動物細胞融合

動物細胞融合山東大學2016級生命基李潔周四下午一、 實驗目的了解細胞融合的常用方法學習化學融合的基本操作過程3觀察動物細胞融合過程中細胞的行為和變化二、 實驗原理細胞融合是指在自發(fā)或者誘導條件下，兩個或兩個以上細胞合并為雙核或者多核細胞的過程。目前人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有很多方法可以誘導細胞融合，包括病毒誘導融合、化學誘導融合額電激誘導融合。很多化學試劑能夠誘導細胞融合，如聚乙二醇（PEG）、二甲基亞砜、山梨醇、甘油、溶血性卵磷脂、磷脂酰絲氨酸等。這些物質能夠細胞膜脂質分子的排列，在去除這些物質之后，細胞膜趨向于恢復原有的有序結構。在恢復過程中相接觸的細胞由于接口處脂質雙分子層的相互親和與表面張力，細胞膜融合，胞質流通，發(fā)生融合?；瘜W誘導方法操作方便，誘導融合的概率比較高，效果穩(wěn)定，適用于動、植物細胞，但對細胞具有一定的毒性°PEG是被廣泛使用的化學融合劑。PEG可與水分子借氫鍵結合，導致細胞脫水而發(fā)生質膜結構的變化，從而引起細胞融合。三、 實驗用品材料雞血紅細胞、兔血試劑50%PEG、0.85%氯化鈉溶液等器材離心機、普通光學顯微鏡、滴管、離心管等。四、 實驗操作1取雞血2ml+2mlAlsever液，再加入6mlAlsever液，混勻后制懸液（4°C保存）。取上述懸液1ml+4m0.85%氯化鈉溶液，進行以下三次離心：1200r/min離心5min，去上清液加至5ml0.85%氯化鈉溶液1000-1200r/min離心5min，去上清液，加入至5ml0.85%氯化鈉溶液1000-1200r/min離心7min將③去上清液后加入GKN液至1-2ml,制成10%細胞懸液。取上述10%細胞懸液1ml，加入3mlGKN液。取上述懸液1ml+0.5ml50%PEG液，停留40s-1min，混勻，停留1min-2min，再充分混勻滴片，鏡下觀察。取4中懸液0.5ml+0.5ml50%PEG液，停留40s-1min，混勻，停留1min-2min，再充分混勻滴片，鏡下觀察。取4中懸液0.5ml+1ml50%PEG液，停留40s-1min，混勻，停留1min-2min，再充分混勻滴片，鏡下觀察。取4中懸液0.25ml+0.25ml兔血懸液+1ml50%PEG液，停留40s-1min，混勻，停留1min-2min，再充分混勻滴片，鏡下觀察。五、 實驗結果

照片記錄圖一兩個細胞開始融合示意圖圖三兩個細胞進一步融合示意圖圖五兩個細胞完全融合示意圖圖七雞紅細胞和兔紅細胞融合圖四兩個細胞進一步融合示意圖圖六雞紅細胞和兔紅細胞融合照片記錄圖一兩個細胞開始融合示意圖圖三兩個細胞進一步融合示意圖圖五兩個細胞完全融合示意圖圖七雞紅細胞和兔紅細胞融合圖四兩個細胞進一步融合示意圖圖六雞紅細胞和兔紅細胞融合六、實驗反思結果中由于PEG的作用，細胞變形情況較為嚴重，且紅細胞發(fā)生多細胞的凝集反應。細胞融合的應用：⑴動物細胞融合：在基礎理論研究上，動物細胞融合技術對研究細胞分化、基因定位、腫瘤發(fā)生機制等方面都有重要意義。在實際應用方面，動物細胞融合技術在藥物定向釋放系統(tǒng)、細胞治療以及抗腫瘤免疫等方面起到重要的作用。⑵植物細胞融合：在生產(chǎn)應用研究方面，植物細胞融合在育種上有重要的應用價值，通過誘導不同種間、屬間甚至不同科間原生質體的融合，可能打破有性雜交不親和性的界限，廣泛地組合各種基因型，從而有可能形成有性雜交方法所無法獲得的新型雜種植株；另一方面又可將各種細胞器、DNA、質粒、病毒、細菌等外源遺傳物質引入原生質體，從而有可能引起細胞遺傳性的改變，為某些珍稀植物的快速繁殖、植物的復壯等提供了可行的方法，應用于植物育種、種質保存、無性系的快速繁殖和有用物質生產(chǎn)等。⑶微生物細胞融合：在基礎理論方面，研究外源DNA轉化、