病毒轉(zhuǎn)基因技術(shù)原理-概述課件

課程背景1980s,轉(zhuǎn)基因技術(shù)隨分子克隆技術(shù)出現(xiàn)2003年，我國(guó)SFDA批準(zhǔn)了全球第一種基因治療藥物“今又生”上市。（StateFoodandDrugAdministration）2005年，我國(guó)SFDA批準(zhǔn)了全球第二種基因治療藥物HB101上市。（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局）2009年12月18日出版的《Science》雜志將”returnofgenetherapy”作為年度重大的科學(xué)突破之一。2012年12月歐盟批準(zhǔn)地全球第三種基因治療藥物上市。迄今，多達(dá)1900種基因治療臨床試驗(yàn)方案并正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)。轉(zhuǎn)基因技術(shù)正成為分子醫(yī)學(xué)的一種革命性的技術(shù)手段，并已成為治療許多遺傳性和獲得性疾病的潛在希望所在。1精選課件問題社會(huì)公眾對(duì)健康需求的增加生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)研究的推動(dòng)對(duì)轉(zhuǎn)基因技術(shù)的安全和倫理關(guān)注持續(xù)增加。2精選課件課程內(nèi)容分為理論課與實(shí)踐課轉(zhuǎn)基因技術(shù)概述病毒轉(zhuǎn)基因技術(shù)原理、純化制備技術(shù)和醫(yī)學(xué)應(yīng)用生物安全醫(yī)學(xué)倫理問題表達(dá)外源基因的復(fù)制缺陷型重組腺病毒的構(gòu)建和鑒定DNA病毒RNA病毒雜合病毒3精選課件第一章轉(zhuǎn)基因技術(shù)概述

范雄林86-27-83650639xlfan@華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系研究生高水平課程——《病毒轉(zhuǎn)基因技術(shù)原理》4精選課件主要內(nèi)容基因轉(zhuǎn)移方式真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)基因技術(shù)外源基因表達(dá)讀框的構(gòu)建原理5精選課件1.定義基因轉(zhuǎn)移（genetransfer）:

自然發(fā)生轉(zhuǎn)基因技術(shù)(transgenetechnology):

人工利用6精選課件2.常見的基因轉(zhuǎn)移方式轉(zhuǎn)化(transformation)轉(zhuǎn)導(dǎo)(transduction)轉(zhuǎn)染(transfection)現(xiàn)象定義分類用途7精選課件轉(zhuǎn)化（transformation）現(xiàn)象:

肺炎鏈球菌的轉(zhuǎn)化試驗(yàn)定義:分類和應(yīng)用:自然轉(zhuǎn)化:感受態(tài),宿主菌種類人工轉(zhuǎn)化:低溫CaCl2、電穿孔8精選課件小鼠的肺炎鏈球菌的轉(zhuǎn)化試驗(yàn)9精選課件轉(zhuǎn)導(dǎo)(transduction)現(xiàn)象:“U”型管實(shí)驗(yàn)

定義:分類和應(yīng)用:普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)10精選課件局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)11精選課件轉(zhuǎn)染(transfection)現(xiàn)象:

感染(infection)、病毒感染定義:廣義和狹義分類和應(yīng)用:物理化學(xué)方法生物學(xué)方法(病毒載體)12精選課件

野生型病毒的自然感染、病毒載體轉(zhuǎn)染和質(zhì)粒經(jīng)化學(xué)法介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染13精選課件3.基因轉(zhuǎn)移入真核細(xì)胞的方法基因轉(zhuǎn)移入真核細(xì)胞的影響因素外源基因轉(zhuǎn)移入真核細(xì)胞的類型和方法構(gòu)建外源基因的基本要素

14精選課件轉(zhuǎn)移入原核細(xì)胞的影響因素:限制-修飾系統(tǒng)質(zhì)粒宿主范圍和相容性同源重組與非同源重組基因轉(zhuǎn)移入真核細(xì)胞的影響因素真核與原核細(xì)胞具有顯著區(qū)別;外源基因要進(jìn)入真核細(xì)胞，要突破三大障礙;理想的轉(zhuǎn)基因技術(shù)方法15精選課件質(zhì)粒型載體:物理方法化學(xué)方法外源基因轉(zhuǎn)移入真核細(xì)胞的類型和方法傳統(tǒng)的針頭注射顯微注射粒子轟擊電穿孔流體動(dòng)力學(xué)包裹微球超聲磷酸鈣法脂質(zhì)體法DEAE-Dxtran法16精選課件常用的物理方法介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移17精選課件外源基因轉(zhuǎn)移入真核細(xì)胞的類型和方法病毒顆粒型載體(病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因技術(shù))

假型病毒載體（復(fù)制缺陷性病毒載體）：具有感染性重組型病毒載體：具有感染性DNA病毒載體：AdV,AAV,HSV-1,etc.RNA病毒載體:HIV,etc.雜合型病毒載體

18精選課件19精選課件不同類型轉(zhuǎn)基因技術(shù)方法的優(yōu)缺點(diǎn)比較20精選課件構(gòu)建外源基因的基本要素

轉(zhuǎn)錄控制元件翻譯控制元件病毒復(fù)制包裝信號(hào)

21精選課件復(fù)習(xí)思考題影響外源基因進(jìn)入真核細(xì)胞的因素。物理、化學(xué)和病毒載體轉(zhuǎn)基因技