精液常規(guī)分析的步驟及注意事項

精液常規(guī)分析的步驟及注意事項本文檔共37頁；當(dāng)前第1頁；編輯于星期二\18點10分簡介┌精子（5%）精液組成┤┌精囊腺液（60%）－凝固因子、果糖└精漿（95%）├前列腺液（20%）－液化因子├尿道球腺液（3%）└睪丸液、附睪液

——精子精液的兩個主要量化指標(biāo)：1．精子總數(shù)，反應(yīng)睪丸的生精狀況和睪丸后管道系統(tǒng)的通暢程度。2．體積反應(yīng)腺體的分泌能力。本文檔共37頁；當(dāng)前第2頁；編輯于星期二\18點10分精液質(zhì)量分析的主要影響因素1．樣本收集是否完整。射精時前面富含精子部分的精液避免丟失，后面部分精液主要是由精囊腺的分泌物構(gòu)成，所以，前面部分精液的丟失比后半部分丟失對精液分析結(jié)果影響更大。2．在射精時，附屬腺體分泌物沖淡含高度濃度精子的附睪液。精子濃度不能直接反應(yīng)睪丸的精子產(chǎn)量，因為還受其他生殖器官功能的影響，而精子密度對于年輕人和老年人沒有區(qū)別，但精子總數(shù)（精子密度X精液體積）可能存在差異，至少人群中有部分人存在隨著年齡增大而精液體積和精子下降的現(xiàn)象。3．精子的活力和染色體不受禁欲時間長短的影響，除非附睪功能受到影響。由于前次射精不徹底，附睪沒完全排空，有部分精子殘存，精子老化會影響精子質(zhì)量，其程度很難確定，所以也很少做考慮。4．睪丸體積的大小不僅能反應(yīng)睪丸的生精水平還影響到每次射精的精子總數(shù)和精子形態(tài)。本文檔共37頁；當(dāng)前第3頁；編輯于星期二\18點10分結(jié)論1、精液質(zhì)量的巨大生理變化是上述所列多種因素的反映，因而同精液相關(guān)的所有分析都要精確全面。2、僅憑一次精液檢查不能確定精子質(zhì)量。3、檢查兩到三次有助于獲得可靠的基本數(shù)據(jù)。（WHO5版精液分析要求）4、雖然對整個精液樣本進行了分析，但其結(jié)果并不能確定那些少數(shù)到達受精部位精子的受精能力，精液分析能為臨床提供有關(guān)患者個人狀況的一些重要信息。5、樣本的采集和檢查都按照規(guī)范化程序進行，其結(jié)果才有價值。本文檔共37頁；當(dāng)前第4頁；編輯于星期二\18點10分基本步驟1、將精液樣本容器放置在溫控臺或水浴箱里（37℃）等待液化。2、在30到60分鐘期間，評估精液的液化情況和物理性狀。3、測量精液體積。4、檢測精液的pH值。5、準(zhǔn)備濕片觀察顯微鏡下精子的活動情況，評估精子活動率。6、制作精液涂片評估精子形態(tài)。7、對精液進行稀釋后做精子密度評估。8、對精子進行計數(shù)。9、如需檢測精漿生化指標(biāo)則對精液進行離心。本文檔共37頁；當(dāng)前第5頁；編輯于星期二\18點10分標(biāo)本的采集采集注意事項1、手淫法采集標(biāo)本，精液射入一清潔廣口的塑料或玻璃容器內(nèi)。2、減少外界溫度和樣本收集到檢測期間過長對精液檢測結(jié)果的影響3、標(biāo)本接收要求：禁欲2-7天，如需復(fù)查每次禁欲的天數(shù)應(yīng)盡可能恒定。標(biāo)本要完整，如果不完整，需在禁欲2-7天后重新采集標(biāo)本檢測。標(biāo)本采集到檢測不能超過3小時。4、采集容器上標(biāo)記受檢者姓名、編碼、采集日期和時間。本文檔共37頁；當(dāng)前第6頁；編輯于星期二\18點10分標(biāo)本的采集家中采集樣本1、對于除了在自家以外的環(huán)境下取精的確困難者，可以在家中進行樣本采集。2、給患者以明確的書面或口頭形式的有關(guān)精液樣本的采集和轉(zhuǎn)運指導(dǎo)說明。3、應(yīng)強調(diào)采集樣本必須完整，如有部分丟失應(yīng)在報告中加以說明。4、對已標(biāo)上姓名和身份證號的容器進行稱重，然后交給患者。5、患者應(yīng)記錄采集的時間，并在一小時內(nèi)送至實驗室。6、在送至實驗室途中樣本應(yīng)保持在20～37℃的環(huán)境中。7、報告中應(yīng)注明樣本采集的地點是在家還是在其他實驗室以外的地方。8、一定不可使用普通避孕套收集精液，因為它們一般含有干擾精子活力的成分。本文檔共37頁；當(dāng)前第7頁；編輯于星期二\18點10分

采集容器的要求標(biāo)本的采集

選擇數(shù)份精子濃度高和活力好的精液標(biāo)本，將每份標(biāo)本的一半放在已知無毒性的容器內(nèi)（對照組），另一半放在待檢測的容器內(nèi)，在4小時內(nèi)、室溫或者37℃下每間隔1小時重復(fù)評估1次精子活力。如果每個時間點在對照組與測試組之間沒有差異（配對t檢驗，P>0.05)，即可認為待檢測的容器對精子是無毒性的，達到精液采集的要求。采集容器需對精子無毒性采集容器保持在20—37℃環(huán)境中，避免精子射入容器后，大的溫度變化對精子產(chǎn)生影響。本文檔共37頁；當(dāng)前第8頁；編輯于星期二\18點10分

標(biāo)本保溫采集后的標(biāo)本需放在37℃保溫標(biāo)本的保溫本文檔共37頁；當(dāng)前第9頁；編輯于星期二\18點10分

標(biāo)本的液化

肉眼觀察

精液送檢15分鐘后觀察其液化狀態(tài)，看其是否變得均質(zhì)和稀薄，若未液化，則在60分鐘之內(nèi)繼續(xù)觀察。若標(biāo)本60分鐘后不液化，則需對標(biāo)本進行處理并作記錄。

觀察液化方法：肉眼觀察：標(biāo)本變得均質(zhì)和稀薄，不見異質(zhì)性混合團塊。顯微鏡觀察：顯微鏡鏡下觀察精子不動。液化期間，置37℃孵箱中，在二維遙控器上，不斷地輕輕混勻樣本容器，有助于產(chǎn)生均質(zhì)的精液標(biāo)本。本文檔共37頁；當(dāng)前第10頁；編輯于星期二\18點10分精液液化延遲的處理方法1、用帶有規(guī)格為18或19號注射針頭的注射器對精液進行反復(fù)抽吸6～10次。肉眼觀察本文檔共37頁；當(dāng)前第11頁；編輯于星期二\18點10分

2、加入與精液體積相等的菠蘿蛋白酶液或者生理培養(yǎng)液(如杜氏磷酸鹽緩沖液）即對標(biāo)本進行1：2（1+1）稀釋。

精液液化延遲的處理方法肉眼觀察注釋：這些處理可能會影響到精漿的生化性質(zhì)，精子活力以及精子外形，如有使用必須記錄。用菠蘿蛋白酶以1+1（1:2）的方式稀釋精液必須在評估了精子濃度后以其結(jié)果作為說明。本文檔共37頁；當(dāng)前第12頁；編輯于星期二\18點10分1、精液液化后，采用塑料吸液管吸取精液，評估標(biāo)本的黏稠度，使精液借助重力滴下，觀察其拉絲的長度。正常精液為液滴不間斷的從吸液管口滴下。2、如果黏稠度異常，液滴會形成超過2cm的拉絲。3、不完全液化標(biāo)本呈均質(zhì)黏性，且黏稠度不隨時間而變化。

精液黏稠度的評估方法肉眼觀察

本文檔共37頁；當(dāng)前第13頁；編輯于星期二\18點10分

將一玻璃棒插入標(biāo)本，提起玻璃棒，觀察拉絲長度。精液黏稠度的評估方法肉眼觀察本文檔共37頁；當(dāng)前第14頁；編輯于星期二\18點10分

精液外觀肉眼觀察肉眼觀察

正常液化精液標(biāo)本呈現(xiàn)均質(zhì)性，灰白色的外觀。

如果精子密度非常低，精液可顯得透明一些。

如有紅細胞，精液可呈紅褐色；病人如有黃疸或服用某些維生素，精液可呈黃色。本文檔共37頁；當(dāng)前第15頁；編輯于星期二\18點10分

空樣本容器可能具有不同的重量，所以每一容器必須提前分別稱重。

將空白采集管放置電子天平上，按下“去皮鍵”，則此時重量顯示為零。肉眼觀察

精液體積精確測量精液體積是任何精液評價的基礎(chǔ)本文檔共37頁；當(dāng)前第16頁；編輯于星期二\18點10分

精液體積測量肉眼觀察

精液體積

將盛有精液的采集管放入已去皮的電子天平上，此時顯示的為精液標(biāo)本的重量。

由重量計算出精液體積（精確到0.1ml),假設(shè)精液的密度為1g/ml。

不推薦將精液從移液管吸到量杯中測量體積，因為不能完全回收精液，會低估精液體積。本文檔共37頁；當(dāng)前第17頁；編輯于星期二\18點10分

精液pH

肉眼觀察1、精液液化后要在0.5-1h內(nèi)檢測，因為pH值會受射精后精液中CO2逸出的影響。2、選用的pH試紙。3、充分混勻精液標(biāo)本。4、在pH試紙上均勻地涂上一滴精液。5、等待浸漬區(qū)的顏色變得均勻（<30秒）。6、與標(biāo)準(zhǔn)比色卡比對，讀數(shù)。注：pH試紙的準(zhǔn)確性應(yīng)該按照已知標(biāo)準(zhǔn)進行檢測。對于粘稠的樣本，可取小份樣本用專為測量粘稠溶液設(shè)計的pH量尺進行檢測。本文檔共37頁；當(dāng)前第18頁；編輯于星期二\18點10分

標(biāo)本的混勻

標(biāo)本混勻

可通過向樣本中插入一個寬孔的一次性無菌塑料吸液管，抽吸10次來達到混勻標(biāo)本的目的。

也可上下顛倒混勻10次，注意力度要輕柔。

或采用專用儀器混勻。

不可用高速渦旋器，以免對精子造成損傷。

如果標(biāo)本未混勻，則兩次測量結(jié)果將出現(xiàn)明顯偏差。本文檔共37頁；當(dāng)前第19頁；編輯于星期二\18點10分標(biāo)本混勻上下顛倒，輕輕的混勻10次本文檔共37頁；當(dāng)前第20頁；編輯于星期二\18點10分

標(biāo)本的取樣

充分混勻后立即取樣，吸取5μl標(biāo)本取樣本文檔共37頁；當(dāng)前第21頁；編輯于星期二\18點10分標(biāo)本滴加

標(biāo)本的滴加1、移液器吸取約5μl標(biāo)本置于點樣區(qū)域（圖A）2、輕輕地從標(biāo)本上方壓下蓋玻片，使蓋玻片的邊緣剛好蓋住標(biāo)本（圖B和C）?；瑒由w玻片至圖D所示的位置。這樣可以消除計數(shù)區(qū)域內(nèi)的氣泡。BACD本文檔共37頁；當(dāng)前第22頁；編輯于星期二\18點10分

標(biāo)本鏡下初檢鏡下初檢1、觀察精子是否分布均勻，有無氣泡。

有氣泡——重滴2、觀察精子是否聚集或凝集。

聚集或凝集——記錄3、觀察有無精子。

無精子——離心鏡檢4、觀察濃度是否適宜。

過高——稀釋100倍鏡下本文檔共37頁；當(dāng)前第23頁；編輯于星期二\18點10分無精子癥隱匿精子癥和可疑無精子癥

本文檔共37頁；當(dāng)前第24頁；編輯于星期二\18點10分無精子癥1、充分混勻精液標(biāo)本。2、取1ml精液，以3000g離心15分鐘。3、棄去大部分上清液，在剩下約50ul精漿里重新混勻精子沉淀物。4、在兩張玻片上，各加入10ul沉淀團懸液，覆蓋22mm×22mm蓋玻片。5、200倍鏡下Z字形觀察玻片。x軸y軸隱匿精子癥任一重復(fù)樣本觀察到精子無精子癥兩張重復(fù)玻片中均未觀察到精子本文檔共37頁；當(dāng)前第25頁；編輯于星期二\18點10分

離心過程中作用于精子的力（相對離心力，RCF）取決于旋轉(zhuǎn)速度（N，每分鐘的轉(zhuǎn)數(shù)，r.p.m)和從轉(zhuǎn)子中心到被力測量點（通常是離心管底部）之間的距離（半徑，R，cm).RCF:1.118×10-5×R×N2無精子癥離心機

15ml離心管的臺式離心機一般達不到3000g，可使用配有離心管的速度更高的離心機。本文檔共37頁；當(dāng)前第26頁；編輯于星期二\18點10分標(biāo)本稀釋標(biāo)本稀釋1、3000g離心10min取精漿做稀釋液或者用生理培養(yǎng)液做稀釋液。2、使用正向置換式移液器將適量的固定液加入兩個稀釋小瓶。3、充分混勻精液標(biāo)本。4、混勻后用移液器立即吸出適量的精液標(biāo)本。5、將精液移到固定液里，抽吸、吹打固定液。6、再次充分混勻精液。儀器檢測濃度超過100×106/ml，建議稀釋本文檔共37頁；當(dāng)前第27頁；編輯于星期二\18點10分標(biāo)本鏡下初檢如果標(biāo)本濃度適中，計數(shù)池內(nèi)精液不再漂移，則轉(zhuǎn)換成20倍物鏡開始分析。標(biāo)本檢測本文檔共37頁；當(dāng)前第28頁；編輯于星期二\18點10分標(biāo)本檢測智能化儀器檢測1、提前10分鐘開啟儀器，待恒溫加熱板加熱至指定溫度。2、將滴加的計數(shù)板放置儀器中，選擇檢測模式，儀器自動進行檢測。檢測注意事項：1、一份標(biāo)本檢測兩次。2、每份標(biāo)本滿足200條精子檢測需求。本文檔共37頁；當(dāng)前第29頁；編輯于星期二\18點10分標(biāo)本檢測精子活力分類·運動活躍型（PR）：精子運動活躍、線性運動或者在較大的范圍內(nèi)運動（不考慮運動的速度）?！し沁\動活躍型(NP)：精子運動但不活躍，如精子在較小的范圍內(nèi)運動，精子頭部輕微移位或盡有鞭毛擺動?！ね耆粍有停↖M）：精子完全不動。本文檔共37頁；當(dāng)前第30頁；編輯于星期二\18點10分標(biāo)本檢測每次計數(shù)>200個精子，計數(shù)兩次，取均值。差異大時，需重新計數(shù)。兩次精子計數(shù)可接受的誤差本文檔共37頁；當(dāng)前第31頁；編輯于星期二\18點10分相差環(huán)的調(diào)節(jié)

儀器維護與保養(yǎng)對中調(diào)節(jié)：①用對中望遠鏡換下目鏡；②轉(zhuǎn)動對中望遠鏡的上部，調(diào)節(jié)聚焦，讓亮環(huán)（環(huán)形槽）和暗處在視野中清晰可見；③轉(zhuǎn)動兩個對中螺絲，讓亮環(huán)和暗環(huán)同心重疊，如圖（c）；④卸下對中望遠鏡，重新裝上目鏡，開始相襯觀察；本文檔共37頁；當(dāng)前第32頁；編輯于星期二\18點10分

顯微鏡燈的保養(yǎng)

儀器維護與保養(yǎng)光線強度耐用度照明效果節(jié)能鹵素?zé)粼诠饩€黑暗的情況下，偏黃的鹵素?zé)袅疗饋頉]那么顯眼，最大輸出1200流明，相當(dāng)于1200根蠟燭平均壽命500小時光線均勻，濾色片一般鹵素大燈55wLED燈光譜幾乎全部集中于可見光斷，發(fā)光率可達80~90%，輸出6200流明，相當(dāng)于6200根蠟燭壽命可長達100000小時光線誤差小，無需濾光能耗僅為鹵素?zé)?/20本文檔共37頁；當(dāng)前第33頁；編輯于星期二\18點10分儀器維護與保養(yǎng)

顯微鏡燈的保養(yǎng)OLYMPUSNIKONMOTICCX23CX41BX43BX53E200CI全系列燈泡類型LED鹵素?zé)?V30WLED鹵素?zé)?2V100WLEDLEDLED燈泡注意事項：1、確認光源亮度處于最小位置，打開顯微鏡燈光，預(yù)熱5分鐘再開始使用。2