第八章植物的胚胎培養(yǎng)

植物的胚胎培養(yǎng)是指對(duì)植物的胚、子房、胚珠和胚乳等胚胎組織進(jìn)行離體培養(yǎng)，使其發(fā)育成完整植株或者離體研究植物胚胎發(fā)生機(jī)理的生物技術(shù)。植物胚胎培養(yǎng)的概念胚乳胚子房胚珠本文檔共58頁；當(dāng)前第1頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分8.1離體胚培養(yǎng)8.2植物胚珠和子房培養(yǎng)8.3

離體授粉、受精與合子培養(yǎng)8.4胚乳培養(yǎng)本文檔共58頁；當(dāng)前第2頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分8.1.1離體胚培養(yǎng)的概念離體胚培養(yǎng)（embryoculture）指從植物種子中分離出胚組織進(jìn)行離體培養(yǎng)的技術(shù)。包括幼胚培養(yǎng)和成熟胚培養(yǎng)。8.1離體胚培養(yǎng)花生成熟胚幼胚本文檔共58頁；當(dāng)前第3頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分8.1.2成熟胚培養(yǎng)（matureembryoculture）是指對(duì)發(fā)育成熟種子胚的培養(yǎng)。成熟胚培養(yǎng)主要是為了打破種子的休眠，并誘導(dǎo)形成小植株，因此，培養(yǎng)基相對(duì)簡單，一般只需要大量元素和糖即可，有些培養(yǎng)為了打破種子休眠也加入一些植物激素。水稻成熟胚培養(yǎng)本文檔共58頁；當(dāng)前第4頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分臺(tái)灣紅豆杉成熟胚培養(yǎng)觀賞與藥用（紫杉醇）種子有休眠特性本文檔共58頁；當(dāng)前第5頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分

牡丹成熟胚的離體培養(yǎng)與快速繁殖Matureembryocultureandrapidpropagationoftreepeony種子有休眠特性（種皮與未完成后熟的原因）本文檔共58頁；當(dāng)前第6頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分8.1.3幼胚培養(yǎng)（immatureembryoculture）是指對(duì)發(fā)育早期胚或未成熟胚的培養(yǎng)，即供給一定的培養(yǎng)條件，使幼胚逐步發(fā)育成成熟胚，并進(jìn)一步發(fā)育成小植株的技術(shù)。幼胚培養(yǎng)要根據(jù)幼胚發(fā)育的不同階段，選用相應(yīng)的培養(yǎng)基、營養(yǎng)條件和培養(yǎng)條件。遠(yuǎn)緣雜交雜種胚拯救，使胚發(fā)育不全的植株獲得大量的后代

本文檔共58頁；當(dāng)前第7頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分適當(dāng)時(shí)期未成熟種子---消毒---解剖，剝?nèi)⊥暾着摺?）培養(yǎng)基常用的培養(yǎng)基有Cox、

Rijven、Rappaport、Ranaswamy、Norstog以及MS、B5、White、Nitsch等培養(yǎng)基。碳源：蔗糖是幼胚培養(yǎng)基中最好的碳水化合物。

不同發(fā)育時(shí)期的胚要求不同的蔗糖濃度，往往胚齡越小，糖濃度要求越高，成熟胚，2%；而幼胚，4％甚至更高濃度的蔗糖。如曼陀羅的前心形期胚培養(yǎng)要求8%的蔗糖含量，而魚雷期要降到1.0%～0.5%。1)幼胚的分離

本文檔共58頁；當(dāng)前第8頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分氨基酸：谷氨酰胺是促進(jìn)離體胚生長最有效的氨基酸；

酪蛋白水解物（CH），不同物種的離體胚對(duì)CH的濃度要求不同

。

胚乳提取物。一般認(rèn)為，八分成熟的椰乳對(duì)幼胚培養(yǎng)作用顯著，而完全成熟的椰乳作用不明顯。大麥胚乳提取物可以促進(jìn)大麥胚的生長，玉米胚乳組織的提取物能促進(jìn)離體玉米胚的生長。維生素，對(duì)發(fā)育初期的幼胚培養(yǎng)來說，則是必須的。以不加植物生長調(diào)節(jié)劑為宜。本文檔共58頁；當(dāng)前第9頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分離體胚培養(yǎng)一般用固體培養(yǎng)基，大多數(shù)植物的離體胚在25～30℃生長良好。一般離體幼胚培養(yǎng)前期在散射光下培養(yǎng)，后期則要在2000Lx光強(qiáng)度左右培養(yǎng)。4）胚乳看護(hù)培養(yǎng)非常幼小的雜種胚，采用看護(hù)培養(yǎng)，即把發(fā)育不全的雜種胚埋在從正常發(fā)育的胚珠中取出的胚乳內(nèi)，培養(yǎng)至幼苗期。3)培養(yǎng)

本文檔共58頁；當(dāng)前第10頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分黃瓜遠(yuǎn)緣雜種幼胎培養(yǎng)本文檔共58頁；當(dāng)前第11頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分（1）正常胚發(fā)育

離體培養(yǎng)的幼胚，在控制條件下，按照活體內(nèi)的發(fā)育方式發(fā)育，最終發(fā)育成成熟胚，進(jìn)而萌發(fā)形成小植株。這是幼胚培養(yǎng)胚拯救的正常發(fā)育模式。8.1.4離體幼胚培養(yǎng)的生長發(fā)育類型本文檔共58頁；當(dāng)前第12頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分植物胚胎發(fā)生過程：原胚－球形胚－心型胚－魚雷胚－子葉胚

球形胚前期心型胚前期魚雷胚球形胚本文檔共58頁；當(dāng)前第13頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分A、早熟萌發(fā)離體的幼胚在培養(yǎng)基上不僅能越過休眠期，而且還常常終止進(jìn)行此后的胚胎發(fā)育，直接長成弱小的幼苗，而且這種幼苗只具有那些當(dāng)胚離體時(shí)已具有的結(jié)構(gòu)，這種未完成正常的胚胎發(fā)育過程而形成幼苗的現(xiàn)象叫做早熟萌發(fā)。

大麥未成熟胚離體培養(yǎng)中，CH能促進(jìn)胚胎的繼續(xù)發(fā)育，抑制早熟萌發(fā)。培養(yǎng)基中高濃度的蔗糖（12～18%）同樣能抑制薺菜胚的早熟萌發(fā)。（2）異常胚發(fā)育

本文檔共58頁；當(dāng)前第14頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分在一些植物中，植株上發(fā)育的種子并無胚根、胚芽、和子葉的分化。蘭花種子球形胚是未分化的，在離體培養(yǎng)條件下，胚即增大形成原球莖，最后由原球莖分化出根和莖。B、胚不完全發(fā)育

兔絲子屬（Guscuta）植物的成熟胚有胚芽，但沒有胚根，在離體培養(yǎng)中很難誘導(dǎo)根的分化。本文檔共58頁；當(dāng)前第15頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分離體培養(yǎng)的植物成熟胚和幼胚組織，在外源激素的誘導(dǎo)下，可發(fā)生生物鐘的強(qiáng)行逆轉(zhuǎn)，經(jīng)脫分化形成愈傷組織或胚性愈傷組織，并經(jīng)再分化形成完整植株，如水稻、小麥等（圖8-1）。C.胚脫分化和再分化圖8-1小麥幼胚體細(xì)胞無性系（左）及其再生（右）本文檔共58頁；當(dāng)前第16頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分8.1.5影響離體幼胚培養(yǎng)的其它因素

幼胚的發(fā)育時(shí)期表8-1薺菜胚胎不同發(fā)育時(shí)期對(duì)營養(yǎng)的需求（引自Torrey，1964）胚發(fā)育時(shí)期胚長（μm）營養(yǎng)要求球形胚早期22-60小于40μm的胚對(duì)營養(yǎng)的需求不詳球形胚晚期61-80基本培養(yǎng)基（大量元素①+微量元素②+維生素③+2%蔗糖）+IAA（0.1mg/L）+KT（0.001mg/L）+硫胺腺嘌呤（0.001mg/L）心形胚期81-450僅基本培養(yǎng)基魚雷形胚期451-700大量元素①+維生素③+2%蔗糖拐杖形胚及成熟期700及更大大量元素①+2%蔗糖本文檔共58頁；當(dāng)前第17頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分胚柄的作用

在培養(yǎng)中胚柄的存在對(duì)于幼胚的存活是一個(gè)關(guān)鍵因素。表8-3紅花菜豆中胚柄對(duì)胚在離體條件下生長和發(fā)育的作用（引自Yeung等，1979）開始培養(yǎng)時(shí)期①（鮮重）處理鮮重±SE②（N）形成植株的胚數(shù)占（培養(yǎng)的胚數(shù)）百分比心形早期（0.87±0.02mg）只有胚本身3.19±0.52（10）41.5（89）胚連著胚柄8.91±1.16③

（10）88.4（95）胚與離體胚柄直接接觸6.22±0.78③（10）72.5（51）胚與加熱殺死的離體胚柄直接接觸4.10±0.43（5）37.0（43）胚距胚柄1cm－33.3（30）心形晚期（1.07±0.07mg）只有胚本身17.2±2.84（5）94.4（18）胚連著胚柄15.4±1.41（6）94.4（18）子葉形早期（3.92±0.19）只有胚本身20.3±2.5（7）100.0（18）胚連著胚柄24.4±2.75（11）100.0（19）本文檔共58頁；當(dāng)前第18頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分培養(yǎng)基的滲透壓在幼齡胚培養(yǎng)中，培養(yǎng)基的滲透壓是控制胚生長的重要因素。母體植株上的幼齡胚是在具有較高滲透壓的液體胚乳之中生長，即幼胚被一種高滲液體包圍著。郭仲?。?978）研究表明，向日葵不同發(fā)育時(shí)期的胚對(duì)蔗糖的要求有較大的差異：幼胚長度1～1.1mm，要求蔗糖濃度17.5%，成熟胚要求蔗糖濃度只有0.5%。本文檔共58頁；當(dāng)前第19頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分（1）胚拯救

A.遠(yuǎn)緣雜交雜種胚拯救：在遠(yuǎn)緣雜交中，常因胚發(fā)育不良或胚乳不能正常發(fā)育以及胚與胚乳之間的不協(xié)調(diào)等原因，使雜種不育。如果將這類雜種的胚在適期取出，在人工合成的培養(yǎng)基上進(jìn)行離體培養(yǎng)，則有可能使雜種胚繼續(xù)發(fā)育、生長，從而獲得雜種后代。8.1.6離體胚培養(yǎng)的應(yīng)用本文檔共58頁；當(dāng)前第20頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分在普通小麥與玉米的雜交中，胚胎發(fā)生的最初幾次分裂期間，父本玉米的染色體被排除，結(jié)果形成了只含有一套母本染色體的單倍體小麥胚，但受精后3～12d胚乳逐漸解體，使胚得不到營養(yǎng)在穎果成熟前死亡。B.單倍體胚拯救圖8-2小麥×玉米12d雜種胚拯救本文檔共58頁；當(dāng)前第21頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分果樹早熟育種中有一個(gè)棘手的問題，就是果實(shí)的早熟往往伴隨著產(chǎn)生沒有生活力的種子。如桃與櫻桃、杏等早熟品種，有很高經(jīng)濟(jì)價(jià)值，但其胚在母體組織內(nèi)往往不能正常發(fā)育，或胚生理成熟速度慢于果實(shí)成熟速度。因此，以這些品種作母本進(jìn)行雜交時(shí)，種子往往沒有生活力，用一般方法很難得到雜種后代。利用離體胚培養(yǎng)就可以獲得有活力的雜交種子或幼苗。(2)核果類胚的后熟作用本文檔共58頁；當(dāng)前第22頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分有些植物種子休眠期很長，如鳶尾（lris），一般種子成熟后要休眠2～3年才能萌發(fā)，在培養(yǎng)基上幾天內(nèi)種子就能萌發(fā)。植物種子休眠的原因可能來自胚乳，因?yàn)殡x體胚如果帶著胚乳培養(yǎng)，胚的生長就受到抑制。具有休眠特性的種子，其胚離體培養(yǎng)時(shí)，在培養(yǎng)基中加入1～2mg/L的赤霉素，對(duì)打破種子休眠有顯著作用。(3)克服種子休眠本文檔共58頁；當(dāng)前第23頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分蘭花、天麻等一些寄生植物或附生植物，有的胚只有6～7個(gè)細(xì)胞，在培養(yǎng)基上培養(yǎng)，胚就能生長發(fā)育成正常的植株。(4)

使胚發(fā)育不全的植株獲得大量的后代本文檔共58頁；當(dāng)前第24頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分胚培養(yǎng)對(duì)于一些具有珠心胚的植物，如柑桔（Citrus）、芒果（Mangiferaindica）、紫萼等，具有特殊的意義。在柑桔雜交育種中一個(gè)問題是雜交往往得不到雜種胚，由于珠心胚的生長把合子胚擠到旁邊去。(5)用于某些植物雜種胚的繁殖本文檔共58頁；當(dāng)前第25頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分

離體胚培養(yǎng)還可用于許多重大理論問題的研究，如胚胎發(fā)育過程，影響胚發(fā)育的各種因素，胚乳作用以及與胚發(fā)育有關(guān)的代謝和生理變化等。

(7)脫分化與再分化培養(yǎng)

以幼胚或成熟胚為外植體誘導(dǎo)愈傷組織，建立胚性無性系，不僅可以應(yīng)用于研究體細(xì)胞胚胎發(fā)生、分離原生質(zhì)體，還可應(yīng)用于植物體細(xì)胞遺傳飾變和轉(zhuǎn)基因技術(shù)的研究等。(6)用于有關(guān)理論研究

本文檔共58頁；當(dāng)前第26頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分植物胚珠結(jié)構(gòu)側(cè)膜胎座（右）中軸胎座葫蘆科的下位子房本文檔共58頁；當(dāng)前第27頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分8.2.1胚珠培養(yǎng):

概念：在人工控制的條件下，對(duì)胚珠進(jìn)行離體培養(yǎng)使其生長發(fā)育形成幼苗的技術(shù)。

1980年成功培養(yǎng)了未授粉的非洲菊、煙草的胚珠，獲得了單倍體植株。子房多個(gè)胚珠本文檔共58頁；當(dāng)前第28頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分

由于幼胚分離難度大，而胚珠分離則相對(duì)容易，在幼胚培養(yǎng)時(shí)常采用胚珠培養(yǎng)。

分為兩種類型：授粉胚珠培養(yǎng) 未授粉胚珠培養(yǎng)本文檔共58頁；當(dāng)前第29頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分（1）胚珠培養(yǎng)的意義:防止雜種胚早期敗育，獲得雜種植株；也為拯救心型期胚或心型期以前的胚胎提供了新的途徑。授粉前胚珠培養(yǎng)，可作為試管受精的基礎(chǔ)；未授粉胚珠培養(yǎng)，能培養(yǎng)獲得單倍體植株，用于單倍體育種。本文檔共58頁；當(dāng)前第30頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分（2）胚珠培養(yǎng)方法: A、材料的選擇和滅菌： 未授粉胚珠：開花前1-6天，

授粉胚珠：授粉后1-120天不等，較晚時(shí)期有利于胚的發(fā)育。

滅菌：先對(duì)子房或外表組織消毒滅菌后，后取出胚珠培養(yǎng)。

辣椒子房本文檔共58頁；當(dāng)前第31頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分 B、培養(yǎng)基多用Nitsch、White、MS等基本培養(yǎng)基

植物激素：細(xì)胞分裂素對(duì)授粉胚珠發(fā)育常有促進(jìn)作用。

有機(jī)物：添加有機(jī)附加物（椰汁，水解酪蛋白）可以促進(jìn)授粉胚珠的發(fā)育。

蔗糖濃度：4-10%。本文檔共58頁；當(dāng)前第32頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分

（3）胎座和子房對(duì)胚珠培養(yǎng)的影響：帶有胎座或子房組織的胚珠相對(duì)較易培養(yǎng)。

（4）胚發(fā)育時(shí)期的影響：一般來說，合子或早期原胚期的胚珠較難剖取和培養(yǎng)，對(duì)培養(yǎng)基的成分要求也較嚴(yán)格。C、培養(yǎng)：

子房培養(yǎng)一般溫度為20～25℃。對(duì)光照要求不嚴(yán)，大多數(shù)植物子房培養(yǎng)早期在黑暗，弱光照條件下生長良好。本文檔共58頁；當(dāng)前第33頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分、子房培養(yǎng):

包括授粉子房和未授粉子房培養(yǎng)。

1949年和1951年最早在黃瓜、番茄、菜豆、草莓、煙草等植物上獲得成功。 授粉子房培養(yǎng)形成成熟果實(shí)和種子； 未授粉子房培養(yǎng)形成小的無籽果實(shí)。

授粉后3d的玉米子房，其中6顆發(fā)育成種子，其余產(chǎn)生愈傷組織。本文檔共58頁；當(dāng)前第34頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分（1）子房培養(yǎng)的意義:獲得雜種植株；未授粉子房培養(yǎng)為試管受精提供技術(shù)基礎(chǔ)；未授粉子房培養(yǎng)能獲得獲得單倍體植株，用于單倍體育種。百合子房本文檔共58頁；當(dāng)前第35頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分（2）子房培養(yǎng)的一般方法

材料制備：未傳粉子房培養(yǎng)時(shí)，選用開花前1～5d的花蕾。培養(yǎng)基：子房培養(yǎng)常用的培養(yǎng)基有MS、Whiter、Nitsch等。碳源主要是蔗糖和葡萄糖，濃度為2～5%。B族維生素、椰子乳和其它一些天然提取物對(duì)子房發(fā)育成果實(shí)或種子都有良好的促進(jìn)作用。培養(yǎng)基中附加一定的赤霉素，生長素和細(xì)胞分裂素，可使離體子房發(fā)育的果實(shí)增大。培養(yǎng)：

子房培養(yǎng)一般溫度為20～25℃。對(duì)光照要求不嚴(yán)，大多數(shù)植物子房培養(yǎng)早期在黑暗，弱光照條件下生長良好。本文檔共58頁；當(dāng)前第36頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分（3）附屬花器對(duì)子房培養(yǎng)的作用花被在果實(shí)和胚胎發(fā)育中成起著重要的作用。雙子葉植物各種花的萼片，對(duì)培養(yǎng)子房的生長顯示了有利的影響。（4）胚囊的發(fā)育時(shí)期對(duì)子房培養(yǎng)的作用從研究較多的大麥和水稻來看，在胚囊發(fā)育的各個(gè)時(shí)期都可以誘導(dǎo)，而以接近成熟的胚囊易于誘導(dǎo)成功。本文檔共58頁；當(dāng)前第37頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分兩種途徑：直接成苗的發(fā)育途徑：在離體培養(yǎng)條件下，合子胚在胚珠內(nèi)繼續(xù)發(fā)育至成熟，最終成熟胚在胚珠內(nèi)萌發(fā)，形成小植株；脫分化和再分化途徑：離體子房或胚珠內(nèi)的幼胚等組織脫分化，產(chǎn)生愈傷組織，經(jīng)誘導(dǎo)后，愈傷組織形成體細(xì)胞胚或經(jīng)器官發(fā)生，再形成小植株。離體子房和胚珠的發(fā)育本文檔共58頁；當(dāng)前第38頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分Fig1

MorphologicalaspectsofsomaticembryogenesisinovarycultureofCocosnuciferaL.aCallusderivedfromovaryexplantsafter10weeksofcultureinitiation(bar=4

mm).bEmbryogenicstructures(Es)developedfromcalliaftersub-culturingintosomaticembryoinductionmedium(bar=5

mm).cDevelopingshootsingerminationmedium.dAcompleteplantletwithroots(Rt)椰子的子房培養(yǎng)本文檔共58頁；當(dāng)前第39頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分通過雌配子體的離體培養(yǎng)，可以誘導(dǎo)胚囊細(xì)胞發(fā)育成單倍體胚。把這種通過未授粉胚珠或子房的離體培養(yǎng)進(jìn)行單倍體胚胎發(fā)育的過程叫雌核發(fā)育（gynogenesis）。目前已有包括甜菜、小麥、水稻、煙草和玉米等多種農(nóng)作物可以通過雌核發(fā)育途徑產(chǎn)生單倍體。8.2.4未授粉胚珠和子房培養(yǎng)

本文檔共58頁；當(dāng)前第40頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分愈傷組織和胚狀體形成（愈傷組織再分化；胚狀體直接成苗；胚狀體-愈傷組織-分化成苗。）試管苗的移栽

單倍體加倍

鑒定為單倍體的植株，利用秋水仙素加倍。在固體培養(yǎng)基中附加0.01％秋水仙素處理1～2d；在液體培養(yǎng)基中附加0.3％秋水仙素，在25℃下振蕩培養(yǎng)5～6h，或用0.2％～0.4％秋水仙堿液滴注移栽成活后試管苗生長點(diǎn)，在盆栽條件下處理3～4d。（1）離體未授粉胚珠和子房的發(fā)育本文檔共58頁；當(dāng)前第41頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分Fig2

Plantregenerationinunfertilizedovulecultureofgentian（龍膽草）.aUnfertilizedovulesinanovary.bOvulesculturedon1/2NLNsolidmedium.cELSsemergedfromovulesafter50

daysofculture.dAmagnifiedELSincplate.e,fAplantletregeneratedfromELS.gAregeneratedplantofG.scabrastrain17-260growninsoil.hSomaticchromosomesofthehaploid(2n

=

x

=

13)regeneratedfromG.scabrastrain17-260.Thebarsina,d,e

=

500

μm,b,c,f

=

10

mm,g

=

50

mm,h

=

20

μm未受精子房內(nèi)的胚珠本文檔共58頁；當(dāng)前第42頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分植物未授粉胚珠或子房離體培養(yǎng)時(shí)，由于培養(yǎng)物既包含有孢子體組織，如珠心、珠被、子房壁等，又包含有配子體細(xì)胞，如卵細(xì)胞、助細(xì)胞、反足細(xì)胞等，因而在培養(yǎng)過程中，既可以產(chǎn)生單倍體愈傷組織或胚狀體，也可能產(chǎn)生二倍體愈傷組織或胚狀體，或二者同時(shí)產(chǎn)生。（2）單倍體植株的起源

對(duì)于某些雄核組織培養(yǎng)反應(yīng)遲鈍或雄核敗育的物種來說，雌核發(fā)育途徑是一個(gè)重要的創(chuàng)制單倍體的手段。本文檔共58頁；當(dāng)前第43頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分克服遠(yuǎn)緣雜交中雜種早亡用于試管授粉

創(chuàng)造雌核發(fā)育的單倍體獲得大量的體細(xì)胞胚（葡萄的末受精胚珠培養(yǎng)中都得到了來源于珠心細(xì)胞的體細(xì)胞胚狀體。柑桔末受精胚珠來源的體細(xì)胞胚狀體，這種胚狀體可用于脫毒苗的快速繁殖。）繁育無核植物的珠心苗（通過末受精胚珠的離體培養(yǎng)，是獲得無核柑桔珠心苗的有效方法。

）8.2.5胚珠、子房培養(yǎng)的應(yīng)用

本文檔共58頁；當(dāng)前第44頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分柑橘上珠心苗的作用與營養(yǎng)系相比,實(shí)生群體常具有變異普遍、變異性狀多而且變異幅度大的特點(diǎn)。對(duì)多胚性的柑橘進(jìn)行實(shí)生選種,有可能獲得:①利用有性系變異選育出優(yōu)良的自然雜種,例如溫州蜜柑、葡萄柚、日本夏橙等都源出于自然雜種;②利用珠心系中發(fā)生的變異選育出新的優(yōu)良品種、品系,例如四川的錦橙、先鋒橙;③利用珠心胚實(shí)生苗的生理復(fù)壯作用選育出該品種的新生系,例如美國從華盛頓臍橙、伏令夏橙、檸檬中選育出的新生系均比老系表現(xiàn)樹勢旺盛、豐產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)、適應(yīng)性增強(qiáng),而又保持原品種的優(yōu)良品質(zhì)。本文檔共58頁；當(dāng)前第45頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分植物離體授粉（pollinationinvitro）指在離體條件下對(duì)雌蕊的柱頭、帶胎座的胚珠和單個(gè)胚珠進(jìn)行人工授粉和完成受精并形成種子過程；離體受精（fertilizationinvitro）指游離的植物精細(xì)胞和卵細(xì)胞融合形成合子，進(jìn)一步培養(yǎng)使其形成完整植株的技術(shù)；離體授粉、受精也叫植物試管受精（test-tubefertilization）。合子培養(yǎng)是指對(duì)離體受精合子或分離的自然受精合子的離體培養(yǎng)，并使其進(jìn)一步發(fā)育成植株的過程。8.3離體授粉、受精與合子培養(yǎng)

本文檔共58頁；當(dāng)前第46頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分8.3.1植物離體授粉（1）離體授粉類型:離體柱頭授粉離體子房授粉離體胚珠授粉可以克服遠(yuǎn)緣雜交中的不親和性，特別是離體子房授粉和離體胚珠授粉，能消除柱頭和花柱所造成的受精前障礙。本文檔共58頁；當(dāng)前第47頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分（2）離體授粉的程序：1）確定開花、花藥開裂及授粉時(shí)間2）去雄后將花蕾套袋隔離3）制備無菌子房或胚珠4）制備無菌花粉5）胚珠或子房的試管內(nèi)授粉本文檔共58頁；當(dāng)前第48頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分（3）離體授粉的方法:花粉的收集：將要開花的幼穗或花蕾，經(jīng)過常規(guī)消毒后在無菌條件下讓花藥自然開裂。子房或胚珠的剝離：開花前1d將雌穗或花蕾取下，經(jīng)過表面常規(guī)消毒后，剝?nèi)⊥暾臃炕蚺咧?，接種。本文檔共58頁；當(dāng)前第49頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分授粉：一是先將子房接入培養(yǎng)基，后用毛筆粘取剛?cè)雎涞男迈r花粉，涂在雌蕊的柱頭上。

另一種方法是在子房剝離后，可直接用子房的柱頭直接粘取花粉或用毛筆在管外子房柱頭上涂上花粉后再接入培養(yǎng)基中培養(yǎng)。培養(yǎng)基多為Nitsch（1951），在進(jìn)行子房培養(yǎng)時(shí)所用的無機(jī)鹽，此外加上蔗糖和維生素。4%～5%。培養(yǎng)近乎黑暗中或散光條件下，25～28℃。本文檔共58頁；當(dāng)前第50頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分Fig.

1.

ReproductivestructuresofA.mearnsii.(a)Racemecomprisingmultipleinflorescences,(b)stigmasextendedovernumerousanthers,(c)diploid(2n)andtetraploid(4n)polyads,and(d)ananthercomprisedoftwolocules,eachcontainingfourpolyads.本文檔共58頁；當(dāng)前第51頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分Fig.

2.

Invitro(laboratory)andinvivo(field)crosspollinations.(a)Inflorescencesattheyellowbudstageareplacedontoagar,(b)andallowedtoopenovernight.(c)Invitrocrosspollinations.(d)Inflorescencestobeusedaspollendonorsareplacedinadesiccatortohelpreleasethepolyadsfromtheanthers.(e)Baggedinflorescences(invivo)flowersreadytobecrossed.(f)Fixingofinflorescences48

hafterthesecondcrosspollination.本文檔共58頁；當(dāng)前第52頁；編輯于星期三\13點(diǎn)1分Fig.

3.

ReproductiveorgansofA.mearnsii.(a)Stigmawithasinglepolyadattached.(b)