第七章外源化學(xué)物致突變作用

第七章外源化學(xué)物致突變作用第1頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第七章

外源化學(xué)物致突變作用

第2頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月案例3分析討論鐮刀型細(xì)胞貧血是遺傳物質(zhì)DNA中血紅蛋白基因序列中一個(gè)CTT變成CAT，即發(fā)生基因顛換，血紅蛋白β鏈中N端第六位氨基酸由Glu變?yōu)閂al，血紅蛋白分子發(fā)生遺傳缺陷，以至產(chǎn)生病變。這種疾病可以遺傳。通過(guò)這個(gè)案例，一方面了解從堿基改變，到編碼產(chǎn)物的改變，再到表現(xiàn)型的改變最后到健康效應(yīng)的出現(xiàn)之間的因果關(guān)系。另一方面要認(rèn)識(shí)到基因突變的發(fā)生會(huì)引起嚴(yán)重的健康危害。第3頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第四節(jié)

機(jī)體對(duì)致突變作用的影響第4頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月遺傳物質(zhì)在外源性因素的損傷仍能

代代相傳的原因：DNA可執(zhí)行高保真度的復(fù)制，對(duì)復(fù)制中的錯(cuò)誤能及時(shí)修復(fù)，從而達(dá)到高度的保真。細(xì)胞能夠通過(guò)對(duì)DNA損傷的修復(fù)而保護(hù)親代DNA鏈，使之避免由于內(nèi)、外各種因素的損傷而發(fā)生改變。第5頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、DNA損傷的修復(fù)（一）直接修復(fù)：依賴(lài)酶的作用。光復(fù)活：依賴(lài)光的過(guò)程，通過(guò)光裂合酶切下DNA上嘧啶二聚體，將毗連的嘧啶接回原結(jié)構(gòu)上?？梢酝耆迯?fù)紫外線誘發(fā)的嘧啶二聚體，使其在原位上恢復(fù)為單體。“適應(yīng)性”反應(yīng)：通過(guò)烷基轉(zhuǎn)移酶修復(fù)DNA烷化損傷，保護(hù)細(xì)胞免受烷化劑的毒性影響。第6頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）堿基切除修復(fù)

DNA糖基酶作用于受損的DNA，識(shí)別并切除損傷堿基，通過(guò)切斷堿基與脫氧核糖連接的鍵，使受損的堿基脫落，留下一個(gè)無(wú)嘌呤或無(wú)嘧啶的AP位點(diǎn)。AP內(nèi)切酶將DNA鏈切斷，由聚合酶和連接酶完成修復(fù)過(guò)程。

堿基切除修復(fù)是細(xì)胞對(duì)堿基氧化損傷的主要防御系統(tǒng)。第7頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）核苷酸切除修復(fù)

使細(xì)胞具有從DNA上移除較大損傷。所有生物體最常見(jiàn)的修復(fù)機(jī)制?；究梢孕迯?fù)所有種類(lèi)的DNA損傷。

過(guò)程：內(nèi)切酶，①損傷識(shí)別；②損傷兩側(cè)切除損傷鏈；③切除寡聚核苷酸；④修復(fù)合成填補(bǔ)產(chǎn)生的缺口；⑤DNA連接酶封閉，恢復(fù)原有DNA序列。

第8頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（四）雙鏈斷裂修復(fù)

未修復(fù)的雙鏈斷裂啟動(dòng)DNA損傷反應(yīng)系統(tǒng)，使細(xì)胞阻滯于周期的某一期或誘發(fā)細(xì)胞凋亡。

不是修復(fù)，是一種耐受過(guò)程，以容忍損傷繼續(xù)存在和高突變率情況來(lái)?yè)Q取細(xì)胞繼續(xù)生存的耐受過(guò)程。第9頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

（五）交聯(lián)修復(fù)：

當(dāng)細(xì)胞內(nèi)發(fā)生DNA鏈內(nèi)交聯(lián)，會(huì)造成雙鏈的斷裂，機(jī)體啟動(dòng)無(wú)誤交聯(lián)修復(fù)或易誤交聯(lián)修復(fù)。第10頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月小結(jié)修復(fù)的結(jié)果不全是有益的。修復(fù)的途徑是多種。修復(fù)與突變不可分。損傷－修復(fù)－突變第11頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、遺傳因素對(duì)致突變作用的影響（一）代謝酶遺傳多態(tài)性1、氧化代謝酶

芳烴羥化酶：催化多環(huán)芳烴等致癌物活化。2、酯酶

環(huán)氧水化酶：活化酶，參與苯并（a）比代謝為終致癌物。3、谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶

缺乏易患肺癌第12頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）修復(fù)功能的個(gè)體差異

修復(fù)酶的多態(tài)性造成機(jī)體對(duì)損傷的反應(yīng)不一。

1、O6－甲基鳥(niǎo)嘌呤－DNA－甲基轉(zhuǎn)移酶：功能：恢復(fù)堿基的原有配對(duì)性。缺乏或活性降低：腫瘤發(fā)生

2、聚（二磷酸腺苷－核糖）多聚酶：功能：氧化損傷的修復(fù)方式，對(duì)外來(lái)因素造成基因突變和腫瘤發(fā)生可產(chǎn)生抑制或促進(jìn)作用。第13頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月小結(jié)遺傳因素是化學(xué)毒物的作用靶部位，是決定化學(xué)毒物毒作用性質(zhì)和強(qiáng)度的一個(gè)重要因素。遺傳因素對(duì)致突變作用的影響的研究，是預(yù)防和治療腫瘤的新思路。第14頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第五節(jié)觀察外源化學(xué)物致突變作用的基本方法***第15頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月致突變?cè)囼?yàn)的應(yīng)用中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)博士張學(xué)明:煎炸魚(yú)中合有強(qiáng)致癌物－－雜環(huán)胺。雜環(huán)胺的形成量主要受煎炸、烤的溫度影響，其次是煎烤時(shí)間。煎炸溫度小于200℃，雜環(huán)胺的形成量就很少；如果煎炸溫度超過(guò)200℃，煎炸時(shí)間少于2分鐘，雜環(huán)胺的形成量也很少；在煎炸的魚(yú)外面掛上一層淀粉糊再炸，也能預(yù)防雜環(huán)胺形成。美國(guó)加州科研人員發(fā)現(xiàn)，高溫烹調(diào)或油炸的肉食中合有突變?cè)矗瑢?duì)經(jīng)過(guò)高溫烹調(diào)的牛肉、雞、魚(yú)等進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)果測(cè)出10種致癌化合物，這次研究證實(shí)，突變?cè)床皇怯捎谔炕鸬葻嵩磳⑷鉄?，而是肉食本身成分在加?00℃以上時(shí)的產(chǎn)物。

第16頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月檢測(cè)化學(xué)物的致突變性的目的：鑒定生殖細(xì)胞和體細(xì)胞的致突變物；預(yù)測(cè)潛在致癌物環(huán)境致突變物的監(jiān)測(cè)與評(píng)價(jià)。第17頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一.觀察項(xiàng)目的選擇（一）觀察的效應(yīng)終點(diǎn)類(lèi)型遺傳學(xué)終點(diǎn)(geneticendpoint)：

－基因突變和染色體畸變的檢測(cè)可直接反映外源化學(xué)物的致突變性，是評(píng)價(jià)化學(xué)物致突變性唯一可靠的方法。有許多試驗(yàn)所觀察到的現(xiàn)象并不反映基因突變,染色體畸變和染色體分離異常,而僅反映致突變過(guò)程中發(fā)生的其他事件。因此，將試驗(yàn)觀察到的現(xiàn)象所反映的各種事件統(tǒng)稱(chēng)為遺傳學(xué)終點(diǎn)。

包括：基因突變，染色體畸變，染色體組畸變，DNA原始損傷

第18頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）成套觀察項(xiàng)目1.原則①選擇的遺傳毒性試驗(yàn)應(yīng)包括每一類(lèi)型的遺傳學(xué)終點(diǎn)。②應(yīng)包括多種進(jìn)化程度不同的物種,如原核細(xì)胞,低等和高等真核細(xì)胞。③體內(nèi)試驗(yàn)與體外試驗(yàn)配合。

第19頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.HIC(1997)對(duì)于藥品的遺傳毒性評(píng)價(jià)建議的實(shí)驗(yàn)組合為：細(xì)菌基因突變?cè)囼?yàn)體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞染色體畸變實(shí)驗(yàn)或體外小鼠淋巴瘤細(xì)胞tk試驗(yàn)；體內(nèi)嚙齒類(lèi)造血細(xì)胞染色體損傷試驗(yàn)；對(duì)標(biāo)準(zhǔn)致突變實(shí)驗(yàn)組合的結(jié)果進(jìn)一步研究時(shí)，可以選擇其他一些實(shí)驗(yàn)，如DNA加合物測(cè)定、DNA鏈斷裂檢測(cè)、DNA修復(fù)實(shí)驗(yàn)等。第20頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、常用的致突變?cè)囼?yàn)

細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)

微核試驗(yàn)

染色體畸變分析

姐妹染色單體交換試驗(yàn)

果蠅伴性隱性致死試驗(yàn)

顯性致死試驗(yàn)

程序外DNA合成試驗(yàn)

單細(xì)胞凝膠電泳第21頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月(一)細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)－Ames試驗(yàn)***是利用突變體的測(cè)試菌株，觀察受試物能否糾正或補(bǔ)償突變體所攜帶的突變改變，判斷其突變型。常用的指示菌株：鼠傷寒沙門(mén)菌和大腸桿菌。廣泛應(yīng)用鼠傷寒沙門(mén)菌突變?cè)囼?yàn)。第22頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

(一)細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)－Ames試驗(yàn)***

1.原理：是人工誘變的突變株在組氨酸操縱子中有一個(gè)突變，突變的菌株必需依賴(lài)外源性的組氨酸才能生長(zhǎng)，而在無(wú)組氨酸的選擇性培養(yǎng)基上不能存活。致突變物可使其基因發(fā)生回復(fù)突變，使它在缺乏組氨酸的培養(yǎng)基上也能生長(zhǎng)。計(jì)算誘發(fā)的回復(fù)菌落數(shù)即可判斷化學(xué)毒物的致突變性。第23頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

2.常用菌株：鼠傷寒沙門(mén)菌組氨酸缺陷型突變株為指示微生物。目前推薦使用

TA100TA102TA97TA98

為增強(qiáng)對(duì)誘變物的敏感性加入一些附加突變：試驗(yàn)中可供選用的測(cè)試菌株有多種，所攜帶的突變?cè)诓煌幕蛑?，各有不同的特征，有的測(cè)定堿基置換，有的測(cè)定移碼突變，有的兩者都可測(cè)定，根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐涮走x擇。第24頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月(一)Ames試驗(yàn)3.方法：點(diǎn)試法：用作定性試驗(yàn)，適用于短期大量篩選

陽(yáng)性陰性表層培養(yǎng)基＋指示菌±S9培養(yǎng)48小時(shí)受試物10μl第25頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月平板摻入法：標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)，用作定量測(cè)定

培養(yǎng)48小時(shí)陽(yáng)性陰性表層培養(yǎng)基＋指示菌±S9＋受試物第26頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月(二)微核試驗(yàn)(micronucleustest,MNT)觀察受試物產(chǎn)生微核發(fā)生率或有微核的細(xì)胞率為觀察指標(biāo)檢測(cè)化學(xué)物染色體損害能力的試驗(yàn)，DNA斷裂劑，非整倍體誘變劑。微核（micronucleus）

：染色體或染色單體的無(wú)著絲點(diǎn)斷片或因紡錘體受損傷而丟失的整個(gè)染色體，在細(xì)胞分裂的后期仍留在子細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，單獨(dú)形成一個(gè)或幾個(gè)規(guī)則的次核，包含在子細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，比主核小。第27頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

正常細(xì)胞、微核細(xì)胞第28頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

正常細(xì)胞、微核細(xì)胞和核異常細(xì)胞

指示正常細(xì)胞；指示微核細(xì)胞；指示核異常細(xì)胞（2.5×100）第29頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月骨髓多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)

大多數(shù)類(lèi)型的細(xì)胞都可形成微核，但有核細(xì)胞的胞質(zhì)少，微核與正常核葉及核的突起難以鑒別。常規(guī)：骨髓多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)

多染紅細(xì)胞是成紅細(xì)胞發(fā)展為成熟紅細(xì)胞時(shí)，主核已排出，微核仍保留在細(xì)胞質(zhì)中，成為多染紅細(xì)胞（polychromaticerythrocytesPCE）,這些細(xì)胞保持其嗜堿性約24小時(shí)，然后成為正染紅細(xì)胞，并進(jìn)入外周血。計(jì)數(shù)骨髓有微核多染紅細(xì)胞率可判斷受試物對(duì)骨髓細(xì)胞的染色體損傷作用。第30頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)的不足某些化學(xué)物在骨髓難以達(dá)到有效濃度。骨髓中的SCE是動(dòng)態(tài)平衡，其不斷成熟為紅細(xì)胞，紅細(xì)胞又衰老死亡?；瘜W(xué)物毒物主要在肝臟活化，其活化中間產(chǎn)物可能在到達(dá)骨髓之前消失。僅觀察體細(xì)胞其結(jié)果外推其他組織應(yīng)慎重。第31頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月微核實(shí)驗(yàn)進(jìn)展體外微核試驗(yàn)：中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞/中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞/中國(guó)倉(cāng)鼠成纖維細(xì)胞，易于操作和控制受試物濃度。外周血微核實(shí)驗(yàn)：可能成為人群觀察化學(xué)毒物遺傳毒性的一種手段。雙核細(xì)胞法：提高微核的靈敏度。免疫熒光染色法、熒光原位雜交：靈敏度高，還可判斷來(lái)源（斷片還是染色體）。第32頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月(三)染色體畸變分析

chromosomeaberrationassay觀察染色體形態(tài)結(jié)構(gòu)和數(shù)目改變，又稱(chēng)細(xì)胞遺傳學(xué)試驗(yàn)。觀察：用顯微鏡檢查細(xì)胞分裂中期相染色體畸變和染色體分離異常。結(jié)果：裂隙，斷裂，斷片，微小體，染色體環(huán)等。第33頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月常染色體異常Downsyndrome

(trisomy21):先天愚型或唐氏綜合征

第34頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三體綜合征（13三體）：嚴(yán)重的眼，腦，循環(huán)系統(tǒng)缺陷以及腭裂。兒童生活很少超過(guò)幾個(gè)月。第35頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月(四)姐妹染色單體交換試驗(yàn)(sister-chromatidexchange,SCE)

指染色體同源座位上DNA復(fù)制產(chǎn)物的相互交換,其頻率與DNA斷裂和修復(fù)有關(guān)。檢測(cè)DNA損傷的靈敏指標(biāo)。原理：在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入5-溴脫氧尿嘧啶（5-BrdU，嘧啶類(lèi)似物），在DNA合成期可與胸苷競(jìng)爭(zhēng)摻入DNA中，經(jīng)兩個(gè)分裂周期后，兩條染色單體，其中一條DNA鏈的雙鏈內(nèi)T被5-溴脫氧尿嘧啶核苷取代，另一條只有一條鏈被取代。用染色劑處理，使雙鏈含BrdU的染色單體著色淺淡，單鏈含BrdU的染色單體著色深。當(dāng)姐妹染色單體間發(fā)生同源片段交換時(shí)，就可以根據(jù)每條染色單體夾雜著深淺不一的著色片段加以區(qū)分。第36頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月(五)果蠅伴性隱性致死試驗(yàn)

原理

根據(jù)隱性基因在伴性遺傳中的交叉遺傳特征，即雄蠅的X染色體傳給F1代雌蠅。又通過(guò)F1代傳給F2代雄蠅。位于X染色體上的隱性基因能在半合子雄蠅中表現(xiàn)出來(lái)。據(jù)此推斷致死突變的存在。結(jié)果：

能檢出點(diǎn)突變，小缺失，重排。優(yōu)點(diǎn)：判斷突變終點(diǎn)客觀、不需活化。不足：與哺乳動(dòng)物差異較大。第37頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月(六)顯性致死試驗(yàn)

1.原理對(duì)雄性動(dòng)物染毒，觀察一個(gè)精子發(fā)育周期中各個(gè)階段雌鼠出現(xiàn)受精卵在著床前死亡和胚胎早期死亡。致突變物引起哺乳動(dòng)物生殖細(xì)胞染色體發(fā)生結(jié)構(gòu)和數(shù)目變化。2.檢測(cè)整體哺乳動(dòng)物生殖細(xì)胞遺傳性（染色體畸變）損傷的方法。是評(píng)價(jià)化學(xué)毒物對(duì)雄性動(dòng)物的生殖細(xì)胞遺傳毒性較好的方法之一。不足：靈敏度差，動(dòng)物數(shù)量大，一定的受孕率。第38頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（七）程序外DNA合成試驗(yàn)

(unscheduleDNAsynthesis，

UDS)當(dāng)DNA受損傷時(shí)，損傷修復(fù)的DNA合成主要在S期以外的其他細(xì)胞周期，稱(chēng)程序外DNA合成

**。原理：觀察分離或培養(yǎng)的細(xì)胞，加入標(biāo)記DNA合成原料，如3H-胸苷，測(cè)定S期以外3H-胸苷摻入胞核的量，判斷受試物是否造成DNA損傷。因此發(fā)現(xiàn)UDS增高，即表明DNA發(fā)生過(guò)損傷。第39頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月(八)單細(xì)胞凝膠電泳試驗(yàn)(singlecellgelelectrophoresis，SCGE)（彗星試驗(yàn)(cometassay)）一種快速檢測(cè)哺乳動(dòng)物細(xì)胞DNA損傷的實(shí)驗(yàn)方法。

原理：DNA損傷后，斷裂的DNA片段比大片段DNA遷移的更快，電泳后出現(xiàn)彗星狀，即可判斷DNA損傷。

細(xì)胞DNA不同損傷程度的彗星電泳圖

根據(jù)“彗星”尾部占頭部的大小百分比將細(xì)胞損傷分為：0-無(wú)損傷<5%Ⅰ-輕度損傷5%-20%Ⅱ-中度損傷21%-40%Ⅲ-重度損傷41%-95%Ⅳ-完全損傷>95%40第40頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月幾種遺傳毒理學(xué)試驗(yàn)的哺乳動(dòng)物性細(xì)胞

致突變物篩檢可靠性評(píng)價(jià)

試驗(yàn)靈敏性(%)特異性(%)準(zhǔn)確性(％)

Ames試驗(yàn)17/19(89%)3/10(30%)20/29(69%)

骨髓細(xì)胞染色體畸18/18(100%)2/10(20%)20/28(71%)

變?cè)囼?yàn)或微核試驗(yàn)顯性致死試驗(yàn)18/18(100%)8/10(80%)26/28(93%)第41頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月常用的遺傳毒理學(xué)試驗(yàn)的特點(diǎn)試驗(yàn)指示生物細(xì)胞類(lèi)型染毒途徑遺傳學(xué)終點(diǎn)細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)原核-體外基因突變哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因突變?cè)囼?yàn)哺乳動(dòng)物細(xì)胞體細(xì)胞體外基因突變?nèi)旧w畸變?cè)囼?yàn)哺乳動(dòng)物細(xì)胞體細(xì)胞體外染色體損傷哺乳動(dòng)物：骨髓體細(xì)胞體內(nèi)染色體損傷哺乳動(dòng)物：睪丸性細(xì)胞體內(nèi)染色體損傷微核試驗(yàn)哺乳動(dòng)物：骨髓體細(xì)胞體內(nèi)染色體損傷/非整倍體顯性致死試驗(yàn)哺乳動(dòng)物性細(xì)胞體內(nèi)染色體損傷程序外DNA合成試驗(yàn)哺乳動(dòng)物：大鼠肝體細(xì)胞體內(nèi)DNA損傷姐妹染色單體交換試驗(yàn)哺乳動(dòng)物細(xì)胞體細(xì)胞體外DNA損傷第42頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（九）觀察方法的新進(jìn)展（自學(xué)）

1.轉(zhuǎn)基因小鼠致突變檢測(cè)系統(tǒng)

2.微核自動(dòng)化檢測(cè)技術(shù)

3.熒光原位雜交技術(shù)

第43頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月致突變?cè)囼?yàn)的應(yīng)用實(shí)例——如何設(shè)計(jì)？分組（化合物）選擇致突變實(shí)驗(yàn)組合體外，體內(nèi)觀察遺傳學(xué)終點(diǎn)做出評(píng)價(jià)第44頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月致突變實(shí)驗(yàn)的應(yīng)用實(shí)例第45頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第46頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第47頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月致突變實(shí)驗(yàn)的應(yīng)用實(shí)例——空氣污染家庭裝潢有害氣體致小鼠遺傳毒性實(shí)驗(yàn)

第48頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、致突變?cè)囼?yàn)中的一些問(wèn)題（一）陰性和陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)立陰性對(duì)照

－為了獲取試驗(yàn)的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。陽(yáng)性對(duì)照

－證明試驗(yàn)方法的可靠；驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)者在本實(shí)驗(yàn)條件下，完成技術(shù)和鑒定致突變物的能力；證實(shí)經(jīng)一段時(shí)間后，本試驗(yàn)的重復(fù)性。第49頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

(二)體外試驗(yàn)的活化系統(tǒng)

1．哺乳動(dòng)物細(xì)胞介導(dǎo)使用完整的細(xì)胞，特別是大鼠肝原代細(xì)胞，與測(cè)試細(xì)菌或細(xì)胞一起培養(yǎng)。

特點(diǎn)：這也是一種活化系統(tǒng)。它有完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和各種酶及內(nèi)源性輔助因子，代謝能力優(yōu)于無(wú)細(xì)胞系統(tǒng)如S9。

不足：但不如體內(nèi)活化系統(tǒng)。

第50頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

2．S9

S9指經(jīng)酶誘導(dǎo)劑處理后制備的肝勻漿，再經(jīng)9000g離心分離所得上清液，加上適當(dāng)?shù)木彌_液和輔助因子。

特點(diǎn)：它主要含有混合功能氧化酶(MFO)，是國(guó)內(nèi)常規(guī)應(yīng)用于體外致突變?cè)囼?yàn)的代謝活化系統(tǒng)。

缺點(diǎn)：S9隨實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬或器官不同而有差異；S9含有的大量親核物質(zhì)有可能影響試驗(yàn)的敏感性。

第51頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3．純化酶和基因工程純化酶：應(yīng)用純化細(xì)胞色素P-450、谷胱苷肽轉(zhuǎn)移酶及過(guò)氧化物水解酶，可嚴(yán)格控制代謝產(chǎn)物誘發(fā)突變的條件，但技術(shù)難度大。

基因工程：將人的細(xì)胞色素P-450基因，插入組合細(xì)胞內(nèi)，用上述細(xì)胞進(jìn)行致突變?cè)囼?yàn)，使細(xì)胞具有代謝活化系統(tǒng)。

不足：不可能完全取代整體動(dòng)物代謝。

第52頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

（三）致突變?cè)囼?yàn)與致癌試驗(yàn)的關(guān)系已知致突變作用是致癌機(jī)制之一。利用致突變?cè)囼?yàn)預(yù)測(cè)致癌性時(shí)，應(yīng)該考慮敏感度與特異性