臨床微生物檢驗課件

臨床微生物檢驗聰明出于勤奮，天才在于積累臨床微生物檢驗臨床微生物檢驗聰明出于勤奮，天才在于積累臨床微生物檢驗臨床微生物檢驗是人體的各種物質(zhì)進行微生物學檢驗，為臨床診斷和治療提供依據(jù)。整個檢驗過程包括病人樣品的采集、運送、處理，樣品中致病微生物的分離、培養(yǎng)、鑒定，藥物敏感試驗，出具檢驗報告。1.常見病原菌種類病原菌G+球菌金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、肺炎鏈球菌、化膿鏈球菌、草綠色鏈球菌、腸球菌G+桿菌結核分枝桿菌、產(chǎn)單核李斯特菌、陰道加特納菌G-球菌腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌，卡他布蘭漢菌G-桿菌大腸埃希菌、銅綠假單胞苗、克雷伯桿菌、腸桿菌、變形桿菌、沙雷菌、沙門菌、不動桿菌、嗜肺軍團菌、嗜血桿菌真菌念珠菌、曲霉菌、隱球菌、球孢子菌厭氧菌擬桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌2.血液標本的病原菌的檢驗3.病原菌的檢驗程序

1.標本采集2.標本直接檢查(1)直接顯微鏡檢查;(2)抗原檢測;(3)核酸檢測;3.分離培養(yǎng)與鑒定(1)培養(yǎng)基選擇;(2)分離培養(yǎng)與鑒定;4.抗體檢測常用ELISA、間接免疫熒光技術等方法;5.藥物敏感性試驗4.臨床意義

1.葡萄球菌菌血癥由耐甲氧西林金黃色萄球菌(MRSA)及凝固酶陰性葡萄球菌引起的逐年增多，占10％～15％。2.腸球菌菌血癥約占10％,常見泌尿生殖道、消化道和腹腔感染的病人。3.G-桿菌菌血癥主要侵犯免疫功能低下的病人。4.L型菌感染菌血癥使用抑制細胞壁的抗生素，由缺損細胞壁的細菌感染所致。5．厭氧菌菌血癥常合并需氧菌感染，癥狀重而復雜。6．真菌血癥常由條件致病性真菌引起，有念珠菌、曲霉和毛霉等。7．醫(yī)院感染菌血癥近年來明顯增多，占30％—60％。二、中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染1.常見病原體G+菌葡萄球菌，肺炎鏈球菌，B群、A群鏈球菌，消化鏈球菌，結核分枝桿菌，產(chǎn)單核細胞李斯特菌、炭疽芽胞桿菌;G-菌腦膜炎奈瑟菌，大腸埃希菌，銅綠假單胞菌，卡他布蘭漢菌，類桿菌，不動桿菌，肺炎克雷白桿菌;病毒乙型腦炎病毒,柯薩奇病毒AB,脊髓灰質(zhì)炎病毒,新腸道病毒68～71,狂犬病毒;真菌及其他新生隱球菌,白假絲酵母菌,鉤端螺旋體2.微生物檢驗程序

對嬰幼兒不能腰穿時，用PCR技術檢測外周血，對腦膜炎條瑟菌感染者的陽性率為100％，且不受抗生素藥物治療的影響；涂片和結核分枝桿菌培養(yǎng)陽性率有限，且時間長，用PCR技術檢測腦脊液中結核分枝桿菌DNA，檢出率高，快速靈敏和特異，但要嚴格操作規(guī)程，避免假陽性。3.抗體檢測

為病毒檢測的快速診斷方法，較常用。(1)中和試驗：主要檢測中和抗體lgG，此抗體持續(xù)時間長有診斷意義，陽性率和特異性均高。雙份血清效價4倍增高。(2)特異性IgM抗體測定：此抗體在病后4天即可出現(xiàn)，2周可達高峰，常用于早期診斷。用ELISA、間接免疫熒光法等檢測，敏感性和特異性較高。(3)補體結合試驗：補體結合抗體為lgG抗體，常在病后第二周出現(xiàn)，5—6周達高峰，單份血清1：4為陽性，雙份血清效價增高4倍為陽性，用于回顧性診斷或流行病學調(diào)查。(4)血凝抑制試驗：可用于臨床診斷及流行病學調(diào)查。血凝抑制抗體在病后5天出現(xiàn)，2周時達高峰，雙份血清抗體效價增高4倍以上有診斷價值，陽性率高于補體結合試驗，但可出現(xiàn)假陽性。4.臨床意義

1．細菌性腦膜炎是常見類型，其中以流行性腦脊髓膜炎為常見，結核性腦膜炎呈回升趨勢，為防治重點。肺炎球菌、鏈球菌腦膜炎仍常見，流感嗜血桿菌腦膜炎以及其他G-桿菌性腦膜炎有增多趨勢。2．真菌性腦膜炎最常見是隱球菌腦膜炎，其他真菌性腦膜炎如白假絲酵母菌、球孢子菌漸增多，免疫功能低下患者易并發(fā)。3．流行性乙型腦炎是人獸共患的自然疫源性疾病。4．腸道病毒對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的危害性已逐漸引起人們的關注和重視。還不斷發(fā)現(xiàn)新腸道病毒68-71型引起的腦膜炎及腦炎。三、創(chuàng)傷和外科感染

1.常見病原菌種類革蘭陽性革蘭陰性球菌金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌、腸球菌、消化鏈球菌腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、卡他布蘭漢菌桿菌結核分枝桿菌、非結核分枝桿菌、破傷風桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、炭疽芽胞桿菌大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、流感嗜血桿菌、擬桿菌、梭桿菌、肺炎克雷白桿菌、變形桿菌其他衣氏放線菌、諾卡菌2.微生物檢驗程序

見第一節(jié)血液感染或有關章節(jié)。取創(chuàng)傷分泌物和膿液作標本；放線菌首先要檢出標本中的硫磺顆粒；檢測結核分枝桿菌作抗酸染色鏡檢；檢測厭氧菌要作厭氧培養(yǎng)。由創(chuàng)傷、手術、侵人性器械操作等外科治療引起的感染最為常見，并日漸增多。四、上呼吸道感染(一)常見病原體

1.革蘭陽性金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌、結核分枝桿菌、白喉棒狀桿菌、厭氧菌、炭疽芽胞桿菌、白假絲酵母菌、放線菌、奮森螺旋體;2.革蘭陰性腦膜炎奈瑟菌、大腸埃希菌、肺炎克雷白桿菌、銅綠假單胞菌、流感嗜血桿菌、腸桿菌、不動桿菌、百日咳桿菌、軍團菌、肺炎支原體

(二)細菌學檢驗程序1.細菌學檢驗見第一節(jié)血液感染及有關章節(jié)。2.病原體檢測只對某些疾病診斷具有意義。由于菌群復雜，正常寄生菌和種類繁多，一份咽拭子分離出來的細菌不一定與疾病有關，另外由于接受藥物治療，使某些細菌受到抑制，可影響陽性檢出率。因此，在分析結果時應緊密結合臨床。3.鼻咽拭子標本的檢測有助于猩紅熱、風濕熱、急性腎小球腎炎病人的臨床診斷；還可檢出化膿鏈球菌、奮森螺旋體、腦膜炎奈瑟菌、麻風桿菌等以協(xié)助診斷；對白喉、百日咳或口腔念珠菌感染的診斷有意義，應結合臨床。

4.呼吸道還可見病毒感染，常見普通感冒或流行性感冒，咽炎和扁桃腺炎等，均應結合臨床進行診斷。五、下呼吸道感染(一)常見病原體1.革蘭陽性金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、肺炎鏈球菌、A群鏈球菌、腸球菌、結核分枝桿菌、白喉棒狀桿菌、炭疽芽胞桿菌、白假絲酵母菌、毛霉、曲霉;

2.革蘭陰性腦膜炎奈瑟菌、黃色球菌、大腸埃希菌、克雷白桿菌、銅綠假單胞菌、流感嗜血桿菌、百日咳桿菌、軍團菌、支原體(二)病原學檢驗程序(1)要嚴格無菌操作,收集晨起第一次清潔中段尿標本，其結果才可靠。(2)標本直接顯微鏡檢查可用1滴尿涂片作染色鏡檢是有意義的方法。如平均每個視野≥1個細菌(表示細菌定量培養(yǎng)≥105／ml)率達90％以上。(3)尿細菌定量培養(yǎng)診斷標準是以細菌數(shù)≥105／ml為真性細菌尿,104-105／ml為可疑陽性，需再復查?？咕幬锩舾行栽囼?/p>

（AST）近年來，由于抗菌藥物的廣泛使用，導致耐藥菌株不斷出現(xiàn)，尤其濫用抗生素造成抗藥突變菌株的大量出現(xiàn)。加強抗菌藥物的實驗室監(jiān)測，測定細菌對抗菌藥物的敏感程度，是擺在臨床醫(yī)生和微生物工作者面前的一項艱巨任務，對于臨床治療中合理選擇用藥、避免濫用藥物、及時有效的控制感染，以及細菌鑒定具有重要的意義。一、意義①可預測抗菌治療的效果，“敏感”治療可能有效；“耐藥”肯定失敗；②指導醫(yī)生選擇使用抗生素，AST的結果為“耐藥”，即應更換藥物；③提供所選擇藥物的依據(jù)；④監(jiān)測耐藥性，分析耐藥菌變遷，掌握耐藥菌感染病流行病學，控制和預防耐藥菌感染發(fā)生和流行。二、試驗常規(guī)抗菌藥物選擇

所選用的藥物是根據(jù)各類細菌對抗菌藥物的敏感性和臨床用藥的具體情況決定。通常同類藥物只選擇一到兩種代表藥物。三、紙片瓊脂擴散法

將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測試菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸收瓊脂中水分溶解后不斷向紙片周圍擴散形成遞減的梯度濃度在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)測試菌的生長被抑制，從而形成無菌生長的透明圈即為抑菌圈。抑菌圈的大小反映測試菌對測定藥物的敏感程度，并與該藥對測試菌的MIC呈負相關關系。四、肉湯稀釋法

將抗菌藥物作不同濃度的定量稀釋，然后與被測菌作用，測定抗菌藥物對細菌的最小抑制濃度（MIC）或最小殺菌濃度（MBC)。抗菌藥物最高稀釋度仍能抑制細菌生長者，該管含藥濃度即為被測菌株的敏感度。五、藥物敏感試驗結果解釋

“敏感”即表示測試菌可被測定藥物常規(guī)劑量給藥后在體內(nèi)達到的血藥濃度所抑制；“耐藥”即表示測試菌不能被在體內(nèi)感染部位可能達到的抗菌藥物濃度所抑制，臨床治療無效?！爸薪椤闭咛崾驹摷毦鷮ΤＲ?guī)用藥體液或組織中的藥物濃度的反應率低于敏感株，使用高于正常給藥量有療效。當細菌對多種藥物敏感時，應根據(jù)感染部位、病情、藥物抗菌作用、及藥物動力學特點選擇抗菌藥物。謝謝！21、要知道對好事的稱頌過于夸大，也會招來人們的反感輕蔑和嫉妒。——培