn)結(jié)果的科學(xué)、準(zhǔn)確、可信度，因此，培養(yǎng)基靈敏度試驗(yàn)是無(wú)菌試度靠。作色別0倍每l含10-0個(gè)各3培養(yǎng)5天，每株于2管。3、培養(yǎng)基用前的檢查：（1）無(wú)菌檢養(yǎng)3，。（2）新鮮程度檢查：需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基氧化層的顏色用過(guò)1/否能煮，只熱。4、培養(yǎng)基的保存時(shí)限：配制好的培在2。藏1、菌種：入0.l釋仔關(guān)可。2、藥：可。變的。3、菌種：常用的方種生室斜體藏實(shí)用干。4、菌：。四、陽(yáng)性對(duì)照菌液的制備陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)的目的是根據(jù)陽(yáng)性菌在加入供試品的培養(yǎng)基中能否生長(zhǎng)，以驗(yàn)證供試品有無(wú)擬菌活性和試驗(yàn)條件是否符合要求。中國(guó)藥典規(guī)定，使用的陽(yáng)性菌為金黃色葡萄球菌（CMCCB26003）、生孢梭（CMCCB64941）、白色念珠菌（CMCCF98001）。所有對(duì)照菌液的制備及陽(yáng)性對(duì)照菌試驗(yàn)，必須在另一專(zhuān)用凈化臺(tái)上操作，應(yīng)與其他無(wú)菌室分開(kāi)。對(duì)照菌液制備方法：通常根據(jù)供試品抗需氣菌、抗厭氧菌或抗真菌的特性，選取相應(yīng)的陽(yáng)性對(duì)照菌培養(yǎng)物，制成萄：物1湯在30-35℃培養(yǎng)18-4用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液稀釋至每ml含1010別取對(duì)照菌液1ml加菌使。五、擬細(xì)菌擬真菌實(shí)驗(yàn)國(guó)典20培基4基2中2加10-0個(gè)金另2梭菌。菌養(yǎng)基2管加10-10個(gè)白色菌中1管加定量養(yǎng)5觀管4養(yǎng)。品法。六、操作人員的準(zhǔn)備菌洗戴菌，著疊。七、無(wú)菌檢查直前品大的試。1、直：供品1用7璃次試厭基6管，接種真菌培基5管稀釋液接種需氣各1管做陰對(duì)中1管接種100個(gè)對(duì)照菌作、厭氣菌培養(yǎng)基置35置25養(yǎng)7天，養(yǎng)7培養(yǎng)基中或斜面培養(yǎng)基上養(yǎng)2養(yǎng)3種環(huán)取培養(yǎng)液涂微。2、薄：針頭插在0%關(guān)供品6瓶，瓶中，使供試品充分溶解。用注射器將供試液分別轉(zhuǎn)移至100ml稀釋液該將6瓶供試品稀釋液全部過(guò)濾。用1000ml的氯化鈉液沖洗薄膜，每沖洗100ml適當(dāng)搖動(dòng)抽，洗3排下的入1l需氣、氣菌養(yǎng)于2再用兩個(gè)加外2個(gè)入1l真菌培養(yǎng)基于第三個(gè)濾器內(nèi)，前兩元濾器中的一個(gè)要加入金黃菌10-0用2l化溶沖膜，一管入1l需。另濾器進(jìn)入l真菌培養(yǎng)置305置20-25℃，培養(yǎng)7記。3、無(wú)菌檢查結(jié)果判斷：并可厭養(yǎng)，應(yīng)陽(yáng)有品。檢查1、供試液的：（1）固品固體供試品包括片劑品10g放劑啟動(dòng)勻漿儀以每鐘300轉(zhuǎn)3成1：10供液。（2）液品供品l放入已滅菌錐形瓶中，加入90l稀釋劑，使均勻，制成：10液。（3）非水備稱(chēng)供品g約5盤(pán)-80g油g和聚山酸1g中,勻加0液l使供試化成：0試。2、細(xì)：以0取3入l菌稀支l滅菌吸管，吸取供試液1l，成10作0至13或10-4取1ml1供試入4平皿中。再液l入4個(gè)平皿將45左右的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基按每一級(jí)稀釋液倒入2皿1級(jí)稀釋入2。細(xì)菌數(shù)和滅菌數(shù)的陰性對(duì)照試驗(yàn)：分別吸取稀釋劑各l加到4瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基各制成2平。檢查細(xì)菌的平板倒置于305養(yǎng)2天。檢于25-8養(yǎng)3天逐日結(jié)培。3、大腸桿菌：取膽鹽乳糖基3份份100ml菌50-100。第三份加入與供試液等量的稀釋液作陰性對(duì)照，培養(yǎng)184小時(shí)。陰性對(duì)照應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。取上述三份培養(yǎng)物各0，分別接種至5mlMUG于5小時(shí)與24的MG培管對(duì)各置紫下m白液5滴述G培察UG告g或l供G陰性，靛基告1g或l如G或G陰將搖于B或MC。養(yǎng)察果：腸I細(xì)菌落取3個(gè)可疑菌落，接種營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜和IMVIC。C驗(yàn)取可疑菌落培養(yǎng)物接種管1支管2支面1，培液45滴。在1黃色為陰性。在另1支磷酸鹽葡萄糖胨水培養(yǎng)基管內(nèi)加入a-萘酚試液1ml，混勻，再加入40%氫氧化鉀溶液0.4ml充分震搖在4小時(shí)管內(nèi)出養(yǎng)48-72C菌IC陽(yáng)述G陽(yáng)桿G陰供如MUGB瓊脂平板C，如GB瓊脂平板C判，。4、沙：取四基18-24小時(shí)增菌培養(yǎng)物或MCC養(yǎng)18-24性。在C典色菌可菌落3接鐵，接，養(yǎng)4小時(shí)后，陽(yáng)性化試紅可否驗(yàn)：并。養(yǎng)24改變陰性。氰化鉀試驗(yàn)分別用金耳蘸可疑株的營(yíng)肉湯液環(huán)接種對(duì)照培基及氰鉀培基，立用橡膠塞緊，養(yǎng)28小時(shí)。對(duì)照管應(yīng)有菌陽(yáng)。取羧養(yǎng)8小應(yīng)試。動(dòng)檢查菌半中養(yǎng)4小，否則為陰性。保留23天后再。血清凝集試玻菌屬O價(jià)1清23環(huán)，再取培養(yǎng)物少許，與血清混合后于0%氯化應(yīng)取斜面制懸在100溫0分鐘，待冷，為。試何應(yīng)論。5、銅綠假單孢菌檢查：取供液14小時(shí)的培養(yǎng)液劃線接種于溴化十六烷基三甲胺瓊脂培養(yǎng)基平板上養(yǎng)184小時(shí)的落長(zhǎng)未。型邊周長(zhǎng)具有上述特，選23個(gè)菌落取18-4小時(shí)的純培養(yǎng)物，革蘭染色，并作氧化酶。的%二鹽酸在30。芽未菌。綠膿素驗(yàn)于基養(yǎng)4小時(shí)后仿，入約酸，及檢試下：養(yǎng)4體陽(yáng)。42置1±養(yǎng)24-48苔為為。明養(yǎng)4小時(shí)內(nèi)10-0培。假酸產(chǎn)2。6、金：試酸湯4小培養(yǎng)42小金鈉選3取4，。血漿凝固酶試驗(yàn)：取滅菌小試管3支，各加水株液0.5m，一支加入金黃色葡萄球菌的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液或菌懸液0.5ml或0%無(wú)液0.5ml性對(duì)照將33