MiR-216a-3p靶向COX-2和ALOX5抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖的機(jī)制研究

MiR-216a-3p靶向COX-2和ALOX5抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖的機(jī)制研究

摘要：MiR-216a-3p因其功能的多樣性而受到關(guān)注，其在多種癌癥中的表達(dá)變化也引起了研究人員的興趣。本研究探討了MiR-216a-3p在結(jié)直腸癌中的作用及其靶向COX-2和ALOX5抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖的機(jī)制。結(jié)果表明，MiR-216a-3p的表達(dá)水平在結(jié)直腸癌中下調(diào)。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，MiR-216a-3p可通過靶向COX-2和ALOX5基因抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖。這些結(jié)果表明，MiR-216a-3p可以成為結(jié)直腸癌的新靶點(diǎn)。

關(guān)鍵詞：MiR-216a-3p，結(jié)直腸癌，COX-2，ALOX5，增殖

Introduction

MiRNAs是一類長(zhǎng)度約為20-22個(gè)核苷酸的小分子RNA，被廣泛認(rèn)為參與許多生物學(xué)過程的調(diào)控。MiRNAs對(duì)于細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、凋亡、細(xì)胞周期調(diào)控等過程發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。近年來，越來越多的研究表明，MiRNAs在許多癌癥中具有重要作用。MiRNAs可以通過靶向增殖、凋亡、侵襲、轉(zhuǎn)移等相關(guān)基因的表達(dá)來影響癌癥的發(fā)生和發(fā)展。

MiR-216a-3p被認(rèn)為在不同類型的癌癥中表現(xiàn)出不同的作用。在腫瘤抑制作用方面，MiR-216a-3p被報(bào)道能夠抑制腫瘤細(xì)胞增殖和侵襲。然而，在一些癌癥中，MiR-216a-3p還表現(xiàn)出促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的作用，如乳腺癌、胃癌和前列腺癌等。

結(jié)直腸癌是全球發(fā)病率較高的惡性腫瘤之一，其發(fā)生和發(fā)展涉及復(fù)雜的分子機(jī)制。COX-2和ALOX5是結(jié)直腸癌發(fā)生和發(fā)展過程中最為常見的靶點(diǎn)。COX-2、ALOX5是通過調(diào)節(jié)各種細(xì)胞信號(hào)通路影響腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。然而，MiR-216a-3p對(duì)于結(jié)直腸癌中COX-2和ALOX5表達(dá)的調(diào)節(jié)機(jī)制還不清楚。因此，本研究旨在探討MiR-216a-3p在結(jié)直腸癌中的功能以及其對(duì)COX-2和ALOX5的調(diào)節(jié)機(jī)制。

結(jié)果

MiR-216a-3p在結(jié)直腸癌中的表達(dá)

為了研究MiR-216a-3p在結(jié)直腸癌中的表達(dá)模式，我們采用了qPCR法檢測(cè)了結(jié)直腸癌組織和相鄰正常組織中MiR-216a-3p的表達(dá)水平。結(jié)果表明MiR-216a-3p在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)水平顯著低于相鄰正常組織（圖1A）。這表明MiR-216a-3p在結(jié)直腸癌發(fā)生和發(fā)展過程中可能扮演著抑制作用。

MiR-216a-3p靶向COX-2和ALOX5

為了確定MiR-216a-3p對(duì)COX-2和ALOX5的作用，我們使用了多種分子生物學(xué)技術(shù)來研究。通過文獻(xiàn)調(diào)查和MiRanda等靶向預(yù)測(cè)軟件的使用，我們確定了COX-2和ALOX5是MiR-216a-3p的潛在靶向基因。

為了驗(yàn)證COX-2和ALOX5是否是MiR-216a-3p的直接靶向基因，我們進(jìn)行了雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明MiR-216a-3p通過與COX-2和ALOX5的3’UTR結(jié)合，能夠明顯減少其熒光素酶信號(hào)的強(qiáng)度（圖2A&B），表明COX-2和ALOX5是MiR-216a-3p的直接靶向基因。此外，Westernblot實(shí)驗(yàn)顯示MiR-216a-3p顯著抑制了COX-2和ALOX5蛋白的表達(dá)（圖2C&D）。

MiR-216a-3p抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖

為了研究MiR-216a-3p對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖的影響，我們分別轉(zhuǎn)染了MiR-216a-3p-mimics和MiR-NC到HT-29和HCT116細(xì)胞中，并采用MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了細(xì)胞增殖能力。結(jié)果顯示MiR-216a-3p-mimics轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞增殖能力顯著下降（圖3A&B），說明MiR-216a-3p對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖具有明顯的抑制作用。

COX-2和ALOX5抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖

為了研究COX-2和ALOX5對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞的影響，我們使用CAY10585和MK886兩種COX-2和ALOX5的抑制劑處理HT-29和HCT116細(xì)胞，并檢測(cè)了細(xì)胞增殖能力。結(jié)果顯示，通過給予CAY10585和MK886的處理，可以抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖（圖4A&B）。這表明COX-2和ALOX5在結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖中發(fā)揮著重要的作用。

MiR-216a-3p靶向COX-2和ALOX5抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖

為了確定MiR-216a-3p抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖的機(jī)制，我們使用了COX-2和ALOX5的抑制劑以及MiR-216a-3p-mimics來研究。結(jié)果顯示MiR-216a-3p-mimics和CAY10585、MK886的處理分別可抑制HT-29和HCT116細(xì)胞的增殖，而MiR-216a-3p-mimics聯(lián)合CAY10585和MK886的處理則進(jìn)一步抑制了細(xì)胞增殖（圖5A&B）。這表明MiR-216a-3p通過靶向COX-2和ALOX5，抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖。

討論

在本研究中，我們證實(shí)了MiR-216a-3p對(duì)于結(jié)直腸癌中COX-2和ALOX5表達(dá)的調(diào)節(jié)作用。我們驗(yàn)證了COX-2和ALOX5是MiR-216a-3p的直接靶向基因，并通過多種實(shí)驗(yàn)方法驗(yàn)證了MiR-216a-3p對(duì)COX-2和ALOX5的抑制作用。此外，通過MTT實(shí)驗(yàn)和COX-2和ALOX5的抑制實(shí)驗(yàn)，我們證實(shí)COX-2和ALOX5在結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖中發(fā)揮重要作用。通過MiR-216a-3p-mimics、CAY10585和MK886的處理，我們發(fā)現(xiàn)MiR-216a-3p通過靶向COX-2和ALOX5，抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖。

結(jié)論

在結(jié)直腸癌發(fā)生和發(fā)展中，MiR-216a-3p的表達(dá)水平下調(diào)，其可通過靶向COX-2和ALOX5抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖。我們的研究為結(jié)直腸癌的治療提供了新的靶點(diǎn)和潛在治療策略。

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