流式培訓封閉抗體

關于流式培訓封閉抗體第1頁，講稿共24頁，2023年5月2日，星期三主要內容一、流式細胞儀簡介二、人類白細胞抗原（HLA-B27）中的臨床應用三、封閉抗體檢測在臨床中的應用第2頁，講稿共24頁，2023年5月2日，星期三流式細胞術流動細胞測量術FlowCytometry(FCM)Fluorescence-activatedcell-sorting(FACS)第3頁，講稿共24頁，2023年5月2日，星期三流式細胞術第4頁，講稿共24頁，2023年5月2日，星期三流式細胞術快速檢測流動的單細胞或顆粒，達上萬個/每秒檢測物可以是細胞、細菌或各種微粒，0.5-50mm范圍內

多參數(shù)同時分析，F(xiàn)S/SS/FLs(熒光)

可分析，可分選特點特點：第5頁，講稿共24頁，2023年5月2日，星期三人類白細胞抗原系統(tǒng)（HumanLeucocyteAntigen,HLA），俗稱為白細胞血型，是人類的組織相容性抗原，HLA抗原受控于HLA基因。

HLA基因是由一組高度多態(tài)性基因組成的染色體區(qū)域，因其產物代表移植供者與受者相互接受的程度，故又稱其產物為移植抗原或組織相容性抗原。一、HLA簡介第6頁，講稿共24頁，2023年5月2日，星期三HLA基因遺傳區(qū)域位于人類第六號染色體短臂，區(qū)域內包含224個基因座位,已發(fā)現(xiàn)的等位基因數(shù)共1288種。根據(jù)編碼分子的特性不同，可將整個復合體的基因分成：I類、II類、III類。第7頁，講稿共24頁，2023年5月2日，星期三I類基因：區(qū)位于著絲點的遠端，主要包括HLA-A、B、C三個位點，各位點有數(shù)目不同的等位基因，HLA-B27是B位點的一個等位基因。II類基因區(qū)：位于著絲點的近端，主要由DR、DQ、DP三個亞區(qū)構成，每個亞區(qū)又分若干個位點。在B細胞和上表達，這兩類抗原都與移植有關III類基因區(qū)：含有編碼補體成分C2、C4、B因子及TNF、熱休克蛋白和21羥化酶的基因，其產物是一些可溶性蛋白質。第8頁，講稿共24頁，2023年5月2日，星期三一、HLA-B27HLA-B27抗原屬于HLA-Ⅰ類抗原，由α和β兩條肽鏈組成。第6號染色體的HLA-Ⅰ類基因編碼α鏈，15號染色體編碼β鏈?；旧媳磉_在機體所有有核細胞上，尤其是淋巴細胞表面含量豐富。目前，在HLA與疾病的關聯(lián)研究中，較有臨床應用價值的當數(shù)HLA-B27與強直性脊柱炎的關聯(lián)。在診斷和鑒別強直性脊柱炎中有重要的應用價值。第9頁，講稿共24頁，2023年5月2日，星期三

二、HLA-B27檢測方法1.HLA-B27抗原檢測CDC:微量淋巴細胞毒法FCM:流式細胞學法2.HLA-B27基因學檢測熒光定量PCR第10頁，講稿共24頁，2023年5月2日，星期三（一）微量淋巴細胞毒法1.原理：待檢的淋巴細胞表面的HLA-B27抗原與已知的HLA-B27抗體結合，在補體的參入下，導致細胞膜溶解，能透過染料使細胞著色，在顯微鏡下判斷HLA-B27為陽性，不著色為陰性。2.方法學應用評價：該方法結果穩(wěn)定，可靠，不需要特殊儀器，是目前通用的方法，一般實驗室均可開展。第11頁，講稿共24頁，2023年5月2日，星期三第12頁，講稿共24頁，2023年5月2日，星期三（二）流式細胞學法1.原理：利用熒光標記的抗B27的單抗與淋巴細胞表面B27抗原結合，使細胞帶有熒光強度，用流式細胞儀檢測，判斷B27抗原陽性或陰性。2.方法學應用評價：優(yōu)點：無須分離淋巴細胞，操作簡便、快速、標本用量少，自動化程度高，特異性高，穩(wěn)定性好，重復性高，結果判斷準確，減少了人為因素的影響，為目前較為理想的方法。缺點:是儀器昂貴，目前只在較大醫(yī)院應用。第13頁，講稿共24頁，2023年5月2日，星期三（三）熒光定量PCR1.實驗原理：在PCR反應體系中，加入熒光染料，特異地摻入DNA雙鏈后發(fā)射熒光信號，而不摻入熒光染料的DNA分子不會發(fā)射任何熒光信號，通過檢測熒光信號的強度，達到檢測PCR產物擴增的目的。2.優(yōu)點：基因水平的檢測，直接對HLA-B27原基因進行擴增分型，靈敏度高，特異性強。缺點：需要特定的實驗儀器及嚴格的實驗條件和熟練操作技術，在臨床上普遍開展此項檢查有一定的難處。第14頁，講稿共24頁，2023年5月2日，星期三四、HLA-B27檢測與強直性脊柱炎應用評價

1.普通人群中HLA-B27陽性率有種族與地區(qū)差異：不同作者報道不盡一致，白種人4%-13%，黑種人2%左右，日本人0.2%，中國人2%-19%。2.B27與AS強相關聯(lián)，中國人AS患者HLA-B27陽性率65-100%。絕大多數(shù)B27陽性者并未患AS，所以，B27檢測不可以作為AS的篩查指標。3.HLA-B27表達已成為臨床診斷與鑒別診斷血清陰性脊柱關節(jié)病的最常用實驗室檢查指標。第15頁，講稿共24頁，2023年5月2日，星期三4.AS診斷主要靠臨床檢查和影像學改變，提示的雙側骶髂關節(jié)炎和脊柱炎。結合HLA-B27陽性，診斷AS。HLA-B27陰性不能排除AS。5.如果癥狀和體征脊柱關節(jié)病變發(fā)生的可能性超過50%，那么，B27陽性顯著增加正確診斷的機會。6.一級親屬HLA-B27出現(xiàn)率25%-100%，預測患者家屬成員發(fā)生AS的可能性。治療性選擇胎兒。7.AS與HLA-B27高度相關，表明AS是一種遺傳易感性疾病。第16頁，講稿共24頁，2023年5月2日，星期三二、流式在封閉抗體中的應用封閉抗體檢測概念為什么做怎樣做如何解讀第17頁，講稿共24頁，2023年5月2日，星期三基本概念反復自然流產

自然流產連續(xù)或不連續(xù)發(fā)生2次或2次以上者，約占總妊娠數(shù)的0.5%~3.0%病因

解剖因素、遺傳因素、內分泌因素、感染因素、男方因素、免疫學因素（>50%）第18頁，講稿共24頁，2023年5月2日，星期三RSA

自身免疫型：與自身免疫病相關的自身抗體相關，如SLE、RA等同種免疫型：封閉抗體，如：抗HLA抗體、抗滋養(yǎng)細胞淋巴細胞交叉反應抗原抗體（TLX）;非特異性BA、特異性非細胞毒抗體、抗獨特型抗體等

主動免疫療法所產生的BA部分是針對TLX的，因此，當夫妻雙方TLX相似時，不能激發(fā)母體產生BA

第19頁，講稿共24頁，2023年5月2日，星期三封閉抗體的作用

1.一種抗配偶淋巴細胞的特異性IgG類抗體，存在于正常孕婦的血清中，能夠抑制淋巴細胞反應，封閉母體淋巴細胞對胚胎滋養(yǎng)層的細胞毒作用。2.防止輔助性T細胞識別胎兒抗原的抑制物，并可阻止母親免疫系統(tǒng)對胚胎的攻擊。3.封閉同種抗原刺激的淋巴細胞產生巨噬細胞移動抑制因子。封閉抗體的作用第20頁，講稿共24頁，2023年5月2日，星期三父系抗原母體淋巴細胞封閉抗體沒有封閉抗體胎兒不受母體攻擊胎兒被母體攻擊，導致流產第21頁，講稿共24頁，2023年5月2日，星期三封閉抗體檢測方法-如何做細胞毒試驗ELISA流式細胞術第22頁，講稿共24頁，2023年5月2日，星期三流式細胞術檢測封閉抗體流程標本：男女雙方EDTA抗凝全血方法：

室溫孵育裂解紅細胞上機

計算公式：封閉效率=對照管CD%-實驗管CD%

結