臨床生物化學(xué)方法的選擇建立和評(píng)價(jià)課件

教學(xué)目的通過學(xué)習(xí)實(shí)驗(yàn)室主要危害，掌握臨床實(shí)驗(yàn)室的生物安全及防護(hù)。教學(xué)要求掌握

臨床實(shí)驗(yàn)室的生物安全及防護(hù)熟悉

實(shí)驗(yàn)室主要危害的來源了解

臨床實(shí)驗(yàn)室的其他安全SARS事件是指嚴(yán)重急性呼吸系統(tǒng)綜合癥，于2002年在中國(guó)廣東順德首發(fā)，并擴(kuò)散至東南亞乃至全球，直至2003年中期疫情才被逐漸消滅的一次全球性傳染病疫潮。SARS實(shí)驗(yàn)室人員感染SARS情況Dr.CarloUrbaniWHO的傳染病專家，首次向世界報(bào)告了SARS病例2003年3月29日在泰國(guó)曼谷因SARS不治病逝，終年46歲，是死于SARS的首名WHO官員教訓(xùn)：1967年德國(guó)馬爾堡病毒實(shí)驗(yàn)室感染事件2001年10月美國(guó)發(fā)生炭疽恐怖事件，造成人員傷亡和世界范圍的社會(huì)恐慌2003年9月新加坡國(guó)立大學(xué)研究生院實(shí)驗(yàn)室中感染SARS病毒2003年12月一名臺(tái)灣的SARS研究人員在實(shí)驗(yàn)室感染SARS病毒2004年4月安徽、北京先后發(fā)現(xiàn)新的SARS病例，經(jīng)證實(shí)分別來自于在中國(guó)疾病預(yù)防控制所實(shí)驗(yàn)室受到SARS感染的兩名工作人員?！訌?qiáng)實(shí)驗(yàn)室生物安全建設(shè)，防止無意或故意造成公共衛(wèi)生危害事件。

臨床實(shí)驗(yàn)室安全重要性了解實(shí)驗(yàn)室生物感染方面的知識(shí)防止實(shí)驗(yàn)人員的感染防止感染因子的外泄采取適當(dāng)?shù)纳锇踩雷o(hù)措施掌握正確的實(shí)驗(yàn)室操作方法臨床實(shí)驗(yàn)室安全的內(nèi)容生物安全化學(xué)安全放射安全防火安全輻射安全用電安全第一節(jié)

臨床實(shí)驗(yàn)室的主要危害源生物危害源細(xì)菌（bacteria）：布魯菌屬、銅綠假單胞菌屬、衣原體屬、腸道致病菌、結(jié)核分枝桿菌病毒（virus）：肝炎、HIV等真菌（fungus）：莢膜組織胞漿菌、真菌孢子寄生蟲（parasite）：瘧原蟲、利什曼原蟲

化學(xué)危害源

常見的危險(xiǎn)性化學(xué)藥品

物理危害源

火的危害電的危害：設(shè)備老化、無斷路器和漏電保護(hù)器，未定期檢查和測(cè)試電氣設(shè)備等電離輻射噪聲

第二節(jié)

臨床實(shí)驗(yàn)室的生物安全臨床實(shí)驗(yàn)室生物污染的種類

根據(jù)生物污染的對(duì)象分為對(duì)空氣的污染–

氣溶膠對(duì)水的污染

–

污水的排出對(duì)人體的感染-吸入及接觸污染物

對(duì)物體表面的污染-傾倒、不正確的擦洗等

實(shí)驗(yàn)室獲得性感染途徑經(jīng)空氣傳播吸入含病原體的氣溶膠、接種環(huán)操作、離心、振蕩、打開培養(yǎng)皿等經(jīng)口傳播攝入病原體、工作區(qū)進(jìn)餐、吸煙導(dǎo)致“手-口污染”直接接種針刺、劃傷等由皮下或黏膜接觸戴隱形眼鏡、徹底清潔手部節(jié)肢動(dòng)物媒介喂養(yǎng)動(dòng)物臨床實(shí)驗(yàn)室的生物安全防護(hù)

實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)：在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下處理和保存感染性物質(zhì)的過程中采用一系列的防護(hù)措施。包括一級(jí)防護(hù)二級(jí)防護(hù)臨床實(shí)驗(yàn)室的生物安全防護(hù)一級(jí)防護(hù)采用規(guī)范的微生物技術(shù)和適當(dāng)?shù)陌踩O(shè)備，以保護(hù)實(shí)驗(yàn)室工作人員和室內(nèi)環(huán)境安全免受感染性物質(zhì)污染。二級(jí)防護(hù)包括合理的實(shí)驗(yàn)室設(shè)施設(shè)計(jì)和嚴(yán)格規(guī)范的操作流程，保護(hù)實(shí)驗(yàn)室外環(huán)境不受感染性物質(zhì)污染。三要素：實(shí)驗(yàn)室操作和技術(shù)、安全設(shè)備、實(shí)驗(yàn)室設(shè)施設(shè)計(jì)臨床實(shí)驗(yàn)室的生物安全防護(hù)

根據(jù)處理微生物及毒素的危害程度分為臨床實(shí)驗(yàn)室生物安全水平（BSL）分級(jí)生物安全1級(jí)（BSL-1）生物安全2級(jí)（BSL-2）生物安全3級(jí)（BSL-3）生物安全4級(jí)（BSL-4）基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室防護(hù)實(shí)驗(yàn)室等級(jí)最高典型的一級(jí)生物安全水平實(shí)驗(yàn)室（BSL-1）通常對(duì)健康成人不致病、對(duì)實(shí)驗(yàn)室人員及環(huán)境潛在危害性小的病原體在生物安全柜中進(jìn)行可能發(fā)生氣溶膠的操作程序。門保持關(guān)閉并貼上適當(dāng)?shù)奈ｋU(xiǎn)標(biāo)志。潛在被污染的廢棄物同普通廢棄物隔開。典型的二級(jí)生物安全水平實(shí)驗(yàn)室（BSL-2）適用于對(duì)實(shí)驗(yàn)人員和環(huán)境中

具有中等潛在危險(xiǎn)的病原體。臨床實(shí)驗(yàn)室的生物安全防護(hù)生物安全3級(jí)（BSL-3）適用于可通過氣溶膠傳播的，可引起嚴(yán)重或致死性疾病的病原體的操作。生物安全4級(jí)（BSL-4）適用于對(duì)人體具有高度的危險(xiǎn)性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明，目前尚無有效地疫苗或治療方法的致病微生物及其毒素的實(shí)驗(yàn)操作。不同生物安全水平對(duì)實(shí)驗(yàn)室設(shè)施的要求a在環(huán)境與功能上與普通流動(dòng)環(huán)境隔離b取決于排風(fēng)位置c取決于實(shí)驗(yàn)室中所使用的微生物因子d例如：觀察窗、閉路電視、雙向通訊設(shè)備生物安全設(shè)備分類

生物安全柜（biosafetycabinet；biologicalsafetycabinet）(一)、生物安全柜的基本工作原理

生物安全柜是防止操作處理過程中某些含有危險(xiǎn)性或未知性生物微粒發(fā)生氣溶膠散逸的箱形空氣凈化負(fù)壓安全裝置※生物安全柜的基本設(shè)計(jì)的兩個(gè)重要改進(jìn)：

1、HEPA過濾器

2、HEPA過濾器+層流技術(shù)生物安全柜的工作原理主要是將柜內(nèi)空氣向外抽吸，使柜內(nèi)保持負(fù)壓狀態(tài)，通過垂直氣流來保護(hù)工作人員；外界空氣經(jīng)高效空氣過濾器（high-efficiencyparticulateairfilter,HEPAfilter）過濾后進(jìn)入安全柜內(nèi)，以避免處理樣品被污染；柜內(nèi)的空氣也需經(jīng)過HEPA過濾器過濾后再排放到大氣中，以保護(hù)環(huán)境。

(二)、生物安全柜的分類根據(jù)防護(hù)程度的不同，通常將生物安全柜分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)，可適用于不同生物安全等級(jí)的媒質(zhì)的操作CLASSI一級(jí)生物安全柜Ⅰ級(jí)生物安全柜因不考慮處理樣品是否會(huì)被進(jìn)入柜內(nèi)的空氣污染，故對(duì)進(jìn)入柜內(nèi)的空氣潔凈度要求不高空氣的流動(dòng)為單向、非循環(huán)式，空氣流經(jīng)HEPA過濾器后進(jìn)入柜內(nèi)，通過工作臺(tái)面后又被過濾、經(jīng)排氣口排出為保護(hù)操作人員安全，其向內(nèi)的非循環(huán)吸入氣流必須遠(yuǎn)離操作者，故要求在使用前方有操作窗口、無手套的Ⅰ級(jí)生物安全柜時(shí)，避免人員在安全柜前快速走動(dòng)或操作人員完成操作后將手臂快速?gòu)墓駜?nèi)抽出為保護(hù)環(huán)境，安全柜中的氣體在外排到大氣以前必須先經(jīng)過HEPA過濾器過濾Ⅱ級(jí)生物安全柜Ⅱ級(jí)生物安全柜是指用于保護(hù)操作人員、處理樣品安全與環(huán)境安全的通風(fēng)安全柜通常適用于生物危險(xiǎn)度等級(jí)為1、2、3的媒質(zhì)的操作。當(dāng)有毒化學(xué)物質(zhì)或放射性核物質(zhì)被用于微生物研究或制藥的添加物時(shí)，應(yīng)使用專為此目的設(shè)計(jì)制造的II級(jí)生物安全柜

Ⅱ級(jí)生物安全柜為臨床生物防護(hù)中應(yīng)用最普遍的一類生物安全柜

臨床中處理高濃度或大容量感染性材料時(shí)，以Ⅱ級(jí)生物安全柜應(yīng)用最多

CLASSIIA生物安全柜B1型生物安全柜維持穿過工作臺(tái)開口面的最小平均吸入口風(fēng)速（計(jì)算或測(cè)量值）為0.5m/s（100ft/min）經(jīng)HEPA過濾器過濾后的垂直氣流中的絕大部分是由未污染的循環(huán)吸入氣流組成（即柜內(nèi)70%氣體通過排氣口HEPA過濾器排除，30%的氣體通過供氣口HEPA過濾器再循環(huán)至工作區(qū)）經(jīng)HEPA過濾器過濾后的大部分污染的垂直氣流，通過專用風(fēng)道過濾后排入大氣所有被生物污染的風(fēng)道和靜壓箱應(yīng)保持負(fù)壓，或被負(fù)壓的風(fēng)道和靜壓箱包圍CLASSIIB1生物安全柜

Ⅱ級(jí)B2型生物安全柜

維持穿過工作臺(tái)開口面的最小平均吸入口風(fēng)速（計(jì)算或測(cè)量值）為0.5m/s（100ft/min）經(jīng)HEPA過濾器過濾后的垂直氣流是由實(shí)驗(yàn)室或室外空氣送入的（即：安全柜中排出的氣體不進(jìn)入垂直氣流的循環(huán)過程）所有的吸入氣流和垂直氣流經(jīng)HEPA過濾器過濾后排入大氣，不再進(jìn)入安全柜循環(huán)或返回實(shí)驗(yàn)室所有污染的風(fēng)道和靜壓箱應(yīng)保持負(fù)壓，或是被直接排風(fēng)的風(fēng)道和靜壓箱包圍

CLASSIIB2生物安全柜Ⅲ級(jí)生物安全柜Ⅲ級(jí)生物安全柜是完全密閉、不漏氣結(jié)構(gòu)的通風(fēng)安全柜工作空間內(nèi)為經(jīng)HEPA過濾器凈化的無渦流的單向流空氣安全柜正面上部為觀察窗，下部為手套箱式操作口。在安全柜內(nèi)的操作是通過與安全柜相連接的橡皮手套進(jìn)行的CLASSIIB3生物安全柜CLASSIII生物安全柜（手套柜）臨床實(shí)驗(yàn)室的安全設(shè)備生物安全柜高壓滅菌器臨床實(shí)驗(yàn)室的安全設(shè)備各種沖淋洗眼器安全防護(hù)用具（個(gè)體防護(hù)）

安全防護(hù)用具是避免操作人員暴露于氣溶膠、噴濺物以及意外接種等危險(xiǎn)的一個(gè)屏障。可根據(jù)工作的性質(zhì)來選擇。（一）實(shí)驗(yàn)服實(shí)驗(yàn)服包括一般操作服即工作服、隔離衣、連體衣的防護(hù)效果較一般操作服好，因此更適用于在微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室以及生物安全柜中的操作。需進(jìn)一步防護(hù)時(shí)應(yīng)在實(shí)驗(yàn)服或隔離衣外面穿上圍裙。注意這些防護(hù)服、裙不能穿離實(shí)驗(yàn)室區(qū)域。（二）護(hù)目鏡和面罩（三）手套1、一次性手術(shù)用手套（用于實(shí)驗(yàn)室一般操作和處理感染性物質(zhì)、血液、體液時(shí)）。2、替代加粉乳膠手套（用于可發(fā)生皮炎及速發(fā)型超敏反應(yīng)等變態(tài)反應(yīng)者）。3、不銹鋼網(wǎng)孔手套（在進(jìn)行尸體解剖等可能接觸尖銳器械情況時(shí)）。安全防護(hù)用具（個(gè)體防護(hù)）安全防護(hù)用具（個(gè)體防護(hù)）（四）鞋

應(yīng)防滑，從事可能出現(xiàn)液體材料漏出的工作應(yīng)穿防水鞋。進(jìn)入特殊區(qū)域（需防靜電）或SBL3和SBL4實(shí)驗(yàn)室要求使用專用鞋。（一次性或橡膠鞋）感染性微生物危險(xiǎn)度等級(jí)分類（國(guó)家規(guī)定和法律法規(guī)）2004年11月5日，國(guó)務(wù)院69次常務(wù)會(huì)議通過中華人民共和國(guó)國(guó)務(wù)院424號(hào)令，《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》總理溫家寶2004年11月12日感染性微生物危險(xiǎn)度等級(jí)分類《人間傳染的病原微生物名錄》

（中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部制定）

2006年1月11日----是臨床實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行生物危害評(píng)估和設(shè)立生物安全等級(jí)的重要指南感染性微生物危險(xiǎn)度等級(jí)分類

危險(xiǎn)度1級(jí)不太可能引起人或動(dòng)物致病的微生物。危險(xiǎn)度2級(jí)病原體能夠?qū)θ嘶騽?dòng)物致病，但對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作人員不易導(dǎo)致嚴(yán)重危害。對(duì)感染有有效的預(yù)防和治療措施。（個(gè)體危險(xiǎn)中等，群體危險(xiǎn)低）

危險(xiǎn)度3級(jí)病原體通常能引起人或動(dòng)物的嚴(yán)重疾病，但一般不會(huì)發(fā)生感染個(gè)體向其他個(gè)體的傳播，并且對(duì)感染有有效的預(yù)防和治療措施。（個(gè)體危險(xiǎn)高，群體危險(xiǎn)低）危險(xiǎn)度4級(jí)病原體通常能引起人或動(dòng)物的嚴(yán)重疾病，并且很容易發(fā)生個(gè)體之間的直接或間接傳播，對(duì)感染一般沒有有效的預(yù)防和治療措施。（個(gè)體和群體危險(xiǎn)均高）（三）實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)水平危險(xiǎn)度安全水平實(shí)驗(yàn)室類型實(shí)驗(yàn)操作安全設(shè)施4級(jí)BSL4最高防護(hù)（P4）實(shí)驗(yàn)室危險(xiǎn)病原體研究BSL3+氣鎖入口、出口淋浴+污染品特殊處理III級(jí)或II級(jí)生物安全柜+正壓服，雙開門高壓滅菌鍋（穿過墻壁、墻體）、經(jīng)過濾空氣，人員安全監(jiān)控3級(jí)BSL3防護(hù)（P3）實(shí)驗(yàn)室專門特殊的診斷研究BSL2+特殊防護(hù)服+準(zhǔn)入制度+定向氣流生物安全柜：密閉消毒；通風(fēng)系統(tǒng)；密閉消毒；通風(fēng)系統(tǒng)；雙門入口；人員安全監(jiān)控。2級(jí)BSL2基礎(chǔ)（P2）實(shí)驗(yàn)室初級(jí)衛(wèi)生服務(wù)，診斷研究微生物操作規(guī)范（GMT）、防護(hù)服、生物危險(xiǎn)標(biāo)志開放實(shí)驗(yàn)臺(tái)；生物安全柜；（BSC）[防護(hù)可能產(chǎn)生的氣溶膠]；現(xiàn)場(chǎng)高壓滅菌鍋；建議向內(nèi)氣流通風(fēng)系統(tǒng)（HEPA過濾排風(fēng)）。1級(jí)BSL1基礎(chǔ)（P1）實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)教學(xué)、研究標(biāo)準(zhǔn)微生物學(xué)操作規(guī)程開放實(shí)驗(yàn)臺(tái)；不需要安全設(shè)施。臨床實(shí)驗(yàn)室的消毒與滅菌抑制和殺死病原微生物物理消毒滅菌方法

化學(xué)消毒滅菌法臨床實(shí)驗(yàn)室的消毒與滅菌

物理消毒滅菌方法

熱力滅菌法干熱：高溫使菌體蛋白分子變性及細(xì)胞質(zhì)濃縮使新陳代謝受到障礙而死亡。（焚燒、干烤、紅外線）濕熱：最常用，使菌體蛋白變性、凝固；細(xì)菌核酸降解；損傷細(xì)胞膜。輻射殺菌法通過紫外線照射和射線，使菌體蛋白光解、變性、核酸酶被破壞。臨床實(shí)驗(yàn)室的消毒與滅菌超聲波殺菌法利用超聲波通過水時(shí)產(chǎn)生的腔化作用，造成細(xì)菌的崩破與裂解。

濾過除菌法過濾除去細(xì)菌的方法。臨床實(shí)驗(yàn)室的消毒與滅菌

化學(xué)消毒滅菌法浸泡法、擦拭法、薰蒸法、噴霧法、環(huán)氧乙烷氣體密閉消毒法臨床實(shí)驗(yàn)室的消毒與滅菌消毒劑的種類高效：甲醛、戊二醛、過氧乙酸、環(huán)氧乙烷、有機(jī)汞化合物，可殺滅細(xì)菌、病毒、真菌、芽孢在內(nèi)的一切微生物。中效：乙醇、酚類碘、含氯消毒劑等，可殺滅芽孢以外的其他各種微生物。低效：苯扎溴銨（新潔爾滅）、氯己定（洗必泰）等，殺滅結(jié)核分枝桿菌以外的病原體。臨床實(shí)驗(yàn)室感染性廢物的處理

廢物的隔離廢物的包裝廢物的存放廢物的轉(zhuǎn)運(yùn)廢物的處理方法

焚燒壓力蒸汽滅菌

干熱處理

氣體滅菌

化學(xué)消